CN103948523B - 木瓜有效组分的制备方法与用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种木瓜有效组分的制备方法与用途，属于中药有效组分提取领域。它的制备过程包括以下步骤：取木瓜，用乙醇提取，得提取液；将所述提取液浓缩至无醇味，加水稀释，过滤，然后加于HPD100大孔吸附树脂上进行吸附，吸附完成后，用水洗脱至流出液为无色，再用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液进行洗脱，得洗脱液，随后将洗脱液进行浓缩，即得木瓜有效组分。本发明的有益效果是：利用本发明制备方法所得木瓜有效组分中富含三萜等有效成分，具有抗氧化、抗衰老、清除自由基、抗突变、延缓皮肤衰老等活性。
Description
技术领域
本发明属于中药有效组分提取领域，具体涉及一种木瓜有效组分的制备方法与用途。
背景技术
木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实，习称“皱皮木瓜”，又名铁脚梨、宣木瓜、酸木瓜、空儿木瓜、木瓜实。已收载于《中华人民共和国药典》（2010年版）一部中，其富含皂苷类、黄酮类、多糖、有机酸、鞣质等化学成分。具有平肝舒筋，合胃化湿的功能。用于湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，吐泻转筋，脚气水肿。主产于我国的安徽、浙江、河南、湖北和四川等地。其中以安徽宣城木瓜，湖北资丘木瓜和浙江淳安木瓜质量最好。四川产量最大，称川木瓜，质量亦优，畅销全国。中医认为木瓜有舒筋、活络、健脾开胃、舒肝止痛、祛风除湿之功效，可用于预防和治疗风湿病、霍乱、痢疾、肠炎、脚气病及维生素C缺乏症等。木瓜既是食品，又可入药，其所含营养成分非常丰富，是极好的绿色保健食品。
近年来已利用木瓜果实加工罐头、果脯、果酒、果醋、果汁等保健食品及美容护肤化妆品。现已报道木瓜中含有黄酮类、有机酸类、三萜类、皂苷类、糖类、鞣质等化合物。然而迄今为止，现有技术中未见对木瓜有效组分的制备方法及活性的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种木瓜有效组分的制备方法及其用途。
本发明的木瓜有效组分，其制备过程包括以下步骤：取木瓜，用乙醇提取，得提取液；将所述提取液浓缩至无醇味，加水稀释，过滤，然后加于HPD100大孔吸附树脂上进行吸附，吸附完成后，用水洗脱至流出液为无色，再用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液进行洗脱，得洗脱液，随后将洗脱液进行浓缩，即得木瓜有效组分。
在判断是否洗脱完毕时，取洗脱液0.2ml，加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液，摇匀，再加入1.0ml高氯酸溶液。60℃水浴加热5min。摇匀，肉眼观察，至所取的洗脱液样品不显紫红色则为洗脱终点。
优选的，所述乙醇提取的次数为1～4次，每次乙醇提取的时间为0.5～4小时，每次提取时加入乙醇的重量是木瓜重量的5～20倍。特别优选的，乙醇提取的次数为2次和3次，每次乙醇提取的时间为1小时、2小时和3小时，每次提取时加入乙醇的重量是木瓜重量的8倍、10倍、12倍、14倍、16倍和18倍。
优选的，所述乙醇的质量百分比浓度为80%～95%。特别优选的，乙醇的质量百分比浓度为85%、90%。
优选的，所述加水稀释时加入水的重量为所述木瓜重量的10倍。
优选的，所述过滤的目数为300目。
优选的，所述木瓜选自白花木瓜或皱皮木瓜中的一种。其中，白花木瓜为木瓜属毛叶木瓜(C.cathayensis)的一个变种；皱皮木瓜为为蔷薇科木瓜属植物贴梗海棠Chaenomeles lagenaria(Loiscl)Koidz的成熟果实。
本发明还提供一种所述木瓜有效组分的制备方法得到的木瓜有效组分。
本发明还提供所述木瓜有效组分在制备抗氧化化妆品中的应用。
当本发明所得木瓜有效组分作为化妆品的原料或辅料施用于人或动物时，它们可以以其本身给予，即将本发明上述的木瓜有效组分以原形直接施用于使用者；或者可以是以含有例如0.1%～99.9%的木瓜有效组分与其它能够形成化妆品的原辅料配合使用。
本发明的有益效果在于：利用本发明制备方法所得木瓜有效组分中富含三萜等有效成分，具有抗氧化、抗衰老、清除自由基、抗突变、延缓皮肤衰老等活性，可以用于食品、保健食品、化妆品、药品的添加剂或原料使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例1中所得木瓜有效组分还原能力的测试图；
图2为本发明实施例1中所得木瓜有效组分对DPPH自由基的清除作用测试图；
图3为本发明实施例1中所得木瓜有效组分对超氧阴离子自由基的清除作用测试图。
具体实施方式
为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。
实施例1：
取白花木瓜，用质量百分比浓度为85%的乙醇提取3次，每次提取的时间为2小时，每次提取时加入乙醇的重量是白花木瓜重量的10倍，合并3次提取液，得提取液；将提取液浓缩至无醇味，加10倍白花木瓜重量的水稀释，采用具有300目的网筛过滤，然后加于HPD100大孔吸附树脂上进行吸附，吸附完成后，用水洗脱至流出液为无色，再用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液进行洗脱，得洗脱液，随后将洗脱液进行浓缩，即得木瓜有效组分。
其中，取洗脱液0.2ml，加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液，摇匀，再加入1.0ml高氯酸溶液。60℃水浴加热5min。摇匀，肉眼观察，至所取的洗脱液样品不显紫红色则为洗脱终点。
另取上述白花木瓜经乙醇提取后残留的木瓜残渣用10倍重量的水提取3次，每次提取2小时，得水提取液，减压浓缩，喷雾干燥，得木瓜水提取物。
实施例2：
取白花木瓜，用质量百分比浓度为80%的乙醇提取4次，每次提取的时间为0.5小时，每次提取时加入乙醇的重量是白花木瓜重量的5倍，合并，得提取液；将提取液浓缩至无醇味，加10倍白花木瓜重量的水稀释，采用具有300目的网筛过滤，然后加于HPD100大孔吸附树脂上进行吸附，吸附完成后，用水洗脱至流出液为无色，再用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液进行洗脱，得洗脱液，随后将洗脱液进行浓缩，即得木瓜有效组分。
其中，取洗脱液0.2ml，加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液，摇匀，再加入1.0ml高氯酸溶液。60℃水浴加热5min。摇匀，肉眼观察，至所取的洗脱液样品不显紫红色则为洗脱终点。
实施例3：
取皱皮木瓜，用质量百分比浓度为90%的乙醇提取1次，每次提取的时间为4小时，每次提取时加入乙醇的重量是皱皮木瓜重量的20倍，得提取液；将提取液浓缩至无醇味，加10倍皱皮木瓜重量的水稀释，采用具有300目的网筛过滤，然后加于HPD100大孔吸附树脂上进行吸附，吸附完成后，用水洗脱至流出液为无色，再用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液进行洗脱，得洗脱液，随后将洗脱液进行浓缩，即得木瓜有效组分。
其中，取洗脱液0.2ml，加入0.2ml5%香草醛-冰醋酸溶液，摇匀，再加入1.0ml高氯酸溶液。60℃水浴加热5min。摇匀，肉眼观察，至所取的洗脱液样品不显紫红色则为洗脱终点。
对比例1-2：
除将HPD100大孔吸附树脂分别改为D101大孔吸附树脂和AB-8大孔吸附树脂之外，其余完全按照实施例1的方式实施，得对比例1-2。
对比例3-8：
除将用于洗脱的质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液分别改为质量百分比浓度为60%、65%、70%、75%、85%、90%的乙醇水溶液之外，其余完全按照实施例1的方式实施，得对比例3-8。
为验证本发明技术方案的显著性，特做以下对比试验：
从上表可以看出，采用HPD100大孔吸附树脂能很好的吸附木瓜中的有效成分，且能很好地被洗脱下来，最终所得有效组分中三萜含量最高。相比其它树脂，具有显著性。
为验证本发明技术方案的显著性，特做以下对比试验：
| 产品 | 所得木瓜有效组分中三萜含量 |
| 实施例1 | 13.6% |
| 实施例2 | 13.8% |
| 实施例3 | 13.5% |
| 对比例3 | 8.3% |
| 对比例4 | 7.5% |
| 对比例5 | 7.8% |
| 对比例6 | 9.1% |
| 对比例7 | 8.8% |
| 对比例8 | 8.1% |
从上表可以看出，采用质量百分比浓度为80%的乙醇水溶液作为洗脱液，所得木瓜有效组分中三萜含量相比其它浓度的乙醇水溶液，具有显著性。
为验证本发明的技术效果，以上述实施例所得的木瓜有效组分为样品，特作以下试验：
1、木瓜还原能力测试
实验原理：还原力是物质潜在抗氧化能力的指标之一，试样将赤血盐还原成黄血盐，黄血盐与Fe3+作用生成普鲁士蓝，在700nm处测定吸光值以检测普鲁士蓝的生成量，通过普鲁士蓝的生成量衡量样品的还原能力。
实验方法：分别取待测木瓜有效组分溶液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL，用蒸馏水将体积补足到1mL；取阳性对照样品（维生素溶液260微克/毫升）0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL，用蒸馏水补足到1mL。在各组样品中加入1mL磷酸盐缓冲液和1mL铁氰化钾溶液，混匀，50℃水浴20min，取出，加入1mL三氯乙酸溶液，混匀。取2mL的混合液于5mL离心管中，加入2mL蒸馏水和0.4mL的三氯化铁溶液，迅速混匀。测定溶液在700nm处的吸光值。
实验结果：见图1；木瓜有效组分在测试浓度范围内表现出接近Vc溶液的还原能力，并且曲线同Vc具有相似的浓度变化趋势。表明木瓜有效组分具有潜在抗氧化能力。
2、木瓜有效组分对DPPH自由基清除作用的测试
实验原理：DPPH甲醇溶液为紫罗兰色，在517nm下有强的吸光值，若与样品结合，会降低吸光值，由此借以判断样品清除自由基的能力。
实验方法
实验组：分别取0.1mL，0.2mL，0.5mL，1mL木瓜有效组分溶液于试管中，用蒸馏水补足到1mL，加入4mLDPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min，不断震荡，测定517nm处的吸光值。
空白组：在各个试管中分别取同实验组同等体积的样品溶液，用蒸馏水补足到1mL，加入4mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处吸光值。
对照组：1mL蒸馏水加入4mLDPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min，测定517nm处的吸光值。
实验结果：DPPH抑制率（%）=（A0-A1+A2）/A0*100%
其中A0为对照组的吸光值，A1为实验组的吸光值，A2为对应空白组的吸光值。
结果见图2；实验组可以有效清除DPPH自由基，且在测试范围内清除率受浓度影响不大。
3、木瓜有效组分对超氧阴离子的清除作用测试
实验原理：邻苯三酚在弱碱性环境中自身氧化分解产生超氧阴离子，随着反应的进行，超氧阴离子在体系中不断积累，导致反应液在420nm处的吸光度在反应开始一段时间内会随着时间的变化而线性增大，因此测定在该段时间内被测物反应液的吸光度随时间的变化率，并与空白液比较便可得出被测物抑制超氧阴离子的能力。
实验方法
实验组：取5.6mLTris HCl缓冲液，分别加入0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL的白花木瓜有效组分溶液，用蒸馏水补足到6mL，放入25℃水浴锅中水浴10min,然后加入25℃预温的邻苯三酚（如果室温高于25℃可以在室温下操作），充分混匀，从加入邻苯三酚后开始准确计时3min，而后加入5%抗坏血酸（Vc）0.05mL终止反应。10min钟后在420nm处测定其吸光度值。
对照组：取5.6mL的Tris HCl缓冲液，分别加入同实验组相同体积的木瓜有效组分溶液，用蒸馏水补足到6mL加入12mmol/L的HCl溶液，充分混匀，从加入HCl溶液开始准确计时3min，加入5%抗坏血酸终止反应。10min钟后在420nm处测定其吸光度值。
空白组：取5.6mL50mmol/L Tris-HCl缓冲液，加入0.4mL蒸馏水，此后操作同实验组。
实验结果：E=[(A0-A1+A2)/A0]*100%
A0为空白吸光度值，A1为实验组吸光度值，A2为对照组吸光度值。
结果见图3；木瓜有效组分在测试范围内表现出一定的清除超氧阴离子自由基的能力，且在5%浓度下表现出相对较好的清除自由基活性。
另通过对上述实施例中所得木瓜有效组分与实施例1中所得木瓜水提取物的还原能力进行对比测试，发现木瓜有效组分的还原能力（即抗氧化能力）是木瓜提取物的6-8倍。
最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
Claims (7)
1.一种木瓜有效组分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取木瓜，用质量百分比浓度为80％～95％的乙醇提取，得提取液；将所述提取液浓缩至无醇味，加水稀释，过滤，然后加于HPD100大孔吸附树脂上进行吸附，吸附完成后，用水洗脱至流出液为无色，再用质量百分比浓度为80％的乙醇水溶液进行洗脱，得洗脱液，随后将洗脱液进行浓缩，即得木瓜有效组分。
2.根据权利要求1所述的木瓜有效组分的制备方法，其特征在于：所述乙醇提取的次数为1～4次，每次乙醇提取的时间为0.5～4小时，每次提取时加入乙醇的重量是木瓜重量的5～20倍。
3.根据权利要求1所述的木瓜有效组分的制备方法，其特征在于：所述加水稀释时加入水的重量为所述木瓜重量的10倍。
4.根据权利要求1所述的木瓜有效组分的制备方法，其特征在于：所述过滤的目数为300目。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的木瓜有效组分的制备方法，其特征在于：所述木瓜选自白花木瓜或皱皮木瓜中的一种。
6.一种基于权利要求1-4中任意一项所述木瓜有效组分的制备方法得到的木瓜有效组分。
7.根据权利要求6所述木瓜有效组分在制备抗氧化化妆品中的应用。
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