CN104707148A - 一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物及其制备方法 - Google Patents
一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104707148A CN104707148A CN201510073504.0A CN201510073504A CN104707148A CN 104707148 A CN104707148 A CN 104707148A CN 201510073504 A CN201510073504 A CN 201510073504A CN 104707148 A CN104707148 A CN 104707148A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mpeg
- preparation
- enoxolone
- complex
- curcumin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明公开了一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：（1）聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备；（2）聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备；（3）单端氨基聚乙二醇单甲醚(mPEG-NH2)的制备；（4）聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备；（5）聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备；其中mPEG-OTs收率为84.54%以上，mPEG-PI收率为88.96%以上，mPEG-NH2收率为88.72%以上，mPEG-18β-GA收率为82.43%以上。mPEG-OTs的纯度为95.74%以上，mPEG-PI的纯度为96.88%以上，mPEG-NH2的纯度为99.51%以上，mPEG-18β-GA的纯度为99.65%以上，mPEG-GA和CUR复合物的收率为83.31以上，纯度为99.78%以上。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物及其制备方法。
技术背景
肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，其致死率极高。根据最新统计，全世界每年新发肝癌约六十万，居恶性肿瘤的第五位。严重威胁人们的健康和生命。临床上，化疗是较为常用的癌症治疗手段，抗肿瘤药物的联合应用必不可少，但极易产生耐药性及严重的毒副作用。为尽可能减少化疗给患者身体上和精神上造成的伤害，现代科学技术逐渐要求药物及其制剂的“给药精密化”，肝靶向给药系统可将药物有效地输送至肝脏病变部位，减少对其它脏器的损伤。这就促使新型肝靶向抗癌药物的研究开发以及新的肝靶向载体一直被寻找和探索。
甘草（Glycyrrhiza）为豆科甘草属植物，其性味甘平，归心、肺、脾、胃经，具有缓急、润肺、解毒、调和中药的作用。作为常用中药，从古至今为药用。《神农本草经》就将其列为药之上乘。南朝医学家陶弘景将甘草尊为“国老”，并言“此草最为众药之王，经方少有不用者。” 在传统医药学的的药物方剂组成中，甘草多属于“使药”，引导药物直达病变部位，具有调和猪药的作用。在我国，甘草位列“药食同源”的品种之中，这说明甘草除在医药领域外，还能发挥食品和保健品的作用，甚至被用作化妆品原料。现代医学研究表明，甘草酸（Glycyrrhizin，GL）和甘草次酸（Glycyrrhetinic acid， GA）为其主要有效成分，而GL在人体内经胃酸水解为GA。GA具有抗炎、抗溃疡、抗病毒、降血脂、防治肿瘤、促进胰岛素吸收等多方面药理效应，在Caco-2细胞模型上的双向转运结果表明其为吸收良好的化合物且主要为被动扩散。自从1991年Negishi等发现鼠肝实质细胞表面存在大量高度特异性的GA结合位点之后，GA的抗病毒及抗肿瘤作用愈来愈被国内外医学界关注。随后的一些研究也将甘草从中药的传统范围向现代应用方向进行扩展，而如何有效利用日益减少的甘草资源，发挥GA预防肿瘤的发生以及高度肝靶向性称为热点研究内容。GA本身具有抗炎保肝解毒作用，加之肝细胞表面具有丰富的GA结合位点，对肝细胞具有明显的生物膜效，因此它越来越多地被用作一种高效、特异的肝靶向配体，提高抗肿瘤药物的肝靶向递送效率，可将抗肝癌药物定向转运至肝病变细胞组织，在必要时间内持续高度富集，发挥缓释作用，并减少对正常肝组织细胞的毒性。
姜黄素（Curcumin， CUR）是从姜科植物姜黄中提取的一种二酮化合物，其味苦辛，性温，归脾，肝经。具有破血行气、通经止痛的功效、抗癌是其主要药理活性之一，可抑制胃癌、皮肤癌、结肠癌等癌症的发生，还可作为天然色素广泛用于食品工业。但存在水溶性差和稳定性差的问题，生物利用度极低。GA是五环三萜类齐墩果烷型皂甙元，水溶性差，大量使用时常伴有类醛固酮增多症，高浓度时对正常细胞产生毒性，制约了其在临床上的应用。
为了克服GA和CUR的溶解性及有关问题，有利于支撑合适的剂型，改善体内吸收和提高生物利用度，国内外学者对其结构进行修饰和改造，其中在分子中通过引入亲水基团可提高生物利用度从而提高疗效。聚乙二醇（Polyethylene Glycol ，PEG）具有很好的水溶性和生物相容性，无毒，无免疫源性、生物可降解性良好，被广泛应用于食品、制药、化学等行业。它可改善水中不易溶解药物的溶解度，提高药物的稳定性，还利用结构自身具有的羟基或其衍生物，通过化学合成修饰许多化合物，扩大了应用范围。
本项目利用GA本身就具有一定的抗癌药理活性和保肝解毒作用，并具有肝细胞靶向性，不仅可作为药物载体，也可与药物产生协同作用。鉴于GA和CUR的抗肿瘤活性，以及GA分子结构中存在的羧基，设想将GA引到氨基PEG的高分子链上，再与难溶性小分子的药物CUR（Nw=368.32）结合，制成PEG改性水溶性GA和CUR复合物，加之GA的高度趋肝性，共同提高抗肿瘤效果。采用红外光谱，核磁共振等对PEG改性GA进行结构确证和表征，并对复合物进行小鼠体内组织分布及靶向性评价，考察其在肝脏的主动摄取和靶向效率。并以此为依据，深入某些中药抗肿瘤有效成分的结构修饰，进一步寻找高效、低毒、毒副作用小的新药成分，以充分发挥中药的药用价值，使癌症疾病的治疗得到突破性进展。
Negishi等在证实了离体大鼠肝细胞均浆的细胞膜组分中含有多量甘草次酸（Glycyrrhetinic acid ，GA）特异结合为点，在所有脏器组织中，肝脏的GA结合位点活性最高。GA与该结合位点的结合可成饱和性、高度特异性，且该结合位点具有蛋白质性质。国内也有学者用投射电镜进行观察，证实了肝细胞表面确实存在大量GA受体。随后国内外一些学者纷纷报道了以甘草酸和甘草次酸修饰的脂质体或血清蛋白可以在肝脏组织中富集。
如毛声俊在肝细胞靶向甘草次酸表面修饰脂质体的制备[中国中药杂志，2003年4月第28卷第4期，323-331]以毛声俊在2007年Preparation ，characterization and updtake by primary cultured rat hepatocytes of liposomes sufer-modofied with glycyrrhetinic acid .Pharmazie ，[ORIGINAL ， ARTICLES，2007年，62卷第8期；614-619]中公开了一种甘草次酸表面修饰脂质体，它是将GA与硬脂醇、琥珀酸酐偶联，合成一新型两亲性导向分子，将其掺入脂质体中，介导该修饰脂质体与肝细胞表面的GA受体特异结合，以期达到肝细胞主动靶向作用。该甘草次酸表面修饰脂质体简称LP-SM-GA。制得的甘草次酸修饰的脂质体平均粒径在65～79nm之间，甘草次酸修饰脂质体的摩尔含量最高位10%。又如，中国专利申请CN101006983A公开了甘草酸修饰壳聚糖和羧化壳聚糖复合载药纳米粒的制备方法，甘草酸修饰组可进入鼠肝实质细胞的细胞核中，相同时间内荧光标记的甘草酸盐修饰的纳米粒在肝实质细胞的荧光强度对照组强于对照组，具体是将甘草酸盐为靶向基团，通过静电相互作用制备成载药纳米粒而并未涉及甘草次酸的相关内容（文献报道肝细胞膜上甘草次酸的结合位点多余甘草酸）；中国专利申请CN1743008A公开了甘草次酸修饰的壳聚糖纳米粒子并表现出明显的靶向性，但是甘草次酸直接修饰壳聚糖的制备条件较为意义重大；中国专利CN101254308B制备了甘草次酸-氨基聚乙二醇和壳聚糖或壳聚糖衍生物肝靶向复合纳米粒，体外细胞实验显示对肝细胞有很强的结合能力，可提高给药载体的肝靶向能力，能实现对肝脏的靶向定位。对甘草次酸的改性研究很多，华东理工大学的洪伟等从甘草次酸的羧基修饰聚乙二醇作为一种抗肿瘤药物，而并未提及作为肝靶向配基的可能（洪伟，何明磊，魏东芝，18-β甘草次酸-聚乙二醇轭合物的合成及体外抗肿瘤活性，华东理工大学学报，2006，32；415）。周京辉等在姜黄素与甘草次酸联合用药的体外抗肿瘤作用[北方药学，2011年第8卷第4期，7-8]中公开了一种采用MTT法，研究姜黄素、甘草次酸以及姜黄素和甘草次酸联合用药分别对人肝癌细胞株HepG-2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人肺癌细胞株A549的细胞增殖抑制率，可以得到姜黄素、甘草次酸以及姜黄素和甘草次酸联合用药对三种肿瘤细胞株的抑制率IC50值分别为：姜黄素（16.3～19.3μg·mL-1）；甘草次酸（11.6～36.1μg· mL-1）；姜黄素和甘草次酸联合用药（10.5～16.2μg·mL-1） 。甘草次酸可以显著加强姜黄素对 HepG-2、 MCF-7、 A549 癌细胞增殖的抑制作用，而且两者在癌细胞的增殖抑制方面表现出协同作用。其中，姜黄素对HepG-2、MCF-7、A549癌细胞均具有较强的抑制作用；而甘草次酸由于具有很强的肝靶向性，因此，对肝癌HepG-2细胞具有较强的抑制作用，但对MCF-7和A549癌细胞抑制作用较弱。姜黄素、甘草次酸以及姜黄素和甘草次酸联合用药对三种肿瘤细胞株的抑制率 IC50 值分别为：姜黄素（16.3～19.3μg·mL-1）；甘草次酸（11.6～36.1μg·mL-1）；姜黄素和甘草次酸联合用药（10.5～16.2μg·mL-1）。有研究表明，联合用药的药物如果存在协同效应，则可以在控制药物副作用的同时，增强药物的疗效，或减少药物用量而不改变药物疗效。结果表明，当姜黄素和甘草次酸联合用药时，可以显著提高药物对HepG-2、MCF-7、A549癌细胞的抑制作用，而且随着药物浓度的提高，其效果越明显。这表明姜黄素和甘草次酸联合用药可以显著加强姜黄素对HepG-2、MCF-7、A549癌细胞增殖的抑制作用，而且两者在癌细胞的增殖抑制方面表现出了协同作用。
但现有技术一般以吡啶作为缚酸剂，中和反应中生成的盐酸，但吡啶毒性大，易损害实验人员健康，且成本高，回收困难，反应收率低，反应产物纯度不高，并且水溶解性低，肝靶向能力不足，疗效不高。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物，具有水溶解性高、肝靶向能力高、纯度高、毒副作用小和疗效好的优点；
本发明的另一个目的是提供一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，具有收率高，毒性小，成本低和回收简单的优点。
为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
（1）聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备；
（2）聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备；
（3）单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备；
（4）聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备；
（5）聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备。
以下是对上述技术方案的进一步优化：
所述用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法中采用的有机溶剂为：无水乙醚，二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。
所述聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中聚乙二醇单甲醚(mPEG)与对甲苯磺酰氯(TsCl)的摩尔比为1～3：3～9；
（2）提纯步骤。
所述聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)与邻苯二甲酰亚胺钾(PPI)的摩尔比为1～6：3～18；
（2）提纯步骤。
所述单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
（2）提纯步骤。
所述聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中单端氨基单甲氧基聚乙二醇 (mPEG-NH2)、18β-GA、DCC和NHS的摩尔比为：3～12：1～4：3～12：3～12；
（2）提纯步骤。
所述聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中mPEG-18β-GA、环己基碳二亚胺（DCC）、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和姜黄素的摩尔比为：3～12：3～12：3～12：1～4；
（2）提纯步骤。
所述mPEG-OTs收率为84.54%以上，mPEG-PI收率为88.96%以上，mPEG-NH2收率为88.72%以上，mPEG-18β-GA收率为82.43%以上，mPEG-GA和CUR复合物的收率为83.31以上。
所述mPEG-OTs的纯度为95.74%以上，mPEG-PI的纯度为96.88%以上，mPEG-NH2的纯度为99.51%以上，mPEG-18β-GA的纯度为99.65%以上，mPEG-GA和CUR复合物的纯度为99.78%以上。
本发明具有以下优点和效果：
1.本发明中mPEG主链在各步反应中未发生断裂，各步产物纯化处理均采用二氯甲烷溶解-无水乙醚沉淀，简单易得。
2. 本发明采用三乙胺为缚酸剂，毒性小，反应回收简单。
3.二氯甲烷直接作本发明反应中的溶剂，减少了操作步骤，操作简单，并可减少反应成本。
4.将GA引到mPEG的高分子链上，其水溶性可得到有效改善，延长体内循环时间，高效发挥保肝抗炎作用。因为肝细胞表面具有丰富的GA结合位点，因此还可作为药物载体材料，负载抗肿瘤药物主动靶向于肝脏病变部位，从而为后续实验研究提供科学依据。
联合用药用于肿瘤治疗产生的协同作用可增强药物的疗效，减少药物用量而不改变药物的疗效，同时控制或降低药物毒副作用。本发明制得的以单甲氧基聚乙二醇为骨架的水溶性甘草次酸和姜黄素复合物，趋肝性更强，双药协同抗肿瘤效果更加显著。
5.常用于评价靶向制剂的参数为靶向指数TI[TI=（AUC）靶和（AUC）非靶]，其定义为: 靶向制剂治疗组小鼠器官AUC与对照的普通制剂治疗组小鼠器官中AUC的比值，如果te值大于1，则表明该靶向制剂对该器官具有靶向作用，如果te值小于 1，则说明该靶向制剂没有靶向作用。参数大于1，说明该制剂有靶向性，越大越好。本发明通过 DAS20版的药动软件对各组织的靶向参数进行计算，与姜黄素的羧甲基纤维素钠混悬液相比较，小鼠尾静脉注射给药，mPEG-GA和CUR复合物TI值为3.462，对肝的靶向参数大于1，具有十分明显的靶向作用。
6. mPEG-OTs收率为84.54%以上，mPEG-PI收率为88.96%以上，mPEG-NH2收率为88.72%以上，mPEG-18β-GA收率为82.43%以上，mPEG-GA和CUR复合物的收率为83.31以上。
7. mPEG-OTs的纯度为95.74%以上，mPEG-PI的纯度为96.88%以上，mPEG-NH2的纯度为99.51%以上，mPEG-18β-GA的纯度为99.65%以上，mPEG-GA和CUR复合物的纯度为99.78%以上。
8. 经实验，本发明产物的抗癌有效率达90%以上，康复率达75%以上。
具体实施方式
实施例1：
（1）聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备
精密称取2.0mmol聚乙二醇单甲醚mPEG，置于装有回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量二氯甲烷，待mPEG完全溶解之后，通氮气，少量多次共加入6.0mmol对甲苯磺酰氯TsCl，再加入适量三乙胺TEA，在室温下通氮气保护，搅拌回流反应4h。反应结束后，反应混合物过滤除去不溶性固体，滤液转移至分液漏斗中，用稀盐酸萃取洗涤3次，得到的有机相用饱和碳酸钠溶液中和至pH为7，之后再用蒸馏水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液于50℃旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物1即为mPEG-OTs。
（2）聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备
精密称取0.5mmol mPEG-OTs，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量N，N-二甲基甲酰胺DMF，待mPEG-OTs完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到120℃以后，加入1.5mmol邻苯二甲酰亚胺钾PPI，在120℃通氮气保护，搅拌回流反应4h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，过滤除去未反应的过量PPI，滤液减压蒸馏除去溶剂DMF，得到的残留物溶于适量二氯甲烷，旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物2即为mPEG-PI。
（3）单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备
精密称取0.5mmol mPEG-PI，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量无水乙醇溶液中，待mPEG-PI完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到90℃回流开始以后，缓慢滴加适量水合肼至反应液中，在90℃通氮气保护，搅拌回流反应4h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，旋转蒸发，除去无水乙醇，残留物溶于适量二氯甲烷，转移至分液漏斗，加入蒸馏水除去水合肼，少量多次用二氯甲烷洗涤水相，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物3即为mPEG-NH2。
（4）聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备
将1.5 mmol单端氨基单甲氧基聚乙二醇 mPEG-NH2，0.5 mmol 18β-GA溶于适量精制的二氯甲烷中，加入1.5 mmol DCC和1.5 mmol NHS，室温下搅拌反应36 h，反应结束后，抽滤，滤液经无水乙醚沉淀后真空干燥，干燥后的产物溶于蒸馏水中，用氢氧化钠调节pH至8.0～9.0后，多次抽提。经过无水乙醚沉淀后再经过活性炭介质分离。用pH为4.0的醋酸缓冲液作为洗脱液，收集吸收波长在248 nm的聚乙二醇组分并用二氯甲烷抽提，无水乙醚沉淀得到mPEG-18β-GA轭合物。（5）聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备取1.5mmolmPEG-18β-GA，1.5mmol二环己基碳二亚胺DCC，1.5mmol溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入0.5mmol姜黄素，搅拌，反应至TLC检测无DCC时，反应液冷至室温，有针状晶体析出，滤出晶体，滤液浓缩，后用水沉降，过滤，保留固体，固体烘干后用丙酮洗涤，滤去不溶物，烘干滤液中的丙酮，即得粉末状mPEG-GA和CUR复合物。
实施例2：
（1）聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备
精密称取3.0mmol聚乙二醇单甲醚mPEG ，置于装有回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量二氯甲烷，待mPEG完全溶解之后，通氮气，少量多次共加入9.0mmol对甲苯磺酰氯TsCl，再加入适量三乙胺TEA，在室温下通氮气保护，搅拌回流反应6h。反应结束后，反应混合物过滤除去不溶性固体，滤液转移至分液漏斗中，用稀盐酸萃取洗涤3次，得到的有机相用饱和碳酸钠溶液中和至pH为7，之后再用蒸馏水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液于50℃旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物1即为mPEG-OTs。
（2）聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备
精密称取1.5mmol mPEG-OTs，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量N，N-二甲基甲酰胺DMF，待mPEG-OTs完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到120℃以后，加入4.5mmol邻苯二甲酰亚胺钾PPI，在120℃通氮气保护，搅拌回流反应6 h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，过滤除去未反应的过量PPI，滤液减压蒸馏除去溶剂DMF，得到的残留物溶于适量二氯甲烷，旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物2即为mPEG-PI。
（3）单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备
精密称取1.0mmol mPEG-PI，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量无水乙醇溶液中，待mPEG-PI完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到90℃回流开始以后，缓慢滴加适量水合肼至反应液中，在90℃通氮气保护，搅拌回流反应6h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，旋转蒸发，除去无水乙醇，残留物溶于适量二氯甲烷，转移至分液漏斗，加入蒸馏水除去水合肼，少量多次用二氯甲烷洗涤水相，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物3即为mPEG-NH2。
（4）聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备
将3.0 mmol单端氨基单甲氧基聚乙二醇 (mPEG-NH2)，1.0 mmol 18β-GA溶于适量精制的二氯甲烷中，加入3.0 mmol DCC和3.0 mmol NHS，室温下搅拌反应48 h，反应结束后，抽滤，滤液经无水乙醚沉淀后真空干燥，干燥后的产物溶于蒸馏水中，用氢氧化钾调节pH至8.0～9.0后，多次抽提。经过无水乙醚沉淀后再经过活性炭介质分离。用pH为4.0的醋酸缓冲液作为洗脱液，收集吸收波长在248 nm的聚乙二醇组分并用二氯甲烷抽提，无水乙醚沉淀得到mPEG-18β-GA轭合物。
（5）聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备取3.0mmolmPEG-18β-GA，3.0mmol二环己基碳二亚胺（DCC），溶于3.0mmol N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入1mmol姜黄素，搅拌，反应至TLC检测无DCC时，反应液冷至室温，有针状晶体析出，滤出晶体，滤液浓缩，后用水沉降，过滤，保留固体，固体烘干后用丙酮洗涤，滤去不溶物，烘干滤液中的丙酮，即得粉末状mPEG-GA和CUR复合物。
实施例3：
（1）聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备
精密称取4.0mmol聚乙二醇单甲醚mPEG，置于装有回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量二氯甲烷，待mPEG完全溶解之后，通氮气，少量多次共加入12.0mmol对甲苯磺酰氯TsCl，再加入适量三乙胺TEA，在室温下通氮气保护，搅拌回流反应8h。反应结束后，反应混合物过滤除去不溶性固体，滤液转移至分液漏斗中，用稀盐酸萃取洗涤3次，得到的有机相用饱和碳酸钠溶液中和至pH为7，之后再用蒸馏水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液于50℃旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物1即为mPEG-OTs。
（2）聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备
精密称取2.5mmol mPEG-OTs，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量N，N-二甲基甲酰胺DMF，待mPEG-OTs完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到120 ℃以后，加入7.5mmol邻苯二甲酰亚胺钾PPI，在120℃通氮气保护，搅拌回流反应8 h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，过滤除去未反应的过量PPI，滤液减压蒸馏除去溶剂DMF，得到的残留物溶于适量二氯甲烷，旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物2即为mPEG-PI。
（3）单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备
精密称取1.5mmol mPEG-PI，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量无水乙醇溶液中，待mPEG-PI完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到90℃回流开始以后，缓慢滴加适量水合肼至反应液中，在90℃通氮气保护，搅拌回流反应8h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，旋转蒸发，除去无水乙醇，残留物溶于适量二氯甲烷，转移至分液漏斗，加入蒸馏水除去水合肼，少量多次用二氯甲烷洗涤水相，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物3即为mPEG-NH2。
（4）聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备
将4.5 mmol单端氨基单甲氧基聚乙二醇 (mPEG-NH2)，1.5 mmol 18β-GA溶于适量精制的二氯甲烷中，加入4.5 mmol DCC和4.5 mmol NHS，室温下搅拌反应60 h，反应结束后，抽滤，滤液经无水乙醚沉淀后真空干燥，干燥后的产物溶于蒸馏水中，用氢氧化钠调节pH至8.0～9.0后，多次抽提。经过无水乙醚沉淀后再经过活性炭介质分离。用pH为4.0的醋酸缓冲液作为洗脱液，收集吸收波长在248 nm的聚乙二醇组分并用二氯甲烷抽提，无水乙醚沉淀得到mPEG-18β-GA轭合物。
（5）聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备
取4.5mmolmPEG-18β-GA，4.5mmol二环己基碳二亚胺（DCC），溶于4.5mmol N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入1.5mmol姜黄素，搅拌，反应至TLC检测无DCC时，反应液冷至室温，有针状晶体析出，滤出晶体，滤液浓缩，后用水沉降，过滤，保留固体，固体烘干后用丙酮洗涤，滤去不溶物，烘干滤液中的丙酮，即得粉末状mPEG-GA和CUR复合物。
实施例4：
（1）聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备
精密称取6.0mmol聚乙二醇单甲醚mPEG，置于装有回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量二氯甲烷，待mPEG完全溶解之后，通氮气，少量多次共加入18.0mmol对甲苯磺酰氯TsCl，再加入适量三乙胺TEA，在室温下通氮气保护，搅拌回流反应8h。反应结束后，反应混合物过滤除去不溶性固体，滤液转移至分液漏斗中，用稀盐酸萃取洗涤3次，得到的有机相用饱和碳酸钠溶液中和至pH为7，之后再用蒸馏水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液于50℃旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物1即为mPEG-OTs。
（2）聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备
精密称取3.0mmol mPEG-OTs，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，待mPEG-OTs完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到120℃以后，加入9.0mmol邻苯二甲酰亚胺钾(PPI)，在120℃通氮气保护，搅拌回流反应8h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，过滤除去未反应的过量PPI，滤液减压蒸馏除去溶剂DMF，得到的残留物溶于适量二氯甲烷，旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物2即为mPEG-PI。
（3）单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备
精密称取2.0mmol mPEG-PI，置于装有温度计、回流冷凝管和机械搅拌器的干燥三口瓶中，加入适量无水乙醇溶液中，待mPEG-PI完全溶解之后，通氮气，缓慢升温到90℃回流开始以后，缓慢滴加适量水合肼至反应液中，在90℃通氮气保护，搅拌回流反应8h。反应结束后，反应混合物冷却至室温，旋转蒸发，除去无水乙醇，残留物溶于适量二氯甲烷，转移至分液漏斗，加入蒸馏水除去水合肼，少量多次用二氯甲烷洗涤水相，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，静置过夜，抽滤，将滤液旋转蒸发，得到的浓缩溶液在剧烈搅拌的条件下，加入大量无水乙醚至出现白色沉淀，抽滤，白色滤饼通风除去残留的无水乙醚，得到纯化后的产物3即为mPEG-NH2。
（4）聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备
将6.0 mmol单端氨基单甲氧基聚乙二醇 (mPEG-NH2)，2.0 mmol 18β-GA溶于适量精制的二氯甲烷中，加入DCC6.0 mmol和6.0 mmol NHS，室温下搅拌反应72 h，反应结束后，抽滤，滤液经无水乙醚沉淀后真空干燥，干燥后的产物溶于蒸馏水中，用氢氧化钾调节pH至8.0～9.0后，多次抽提。经过无水乙醚沉淀后再经过活性炭介质分离。用pH为4.0的醋酸缓冲液作为洗脱液，收集吸收波长在248 nm的聚乙二醇组分并用二氯甲烷抽提，无水乙醚沉淀得到mPEG-18β-GA轭合物。
（5）聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备
取6.0mmolmPEG-18β-GA，6.0mmol二环己基碳二亚胺（DCC），溶于6.0mmol N，N-二甲基甲酰胺（DMF），加入2.0mmol姜黄素，搅拌，反应至TLC检测无DCC时，反应液冷至室温，有针状晶体析出，滤出晶体，滤液浓缩，后用水沉降，过滤，保留固体，固体烘干后用丙酮洗涤，滤去不溶物，烘干滤液中的丙酮，即得粉末状mPEG-GA和CUR复合物。
本发明中mPEG主链在各步反应中未发生断裂，各步产物纯化处理均采用二氯甲烷溶解后用无水乙醚沉淀，简单易得。
本发明采用三乙胺为缚酸剂，毒性小，反应回收简单。
二氯甲烷直接作本发明反应中的溶剂，减少了操作步骤，操作简单，并可减少反应成本。
通过检识反应、红外光谱与核磁共振氢谱分析共同证实了最终反应产物与目标分子mPEG-18β-GA的结构相吻合。
mPEG-OTs收率为84.54%以上，mPEG-PI收率为88.96%以上，mPEG-NH2收率为88.72%以上，mPEG-18β-GA收率为82.43%以上。
mPEG-OTs的纯度为95.74%以上，mPEG-PI的纯度为96.88%以上，mPEG-NH2的纯度为99.51%以上，mPEG-18β-GA的纯度为99.65%以上，mPEG-GA和CUR复合物的收率为83.31以上，纯度为99.78%以上。
常用于评价靶向制剂的参数为靶向指数TI[TI=（AUC）靶和（AUC）非靶]，其定义为: 靶向制剂治疗组小鼠器官AUC与对照的普通制剂治疗组小鼠器官中AUC的比值，如果te值大于1，则表明该靶向制剂对该器官具有靶向作用，如果te值小于 1，则说明该靶向制剂没有靶向作用。参数大于1，说明该制剂有靶向性，越大越好。本发明通过 DAS20版的药动软件对各组织的靶向参数进行计算，与姜黄素的羧甲基纤维素钠混悬液相比较，小鼠尾静脉注射给药，mPEG-GA和CUR复合物TI值为3.462，对肝的靶向参数大于1，具有十分明显的靶向作用。由此得出结论mPEG-GA和CUR复合物具有肝靶向性。
本发明产物的水溶性高，延长了体内循环时间，高效发挥保肝抗炎作用。因为肝细胞表面具有丰富的GA结合位点，因此还可作为药物载体材料，负载抗肿瘤药物主动靶向于肝脏病变部位，从而为后续实验研究提供科学依据。
联合用药用于肿瘤治疗产生的协同作用可增强药物的疗效，减少药物用量而不改变药物的疗效，同时控制或降低药物毒副作用。本发明制得的以单甲氧基聚乙二醇为骨架的水溶性甘草次酸和姜黄素复合物，具有肝细胞靶向性，复合物的趋肝性更强，双药协同抗肿瘤效果更加显著。经实验，本发明产物的抗癌有效率达90%以上，康复率达75%以上。
以上所述为本发明最佳实施方式的举例，其中未详细述及的部分均为本领域普通技术人员的公知常识。本发明的保护范围以权利要求的内容为准，任何基于本发明的技术启示而进行的等效变换，也在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：
（1）聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备；
（2）聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备；
（3）单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备；
（4）聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备；
（5）聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备。
2.如权利要求1所述的用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法中采用的有机溶剂为：无水乙醚，二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。
3.如权利要求1所述的用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中聚乙二醇单甲醚(mPEG)与对甲苯磺酰氯(TsCl)的摩尔比为1～3：3～9；
（2）提纯步骤。
4.如权利要求1所述的用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述聚乙二醇单甲醚-邻苯二甲酰亚胺(mPEG-PI)的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中聚乙二醇单甲醚-对甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)与邻苯二甲酰亚胺钾(PPI)的摩尔比为1～6：3～18；
（2）提纯步骤。
5.如权利要求1所述的用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述单端氨基聚乙二醇单甲醚 (mPEG-NH2)的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
（2）提纯步骤。
6.如权利要求1所述的用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述聚乙二醇单甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中单端氨基单甲氧基聚乙二醇 (mPEG-NH2)、18β-GA、DCC和NHS的摩尔比为：3～12：1～4：3～12：3～12；
（2）提纯步骤。
7.如权利要求6所述的用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物（mPEG-GA和CUR复合物）的制备方法包括以下步骤：
（1）反应步骤；
其中mPEG-18β-GA、环己基碳二亚胺（DCC）、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和姜黄素的摩尔比为：3～12：3～12：3～12：1～4；
（2）提纯步骤。
8.如权利要求1所述的用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法，其特征在于：所述mPEG-OTs收率为84.54%以上，mPEG-PI收率为88.96%以上，mPEG-NH2收率为88.72%以上，mPEG-18β-GA收率为82.43%以上，mPEG-GA和CUR复合物的收率为83.31以上。
9.一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物的制备方法制备的聚乙二醇单甲醚-甘草次酸，其特征在于：所述mPEG-OTs的纯度为95.74%以上，mPEG-PI的纯度为96.88%以上，mPEG-NH2的纯度为99.51%以上，mPEG-18β-GA的纯度为99.65%以上，mPEG-GA和CUR复合物的纯度为99.78%以上。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510073504.0A CN104707148A (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510073504.0A CN104707148A (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104707148A true CN104707148A (zh) | 2015-06-17 |
Family
ID=53407188
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510073504.0A Pending CN104707148A (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104707148A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105566317A (zh) * | 2016-01-13 | 2016-05-11 | 北京宜生堂医药科技研究有限公司 | 一种化合物及其制备方法 |
| RU2611362C1 (ru) * | 2015-11-26 | 2017-02-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Водорастворимая композиция, обладающая противоопухолевой активностью и способ ее получения |
| CN109206469A (zh) * | 2017-07-06 | 2019-01-15 | 陈懿 | 甘草次酸衍生物及其制备方法和用途 |
| CN111410680A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-07-14 | 江苏崇佩生物科技有限公司 | 一种甘草次酸衍生物llb及其制备方法和应用 |
| CN111617039A (zh) * | 2020-07-06 | 2020-09-04 | 上海中医药大学 | 一种甘草次酸修饰的载姜黄素多功能醇质体及其制备方法和应用 |
| CN113244242A (zh) * | 2020-02-11 | 2021-08-13 | 厦门鹭佳生物科技有限公司 | 甘草次酸、甘草酸在预防或治疗肺炎/肺纤维化中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1913054A (zh) * | 2005-08-08 | 2007-02-14 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 生物相容性磁流体 |
| CN101254308A (zh) * | 2008-04-08 | 2008-09-03 | 南开大学 | 甘草次酸-聚乙二醇/壳聚糖肝靶向复合给药系统及制备方法 |
| CN103736101A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-23 | 天津大学 | 一种pH值敏感的姜黄素载药胶束（单链）及前体的制备方法 |
-
2015
- 2015-02-12 CN CN201510073504.0A patent/CN104707148A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1913054A (zh) * | 2005-08-08 | 2007-02-14 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 生物相容性磁流体 |
| CN101254308A (zh) * | 2008-04-08 | 2008-09-03 | 南开大学 | 甘草次酸-聚乙二醇/壳聚糖肝靶向复合给药系统及制备方法 |
| CN103736101A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-23 | 天津大学 | 一种pH值敏感的姜黄素载药胶束（单链）及前体的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| YANG CHU ET AL: "Preparation and In Vitro Evaluation of Glycyrrhetinic Acid-Modified Curcumin-Loaded Nanostructured Lipid Carriers", 《MOLECULES》 * |
| 洪玮等: "18β -甘草次酸聚乙二醇轭合物的合成及其体外抗肿瘤活性", 《华东理工大学学报(自然科学版)》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2611362C1 (ru) * | 2015-11-26 | 2017-02-21 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) | Водорастворимая композиция, обладающая противоопухолевой активностью и способ ее получения |
| CN105566317A (zh) * | 2016-01-13 | 2016-05-11 | 北京宜生堂医药科技研究有限公司 | 一种化合物及其制备方法 |
| CN109206469A (zh) * | 2017-07-06 | 2019-01-15 | 陈懿 | 甘草次酸衍生物及其制备方法和用途 |
| CN109206469B (zh) * | 2017-07-06 | 2020-09-11 | 陈懿 | 甘草次酸衍生物及其制备方法和用途 |
| CN113244242A (zh) * | 2020-02-11 | 2021-08-13 | 厦门鹭佳生物科技有限公司 | 甘草次酸、甘草酸在预防或治疗肺炎/肺纤维化中的应用 |
| CN111410680A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-07-14 | 江苏崇佩生物科技有限公司 | 一种甘草次酸衍生物llb及其制备方法和应用 |
| CN111617039A (zh) * | 2020-07-06 | 2020-09-04 | 上海中医药大学 | 一种甘草次酸修饰的载姜黄素多功能醇质体及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104707148A (zh) | 一种用于抗肝癌的聚乙二醇改性甘草次酸和姜黄素复合物及其制备方法 | |
| CN103319479B (zh) | 大黄酸小檗碱离子对化合物、制备方法及应用 | |
| CN103705939B (zh) | 两亲性熊果酸-多糖偶联物的制备及其在肿瘤治疗中的应用 | |
| CN104447777B (zh) | 一种辣椒碱-喜树碱类抗癌药物偶联物及其制备方法和应用 | |
| CN103705940A (zh) | 一种天然活性药物-多糖靶向复合物的制备及其抗肿瘤的应用 | |
| CN102008475B (zh) | 喹诺里西啶生物碱在制备用于治疗肿瘤药物的应用 | |
| CN103880910B (zh) | 一种环黄芪醇的制备方法及其用途 | |
| CN104784203A (zh) | 冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物及其制备方法 | |
| CN102058566A (zh) | 一种冬凌草甲素类成分干粉吸入剂及其制备方法和用途 | |
| CN106749089A (zh) | 新型氟代噻唑腙类化合物的制备及其在抗肿瘤药物中的应用 | |
| CN111333692A (zh) | 一种白桦脂酸衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN102526146B (zh) | 含有人参皂苷和斑蝥素的药物组合物及其用途 | |
| CN102133220B (zh) | 白头翁皂苷a的制备方法 | |
| CN106083972B (zh) | 一种罗汉果醇衍生物单体 | |
| CN102908340B (zh) | 一种含异甘草黄酮醇的抗肿瘤药物及其应用 | |
| CN105399794B (zh) | 罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物 | |
| CN101524546A (zh) | 聚乙二醇和姜黄素衍生物缀合的缀合物 | |
| CN106188205B (zh) | 一种罗汉果醇衍生物单体及其组合物的用途 | |
| Wang et al. | Functional metal–organic framework nanoparticles loaded with polyphyllin I for targeted tumor therapy | |
| CN101085804A (zh) | 灰毡毛忍冬次皂苷乙的制备方法及其治疗肝癌、乳腺癌、子宫颈癌的应用 | |
| CN105963307A (zh) | 一种罗汉果醇衍生物单体及其组合物的用途 | |
| CN101024085A (zh) | 一种结肠癌靶向治疗前体药物及制备方法 | |
| CN103054802A (zh) | 介入治疗肝癌的前阳离子/阳离子脂质体姜黄素制剂及其制备方法 | |
| CN102008494B (zh) | 20(R)-人参皂苷Rg3药用水溶性中间体和冻干粉针剂及制备方法 | |
| CN104447921A (zh) | 一种牛蒡子苷元-吉西他滨偶联物及其制备方法、医药用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150617 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |