CN104645306A - 口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺 - Google Patents
口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺 Download PDFInfo
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Abstract
采用W╱O╱W乳化凝胶-外部交联法，制备多肽缓释微囊。经试验研究发现：该工艺微囊成形性较好，主要以圆形、椭圆形及菱形为主，平均粒径为125um，药物平均包封率达76.60%、载药量6.3mg/g；体外模式肠液释药试验显示：前8h药物累积释药率65.60%，8h后呈现缓慢释放，24h药物累积释药率达到90.46%，具有较好的缓释性能，符合口服药物动力学要求。壳聚糖、海藻酸钠可作为多肽类药物生物降解的载体材料，能较好的提高胎盘肽分子结构及功效的稳定性，W╱O╱W乳化凝胶-外部交联法工艺简便、操作性强，制备的微囊包封率和载药量较高，缓释性能较好，粒径、释药度符合口服药物动力学要求，该微囊有望成为口服多肽药物的载体。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，尤其涉及一种口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺。
背景技术
近年来研究发现，胎盘肽对机体具有较高的免疫和生理调节作用[1-10]，对病毒性传染病、真菌感染、免疫缺陷等疾病的辅助治疗有良好的效果[11]；由于多肽的分子结构不稳定，半衰期短，在口服给药过程中，易被胃肠道中大量的蛋白分解酶降解，失去活性，致使该类药物在给药方面受到限制。随着生物技术的不断发展，越来越多的多肽类药物被发掘，多肽类药物的口服给药问题已成为医药领域的焦点问题。
发明内容
本发明的目的在于，克服现有口服多肽类药物微囊制备技术的不足之处，提供一种以壳聚糖、海藻酸钠为壁材、以胎盘多肽为芯料，采用W╱O╱W乳化凝胶-外部交联技术，制备口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的工艺，试验结果显示：该工艺制备的微囊，成形性较好，微囊的包封率及载药量较高、粒径较小、体外模式肠液释药试验显示：胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠微囊具有良好的缓释性能，能较好的提高多肽药物的稳定性，有望成为口服蛋白多肽类药物的缓释载体，现将口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备方法及工艺条件介绍如下：
1、口服胎盘多肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊制备工艺
1.1、仪器与设备
HL-4数显恒温磁力搅拌器；可见光紫外分光光度仪；真空干燥器；LD52A型离心机；H1-4电泳仪；光学显微镜；1%0电子分析天平；HS2060型超声提取器。
1.2、药物与试剂
海藻酸钠；壳聚糖；胎盘多肽，胸腺肽α1，六磷酸肌醇溶液，十二烷基硫酸钠液，植物油；山梨糖醇酐油酸酯（Span-80）；氯化钙(CaCI2 ) 正丁醇、石油醚、异丙醇等试剂均为分析纯。
1.3、多肽微囊制备方法
1.3.1 溶液配制
水相的制备：精密称取海藻酸钠2g，搅拌溶解于六磷酸肌醇溶液中，配制成2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液100ml（W／V）, 精密称取胎盘肽0.4g，超声溶解于2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液中，静止放置除去气泡，得胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液，作为乳化过程中的水相。
油相的制备：取精密量取植物油100ml，置三颈瓶中，用1%乙酸调节pH值至5.0，水浴加热至35℃，搅拌（400r·min-1）下加入span80 0.8g,分散均匀，得0.8% span80植物油溶液，作为油相。
胶联剂的制备：精密称取壳聚糖0.6g，在搅拌下溶于1%乙酸100ml溶液中（25℃），配制成0.6%壳聚糖溶液100ml（W／V），用1%氢氧化钠调节pH值至5.6，精密称取氯化钙1g, 超声溶解于0.6%壳聚糖溶液100ml中，分别用0.4nm、0.22nm滤膜滤过，得壳聚糖-氯化钙混合溶液，作为胶联剂。
1.3.2 多肽微囊的制备
①取一定量的0.8% span80植物油溶液，水浴加热至30℃，在搅拌下（800r.min-1），缓慢加入（2ml.min-1）胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液, 油相与水相比例1∶4 （V／V），乳化30min，形成W／O初乳；低温放置120min，除去气泡；
②取W／O初乳，在搅拌下（800r.min-1）缓慢加入（2ml.min-1）壳聚糖-氯化钙混合溶液中，水浴加热至30℃，搅拌乳化30min，W／O／W复乳形成，静止孵化进行固化；
③将复乳移入分液漏斗中，分别用石油醚、异丙醇充分洗脱、离心，弃去上层油相，再用蒸馏水洗脱，离心，弃去上层水相，得凝胶状微粒；
④取固化后的凝胶状微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥2h；
⑤取干燥后的微粒，在搅拌下（60r.min-1）缓慢放入0.4%壳聚糖溶液中，搅拌下孵化120min进行二步胶联，取出微粒，在搅拌下（60r.min-1）放入正丁醇溶液中，离心取出分别用异丙醇、石油醚、纯净水反复洗脱，离心弃去上层油相和水相；
⑥将固化后的微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥。
2、微囊的制备主要技术条件：
通过正交试验研究及单因素研究考察发现，制备胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊，其主要技术条件为：海藻酸钠浓度2.0%、壳聚糖浓度0.8%、CaCl2浓度1.0%、搅拌速度800r.min-1。其外乳化时的温度（30℃）、span-80的浓度（0.8%）、油相与水相的比例1∶4 （V／V）、蛋白多肽与海藻酸钠的比例（1∶5）等因素均能对微囊的形态、粒径、包封率、载药量、药物释药度产生一定影响。另外本工艺还采用了二次交联技术——对多肽凝胶状微囊用0.4%壳聚糖溶液二次交联包封覆膜，避免了微囊的突释现象，延长药物的释药时间。
3、该工艺制备的胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊达到的技术指标：
采用W╱O╱W乳化凝胶-外部交联法，制备多肽缓释微囊。经试验研究发现：该工艺微囊成形性较好，主要以圆形、椭圆形及菱形为主，平均粒径为125um，药物平均包封率达76.60%、载药量6.3mg/g；体外模式肠液释药试验显示：前8h药物累积释药率65.60%，8h后呈现缓慢释放，24h药物累积释药率达到90.46%，具有较好的缓释性能，符合口服药物动力学要求。
4、结论：
壳聚糖、海藻酸钠可作为多肽类药物生物降解的载体材料，能较好的提高胎盘肽分子结构及功效的稳定性，W╱O╱W乳化凝胶-外部交联法工艺简便、操作性强，制备的微囊包封率和载药量较高，缓释性能较好，粒径、释药度符合口服药物动力学要求，该微囊有望成为口服多肽药物的载体。
具体实施方式
现参照实施例，具体说明如下：
1.1、仪器与设备
HL-4数显恒温磁力搅拌器（昆山市精明仪器公司）；可见光紫外分光光度仪（UV755B,上海精密科学仪器有限公司）；真空干燥器（南京金星干燥有限公司）；LD52A型离心机（北京医用离心机厂）；H1-4电泳仪(上海精密仪器厂)；光学显微镜（日本尼康公司）；1%0电子分析天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）；HS2060型超声提取器（上海之信仪器有限公司）。
1.2、药物与试剂
海藻酸钠（Sodium alginate，Aig化学级，批号：013062346，低粘度：25℃，2%海藻酸钠溶液，粘度0.2Ns／m2，青岛海藻集团提供）；壳聚糖（chitosan Cts，试剂级，批号：013061466 脱乙酰基D.D%=91%，分子量10000，济南海得贝生物工程有限公司生产）；胎盘肽（纯度96.6%，分子量小于7000,本单位制剂室提供，），胸腺肽α1（吉尔生化(上海)有限公司，批号:01302162），六磷酸肌醇溶液（食品级,批号：13022317，徐州昌鼎进出口贸易有限公司生产），十二烷基硫酸钠液，植物油（广西宏太植物油厂生产）；山梨糖醇酐油酸酯（Span-80）；氯化钙(CaCI2 ) 正丁醇、石油醚、异丙醇等试剂均为分析纯。
1.3、多肽微囊制备方法
1.3.1 溶液配制
水相的制备：精密称取海藻酸钠2g，在搅拌下溶解于100ml的六磷酸肌醇溶液中（30℃），配制成2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液（W／V）, 精密称取胎盘肽0.4g，超声溶解于100ml 的2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液中，低温静止放置(2℃，2h)除去气泡，得胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液，作为乳化过程中的水相。
油相的制备：取精密量取植物油100ml，置三颈瓶中，用1%乙酸调节pH值至5.0，水浴加热至35℃，搅拌（400r·min-1）下，将span80 0.8g分散于植物油100ml中，得0.8% span80植物油溶液，作为油相。
胶联剂的制备：精密称取壳聚糖0.6g，搅拌下将壳聚糖溶于1%乙酸100ml溶液中(水浴加热至25℃)，配制成0.6%壳聚糖溶液100ml（W／V），用1%氢氧化钠调节pH值至5.6，精密称取氯化钙1g, 超声溶解于0.6%壳聚糖溶液100ml中，分别用0.4nm、0.22nm滤膜滤过，得壳聚糖-氯化钙混合溶液，作为胶联剂。
1.3.2 多肽微囊的制备
①取一定量的0.8% span80植物油溶液，水浴加热至30℃，在搅拌下（800r.min-1），缓慢加入（2ml.min-1）胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液, 油相与水相比例1∶4 （V／V），乳化30min，形成W／O初乳；低温（2℃）放置120min，除去气泡；
②取W／O初乳，在搅拌下（800r.min-1）缓慢加入（2ml.min-1）壳聚糖-氯化钙混合溶液中（水浴加热至30℃），搅拌乳化30min，W／O／W复乳形成，静止孵化（120min）进行固化；
③将复乳移入分液漏斗中，分别用石油醚、异丙醇充分洗脱、离心，弃去上层油相，再用蒸馏水洗脱，离心，弃去上层水相，得凝胶状微粒；
④取固化后的凝胶状微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥（30℃，-0.04pa）2h；
⑤取干燥后的微粒，在搅拌下（60r.min-1）缓慢放入0.4%壳聚糖溶液中(30℃)，搅拌下孵化120min进行二步胶联，取出微粒，在搅拌下（60r.min-1）放入正丁醇溶液中（ 30℃，30min），离心取出分别用异丙醇、石油醚、纯净水反复洗脱，离心弃去上层油相和水相；
⑥将固化后的微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥（30℃，-0.04pa），即可得到本发明所述的口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊。
参考文献：
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[11]常建军 转移因子的研究现状及临床应用进展[J]青海大学学报（自然科学版）2007,25（2）:31-35 。
Claims (4)
1. 口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺，其特征在于：①取一定量的0.8% span80植物油溶液，水浴加热至30℃，在搅拌下（800r.min-1），缓慢加入（2ml.min-1）胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液, 油相与水相比例1∶4 （V／V），乳化30min，形成W／O初乳；低温（2℃）放置120min，除去气泡；
②取W／O初乳，在搅拌下（800r.min-1）缓慢加入（2ml.min-1）壳聚糖-氯化钙混合溶液中（水浴加热至30℃），搅拌乳化30min，W／O／W复乳形成，静止孵化（120min）进行固化；
③将复乳移入分液漏斗中，分别用石油醚、异丙醇充分洗脱、离心，弃去上层油相，再用蒸馏水洗脱，离心，弃去上层水相，得凝胶状微粒；
④取固化后的凝胶状微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥（30℃，-0.04pa）2h；
⑤取干燥后的微粒，在搅拌下（60r.min-1）缓慢放入0.4%壳聚糖溶液中(30℃)，搅拌下孵化120min进行二步胶联，取出微粒，在搅拌下（60r.min-1）放入正丁醇溶液中（ 30℃，30min），离心取出分别用异丙醇、石油醚、纯净水反复洗脱，离心弃去上层油相和水相；
⑥将固化后的微粒分摊于铝薄上，置真空干燥器中干燥（30℃，-0.04pa），即可得到本发明所述的口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊。
2.根据权利要求1所述的口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺，其特征在于：水相的制备：精密称取海藻酸钠2g，在搅拌下溶解于100ml的六磷酸肌醇溶液中（30℃），配制成2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液（W／V）, 精密称取胎盘肽0.4g，超声溶解于100ml 的2.0%海藻酸钠六磷酸肌醇溶液中，低温静止放置(2℃，2h)除去气泡，得胎盘多肽-海藻酸钠混合溶液，作为乳化过程中的水相。
3.根据权利要求1所述的口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺，其特征在于：油相的制备：取精密量取植物油100ml，置三颈瓶中，用1%乙酸调节pH值至5.0，水浴加热至35℃，搅拌（400r·min-1）下，将span80 0.8g分散于植物油100ml中，得0.8% span80植物油溶液，作为油相。
4.根据权利要求1所述的口服胎盘肽壳聚糖-海藻酸钠缓释微囊的制备工艺，其特征在于：胶联剂的制备：精密称取壳聚糖0.6g，搅拌下将壳聚糖溶于1%乙酸100ml溶液中(水浴加热至25℃)，配制成0.6%壳聚糖溶液100ml（W／V），用1%氢氧化钠调节pH值至5.6，精密称取氯化钙1g, 超声溶解于0.6%壳聚糖溶液100ml中，分别用0.4nm、0.22nm滤膜滤过，得壳聚糖-氯化钙混合溶液，作为胶联剂。
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