CN104666237A - 松露有效组分的制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种松露有效组分的制备方法与用途，属于中药有效组分提取领域。它的制备过程包括以下步骤：a、取松露，用质量浓度为50％～95％乙醇水溶液进行提取，得提取液；b、将所述提取液过滤，浓缩，即得松露有效组分。本发明的优点是：利用合理的提取、富集的方法，得到具有抗氧化和美白作用，可用于制备抗氧化产品和美白产品的松露有效组分。

Description

松露有效组分的制备方法与用途

技术领域

本发明属于中药有效组分提取领域，具体涉及一种松露有效组分的制备方法与用途。

背景技术

松露属于真菌门子囊菌纲块菌目块菌属食用真菌，是一种生长于地下的稀有珍稀野生食用菌，具有极高的营养保健价值。因价格昂贵，被称为餐桌上的“黑色钻石”。经现代研究发现，黑松露富含丰富的蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、多种维生素、松露多糖、松露多肽等多种营养物质。

松露是一个具有开发潜力的物品，在食品、化妆品、保健品及药品等开发方面具有广阔前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种松露有效组分的制备方法与用途。

本发明的松露有效组分，其制备过程包括以下步骤：

a、取松露，用质量浓度为50％～95％乙醇水溶液进行提取，得提取液；

b、将所述提取液过滤，浓缩，即得松露有效组分。所得松露有效组分中三萜含量不低于0.2mg/mL。

作为优选，所述步骤a中松露选自白松露或黑松露中的一种。白松露为意大利白块菌，拉丁文名为：T.magnatum Vittad.(Piedmont white truffle)；黑松露为印度块菌，拉丁文名为：Tuber indicum Cooke et Massee。

作为优选，为有效增加松露有效成分的提取率，所述步骤a中在提取时先用超声提取，再回流提取。特别优选的，超声提取的时间为10～60分钟。

作为优选，所述回流提取的时间为1～5小时，回流提取的次数为1～5次。

本发明提供上述松露有效组分的用途，即本发明的松露有效组分的在制备抗氧化剂中的用途和在抑制酪氨酸酶活性的用途，特别是在制备抑制黑色素物质生成的美白祛斑化妆品的应用。

本发明还提供一种组合物，该组合物含有上述的松露有效组分。

在上述组合物中，本发明的松露有效组分作为酪氨酸酶和抗氧化剂可以单独使用，也可以与其它化合物混合使用，并可以进一步含有化妆品上所允许的辅料或常规的载体，以制备用作抑制黑色素物质生成的美白祛斑化妆品或抗氧化的化妆品。

为有效提高松露有效组分的保质期，不被氧化，可以加入适量苯氧乙醇和1,3丁二醇。例如，10重量份的松露有效组分可以加入1～10重量份的苯氧乙醇和500～1500重量份的1,3丁二醇。

本发明的有益效果在于：以松露为原料，研究出一种制备松露有效组分的制备方法。该方法提高了产品的纯度，降低了生产成本，且生产设备简单，效率高，适合大规模生产。该有效组分具有抗氧化、美白等活性，可以用于食品、保健品、化妆品和药品的添加剂或作为原料。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为松露有效组分还原能力测试图；

图2为松露有效组分对DPPH自由基清除作用的测试图；

图3为松露有效组分对超氧阴离子的清除作用的测试图；

图4为松露有效组分对酪氨酸酶抑制作用的测试图。

具体实施方式

为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。

实施例1：

按重量份数，取1份白松露，加入8倍重量的质量浓度为80％乙醇水溶液超声30分钟，然后回流提取2次，每次回流提取的时间为2小时。对提取液进行合并，采用300目的滤网过滤，减压浓缩，即得松露有效组分。

实施例2：

按重量份数，取1份白松露，加入10倍重量的质量浓度为95％乙醇水溶液超声10分钟，然后回流提取3次，每次回流提取的时间为1小时。对提取液进行合并，采用200目的滤网过滤，减压浓缩，即得松露有效组分。

实施例3：

按重量份数，取1份黑松露，加入12倍重量的质量浓度为50％乙醇水溶液超声60分钟，然后回流提取2次，每次回流提取的时间为3小时。对提取液进行合并，采用300目的滤网过滤，减压浓缩，即得松露有效组分。

对比例1：

按重量份数，取1份白松露，加入8倍重量的质量浓度为40％乙醇水溶液超声30分钟，然后回流提取2次，每次回流提取的时间为2小时。对提取液进行合并，采用300目的滤网过滤，减压浓缩，即得松露有效组分。

对比例2：

按重量份数，取1份白松露，加入8倍重量的质量浓度为20％乙醇水溶液超声30分钟，然后回流提取2次，每次回流提取的时间为2小时。对提取液进行合并，采用300目的滤网过滤，减压浓缩，即得松露有效组分。

对比例3：

按重量份数，取1份白松露，加入8倍重量的水超声30分钟，然后回流提取2次，每次回流提取的时间为2小时。对提取液进行合并，采用300目的滤网过滤，减压浓缩，即得松露有效组分。

为验证本发明的技术效果，特作以下测试：

一、抗氧化测试

1、松露有效组分还原能力测试

实验原理：还原力是物质潜在抗氧化能力的指标之一，试样将赤血盐还原成黄血盐，黄血盐与Fe³⁺作用生成普鲁士蓝，在700nm处测定吸光值以检测普鲁士蓝的生成量，通过普鲁士蓝的生成量衡量样品的还原能力。

实验方法：分别取待测松露有效组分溶液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL，用蒸馏水将体积补足到1mL；取阳性对照样品维生素C溶液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL，用蒸馏水补足到1mL。在各组样品中加入1mL磷酸盐缓冲液和1mL铁氰化钾溶液，混匀，50℃水浴20min，取出，加入1mL三氯乙酸溶液，混匀。取2mL的混合液置于5mL离心管中，加入2mL蒸馏水和0.4mL的三氯化铁溶液，迅速混匀。测定溶液在700nm处的吸光值。

实验结果：见图1；实施例1所得松露有效组分表现出明显优于抗坏血酸(380ug/mL)的抗氧化能力，也明显优于对比例所得的松露有效组分的抗氧化能力。

2、松露有效组分对DPPH自由基清除作用的测试

实验原理：DPPH甲醇溶液为紫罗兰色，在517nm下有强的吸光值，若与样品结合，会降低吸光值，由此借以判断样品清除自由基的能力。

实验方法

实验组：分别取0.1mL，0.2mL，0.5mL，1mL实施例2所得松露有效组分溶液样品于试管中，用蒸馏水补足到1mL，加入4mLDPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min，不断震荡，测定517nm处的吸光值。

空白组：在各个试管中分别取同实验组同等体积的样品溶液，用蒸馏水补足到1mL，加入4mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处吸光值。

对照组：1mL蒸馏水加入4mLDPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处的吸光值。

实验结果：DPPH抑制率(％)＝(A0-A1+A2)/A0*100％

其中A0为对照组的吸光值，A1为实验组的吸光值，A2为对应空白组的吸光值。

结果见图2；实施例2所得松露有效组分可以有效清除DPPH自由基，且随着浓度的升高，对于DPPH自由基的清除率也明显升高，表现出很好的浓度依赖关系。

3、松露有效组分对超氧阴离子的清除作用测试

实验原理：邻苯三酚在弱碱性环境中自身氧化分解产生超氧阴离子，随着反应的进行，超氧阴离子在体系中不断积累，导致反应液在420nm处的吸光度在反应开始一段时间内会随着时间的变化而线性增大，因此测定在该段时间内被测物反应液的吸光度随时间的变化率，并与空白液比较便可得出被测物抑制超氧阴离子的能力。

实验方法

实验组：取5.6mLTris HCl缓冲液，分别加入0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL的待测样品，用蒸馏水补足到0.4mL,放入25℃水浴锅中水浴10min,然后加入25℃预温的邻苯三酚(如果室温高于25℃可以在室温下操作)，充分混匀，从加入邻苯三酚后开始准确计时3min，而后加入5％抗坏血酸(Vc)0.05mL终止反应。10min钟后在420nm处测定其吸光度值。

对照组：取5.6mL的Tris HCl缓冲液，分别加入同实验组相同体积的待测样品，用蒸馏水补足到0.4mL，加入12mmol/LHCl，充分混匀，从加入HCl开始准确计时3min，加入5％抗坏血酸终止反应。10min钟后在420nm处测定其吸光度值。

空白组：取5.6mL 50mmol/L Tris-HCl缓冲液，加入0.4mL蒸馏水，此后操作同实验组。

实验结果：E＝[(A0-A1+A2)/A0]*100％

A0为空白吸光度值，A1为实验组吸光度值，A2为对照组吸光度值。

结果见图3；待测样品实施例3所得松露有效组分表现出一定的清除超氧阴离子的作用。

二、美白测试

1、松露有效组分对酪氨酸酶的抑制作用

实验原理：酪氨酸酶的二酚酶活性可以直接催化底物多巴生成多巴醌，然后经过一系列的反应最终生成黑色素。黑色素物质的生成量多少与酶的活力成正比。所以，通过测定体系中的黑色素的生成量多少来反映酶活力的大小。

分别取待测液0.1mL、0.2mL、0.5mL及1mL，用蒸馏水补足到1mL，加入3mL L-酪氨酸溶液37℃保温15min，加入酪氨酸酶溶液0.1mL，于37℃反应25min，470nm下测定其吸光度值。

实验结果：酪氨酸酶抑制率(％)＝(A0-A1+A2)/A0*100％

其中，A0为用蒸馏水替代样品和酪氨酸酶的吸光度之；A1为实验组吸光度值；A2为蒸馏水替代样品的吸光度值。

实验结果表明，实施例1所得松露有效组分表现出优于熊果苷(0.1％)的酪氨酸酶抑制活性，熊果苷为公认具有美白活性的化学物质，而酪氨酸酶是黑色素生成过程中的关键酶；也明显优于对比例所得松露有效组分的美白活性。

最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。

Claims (8)

1.一种松露有效组分，其特征在于，其制备方法包括以下步骤：

a、取松露，用质量浓度为50％～95％乙醇水溶液进行提取，得提取液；

b、将所述提取液过滤，浓缩，即得松露有效组分。

2.根据权利要求1所述的松露有效组分，其特征在于，所述步骤a中松露选自白松露或黑松露中的一种。

3.根据权利要求1所述的松露有效组分，其特征在于，所述步骤a中在提取时先用超声提取，再回流提取。

4.根据权利要求3所述的松露有效组分，其特征在于，所述回流提取的时间为1～5小时，回流提取的次数为1～5次。

5.一种基于权利要求1-4任一项所述的松露有效组分的在制备抗氧化剂中的用途。

6.一种基于权利要求1-4任一项所述的松露有效组分的在抑制酪氨酸酶活性的用途。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述松露有效组分在制备抑制黑色素物质生成的美白祛斑化妆品的应用。

8.一种组合物，其特征在于，该组合物含有权利要求1-4任一项所述的松露有效组分。