CN107223966B - 一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制备方法 - Google Patents
一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制备方法，通过以管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草为主要原料，以结晶麦芽糖醇和壳聚糖作为辅料，四者配伍，相辅相成，制备的蓉甘草口服液中腺苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量稳定，其中，腺苷含量最高为3.90mg/100ml，松果菊苷含量最高为52.37mg/100ml，毛蕊花糖苷含量最高为9.75mg/100ml。该口服液对于食品加工技术领域具有广泛的实用性。
Description
技术领域
本发明属于功能食品制备技术领域，具体的，涉及一种蓉草甘口服液及其制备的技术领域。
背景技术
免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。当免疫力低下时，容易罹患疾病，免疫力低下的主要影响因素，一是年龄因素：人生有两个免疫能力低下的阶段，即儿童阶段和老年阶段。儿童的免疫系统尚未成熟，功能不健全，免疫力低下；而老年机体器官功能衰退、获得营养能力下降，再加之免疫器官逐渐萎缩衰退，导致免疫力下降，与此相对应，儿童和老人也是疾病高发的两个阶段。二是不良的生活方式和习惯：精神紧张、营养不良、缺乏运动或睡眠不足，滥用酒精和吸烟等，都可抑制免疫系统，降低机体免疫力。三是其他因素：环境中的有毒物质、某些药物、放射治疗以及过量的抗生素也都会抑制免疫系统。通过分析导致免疫力低下的主要原因，不难看出老年人及受社会因素和不良的生活方式影响处于亚健康状态的人群是免疫力低下的主要易感人群。
肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)或管花肉苁蓉(Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight)的干燥带鳞叶的肉质茎。味甘、咸，性温。归肾、大肠经。具有补肾阳，益精血，润肠通便的功效。肉苁蓉分布于内蒙古、宁夏、甘肃和新疆，素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值，是我国传统的名贵中药材。
冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis (BerK.)Sacc.)寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体。味甘、性平，归肺、肾经。具有补肾益肺，止血化痰的功效。冬虫夏草是极其珍稀名贵的传统中药材。
蝙蝠蛾拟青霉作为天然冬虫夏草的人工培育替代品，是从新鲜冬虫夏草中分离所得的虫草菌——蝙蝠蛾拟青霉菌株，通过深层发酵培养，将发酵产物(菌丝体)过滤干燥制成的粉状成品。具有增强体质、延缓衰老、改善睡眠、提高人体免疫功能等功效。
玫瑰花为蔷薇科植物玫瑰的干燥花蕾。味甘、微苦，性温。归肝、脾经。具有行气解郁，和血，止痛的功效。玫瑰花有理气解郁、和血散淤、消肿止痛、美容养颜之功效，能消暑热、解烦渴、醒脾益胃及止血收敛。玫瑰花作为可供食用的药物，是正式载入《食物本草》的。玫瑰花富含维生素C、葡萄酒、蔗糖、柠檬酸、苹果酸，食之味道鲜美。玫瑰花中含富含黄酮类和多酚类化合物、多糖、氨基酸、微量元素等，具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖等多种功效。
甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)的干燥根和根茎。味甘，性平。归心、肺、脾、胃经。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的功效。
目前，市场上增强免疫力功能的保健品从原料上主要分如下几类：一类是中药类，如黄芪、山药、枸杞、茯苓、牛膝等。二类是真菌类，如灵芝、香菇、银耳、虫草、木耳、猴头菌等。三类是动物源类，如海参、中华鳖、蚕蛹、雄蚕蛾等。四类是益生菌类，如双岐杆菌、乳酸杆菌等。五类是维生素矿物质类，如维生素E、维生素C、β-胡萝卜素、锌、硒等。尚未发现以管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草为主要原料制成的功能食品。因此，需要在现有提高免疫力的功能食品的基础上进行升级和改造，提供一种能够明显提高免疫力的口服液产品。
发明内容
针对现有技术中尚未发现以管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草为主要原料制成的功能食品的技术现状，本发明旨在于提供一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制备方法，与现有技术相比，本申请以管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草为主要原料，以结晶麦芽糖醇和壳聚糖作为辅料，四者配伍，相辅相成，共同达到提高免疫力的功效，对于食品加工技术领域具有广泛的实用性。
本发明具体提供的一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液，按照重量份计，包括管花肉苁蓉16-24份，蝙蝠蛾拟青霉12-15份，玫瑰花 5-8份，甘草5-7份，结晶麦芽糖醇0-15份，壳聚糖1-3份，水1034-1905 份。
优选的，本发明提供的一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液，按照重量份计，管花肉苁蓉24份，蝙蝠蛾拟青霉15份，玫瑰花5份，甘草5份，壳聚糖1份，水1300份。
同时，本发明提供的一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液制备方法，具体采用如下方法步骤制备：
(1)原料预处理：选取管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、壳聚糖和结晶麦芽糖醇，除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将其他原料冲洗干净后备用。
(2)提取、浓缩：将5-8份玫瑰花和12-15份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与16-24份管花肉苁蓉、5-7份甘草共同置于提取罐中，再加入1034-1905份水，在料液体积比为11-15：1的条件下提取1-3 次，每次1-3小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.01-1.05，得到浓缩液。
(3)澄清：将1-3份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液。
(4)调配：将上述步骤中得到的滤液加入55-70份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为4-6，得蓉草甘口服液。
(5)口服液瓶干热灭菌：将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min 的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用。
(6)灌装：将上述步骤得到的口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装。
(7)灭菌：在温度115℃、时间30min条件下高温灭菌，冷却。
(8)灯检入库：剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
本发明中，步骤(2)提取、浓缩步骤中，在料液体积比为11-15： 1的条件下提取3次，第一次2小时，其余2次每次1小时，合并3 次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.05。
通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下效果:
(1)本发明提供一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制备方法，与现有技术相比，本申请以管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草为主要原料，以结晶麦芽糖醇和壳聚糖作为辅料，四者配伍，相辅相成，共同达到提高免疫力的功效，对于食品加工技术领域具有广泛的实用性。
(2)本发明制备的口服液与固体制剂相比，其优点为：生物利用度高；吸收快，显效迅速，液体制剂中的药物分散度大，易吸收；能大批量生产，应用方便；服用剂量小，便于保存和服用；加入矫味剂，口感好，易被人们所接受；成品经灭菌处理，密封包装，质量稳定，不易变质。
(3)本发明提供的用于提高免疫力的蓉甘草口服液中，腺苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量稳定，其中，腺苷含量最高为 3.90mg/100ml，松果菊苷含量最高为52.37mg/100ml，毛蕊花糖苷含量最高为9.75mg/100ml。
(4)本发明制备的蓉甘草口服液中菌落总数小于10CFU/ml，未检出致病菌，腺苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷等主要成分变动幅度不明显，含量稳定；经过12个月的稳定性检验，本发明制备的蓉甘草口服液中铅、砷的含量始终低于0.05mg/L，可溶性固形物保持在 10g/100ml，腺苷的含量降低了0.28mg/100ml，松果菊苷的含量降低了1.96mg/100ml，毛蕊花糖苷的含量降低了0.44mg/100ml，主要成分总体稳定性较强。
(5)经动物实验证明，中、高剂量组小鼠迟发型变态反应能力与对照组比较显著提高(P<0.05)，高剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较显著提高，高剂量组小鼠半数溶血值(HC50)与对照组比较显著提高(P<0.05)，中、高剂量组小鼠NK细胞活性与对照组比较显著提高(P<0.05)。因此，本申请提供的蓉草甘口服液具有增强免疫力功能。
附图说明
图1显示为生产条件中料水比和提取次数因素之间的等高线图。
图2显示为生产条件中料水比和提取次数因素之间的响应面图。
图3显示为生产条件中料水比和提取时间因素之间的等高线图。
图4显示为生产条件中料水比和提取时间因素之间的响应面图。
图5显示为生产条件中提取时间和提取次数因素之间的等高线图。
图6显示为生产条件中提取时间和提取次数因素之间的响应面图。
具体实施例
本发明使用的材料：
管花肉苁蓉(和田秋永霞管花肉苁蓉有限责任公司)，蝙蝠蛾拟青霉(浙江万丰企业集团制药有限公司)，玫瑰花(新疆本草堂中药饮片有限公司)，甘草(新疆本草堂中药饮片有限公司)，结晶麦芽糖醇(山东绿健生物技术有限公司)，壳聚糖(潍坊海之源生物制品有限公司)。
本发明使用的仪器：
动物台秤、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离心机、 722分光光度计、恒温水浴箱、酶标仪、显微镜等。
实施例一：
本发明提供的一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液，具体采用如下方法制备获得：
(1)原料预处理：选取管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、壳聚糖和结晶麦芽糖醇，除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将其他原料冲洗干净后备用。
(2)提取、浓缩：将5-8份玫瑰花和12-15份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与16-24份管花肉苁蓉、5-7份甘草共同置于提取罐中，再加入1034-1905份水，在料液体积比为11-15：1的条件下提取1-3 次，每次1-3小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.01-1.05，得到浓缩液。
(3)澄清：将1-3份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液。
(4)调配：将上述步骤中得到的滤液加入55-70份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为4-6，得蓉草甘口服液。
(5)口服液瓶干热灭菌：将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min 的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用。
(6)灌装：上述步骤中得到的口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装。
(7)灭菌：在温度115℃、时间30min条件下高温灭菌，冷却。
(8)灯检入库：剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
优选的，本发明步骤(2)提取、浓缩步骤中，在料液体积比为11-15：1的条件下提取3次，第一次2小时，其余2次每次1小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.05。
优选的，本发明提供的一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液，按照重量份计，管花肉苁蓉24份，蝙蝠蛾拟青霉15份，玫瑰花5份，甘草5份，结晶麦芽糖醇0份，壳聚糖1份，水1300份。
实施例二：
除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、冲洗干净后备用。将5份玫瑰花和12份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与16份管花肉苁蓉、5份甘草共同置于提取罐中，再加入1034份水，在料液比为11：1的条件下提取1次，每次1小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.01，得到浓缩液。将1份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液。将上述步骤中得到的滤液加入55份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为4，得蓉草甘口服液。将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用。蓉草甘口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装。在温度115℃、时间 30min条件下高温灭菌，冷却。剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
实施例三：
除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、冲洗干净后备用。将7份玫瑰花和14份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与22份管花肉苁蓉、6份甘草共同置于提取罐中，再加入1800份水，在料液比为1：15的条件下提取2次，每次3小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.03，得到浓缩液。将1-3份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液。将上述步骤中得到的滤液加入65份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为6，得蓉草甘口服液。将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用。蓉草甘口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装。在温度115℃、时间 30min条件下高温灭菌，冷却。剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
实施例四：
除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、冲洗干净后备用。将6份玫瑰花和13份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与20份管花肉苁蓉、6份甘草共同置于提取罐中，再加入1580份水，在料液比为1：14的条件下提取3次，每次3小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.04，得到浓缩液。将2份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液。将上述步骤中得到的滤液加入62份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为4，得蓉草甘口服液。将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用。蓉草甘口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装。在温度115℃、时间 30min条件下高温灭菌，冷却。剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
实施例五：
除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、冲洗干净后备用。将5份玫瑰花和15份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与24份管花肉苁蓉、5份甘草共同置于提取罐中，再加入1300份水，在料液比为1：13的条件下提取2次，每次2小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.05，得到浓缩液。将1份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液。将上述步骤中得到的滤液加入0份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为5，得蓉草甘口服液。将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用。蓉草甘口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装。在温度115℃、时间 30min条件下高温灭菌，冷却。剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
实施例六：
除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、冲洗干净后备用。将8份玫瑰花和15份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与24份管花肉苁蓉、7份甘草共同置于提取罐中，再加入1905份水，在料液比为1：15的条件下提取3次，每次3小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.05，得到浓缩液。将3份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液。将上述步骤中得到的滤液加入70份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为6，得蓉草甘口服液。将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用。蓉草甘口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装。在温度115℃、时间 30min条件下高温灭菌，冷却。剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
实施例七：蓉甘草中试放大试验
口服液是在汤剂、注射剂基础上发展起来的新剂型，是将原材料用水或其他溶剂，采用适宜的方法制成的内服液体剂型。将上述本发明实施例一至实施例六得到的口服液进行中试放大试验，其中三批中试生产数据如下：
表1：蓉甘草口服液的中试放大试验结果
由表1的中试验证结果可以看出，工艺切实可行，从成品率来看，工艺重现性较好，证明了本发明提供的蓉甘草口服液制备方法的稳定性，适合工业化大生产。本发明制备的口服液与固体制剂相比，其优点为：生物利用度高；吸收快，显效迅速，液体制剂中的药物分散度大，易吸收；能大批量生产，应用方便；服用剂量小，便于保存和服用；加入矫味剂，口感好，易被人们所接受；成品经灭菌处理，密封包装，质量稳定，不易变质。
实施例八：一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液的制备工艺优化
在上述系列实施例的实施情况下，进一步提供优化的蓉草甘口服液生产方法。通过单因素试验进一步确定最适料液体积比比范围为 11-15：1，最适提取时间控制在1h-3h，最适提取次控制在1-3次。
1.正交试验优化
在单因素实验的基础上以L9(33)因素水平表，设计优化方案，具体参数设计请参见表2；对检测结果进行直观分析，以确定最佳条件，具体结果及数据分析请参见表3。再对直观分析所得出的最佳条件进行试验验证。
表2：L9(33)正交试验因素水平
表3：L9(33)极差分析表
通过表3极差分析，可得出各因素影响的主次关系和最佳配比，生产条件各因素影响主次关系为：提取时间＞料液比＝提取次数。在蓉甘草口服液的生产过程中，提取时间的变化对结果的影响更为明显，因此尽可能的控制提取时间能够更好地达到生产目的；而达到一定的料液比时，随着时间的变化，提取率会趋于稳定，其变化情况相对缓慢，综合实际生产情况考虑，选取提取时间2h，料液比1:13，提取次数2次，此条件下的提取率为91％。
2.响应面法优化试验及结果分析
在单因素试验的基础上，根据Box-Behnken实验设计原理，选取料液比(A)、提取时间(B)、提取次数(C)进行三因素三水平的响应面分析方法，试验设计方案请参见表4，试验结果请参见表5。
表4：响应面分析试验设计
表5：响应面试验结果
采用Design Expert 8.0.6软件对试验数据进行回归分析，由此可求出影响因素的一次效应，二次效应及其交互效应的关联式，得到回归方程见式：
Y＝91.40+0.87*A-0.05*B+8.63*C-6.00*AB+8.25*AC+6.50*BC
-28.57A2-13.82B2-23.57C2
根据上述回归方程及回归模型方差分析表绘出双因子效应分析图，请参见附图1至附图6。两因素之间的影响呈现抛物线型关系，且均有一个极大值点，变化趋势是先增大后减小。
通过上述分析得到蓉甘草口服液生产的最佳工艺是：提取时间 2h，料液比1:13，提取次数2次，提取率的预测值为91.40％。与正交试验的优化结果一致；对比两种分析方法及优化结果，综合考虑实际需要，确定最优的条件为提取时间2h，料液比1:13，提取次数2次。
实施例九：蓉甘草口服液功效成分检测及稳定性试验
对上述实施例二至实施例六系列试验制备获得蓉甘草口服液进行功效成分检测和稳定性试验，各项检测方法均采用常规检测标准。功效成分检测结果参见表7，稳定性试验检测结果参见表8。
表7：蓉甘草口服液检测结果
由表7可知，本发明提供的用于提高免疫力的蓉甘草口服液中，腺苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量稳定，其中，腺苷含量最高为 3.90mg/100ml，松果菊苷含量最高为52.37mg/100ml，毛蕊花糖苷含量最高为9.75mg/100ml，因此将松果菊苷、毛蕊花糖苷、腺苷定为蓉甘草口服液的标志性成分。
表8：蓉甘草口服液稳定性试验检测结果
由表8可知，经过3个月稳定性实验验证，本发明制备的蓉甘草口服液中菌落总数小于10CFU/ml，未检出致病菌，腺苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷等主要成分变动幅度不明显，含量稳定；经过12个月的稳定性检验，本发明制备的蓉甘草口服液中铅、砷的含量始终低于0.05mg/L，可溶性固形物保持在10g/100ml，腺苷的含量降低了 0.28mg/100ml，松果菊苷的含量降低了1.96mg/100ml，毛蕊花糖苷的含量降低了0.44mg/100ml，主要成分总体稳定性较强。
实施例十：提高免疫力的动物验证实验
采用上述实施例一至实施例六制备的蓉草甘口服液对小鼠进行灌胃处理，分别测定本发明提供的蓉草甘口服液对小鼠迟发型变态反应、小鼠抗体生成细胞数的影响、小鼠半数溶血值以及小鼠NK细胞活性的影响，从而验证本发明提供的蓉草甘口服液具有提高免疫力的效果。
(1)材料与分组：人体口服推荐剂量为每日200ml，体重按60kg 计算，折合动物实验中的最佳剂量为3.33ml/kg.bw。选择SPF级ICR 种雌性小鼠160只，体重18g-22g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。饲料购自长沙市天勤生物技术有限公司。每40只小鼠为一大组，共五大组。免疫I组进行小鼠NK细胞的活性测定；免疫II组进行小鼠NK细胞的活性测定；免疫III组进行半数溶血值(HC5O)的测定和抗体生成细胞数的测定；免疫IV组，进行迟发型变态反应实验；每大组40只小鼠按体重随机分为4小组，即对照组和低、中、高剂量组，每组10只小鼠。据人体口服推荐量，设5倍浓缩液低、中、高剂量分别为3.33ml/kg.bw、6.67ml/kg.bw、20.00ml/kg.bw，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍。试验时，低、中剂量分别取5倍浓缩液33.3ml、66.7ml加蒸馏水定容至200ml，高剂量给予5 倍浓缩液，对照组予以等体积的蒸馏水，各组按0.2ml/10g.bW体积给小鼠灌胃，每天一次，连续灌胃至少30天。
(2)实验方法：迟发型变态反应(DTH)采用足跖增厚法进行测定，同一部位测量三次，取平均值，以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。抗体生成细胞检测采用Jerne改良玻片法进行测定；半数溶血值的测定，溶血素的量以半数溶血值(HC5Q)表示，按下式计算：半数溶血值(HC5Q)＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值x稀释倍数；NK细胞活性的测定采用乳酸脱氢酶测定法进行测定，按下式计算：NK细胞活性＝[(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD—自然释放孔OD)]×100％
(3)实验结果：蓉草甘口服液对小鼠迟发型变态反应(DTH) 的影响结果见表9，对小鼠抗体生成细胞数的影响结果见表10，对小鼠半数溶血值(HC50)的影响结果见表11，对小鼠NK细胞活性的影响结果见表12。
表9：蓉草甘口服液对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
表10：蓉草甘口服液小鼠抗体生成细胞数的影响
表11:蓉草甘口服液对小鼠半数溶血值(HC50)的影响
表12：蓉草甘口服液对小鼠NK细胞活性的影响
由表9-表11可知，经口灌胃给予小鼠3.33ml/kg-bw、 6.67ml/kg.bw、20.00ml/kg.bw剂量的蓉草甘口服液5倍浓缩液30天，与对照组比较，6.67ml/kg bw、20.00ml/kg.bw剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力、NK细胞活性，20.00ml/k.bw剂量能显著提高小鼠抗体生成细胞数、半数溶血值。即中、高剂量组小鼠迟发型变态反应能力与对照组比较显著提高(P<0.05)，高剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较显著提高，高剂量组小鼠半数溶血值(HC50)与对照组比较显著提高(P<0.05)，中、高剂量组小鼠NK细胞活性与对照组比较显著提高(P<0.05)。因此，本申请提供的蓉草甘口服液具有增强免疫力功能。
综上所述，本发明提供一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液及其制备方法，与现有技术相比，本申请以管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草为主要原料，以结晶麦芽糖醇和壳聚糖作为辅料，四者配伍，相辅相成，制备的蓉甘草口服液中腺苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量稳定，其中，腺苷含量最高为3.90mg/100ml，松果菊苷含量最高为52.37mg/100ml，毛蕊花糖苷含量最高为9.75mg/100ml。
如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。
Claims (1)
1.一种用于提高免疫力的蓉草甘口服液，其特征在于，蓉草甘口服液通过如下制备方法获得：
(1)原料预处理：选取管花肉苁蓉、蝙蝠蛾拟青霉、玫瑰花、甘草、壳聚糖和结晶麦芽糖醇，除壳聚糖和结晶麦芽糖醇外，将其他原料冲洗干净后备用；
(2)提取、浓缩：将5-8份玫瑰花和12-15份蝙蝠蛾拟青霉分别用滤袋包裹，与16-24份管花肉苁蓉、5-7份甘草共同置于提取罐中，再加入1034-1905份水，在料液体积比为11-15:1的条件下提取3次，第一次2小时，其余2次每次1小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.05，得到浓缩液；
(3)澄清：将1-3份壳聚糖配制成1％的水溶液，将浓缩液温度保持在50℃，加入配置好的壳聚糖溶液，搅拌30分钟，静置8小时，过滤后得到滤液；
(4)调配：将上述步骤中得到的滤液加入55-70份结晶麦芽糖醇，搅拌溶解，加纯化水定容，控制pH值为4-6，得蓉草甘口服液；
(5)口服液瓶干热灭菌：将口服液瓶在洁净区外用饮用水粗洗，进入洁净区用纯化水进行精洗后甩干，然后在温度250℃、时间30min的条件下干热灭菌，备用；将瓶盖拆去外包装进入洁净区，用纯化水进行精洗，再用75％乙醇浸泡，干燥，备用；
(6)灌装：将上述步骤得到的口服液采用钠钙玻璃口服液瓶灌装；
(7)灭菌：在温度115℃、时间30min条件下高温灭菌，冷却；
(8)灯检入库：剔除不合格产品，成品检验合格后包装入库。
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