CN104688781A - 一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，包括以下步骤：步骤一、以健康家禽作为供体，并分离纯化所述供体粪便中的功能菌群；步骤二、将待接受腹泻防治的幼禽作为受体，并将所述功能菌群接种于所述幼禽的胃肠道内，建立所述幼禽的具有正常功能的肠道菌群，实现所述幼禽腹泻的防治。所述供体可为其他健康幼禽或与作为受体的幼禽的亲生母禽或与所述亲生母禽同舍的其他母禽。本发明能够快速建立幼禽的正常肠道微生态，建立肠道的免疫系统，预防幼禽腹泻的发生，并能够有效抑制肠道内致病微生物或病毒的生长繁殖，高效、彻底治疗幼禽腹泻。

Description

一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法

技术领域

本发明涉及禽畜疫病防治领域，尤其涉及一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法。

背景技术

腹泻是家禽发病后的常见症状，表现多样，原因复杂，严重而持续的腹泻往往引起消化机能障碍，使家禽营养不良甚至死亡，随着家禽集约化养殖的发展，各种病毒、细菌感染引起的腹泻时常发生，尤其是幼禽因肠道尚未建立稳定的微生物系统，自身抵抗力低，对外界刺激敏感，易受各种病原微生物侵袭，较成年家禽更易感染，发病率较高，发病率可达10％左右。

目前，治疗幼禽腹泻多采用抗生素类药物，但是抗生素的滥用极易产生抗药性，国内已经基本禁止使用。一些中药成分的药物虽然可避免抗生素的一系列弊端，但是普遍具有起效慢，治疗效果不佳，治愈率较低等缺陷。近年来市场上出现了用来改善肠道菌群的微生态制剂，往往所含菌类品种较少，而幼禽不同个体的肠道环境具有一定的差异性，故常规的微生态制剂不易完全适应不同个体的肠道环境，造成活性较低，治疗效果不佳等情况，且由于制备工艺较为复杂，成本较高，不适合大规模推广使用。

粪菌移植是将健康人粪便中的功能菌群，移植到患者胃肠道内，重建具有正常功能的肠道菌群，实现肠道及肠道外疾病的治疗，又称为“粪便移植”、“粪菌治疗”、“肠菌移植”或“肠微生态移植”。迄今，全世界已有数千例患者接受粪菌移植治疗，均是在实验室内借助现代仪器设备人性化地分离获得高度纯化的菌群，再经内镜或者引流管将量化的菌液输注到患者肠内。依据文献报道，粪菌移植已经用于难辨梭状芽孢杆菌感染、炎症性肠病、顽固性便秘、代谢病、肠道免疫缺陷、肠道过敏等疾病的关键挽救治疗，取得了良好的疗效。目前，粪菌移植的方法一般仅限于人类的临床应用，还没有利用粪菌移植进行幼禽腹泻防治的报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，能够快速建立幼禽的正常肠道功能菌群，有效进行幼禽腹泻的预防及治疗。

本发明的另一个目的是，提供一种提高粪菌液中肠道功能菌活性的方法，能够增加粪菌移植的成功率，提高利用粪菌移植预防或治疗幼禽腹泻的效果。

为实现上述目的和一些其他的目的，本发明采用如下技术方案：

如图1所示，一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，包括以下步骤：

步骤一、以健康家禽作为供体，并分离纯化所述供体粪便中的功能菌群；

步骤二、将待接受腹泻防治的幼禽作为受体，并将所述功能菌群接种于所述幼禽的胃肠道内，建立所述幼禽的具有正常功能的肠道菌群，实现所述幼禽腹泻的防治。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，步骤一中所述供体可为其他健康幼禽、与作为受体的幼禽的亲生母禽或与所述亲生母禽同舍的其他母禽。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，步骤一中，可利用与作为受体的幼禽的亲生母禽同舍的其他母禽的混合粪便来分离纯化功能菌群。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，将所述功能菌群制备为粪菌液，并将含有所述功能菌群的粪菌液经上消化道途径移植到所述受体幼禽的胃肠道内。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，可采用鼻胃管、鼻空肠管或内窥镜插入上消化道进行粪菌移植；也可采用肠溶性胶囊作为载体经消化道进行粪菌移植。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，所述粪菌液的制备方法包括以下步骤：

步骤一、收集供体的粪便，并与1-10倍体积无菌水混合制成粪水，将粪水静置沉淀或离心并收集上清液，将上清液过滤，收集滤过液既得含有所述功能菌群的初级粪菌液；

步骤二、将所述初级粪菌液加入液体富集培养基中，在28-35℃条件下富集培养5-7天，将培养物进行离心收集菌体，将菌体与5-10倍体积的生理盐水混合均匀，既得所述粪菌液。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，步骤二中，所述富集培养时，先进行1-3天的静置培养，然后进行2-5天的摇床培养。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，步骤一中，采用孔径为0.1-3微米的微孔滤膜对上清液进行过滤。

优选的是，所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，也可将步骤二中离心分离出的菌体进行冷冻干燥后制得菌粉，将菌粉与饲料按照1∶10-20的质量比混合后喂食幼禽进行粪菌移植；或将所述粪菌液与水以1∶1-10体积比混合后喂食幼禽进行粪菌移植。

本发明至少包括以下有益效果：首先，本发明通过利用粪菌移植技术，提取纯化健康家禽粪便中的功能菌并移植到幼禽肠道内，能够快速建立幼禽的正常肠道微生态，一方面对幼禽的肠道起到保护作用，迅速建立肠道的免疫系统，有效预防幼禽腹泻的发生，使幼禽腹泻的发病率降低至1％以内，而且能够增加幼禽的消化吸收能力，有益于幼禽的快速生长，使幼禽日增重提高至少5％；另一方面，功能菌在肠道内能够快速生长繁殖为肠道微生态中的优势菌群，能够有效抑制肠道内致病微生物或病毒的生长繁殖，达到高效、彻底治疗幼禽腹泻的目的，对幼禽腹泻的治愈率可达到90％以上，同时能够避免其他药物治疗药物残留的弊端。

其次，本发明通过优化粪菌来源，采用其他健康幼禽或与作为受体的幼禽的亲生母禽或与所述亲生母禽同舍的其他母禽，能够大幅度提高粪菌移植的效果。因为所选供体与受体幼禽的生活环境相同，那么受体幼禽与所选的供体的肠道内环境也较为接近，因此供体肠道内的功能菌能够快速、高效地在受体幼禽肠道内适应，并生长繁殖，建立受体幼禽的自身的正常的肠道微生态，极大地提高了粪菌移植的效果。

最后，通过将分离纯化的粪菌进行富集培养，并通过收集菌体后用生理盐水稀释到适当的浓度，能够有效提高粪菌液中功能菌的活性，保障粪菌移植的效果。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法流程图。

具体实施方式

下面参照附图对本发明做详细说明，以令本领域普通技术人员参阅本说明书后能够据以实施。

如图1所示，一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，包括以下步骤：

步骤一、以健康家禽作为供体，并分离纯化所述供体粪便中的功能菌群；

步骤二、将待接受腹泻防治的幼禽作为受体，并将所述功能菌群接种于所述幼禽的胃肠道内，建立所述幼禽的具有正常功能的肠道菌群，实现所述幼禽腹泻的防治。

通过利用粪菌移植技术，提取纯化健康家禽粪便中的功能菌移植到幼禽肠道内，能够快速建立幼禽的正常肠道微生态，一方面对幼禽的肠道起到保护作用，迅速建立肠道的免疫系统，有效预防幼禽腹泻的发生，另一方面促进功能菌在肠道内能够快速生长繁殖为肠道微生态中的优势菌群，能够有效抑制肠道内致病微生物或病毒的生长繁殖，达到高效、彻底治疗幼禽腹泻的目的，避免其他药物治疗效果不佳及药物残留的弊端。一般采用排泄出来不超过1h的新鲜粪便进行处理，能够避免粪便内的功能菌由于环境的改变而失活。本发明中采用快大型优质鸡中良凤花鸡的幼禽作为受体进行粪菌移植，在幼禽腹泻的防治及其生长速度上均取得良好效果。

所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，步骤一中所述供体可为其他健康幼禽或与作为受体的幼禽的亲生母禽或与所述亲生母禽同舍的其他母禽。因为所选供体与受体幼禽具有直接的血缘关系或生活环境相同，其肠道内环境也较为接近，故受体幼禽的亲生母禽作为供体是最优选择。与受体幼禽同舍的其他健康幼禽，由于生活环境相同，肠道内环境也非常接近，功能菌的适应性较好，移植效果也高。同样，与所述受体幼禽的亲生母禽同舍的其他母禽与受体幼禽的肠道内环境也较为接近，也可以作为较为合适的供体。本发明所选供体肠道内的功能菌能够快速、高效地在受体幼禽肠道内适应，并生长繁殖，建立受体幼禽的自身的正常的肠道微生态，极大地提高了粪菌移植的效果。

可利用与作为受体的幼禽的亲生母禽同舍的其他母禽的混合粪便来分离纯化功能菌群。采集同舍的多个供体的新鲜粪便后，将其混合后提取功能菌，能够增加功能菌的种类，避免个体供体内的肠道功能菌的单一性，因此更加能够提高对幼禽腹泻的防治效果。

所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，将所述功能菌群制备为粪菌液，并将含有所述功能菌群的粪菌液经上消化道途径移植到所述受体幼禽的胃肠道内。

所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，可采用鼻胃管、鼻空肠管或内窥镜插入上消化道进行粪菌移植；也可采用肠溶性胶囊作为载体经消化道进行粪菌移植。

所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，所述粪菌液的制备方法包括以下步骤：

步骤一、收集供体的粪便，并与1-10倍体积无菌水混合制成粪水，将粪水静置沉淀或离心并收集上清液，将上清液过滤，收集滤过液既得含有功能菌群的初级粪菌液；离心的转速不易过高，一般不高于1000rpm，使粪便中的固体杂质沉淀于底部，而菌体留在上清液中。

步骤二、将所述初级粪菌液加入液体富集培养基中，在28-35℃条件下富集培养5-7天，使粪菌液中的功能菌得到繁殖富集，提高粪菌液的活性。将培养物进行离心收集菌体，将菌体与5-10倍体积的生理盐水混合均匀，既得所述粪菌液。使用生理盐水对菌体进行一定的稀释，也是为了增加功能菌的活性。此步骤中离心的转速应在3000-5000rpm，以使菌体分离出。也可将分离出的菌体在不高于-18℃的温度下冷冻保藏备用。

所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，步骤二中，所述富集培养时，先进行1-3天的静置培养，目的是为了使其中的厌氧菌得到繁殖和富集；然后进行2-5天的恒温摇床培养，增加了通氧量，使其中的好氧菌得到繁殖和富集。通过分步培养，使粪菌液中的各种功能菌均得到全面的富集培养。所用培养基可为液体LB培养基。摇床的转速可设定为100rpm左右。

所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，步骤一中，采用孔径为0.1-3微米的微孔滤膜对上清液进行过滤。细菌一般能够通过0.1微米的孔径，而寄生虫及虫卵则会被截留，通过微孔滤膜的过滤，去除上清液中的寄生虫和虫卵，使粪菌液得到进一步纯化，避免将虫卵在粪菌移植过程中带入受体幼禽肠道，保障粪菌移植的安全性。

所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法中，也可将步骤二中离心分离出的菌体进行冷冻干燥后制得菌粉，将菌粉与饲料按照1∶10-20的质量比混合后喂食幼禽进行粪菌移植；或将所述粪菌液与水以1∶1-10体积比混合后喂食幼禽进行粪菌移植。根据家禽的特异性，利用鼻胃管、鼻空肠管或内窥镜具有一定的操作难度，而胶囊对于幼禽来说吞咽也很困难，同时家禽的消化道较短，采用直接喂食的方法功能菌易到达肠道内。通过冷冻干燥法将功能菌制成菌粉后与饲料混合喂食，可大大简化喂食的难度，且可将菌粉在不超过-18摄氏度条件下冷冻保藏较长时间，方便使用。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (9)

1.一种利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，包括以下步骤：

步骤一、以健康家禽作为供体，并分离纯化所述供体粪便中的功能菌群；

步骤二、将待接受腹泻防治的幼禽作为受体，并将所述功能菌群接种于所述幼禽的胃肠道内，建立所述幼禽的具有正常功能的肠道菌群，实现所述幼禽腹泻的防治。

2.如权利要求1所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，步骤一中所述供体可为其他健康幼禽、或与作为受体的幼禽的亲生母禽或与所述亲生母禽同舍的其他母禽。

3.如权利要求2所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，步骤一中，可利用与作为受体的幼禽的亲生母禽同舍的其他母禽的混合粪便来分离纯化功能菌群。

4.如权利要求1所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，将所述功能菌群制备为粪菌液，并将含有所述功能菌群的粪菌液经上消化道途径移植到所述受体幼禽的胃肠道内。

5.如权利要求4所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，可采用鼻胃管、鼻空肠管或内窥镜插入上消化道进行粪菌移植；也可采用肠溶性胶囊作为载体经消化道进行粪菌移植。

6.如权利要求4所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，所述粪菌液的制备方法包括以下步骤：

步骤一、收集供体的粪便，并与1-10倍体积无菌水混合制成粪水，将粪水静置沉淀或离心并收集上清液，将上清液过滤，收集滤过液既得含有所述功能菌群的初级粪菌液；

步骤二、将所述初级粪菌液加入液体富集培养基中，在28-35℃条件下富集培养5-7天，将培养物进行离心收集菌体，将菌体与5-10倍体积的生理盐水混合均匀，既得所述粪菌液。

7.如权利要求6所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，步骤二中，所述富集培养时，先进行1-3天的静置培养，然后进行2-5天的摇床培养。

8.如权利要求6所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，步骤一中，采用孔径为0.1-3微米的微孔滤膜对上清液进行过滤。

9.如权利要求6所述的利用粪菌移植技术防治幼禽腹泻的方法，其特征在于，也可将步骤二中离心分离出的菌体进行冷冻干燥后制得菌粉，将菌粉与饲料按照1∶10-20的质量比混合后喂食幼禽进行粪菌移植；或将所述粪菌液与水以1∶1-10体积比混合后喂食幼禽进行粪菌移植。