CN115105543B - 木瓜总三萜在制备抗胃衰老药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了木瓜总三萜在抗胃衰老药物中的应用。木瓜总三萜可显著抑制D‑半乳糖所致人胃黏膜上皮细胞(GES‑1细胞)和小鼠胃衰老，抑制细胞周期阻滞及细胞和胃黏膜组织中SASP、衰老基因和Bcl‑2、Bcl‑xl表达；促进抗衰老基因和Bax、Bax表达；抑制衰老的GES‑1细胞和胃黏膜组织分泌EVs。在动物实验过程中，未发现小鼠死亡，也没有观察到小鼠明显的肝肾功能异常，这表明其具有较好的安全性。木瓜总三萜可应用于制备抗胃衰老药物及药物组合物。

Description

木瓜总三萜在制备抗胃衰老药物中的应用
技术领域
本发明涉及药物领域，具体涉及木瓜总三萜在制备抗胃衰老药物中的应用。
背景技术
“衰老”虽不是一种疾病，却是诸多慢性病的重要危险因素。因此，要积极应对人口老龄化问题，抗衰老研究刻不容缓。大量临床实践证明，胃衰老是人体衰老的重要原因，中老年人抗胃衰老是缓衰增寿的务本之举。
中医药以其独特的全局观辨证论治体系、多靶点作用机制、丰富的活性物质种类为抗衰老药物的发现提供了不竭的动力和灵感来源。借助现代医学的最新研究成果，深入系统研究中药抗胃衰老的作用机制及作用环节，有望从中研发出具有抗胃衰老的新型、特效药物应用于临床。
木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomelesspeciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实，又名皱皮木瓜、铁脚梨、贴梗海棠等，是一种非常重要的可供观赏和食用的植物，其果实素有“百益之果”之美称，被列为卫生部2003年首批认定的药食两用的食品之一，广泛应用于美容化妆品和保健品领域。木瓜总三萜是皱皮木瓜中的重要活性成分，其主要成分包括齐墩果酸、熊果酸、白桦脂酸、3-O-乙酰熊果酸、3-O-乙酰坡模醇酸、山楂酸、委陵菜酸和Speciosaperoxide。木瓜总三萜在鲜果中含量在0.32％以上，富集后的木瓜三萜总含量为90.02％。ZL201510660595.8提供一种皱皮木瓜提取物、提取方法及其应用，关于木瓜总三萜的提取有详细介绍。
发明内容
本发明提供一种木瓜总三萜在制备抗衰老药物中的应用，木瓜总三萜对胃衰老有较好的抑制作用，可用于制备抗胃衰老药物。
本发明的技术方案是，一种木瓜总三萜在制备抗胃衰老药物中的应用。
进一步地，所述药物剂型为混悬液、胶囊剂、片剂、丸剂、滴丸剂、粉剂、注射液或者其他药学上可接受的剂型。
进一步地，所述抗胃衰老药物中用量为2.22mg/kg～16.62mg/kg。优选16.62mg/kg。
抗衰老药物难于成功研发的一个重要原因是没有一个理论可以较好地解释衰老现象和作用机制。基于目前的研究证实，衰老胃黏膜微环境的形成和衰老相关分泌表型(SASP) 释放在胃衰老中起着重要作用。与年轻、健康胃微环境相比，SASP和免疫抑制细胞积累而变得越来越不稳定，SASP一方面可通过多种转录因子和信号通路，在空间和时间上改变胃衰老微环境，进一步恶化衰老微环境/向病理微环境转化；另一方面可通过旁分泌和内分泌方式不断扩大和持续恶化衰老信号，促进胃组织和胃衰老。因此，若能改善胃衰老微环境、阻断SASP介导的衰老信号传递，就可以有效抑制胃衰老发生。
衰老胃黏膜微环境诱导了损伤的胃黏膜上皮细胞分泌细胞外囊泡(EVs)，而EVs在胃黏膜上皮细胞衰老中扮演着重要角色。EVs是受损的细胞分泌并释放到细胞外环境中的球状膜性囊泡，在SASP参与下通过自分泌、旁分泌和内分泌方式放大衰老信号，从因受损而衰老的胃黏膜上皮细胞穿梭到受体细胞(正常的胃黏膜上皮细胞)，以融合或内吞方式传递给受体细胞，从而导致衰老信号传播。研究表明，EVs促进了胃黏膜上皮细胞衰老。因而，靶向衰老胃黏膜上皮细胞及其分泌EVs，开发抗胃衰老治疗药物，有望突破当前无抗胃衰老药物可用窘境。
本发明为了试验并明确木瓜总三萜抗胃衰老作用，分别从衰老的细胞和衰老的动物模型进行观察。结果表明木瓜总三萜对D-半乳糖(D-gal)所致人胃黏膜上皮细胞(GES-1细胞) 和小鼠胃衰老具有显著抑制作用，可有效清除衰老的胃黏膜上皮细胞和抑制其分泌EVs，进一步地研究证实木瓜总三萜可通过抑制D-gal所致衰老细胞的细胞周期阻滞，降低衰老细胞和胃黏膜组织中Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表达和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad比值，升高Bax、 Bad的mRNA表达，降低衰老基因和SASP的蛋白表达，升高抗衰老相关基因蛋白表达抗胃衰老。在进行抗胃衰老的动物实验过程中，没有发现小鼠死亡，也没有观察到小鼠明显肝肾功能异常，这表明木瓜总三萜具有较好的安全性。
附图说明
图1木瓜总三萜对D-gal诱导衰老GES-1细胞SA-β-gal活性的影响(与正常组比较##P ＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，n＝5，×100)。
图2木瓜总三萜对D-gal诱导衰老GES-1细胞周期阻滞的影响(与正常组比较##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，n＝5)。
图3木瓜总三萜对D-gal诱导衰老的GES-1细胞中衰老和抗衰老相关基因、SASP蛋白表达的影响(1.正常组，2.模型组，3.木瓜总三萜25μg/mL组，4.木瓜总三萜50μg/mL) 组，5.木瓜总三萜100μg/mL组)。
图4木瓜总三萜对D-gal诱导衰老GES-1细胞分泌EVs的影响(A：TEM下EVs照片，B：从TEM九个随机视野中计数的每个EVs数目的平均值)。
图5木瓜总三萜对D-gal诱导衰老的GES-1细胞分泌EVs的影响(NTA分析，A：EVs 的直径范围，B：EVs的平均大小，C：EVs的浓度)。
图6木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃组织SA-β-gal染色的影响(SA-β-gal染色，×200)。
图7木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃组织病理学影响(HE染色，×200)。
图8木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜超微结构的影响(TEM，×8000)。
图9木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜中衰老/抗衰老相关基因、SASP蛋白表达的影响(1.正常组，2.模型组，3.木瓜总三萜25mg/kg组，4.木瓜总三萜50mg/kg)组， 5.木瓜总三萜100mg/kg组)。
图10木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜上皮细胞分泌EVs的影响(A：TEM下EVs照片，B：从TEM九个随机视野中计数的每个EVs数目的平均值)。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实验例1木瓜总三萜清除D-gal所致衰老的胃黏膜上皮细胞(GES-1)和抑制其分泌EVs 的作用研究。
下面结合实验例，具体说明木瓜总三萜清除D-gal所致衰老的胃黏膜上皮细胞(GES-1) 和抑制其分泌EVs作用。
试验方法
1)实验细胞
细胞株本次实验采用胃黏膜上皮细胞(GES-1)，购自美国Invitrogen公司。
2)方法
(1)细胞培养
实验细胞采用正常人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞，培养液为含10％进口胎牛血清的 RPMI1640培养液，恒温37℃，5％CO2，相对饱和湿度条件，无菌培养。每日观察细胞生长情况，单层细胞贴壁达80％左右时进行传代。传代时弃上清，用PBS缓慢清洗细胞，洗 2次，弃PBS，再用2mL 0.25％胰蛋白酶进行消化，加入含血清培养液终止消化，将贴壁细胞轻轻吹下，将细胞悬液离心(1000rpm,4min)，弃上清，加入新鲜培养液将离心细胞吹打成单细胞悬液，以1:3传入新瓶，补入培养液至5mL继续培养。实验时取对数生长期细胞。
(2)D-gal诱导GES-1细胞衰老模型的建立及分组
取对数生长期的GES-1细胞，1000rpm离心4min收集细胞，吸弃上清液，将收集的细胞用新鲜培养液重悬，轻轻吹打成为单细胞悬液，血球计数板计数。稀释细胞至相应浓度后，接种于培养板中，用D-gal(200μmol/mL)作用GES-1细胞24h诱导其衰老，随后用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)作用于GES-1细胞24h，进行相关实验研究。
(3)β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法测定衰老细胞数目
细胞衰老时会生成大量的SA-β-Gal，该酶作用于可催化白色底物(X-gal)水解产生蓝色物质。将GES-1细胞以3×104个/孔接种于24孔板，造模及分组见(2)，用木瓜总三萜(25、 50、100μg/mL)干预24h后去上清，然后根据β-半乳糖苷酶检测试剂盒的说明书进行SA-β-gal染色。次日在光学显微镜下观察细胞染色情况并计数，每组随机选取3个视野，每个视野数100个细胞，计算SA-β-gal阳性细胞百分比(即蓝色细胞的数量占总视野细胞数量的比值)，实验重复5次，最终取15个视野的阳性细胞百分比的平均值为各组细胞的 SA-β-gal染色阳性。
(4)流式细胞仪分析细胞周期
将GES-1细胞以6×104个/孔接种于6孔板，造模及分组见(2)，用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)干预24h后去上清，收集细胞，用PBS洗涤2次，调整细胞密度为1×106个/mL，每组加入70％冷乙醇1mL重悬固定，4℃过夜。次日离心后再用PBS洗涤1次，离心去除上清，每组加入100μLRNase A放于37℃水浴30min，再加400μL PI混匀染色， 4℃避光30min，用流式细胞仪检测细胞周期。
(5)Real-time PCR检测相关基因的mRNA表达
将GES-1细胞以6×104个/孔接种于6孔板，造模及分组见(2)，用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)干预24h后去上清，收集细胞，用PBS洗涤2次后，按照RNA提取试剂盒说明书介绍方法提取各组细胞RNA，测定其纯度和浓度，然后将其反转录成cDNA。以 25μL反应体系进行PCR扩增，在EP管中分别加入Premix Ex TaqTMⅡ(2X)12.5μL，上下游特异性引物各1μL，cDNA模板2μL，适量MilliQ水补足25μL。经95℃10min 热启动后，以95℃15s变性，60℃退火和延伸1min为一个循环，共40个循环。以GAPDH 作为内参基因，用2-ΔΔCT法计算mRNA表达相对水平，各基因以GAPDH为参考基因，靶基因水平以参考基因mRNA表达水平的倍数表达。
(6)Western blot检测相关蛋白的表达
将GES-1细胞以6×104个/孔接种于6孔板，造模及分组见(2)，用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)干预24h后去上清，收集细胞，用PBS洗涤2次后，按照蛋白提取试剂盒说明书介绍的方法提取细胞总蛋白，采用BCA法对蛋白进行浓度定量、SDS-PAGE电泳、每孔上样量50μg，电泳、转膜、封闭。后按照检测目的分别加入一抗，4℃孵育过夜。洗膜后加入二抗室温孵育2h。洗去二抗后，加入曝光液进行曝光，并运用凝胶成像系统对免疫印迹进行成像。Image J软件分析条带的灰度值，以目的蛋白/β-actin内参蛋白计算蛋白表达量。
(7)透射电镜、纳米颗粒跟踪分析分析EVs形态、数目、粒径和浓度
将GES-1细胞以6×104个/孔接种于6孔板，造模及分组见(2)，用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)干预24h后，收集各组细胞上清液首先以300×g离心10min以去除游离细胞，以3000×g离心20min以去除细胞碎片，然后以10000×g离心30min以去除细胞内的细胞器。最后，通过在4℃下以100000×g超速离心2h收集EVs，利用透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析(NTA)分析EVs形态、数目、粒径和浓度。
(8)统计学分析
统计每组数据，均以均数±标准差表示。数据分析在SPSS21.0统计软件包上进行，以单因素方差分析(one-way ANOVA)进行多组间差异的比较，以Dunnett-t检验比较两组间均数的差异，P<0.05说明差异具有统计学意义。每个实验重复5次。
试验结果
1)木瓜总三萜对D-gal诱导衰老GES-1细胞SA-β-gal活性的影响
SA-β-gal活性检测是目前观察细胞衰老最直观、简便且有效的方法。衰老细胞产生的 SA-β-gal在pH值为6.0时可以将底物SA-β-gal催化成深蓝色产物，从而可以用SA-β-gal 活性(即蓝染细胞占比)反映细胞衰老情况。在本实验中我们发现：D-gal刺激后，GES-1表达大量的SA-β-gal，说明D-gal诱发了细胞衰老；随着木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)给药浓度增加，衰老细胞明显减少，结果如图1所示。
2)木瓜总三萜对D-gal诱导衰老GES-1细胞周期阻滞的影响
由图2可见：D-gal组90％以上的细胞被阻滞在DNA合成前期，与正常组比较具有显著性差异(P＜0.01)；用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)处理后，细胞在DNA合成期分别占38.5％、52.0％及61.8％，呈浓度依赖性上升(P＜0.05，P＜0.01)，表明木瓜总三萜对 D-gal诱导的细胞周期阻滞较好的抑制效应。
3)木瓜总三萜对D-gal诱导衰老的GES-1细胞线粒体凋亡通路的影响
通过Real-time PCR分析发现，GES-1细胞用D-gal诱导后，衰老的GES-1细胞中Bcl-2、 Bcl-xl的mRNA表达和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad比值明显降低，Bax、Bad的mRNA表达显著升高，与正常组比较具有显著性差异(P＜0.01)；用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)处理后，Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表达和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad比值进一步降低，Bax、Bad的 mRNA表达进一步升高，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)，实验结果表明，木瓜总三萜可清除衰老的GES-1细胞。结果如表1所示。
表1木瓜总三萜对D-gal诱导衰老的GES-1细胞线粒体凋亡通路的影响(n＝5)
与正常组比较##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
4)木瓜总三萜对D-gal诱导衰老的GES-1细胞中衰老/抗衰老相关基因、SASP蛋白表达的影响
GES-1细胞用D-gal诱导后，模型组衰老的GES-1细胞中衰老相关基因(p53、p16、p21) 和SASP相关因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、TGF-β、INF-γ)蛋白表达明显升高，抗衰老相关基因(SIRT1、Klotho)和VEGF-A蛋白表达明显降低，与正常组比较具有显著性差异(P＜0.01)；用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)处理后，上述表达被明显逆转，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。表明木瓜总三萜可抑制衰老GES-1细胞衰老相关基因、SASP相关因子的蛋白表达，促进抗衰老相关基因表达。结果如表2、表3和图3 所示。
表2木瓜总三萜对D-gal诱导衰老的GES-1细胞中衰老/抗衰老相关基因蛋白表达的影响(n＝5)
与正常组比较##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表3木瓜总三萜对D-gal诱导的GES-1细胞中SASP蛋白表达的影响(n＝5)
与正常组比较##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
5)木瓜总三萜对D-gal诱导衰老的GES-1细胞分泌的EVs影响
通过TEM和NTA分析发现：D-gal诱导后GES-1细胞衰老后分泌EVs的数目和浓度明显增加，正常组比较具有显著性差异(P＜0.01)；用木瓜总三萜(25、50、100μg/mL)处理后，分泌EVs的数目和浓度明显减少，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.01)。但各组间分泌的EVs平均大小(100～300nm)没有差异。结果如图4和图5所示。
试验结论
木瓜总三萜可清除D-gal诱导的衰老GES-1细胞，促进衰老细胞中衰老相关基因和SASP相关因子蛋白表达，抑制抗衰老相关基因蛋白表达和抑制其分泌EVs。本发明提示木瓜总三萜具有抗胃黏膜上皮细胞衰老活性，可用于制备抗衰老的药物，尤其是制备抗胃衰老的药物。
实验例2木瓜总三萜对D-gal所致所致小鼠胃衰老的治疗作用研究。
下面结合具体的实验例，具体说明木瓜总三萜对D-gal所致小鼠胃衰老具有明显的治疗作用。
试验方法
1)实验动物
动物及饲料均购自三峡大学实验动物中心，SPF级雄性C57BL/6J小鼠50只，体重18～22g，实验动物质量合格证号：SCXK(鄂)2017-0061。动物饲养于SPF级动物室干燥、通风、安静的环境，5只/笼。动物实验遵循三峡大学实验动物伦理委员会指导原则，并在其监督下开展实验研究。
2)方法
(1)胃衰老小鼠模型的制作及分组
将50只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、D-gal衰老模型组和木瓜总三萜(25、50、 100mg/kg)组，除正常组小鼠外，其余各组小鼠皮下注射D-gal(200mg/kg)，每天1次，连续8周，给药同时灌胃给予木瓜总三萜(25、50、100mg/kg)进行干预，每天1次，连续8 周，正常组和模型组灌胃给予同体积的0.5％羧甲基纤维素钠溶液。
(2)一般状况观察
观察动物每日摄食、体重、毛色、活动等情况。
(3)胃组织病理学及其超微结构观察
取各组小鼠部分新鲜胃组织，多聚甲醛固定24h，制备石蜡切片，HE染色，光镜观察胃组织学改变；取石蜡切片，常规脱蜡处理，按照衰老SA-βGal染色试剂盒说明书进行染色，观察肾组织中染色阳性细胞相对密度。另取各组部分新鲜胃组织，2.5％戊二醛固定 4h，PBS洗涤3次，1％四氧化锇酸后固定1h，乙醇梯度脱水，环氧树脂包埋，制备超薄切片，醋酸铀与硝酸铅电子双染色，TEM观察摄片。
(4)Real-time PCR检测相关基因的mRNA表达
分别取胃组织100mg，按照RNA提取试剂盒说明书介绍的方法提取胃组织RNA，测定其纯度和浓度，然后将其反转录成cDNA。以25μL反应体系进行PCR扩增，在EP管中分别加入Premix Ex TaqTMⅡ(2X)12.5μL，上下游特异性引物各1μL，cDNA模板2μL，适量MilliQ水补足25μL。经95℃10min热启动后，以95℃15s变性，60℃退火和延伸1min为一个循环，共40个循环。以GAPDH作为内参基因，用2-ΔΔCT法计算 mRNA表达相对水平，各基因以GAPDH为参考基因，靶基因水平以参考基因mRNA表达水平的倍数表达。
(5)Western blot检测相关蛋白的表达
分别取胃组织100mg，按照蛋白提取试剂盒说明书介绍的方法提取总蛋白，采用BCA 法对蛋白进行浓度定量、SDS-PAGE电泳、每孔上样量50μg，电泳、转膜、封闭。后按照检测目的分别加入一抗，4℃孵育过夜。洗膜后加入二抗室温孵育2h。洗去二抗后，加入曝光液进行曝光，并运用凝胶成像系统对免疫印迹进行成像。Image J软件分析条带的灰度值，以目的蛋白/β-actin内参蛋白计算蛋白表达量。
(6)纳米颗粒跟踪分析EVs形态、数目
将剪碎的胃黏膜组织制成匀浆液后，用孔径为40μm过滤器过滤，然后在4℃下以300×g离心10min，以3000×g离心20min，以去除细胞、膜和碎片。上清液用孔径为0.45μm过滤器过滤后，将其在4℃下以10000×g离心30min以消除细胞器污染。将上清液进一步在4℃下以100000×g离心70min，收集EVs。最后利用NTA分析EVs形态和数目。
(7)统计学分析
实验结果用均数±标准差表示，数据分析在SPSS21.0统计软件包上进行，以单因素方差分析进行多组间差异比较，以Dunnett-t检验比较两组间差异；P<0.05认为有统计学差异。
试验结果
1)木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠衰老动态情况观察
模型组小鼠毛色逐渐晦暗、易脱落，皮肤弹性差，精神萎靡、倦怠嗜睡，进食量和活动明显减少，体质量增加缓慢，其生物学表现呈明显自然衰老体征，正常组、木瓜总三萜(25、50、100mg/kg)治疗组小鼠无明显衰老表现。在动物实验过程中，未发现小鼠死亡，也没有观察到小鼠明显的肝肾功能异常。
2)木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃组织SA-β-gal染色的影响
模型组小鼠胃黏膜SA-β-gal染色阳性颗粒数明显增高，与正常组比较具有显著性差异 (P＜0.01)；用木瓜总三萜(25、50、100mg/kg)治疗后SA-β-gal染色阳性颗粒数明显减少(P ＜0.01)。结果如图6所示。
3)木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃组织病理学影响
正常组胃体黏膜光滑呈粉红色，表面黏液覆盖，胃壁肌张力较强，胃底白色，皱襞明显，厚薄适中。模型组小鼠胃黏膜受损明显、结构层次排列紊乱、胃小凹结构破坏；用木瓜总三萜(25、50、100mg/kg)治疗后胃黏膜损伤明显减轻。结果如图7所示。
4)木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜超微结构的影响
TEM观察发现：正常组大鼠胃黏膜上皮细胞基质及细胞核均正常；模型组小鼠胃黏膜线粒体肿胀、溶酶体破裂、内质网扩张和核膜溶解严重，用木瓜总三萜干预上述细胞器损伤明显减轻，结果如图8所示。
5)木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜中衰老/抗衰老相关基因、SASP蛋白表达的影响
模型组小鼠胃黏膜中衰老相关基因(p53、p16、p21)和SASP相关因子(TNF-α、IL-1β、 IL-6、MCP-1、TGF-β、INF-γ)蛋白表达明显升高，抗衰老相关基因(SIRT1、Klotho)和VEGF-A 蛋白表达明显降低，与正常组比较具有显著性差异(P＜0.01)；用木瓜总三萜(25、50、100 mg/mL)治疗后，上述被表达被明显逆转，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05，P＜0.01)。表明木瓜总三萜可抑制胃黏膜组织中衰老相关基因、SASP相关因子的蛋白表达，促进抗衰老相关基因表达。结果如表4、表5和图9所示。
表4木瓜总三萜对对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜中衰老/抗衰老相关基因蛋白表达的影响(n＝5)
表5木瓜总三萜对对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜中SASP蛋白表达的影响(n＝5)
6)木瓜总三萜对D-gal所致衰老小鼠胃黏膜上皮细胞分泌EVs的影响
通过TEM分析发现：D-gal所致衰老小鼠胃黏膜上皮细胞分泌EVs的数目明显增加，正常组比较具有显著性差异(P＜0.01)；用木瓜总三萜(25、50、100mg/mL)干预后，分泌EVs的数目明显减少，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.01)。结果如图10所示。
试验结论
木瓜总三萜可显著抑制D-gal诱导的小鼠胃衰老，促进胃黏膜组织中衰老和相关基因和SASP相关因子蛋白表达，抑制抗衰老相关基因蛋白表达和抑制其分泌EVs。本发明提示木瓜总三萜具有抗胃衰老活性，可用于制备抗衰老的药物，尤其是制备抗胃衰老的药物。
按一只小鼠(20g)和一个人(70kg)的剂量换算系数为387.9。在实验中，小鼠的剂量范围是25mg/kg-100mg/kg，换算成一只小鼠的剂量：0.5mg/只～2mg/只。一个人(70kg)的剂量范围是：193.95mg/人～775.8mg/人，计算成每kg的用量应为：2.77mg/kg～11.08mg/kg。
小鼠的区间为20mg/kg-150mg/kg，换算成一只小鼠的剂量：0.4mg/只～3mg/只。一个人(70kg)的剂量范围是：155.16mg/人～1163.7mg/人，每kg的用量为：2.22mg/kg～16.62mg/kg。

Claims (4)

1.一种木瓜总三萜在制备抗D-半乳糖所致胃衰老药物中的应用。
2.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于：所述药物剂型为混悬液、胶囊剂、片剂、丸剂、滴丸剂、粉剂、注射液或者其他药学上可接受的剂型。
3.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于：所述抗胃衰老药物中用量为 2.22mg/kg~16.62mg/kg。
4.根据权利要求 3 所述的应用， 其特征在于： 所述抗胃衰老药物中用量为11.08mg/kg。
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