CN104762356B - 一种南瓜叶多糖与多肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种南瓜叶多糖与多肽及其制备方法，其包括以下步骤：将南瓜叶烘干，粉碎；然后将所得叶粉经细胞破碎，超声波辅助酶解提取，提取液经两次超滤获得二次截留液和滤液；截留液经蛋白酶酶解，纳滤浓缩后冷冻干燥，得南瓜叶多肽；滤液经纳滤浓缩，真空冷冻干燥，得南瓜叶多糖。本发明在获得南瓜叶多糖的同时，能够得到南瓜叶多肽，制备的南瓜叶多糖和多肽分子量较低，是抗氧化活性较高的天然产物，对O^2‑·，·OH，DPPH·和ABTS·⁺清除能力较强，可作为天然抗氧化剂，应用于食品、医药和化妆品等领域。本方法引入酶解技术和膜技术进行提取、分离、浓缩，既省工省时又能提高产品质量和得率，制备过程温度低，避免了高温加热对多糖和多肽成分的破坏。另外，通过本发明得到的南瓜叶多糖和多肽，无二次不溶于水的现象。

Description

一种南瓜叶多糖与多肽及其制备方法

技术领域

本发明属于天然产物提取领域，尤其涉及一种南瓜叶多糖和多肽及其制备方法。

背景技术

南瓜(Cucurbita moschata Duch)又名麦瓜、倭瓜、金冬瓜等，属葫芦科南瓜属一年生草本植物，是我国的传统蔬菜之一，南瓜是我国重要的经济作物，年产量达410万t，位居世界第一。南瓜果茎叶花的资源量非常巨大，国内外对南瓜果的营养成分和保健作用进行了大量的研究和报道，但对南瓜茎叶花的研究报道却很少目前，南瓜茎叶花除了很少量被食用外，大部分资源被丢弃。

国内外对南瓜叶的营养保健和开发利用还处于起步阶段。如对南瓜叶黄酮、多酚和蛋白质的提取和活性有少量报道。南瓜干叶蛋白质含量高达30％以上，氨基酸种类全，营养价值高。但是由于南瓜叶纤维含量高，一般的碱水加热法提取率很低。多糖在南瓜叶中含量较高，但是至今未见研究报道，利用南瓜叶蛋白质制备南瓜叶多肽也未见研究。

多糖能降血脂、降血糖、抗溃疡、抗癌防癌、清除自由基等。现已采用多糖制造出了治疗糖尿病、抗艾滋病病毒的新药，具有显著的疗效；近年来还发现，多糖的糖链在动物细胞分裂、分化、生长和抗衰老方面有决定性作用，多糖已然显示出愈发广泛的应用前景。多肽是直接从植物中提取或者经蛋白质水解而得，它是十分重要的生物活性成分，其吸收机制优于氨基酸，并具有氨基酸不可比拟的生理功能。生物活性肽比游离氨基酸的渗透压低，吸收率高，食后不会引起腹泻等不良反应；生物活性肽又具较低抗原性，不会引起过敏反应。此外由于生物活性肽结构的多样性和复杂性决定了其在细胞生理和调节代谢功能有活性作用，大量的研究证实了这些多肽还具有潜在的降血压、降血脂、抗氧化、抗病毒、抑菌、促进生长、镇静、降低胆固醇、促进矿物质吸收、改善物质代谢、增强机体免疫能力等功能，这些功能是原蛋白质和其组成单一氨基酸所不具备的。

目前多糖的一般制备工艺为提取---脱蛋白---浓缩---干燥。多糖的提取方法以传统溶剂加热提取法为主，此外，超声波辅助提取、微波辅助提取、酶解提取法也日益为人们重视。脱蛋白法以传统的Sevage法为主，需使用大量有毒溶剂氯仿和正丁醇，将蛋白质破坏。近年来应用各种蛋白酶水解蛋白的方法渐成趋势。在提取、脱蛋白、浓缩、干燥各环节中，高温和有机溶剂的使用导致活性成分易被破坏、耗能高。由于含有高分子成分，经常会出现二次不溶于水的现象，妨碍了人体对多糖的有效吸收。

在此背景下，引入新的酶和膜技术，提高酶解提取的效率，避免高温、避免有机溶剂的大量使用，是技术发展的方向和市场的迫切需求。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的主要目的在于提供一种南瓜叶多糖与多肽，以南瓜叶为原料，通过酶解、膜技术得到南瓜叶多糖，同时得到南瓜叶多肽，所得多糖和多肽易溶于水、分子量适中，具有一定抗氧化活性，并且此发明在实现过程中具有投资少、工艺流程短、无污染的特点。

本发明的另一目的在于提供一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的南瓜叶多糖与多肽，其制备原料为南瓜叶片。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

较优地，前述的南瓜叶多糖与多肽，其包括以下含量的成分：南瓜叶多糖：总糖含量≥85％，水分≤6.0％；南瓜叶多肽：多肽含量≥70％，水分≤6.0％。

较优地，前述的南瓜叶多糖和多肽，其制备方法包括以下步骤：

a.前处理阶段：将采摘于每年南瓜结果后至10月份的新鲜南瓜叶经过去杂处理后，进行干燥处理；将干燥的南瓜叶用机械进行适当粉碎后，置于干燥阴凉处备用；

b.提取阶段：将步骤a中南瓜叶粉，与1:5～1:15的水混合，经组织破碎机匀浆1-3min后，再以料液比1:20～1:60，超声波功率200-600W，加酶量纤维素酶量2000～4500U/g南瓜叶干粉(酶活200U/mg以上)，木糖酶300～1200U/g南瓜叶干粉(酶活60U/mg以上)，pH值4.5-6.5、在40～60℃条件下酶解提取0.5～1h；其中，纤维素酶量比木糖酶量倍数为2～10。

c.过滤除杂阶段：将步骤b中提取得到的混合液经两种不同截留分子量的超滤膜过滤除杂脱色，第一次所用膜截留分子量15000～25000，得南瓜叶多糖提取液；第二次所用膜截留分子量7500～8500，第二次超滤截留液作为制备南瓜叶多肽的原料，加酶量木瓜蛋白酶60～200U/g，其南瓜叶干粉酶活20U/mg以上，胃蛋白酶40～120U/g南瓜叶干粉酶活100U/mg以上，pH值4.5-7.0，在40～60℃条件下酶解提取2～6h，得蛋白酶解液；其中，木瓜蛋白酶量比胃蛋白酶量倍数为1.5～6。

d.浓缩干燥阶段：将步骤c中多糖提取液和蛋白酶解液，分别经过纳滤膜进行浓缩，其中膜的截留分子量为150～250，出口压力0.2～0.3Mpa，浓缩液密度为1.10～1.15g/mL。浓缩液再经真空冷冻干燥得南瓜叶多糖和南瓜叶多肽，真空冷冻干燥条件是液体降温至-20～-40℃，干燥室真空为0.08～0.1MPa，物料厚度5～15mm，加热板温度20～35℃，冷阱温度-30～-60℃，经过冷冻干燥后，得到南瓜叶多糖和南瓜叶多肽。

本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的前述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，其包括以下步骤：

a.前处理阶段：将南瓜叶经过去杂处理后，进行干燥处理；将干燥的南瓜叶用机械进行适当粉碎后，置于干燥阴凉处备用；

b.提取阶段：将步骤a中南瓜叶粉，与一定量的水混合，经组织破碎机匀浆后，在一定料液比，一定温度条件下，加入一定量纤维素酶、木糖酶提取一定的时间；

c.过滤除杂阶段：将步骤b中提取得到的混合液经两种不同截留分子量的超滤膜过滤除杂脱色，得南瓜叶多糖提取液；第二次超滤截留液作为制备南瓜叶多肽的原料，加入一定量木瓜蛋白酶和胃蛋白酶，在一定料液比，一定温度条件下，酶解一定时间，得蛋白酶解液；

d.浓缩干燥阶段：将步骤c中南瓜叶多糖提取液经纳滤膜浓缩，冷冻干燥得南瓜叶多糖；蛋白酶解液经纳滤膜浓缩，冷冻干燥得南瓜叶多肽。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

作为优选，前述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，步骤a中所述的南瓜叶，是南瓜结果后至10月底前采摘的南瓜叶，无霉变，干枯，发黄，经太阳暴晒或高温瞬间杀毒干燥；将干燥的南瓜叶用机械进行适当粉碎后，置于干燥阴凉处备用。

作为优选，前述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，步骤b中所述的南瓜叶粉，加水至料液比1:5～1:15，匀浆1-3min，再以料液比1:20～1:60，超声波功率200-600W，加酶量纤维素酶量2000～4500U/g南瓜叶干粉(酶活200U/mg以上)，木糖酶300～1200U/g南瓜叶干粉(酶活60U/mg以上)，pH值4.5-6.5、在40～60℃条件下酶解提取0.5～1h。

作为优选，前述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，步骤c中提取的提取液利用超滤膜过滤两次，第一次所用膜截留分子量20000，第二次所用膜截留分子量8000。

作为优选，前述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，步骤c中的第二次超滤截留液加水至料液比1:20～1:60，加酶量木瓜蛋白酶60～200U/g南瓜叶干粉(酶活20U/mg以上)，胃蛋白酶40～120U/g南瓜叶干粉(酶活100U/mg以上)，pH值4.5-7.0，在40～60℃条件下酶解提取2～6h。

作为优选，前述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，步骤b中纤维素酶量比木糖酶量倍数为2～10；步骤c中木瓜蛋白酶量比胃蛋白酶量倍数为1.5～6。

作为优选，前述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，步骤d中所述多糖提取液和蛋白酶解液，分别经过纳滤膜进行浓缩，其中膜的截留分子量为150～250，出口压力0.2～0.3Mpa，浓缩液密度为1.10～1.15g/mL。浓缩液再经真空冷冻干燥得南瓜叶多糖和南瓜叶多肽，真空冷冻干燥条件是液体降温至-20～-40℃，干燥室真空为0.08～0.1MPa，物料厚度5～15mm，加热板温度20～35℃，冷阱温度-30～-60℃。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

本发明利用南瓜叶高效提取南瓜叶多糖和多肽，引入酶解和膜技术进行提取、分离、浓缩、脱色等工序，可提高产品质量和得率，所需时间短，提取过程温度低，避免了高温加热对有效成分的破坏，另外，通过本发明提取出的南瓜叶多糖和多肽，无二次不溶于水的现象。

本发明所得南瓜叶多糖和多肽属于天然保健品制剂，安全无毒，适用于医药及保健品、食品抗氧化剂、饲料添加剂等行业，实现了南瓜叶资源的综合利用。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，并配合附图,详细说明如下。

附图说明

图1为本发明一实施例中南瓜叶多糖与多肽的制备方法流程图。

具体实施方式：

为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。

南瓜叶多糖和多肽,其主要制备原料为每年南瓜结果后至10月份的新鲜南瓜叶，经过去杂处理后，进行干燥处理，经前述方法制备。

实施例1

将9月份采集的50g南瓜叶，经去杂处理后，在鼓风烘箱内50℃干燥2小时，将干燥的南瓜叶用中药粉碎机粉碎，加水250ml至料液比1:5，经高速组织捣碎机12000r/min处理3min后，再加水1000ml至料液比1:25，超声波功率250w，加酶量纤维素酶量2500U/g南瓜叶干粉(酶活300U/mg)，木糖酶400U/g南瓜叶干粉(酶活80U/mg)，pH值4.5、在60℃条件下酶解提取40min，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温。提取液经管膜过滤除杂，第一次管膜截留分子量20000以上，第二次过滤管膜截留分子量8000以上。二次截留液加水至密度1.05g/ml，加酶量木瓜蛋白酶100U/g南瓜叶干粉(酶活100U/mg)，胃蛋白酶40U/g南瓜叶干粉(酶活200U/mg)，pH值5.0，在50℃条件下酶解提取3h后，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温得多肽提取液。二次卷膜滤液和多肽提取液分别经卷膜浓缩为浓缩液，卷膜的通过分子量为200，出口压力0.2Mpa，浓缩液密度为1.10g/mL。两种浓缩液再经真空冷冻干燥得最终成品，条件是液体降温至-35℃，干燥室真空为0.09MPa，物料厚度15mm，加热板温度32℃，冷阱温度-49℃。多糖干粉3.29g，淡灰色，硫酸-苯酚法测定纯度91.7％，溶解度10g/100ml，溶液澄清透明。多糖经凝胶柱纯化后得单一组分A3质量为2.15g，Mw2403，Mn3565，ABTS自由基IC₅₀为1.2mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为1.8mg/ml，羟基自由基IC₅₀为2.5mg/ml。多肽干粉2.16g，淡黄色，多肽含量82.4％，Mw759，Mn1218，ABTS自由基IC₅₀为4.6mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为4.8mg/ml，羟基自由基IC₅₀为2.2mg/ml。

实施例2

将10月份采集的100g南瓜叶，经去杂处理后，在鼓风烘箱内50℃干燥4小时，将干燥的南瓜叶用中药粉碎机粉碎，加水1000ml至料液比1:10，经高速组织捣碎机16000r/min处理2min后，再加水5000ml至料液比1:60，超声波功率600w，纤维素酶加入量4500U/g南瓜叶干粉(酶活300U/mg)，木糖酶加入量600U/g南瓜叶干粉(酶活80U/mg)，pH值6.5、在50℃条件下酶解提取60min，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温。提取液经管膜过滤除杂，第一次管膜截留分子量20000以上，第二次过滤管膜截留分子量8000以上。二次截留液加水至密度为1.00g/ml，木瓜蛋白酶加入量200U/g南瓜叶干粉(酶活40U/mg)，胃蛋白酶100U/g南瓜叶干粉(酶活100U/mg)，pH值6.5，在40℃条件下酶解提取6h后，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温得多肽提取液。二次卷膜滤液和多肽提取液分别经卷膜浓缩为浓缩液，卷膜的通过分子量为200，出口压力0.25Mpa，浓缩液密度为1.10g/mL。两种浓缩液再经真空冷冻干燥得最终成品，条件是液体降温至-25℃，干燥室真空为0.09MPa，物料厚度10mm，加热板温度24℃，冷阱温度-35℃。多糖干粉8.97g，淡灰色，硫酸-苯酚法测定纯度90.3％，溶解度11g/100ml，溶液澄清透明。多糖经凝胶柱纯化后得单一组分A3共6.52g，Mw1837，Mn2371，ABTS自由基IC₅₀为0.5mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为1.1mg/ml，羟基自由基IC₅₀为2.7mg/ml。多肽干粉6.85g，淡黄色，多肽含量76.1％，Mw570，Mn1024，ABTS自由基IC₅₀为2.5mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为3.4mg/ml，羟基自由基IC₅₀为1.9mg/ml。

实施例3

将10月份采集的100g南瓜叶，经去杂处理后，在鼓风烘箱内50℃干燥4小时，将干燥的南瓜叶用中药粉碎机粉碎，加水1500ml至料液比1:15，经高速组织捣碎机18000r/min处理2min后，再加水3000ml至料液比1:35，超声波功率500w，纤维素酶加入量3200U/g南瓜叶干粉(酶活200U/mg)，木糖酶加入量400U/g南瓜叶干粉(酶活60U/mg)，pH值6.5、在40℃条件下酶解提取60min，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温。提取液经管膜过滤除杂，第一次管膜截留分子量20000以上，第二次过滤管膜截留分子量8000以上。二次截留液加水至密度为1.00g/ml，木瓜蛋白酶加入量200U/g南瓜叶干粉(酶活40U/mg)，胃蛋白酶60U/g南瓜叶干粉(酶活100U/mg)，pH值5.5，在50℃条件下酶解提取4h后，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温得多肽提取液。二次卷膜滤液和多肽提取液分别经卷膜浓缩为浓缩液，卷膜的通过分子量为200，出口压力0.2Mpa，浓缩液密度为1.10g/mL。两种浓缩液再经真空冷冻干燥得最终成品，条件是液体降温至-20℃，干燥室真空为0.1MPa，物料厚度6mm，加热板温度30℃，冷阱温度-40℃。多糖干粉8.52g，淡灰色，硫酸-苯酚法测定纯度88.6％，溶解度10g/100ml，溶液澄清透明。多糖经凝胶柱纯化后得单一组分A3共5.86g，Mw1538，Mn2019，ABTS自由基IC₅₀为0.7mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为1.8mg/ml，羟基自由基IC₅₀为3.1mg/ml。多肽干粉4.82g，淡黄色，多肽含量75.4％，Mw1062，Mn1307，ABTS自由基IC₅₀为3.1mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为1.6mg/ml，羟基自由基IC₅₀为1.4mg/ml。

实施例4

将10月份采集的150g南瓜叶，经去杂处理后，在鼓风烘箱内50℃干燥4小时，将干燥的南瓜叶用中药粉碎机粉碎，加水1500ml至料液比1:10，经高速组织捣碎机14000r/min处理3min后，再加水1500ml至料液比1:20，超声波功率200w，纤维素酶加入量4500U/g南瓜叶干粉(酶活300U/mg)，木糖酶加入量1600U/g南瓜叶干粉(酶活80U/mg)，pH值4.5、在60℃条件下酶解提取60min，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温。提取液经管膜过滤除杂，第一次管膜截留分子量15000，第二次过滤管膜截留分子量7500。二次截留液加水至密度为1.00g/ml，木瓜蛋白酶加入量200U/g南瓜叶干粉(酶活40U/mg)，胃蛋白酶80U/g南瓜叶干粉(酶活100U/mg)，pH值4.5，在60℃条件下酶解提取6h后，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温得多肽提取液。二次卷膜滤液和多肽提取液分别经卷膜浓缩为浓缩液，卷膜的通过分子量为150，出口压力0.2Mpa，浓缩液密度为1.15g/mL。两种浓缩液再经真空冷冻干燥得最终成品，条件是液体降温至-20℃，干燥室真空为0.1MPa，物料厚度5mm，加热板温度20℃，冷阱温度-30℃。多糖干粉10.17g，淡灰色，硫酸-苯酚法测定纯度89.6％，溶解度12g/100ml，溶液澄清透明。多糖经凝胶柱纯化后得单一组分A3共8.52g，Mw1868，Mn2410，ABTS自由基IC₅₀为0.6mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为1.4mg/ml，羟基自由基IC₅₀为3.2mg/ml。多肽干粉10.45g，淡黄色，多肽含量79.1％，Mw590，Mn1124，ABTS自由基IC₅₀为2.7mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为3.6mg/ml，羟基自由基IC₅₀为1.8mg/ml。

实施例5

将10月份采集的100g南瓜叶，经去杂处理后，在鼓风烘箱内50℃干燥4小时，将干燥的南瓜叶用中药粉碎机粉碎，加水1000ml至料液比1:10，经高速组织捣碎机18000r/min处理1min后，再加水5000ml至料液比1:20，超声波功率200w，纤维素酶加入量2000U/g南瓜叶干粉(酶活300U/mg)，木糖酶加入量300U/g南瓜叶干粉(酶活60U/mg)，pH值5.5、在50℃条件下酶解提取30min，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温。提取液经管膜过滤除杂，第一次管膜截留分子量15000以上，第二次过滤管膜截留分子量7500以上。二次截留液加水至密度为1.00g/ml，木瓜蛋白酶加入量200U/g南瓜叶干粉(酶活20U/mg)，胃蛋白酶120U/g南瓜叶干粉(酶活100U/mg)，pH值4.5，在60℃条件下酶解提取2h后，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温得多肽提取液。二次管膜滤液和多肽提取液分别经卷膜浓缩为浓缩液，卷膜的通过分子量为150，出口压力0.3Mpa，浓缩液密度为1.10g/mL。两种浓缩液再经真空冷冻干燥得最终成品，条件是液体降温至-40℃，干燥室真空为0.08MPa，物料厚度5mm，加热板温度20℃，冷阱温度-30℃。多糖干粉6.85g，淡灰色，硫酸-苯酚法测定纯度81.3％，溶解度11g/100ml，溶液澄清透明。多糖经凝胶柱纯化后得单一组分A2共4.35g，Mw2097，Mn2844，ABTS自由基IC₅₀为0.7mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为1.2mg/ml，羟基自由基IC₅₀为2.8mg/ml。多肽干粉4.63g，淡黄色，多肽含量73.4％，Mw887，Mn1432，ABTS自由基IC₅₀为3.4mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为4.5mg/ml，羟基自由基IC₅₀为2.7mg/ml。

实施例6

将10月份采集的100g南瓜叶，经去杂处理后，在鼓风烘箱内50℃干燥4小时，将干燥的南瓜叶用中药粉碎机粉碎，加水1000ml至料液比1:10，经高速组织捣碎机16000r/min处理3min后，再加水5000ml至料液比1:60，超声波功率600w，纤维素酶加入量4500U/g南瓜叶干粉(酶活300U/mg)，木糖酶加入量350U/g南瓜叶干粉(酶活60U/mg)，pH值6.5、在50℃条件下酶解提取60min，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温。提取液经管膜过滤除杂，第一次管膜截留分子量25000以上，第二次过滤管膜截留分子量8500以上。二次截留液加水至密度为1.00g/ml，木瓜蛋白酶加入量60U/g南瓜叶干粉(酶活40U/mg)，胃蛋白酶40U/g南瓜叶干粉(酶活100U/mg)，pH值7.0，在50℃条件下酶解提取5h后，提取液加热到95℃灭酶10min，冷却至室温得多肽提取液。二次管膜滤液和多肽提取液分别经卷膜浓缩为浓缩液，卷膜的通过分子量为250，出口压力0.25Mpa，浓缩液密度为1.10g/mL。两种浓缩液再经真空冷冻干燥得最终成品，条件是液体降温至-25℃，干燥室真空为0.09MPa，物料厚度10mm，加热板温度35℃，冷阱温度-60℃。多糖干粉8.04g，淡灰色，硫酸-苯酚法测定纯度90.8％，溶解度10g/100ml，溶液澄清透明。多糖经凝胶柱纯化后得单一组分A4共5.24g，Mw2112，Mn2854，ABTS自由基IC₅₀为0.2mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为0.6mg/ml，羟基自由基IC₅₀为2.4mg/ml。多肽干粉5.68g，淡黄色，多肽含量75.3％，Mw843，Mn1366，ABTS自由基IC₅₀为2.8mg/ml,DPPH自由基IC₅₀为3.6mg/ml，羟基自由基IC₅₀为2.7mg/ml。

需说明的是，以上各实施例中，本发明的南瓜叶多糖与多肽的制备方法并不仅限于此，一些步骤或操作方法可由本领域技术人员得知的其他惯用步骤或方法所替换以实现本发明，例如步骤b中进行提取的次数并不限于两次，也可以为一次或多次。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (4)

1.一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，其特征在于其包括以下步骤：

a.前处理阶段：将采摘于每年南瓜结果后至10月份的新鲜南瓜叶经过去杂处理后，进行干燥处理；将干燥的南瓜叶用机械进行适当粉碎后，置于干燥阴凉处备用；

b.提取阶段：将步骤a中得到的南瓜叶粉与水1:5～1:15的混合，经组织破碎机匀浆1-3min后，再以料液比1:20～1:60，超声波功率200-600W，加酶量为酶活200U/mg以上的纤维素酶2000～4500U/g南瓜叶干粉，酶活60U/mg以上的木糖酶300～1200U/g南瓜叶干粉，pH值4.5-6.5、在40～60℃条件下酶解提取0.5～1h；其中，纤维素酶量比木糖酶量倍数为2～10；

c.过滤除杂阶段：将步骤b中提取得到的混合液经两种不同截留分子量的超滤膜过滤除杂脱色，第一次所用膜截留分子量为15000～25000，得到的过滤液进行第二次超滤；第二次所用膜截留分子量为7500～8500，第二次超滤截留液作为制备南瓜叶多肽的原料，过滤液作为南瓜叶多糖提取液；将所述第二次超滤截留液加水至料液比1:20～1:60，加入酶活20U/mg以上的木瓜蛋白酶60～200U/g南瓜叶干粉，酶活100U/mg以上的胃蛋白酶40～120U/g南瓜叶干粉，pH值4.5-7.0，在40～60℃条件下酶解提取2～6h，得蛋白酶解液；其中，木瓜蛋白酶量比胃蛋白酶量倍数为1.5～6；

d.浓缩干燥阶段：将步骤c中得到的多糖提取液和蛋白酶解液，分别经过纳滤膜进行浓缩，其中膜的截留分子量为150～250，出口压力0.2～0.3Mpa，浓缩液密度为1.10～1.15g/mL；浓缩液再经真空冷冻干燥得南瓜叶多糖和南瓜叶多肽；所述真空冷冻干燥条件是液体降温至-20～-40℃，干燥室真空为0.08～0.1MPa，物料厚度5～15mm，加热板温度20～35℃，冷阱温度-30～-60℃，经过冷冻干燥后，得到南瓜叶多糖和南瓜叶多肽。

2.根据权利要求1所述的一种南瓜叶多糖与多肽的制备方法，其特征在于步骤a中所述的南瓜叶，是南瓜结果后至10月底前采摘的南瓜叶，无霉变，干枯，发黄，经太阳暴晒或高温瞬间杀毒干燥；将干燥的南瓜叶用机械进行适当粉碎后，置于干燥阴凉处备用。

3.根据权利要求1或2所述方法制备得到的南瓜叶多糖，其特征在于所述南瓜叶多糖的总糖含量≥85％，水分≤6.0％。

4.根据权利要求1或2所述方法制备得到的南瓜叶多肽，其特征在于所述南瓜叶多肽的多肽含量≥70％，水分≤6.0％。