CN104622919B

CN104622919B - 一种骆驼蓬的综合提取方法

Info

Publication number: CN104622919B
Application number: CN201510020959.6A
Authority: CN
Inventors: 尚小飞; 苗小楼; 潘虎; 郭肖; 王东升; 王学智; 王瑜; 张继瑜
Original assignee: Lanzhou Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine CAAS
Current assignee: Lanzhou Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine CAAS
Priority date: 2015-01-16
Filing date: 2015-01-16
Publication date: 2017-11-24
Anticipated expiration: 2035-01-16
Also published as: CN104622919A

Abstract

本发明公开一种骆驼蓬的综合提取方法，该方法包括如下步骤：（1）骆驼蓬用乙醇提取，过滤，得到滤液和残渣；（2）步骤（1）所得的滤液上阳离子交换树脂柱，依次用水、乙醇水溶液和氯化钠乙醇水溶液洗脱；（3）步骤（2）用乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液上聚酰胺色谱柱，再用乙醇水溶液洗脱聚酰胺色谱柱，即得到骆驼蓬总黄酮；（4）步骤（2）用氯化钠乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液，浓缩，加入乙醇除盐，得到骆驼蓬总生物碱。乙醇提取后的残渣可直接作为饲料添加剂，也可去除蛋白后提取骆驼蓬多糖。本发明方法操作简单、安全、可靠，提取率高，可分别获得骆驼蓬的总生物碱、总黄酮和多糖成分，有利于提高骆驼蓬的综合利用度。

Description

一种骆驼蓬的综合提取方法

技术领域

本发明属于植物药材提取领域，具体涉及一种骆驼蓬的综合利用方法。

背景技术

骆驼蓬（Peganum harmala L.）为蒺藜科(Zygophyllaceae)骆驼蓬属(Peganum)植物，以全草及种子入药，广泛分布于亚洲、北非等地。在我国，骆驼蓬主要生长在西北等地，常作为中药、维药和蒙古族药材，收载于《中华人民共和国药品标准维吾尔药分册》(WS3-bw-0080-98, 1999年版) 中，具有消肿止痛、通血调经的作用，用于关节骨痛、月经闭阻、咳嗽气喘等症。目前，以骆驼蓬种子为主要成分的复方骆驼蓬软膏已上市应用，具有清泻局部异常黑胆质、粘液质，消肿止痒，散气止痛。用于湿寒所引起的关节酸痛、风湿性关节炎、坐骨神经痛、湿疹，疥癣，疥疮等。

研究表明：骆驼蓬主要要含有生物碱类、黄酮类、多糖及蛋白质等成分，其中生物碱为有效成分，包括鸭嘴花碱（visicine）、骆驼蓬碱（harmalin）、去氢骆驼蓬碱（harmine）、鸭嘴花酮碱、哈儿明碱等，药理作用十分广泛，具有平喘、抗菌、抗肿瘤、抗炎镇痛、止痒杀虫及对中枢神经系统、心血管系统和气管平滑肌等方面的作用。黄酮类化合物以刺槐素为主要成分，其具有抗炎、抗癌、抗氧化等药理活性；研究显示骆驼蓬全草的多糖得率34.2%，具有一定的抗氧化活性，其对O₂ ^－·的最大清除率为38.11%。骆驼蓬种子具有较高的营养成分，乳熟期粗蛋白质含量可达17.25%，含有17种氨基酸，其粗蛋白提取物具有一定的体外抑菌和抗癌活性。同时，骆驼蓬具有良好的抗旱固沙作用。因此，对于骆驼蓬的综合利用具有广泛的社会价值和经济效益。

目前，人们已采用多种化学分离方法提取制备骆驼蓬中总生物碱，在中国专利CN101433565A、CN101491557A、CN1250560C、CN101229203A、CN104107199A及相关文献中均有报道，但对于黄酮类、多糖及蛋白质的分离制备及药理活性研究较少。且总生物碱和其他活性物质的制备过程没有综合起来，总生物碱提取过程中产生的废渣也没有重新利用，造成资源的极大浪费。

发明内容

本发明的针对目前骆驼蓬生产过程中综合利用方法不足，资源浪费较为严重，提供一种高效综合利用骆驼蓬的方法，可同时提取骆驼蓬粗多糖、黄酮类和生物碱类化合物。

本发明实现上述目的所采用的技术方案如下：

骆驼蓬的综合利用方法，包括如下步骤：

（1）骆驼蓬用乙醇提取，过滤，得到滤液和残渣；

（2）步骤（1）所得的滤液上阳离子交换树脂柱，依次用水、乙醇水溶液和氯化钠乙醇水溶液洗脱；

（3）步骤（2）用乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液上聚酰胺色谱柱，再用乙醇水溶液洗脱聚酰胺色谱柱，即得到骆驼蓬总黄酮；

（4）步骤（2）用氯化钠乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液，浓缩，加入乙醇除盐，得到骆驼蓬总生物碱。

进一步，步骤（1）所得的残渣加水，回流提取，所得提取液再加乙醇进行醇沉，沉淀除蛋白后，即得到骆驼蓬多糖。

更进一步，残渣用水提取时，料液比为1:(20-40)。

更进一步，醇沉时，乙醇的浓度为70-85vt%。

为除去醇沉所得的沉淀中的蛋白质，可采用常见的方法，如Sevage法、氯化钠法、氯化钙法、三氯乙酸法或盐酸法。

进一步，用浓度为30-80vt%的乙醇水溶液洗脱阳离子交换树脂柱。

进一步，用浓度为30-60vt%的乙醇水溶液洗脱聚酰胺色谱柱。

进一步，所述氯化钠乙醇水溶液中氯化钠的浓度为2-4mol/L，乙醇的浓度为30-80vt%。

进一步，步骤（1）中，骆驼蓬用浓度为60-90vt%的乙醇提取。

进一步，骆驼蓬用浓度为60-90vt%的乙醇提取时，料液比(g/mL)为1:(5-14)。

进一步，所述骆驼蓬为种子和/或全草。

本发明使用的提取方法简单，生产过程绿色、安全，可同时提取骆驼蓬多糖、黄酮类及主要活性成分生物碱，大大提高骆驼蓬的综合利用度，具有一定的经济效益和社会价值。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。

实施例1

取50g骆驼蓬种子，烘干至恒重，用400mL 70vt%的乙醇加热回流提取骆驼蓬种子三次，每次2小时，合并提取液，过滤，干燥残渣，浓缩提取液，备用。

上述浓缩后的提取液上001型阳离子交换树脂柱，先用纯净水洗脱除质后，再用30vt%-80%的乙醇溶液进行洗脱，采用常规的三氯化铝显色反应鉴定黄酮（将样品滴于滤纸上，再滴上1%三氯化铝，紫外光下观察），洗脱过程中逐步提高乙醇的浓度（当用低浓度的乙醇洗脱至三氯化铝显色反应显示无黄酮时，提高乙醇浓度，继续洗脱），洗脱流速控制在1-3BV/h，收集的黄酮类洗脱液浓缩后上聚酰胺色谱柱，用水洗脱除杂后，以60vt%的乙醇水溶液反复洗脱纯化，洗脱流速控制在1-3 BV/h，以三氯化铝显色反应为标志，收集洗脱液，得到骆驼蓬总黄酮，得率为1.154%（以骆驼蓬种子计）。

上述洗脱后的001型阳离子交换树脂柱再用氯化钠乙醇水溶液（氯化钠2mol/L，乙醇浓度为30-80 vt %）洗脱，采用碘化泌鉀显色反应鉴定生物碱，洗脱过程中逐步提高乙醇的浓度（当用低浓度的乙醇洗脱至碘化泌鉀显色反应显示无生物碱时，提高乙醇的浓度，继续洗脱），洗脱流速控制在1-3 BV/h，洗脱液浓缩，加入乙醇使氯化钠析出，纯化后，浓缩干燥，获得骆驼蓬总生物碱，经HPLC分析，得率为5.25%（以骆驼蓬种子计）。

骆驼蓬醇提后的残渣含有大量的蛋白质和多糖类物质，烘干后可以直接做为动物饲料；残渣也可以用20倍的水加热回流提取三次，每次2小时，合并提取液，过滤，浓缩，加入95vt%乙醇，使溶液中乙醇浓度达到70vt%，静置24小时，离心，沉淀干燥，再用Sevage法除去沉淀中的蛋白质，既得骆驼蓬粗多糖，粗多糖得率为14.21%（以骆驼蓬种子计），可用作保健品或者饲料添加剂。

实施例2

取50g骆驼蓬种子，烘干至恒重，用500mL 80vt%的乙醇加热回流提取骆驼蓬种子三次，每次2小时，合并提取液，过滤，干燥残渣，浓缩提取液，备用。

上述浓缩后的提取液上001型阳离子交换树脂柱，先用纯净水洗脱除质后，再用30vt%-80%的乙醇溶液进行洗脱，采用常规的三氯化铝显色反应鉴定黄酮（将样品滴于滤纸上，再滴上1%三氯化铝，紫外光下观察），洗脱过程中逐步提高乙醇的浓度（当用低浓度的乙醇洗脱至三氯化铝显色反应显示无黄酮时，提高乙醇的浓度，继续洗脱），洗脱流速控制在1-3 BV/h，收集的黄酮类洗脱液浓缩后上聚酰胺色谱柱，用水洗脱除杂后，以30vt%的乙醇水溶液反复洗脱纯化，洗脱流速控制在1-3 BV/h，以三氯化铝显色反应为标志，收集洗脱液，得到骆驼蓬总黄酮，得率为1.33%（以骆驼蓬种子计）。

上述洗脱后的001型阳离子交换树脂柱再用氯化钠乙醇水溶液（氯化钠3mol/L，乙醇浓度为30-80 vt %）洗脱，采用碘化泌鉀显色反应鉴定生物碱，洗脱过程中逐步提高乙醇的浓度（当用低浓度的乙醇洗脱至碘化泌鉀显色反应显示无生物碱时，提高乙醇的浓度，继续洗脱），洗脱流速控制在1-3 BV/h，洗脱液浓缩，加入乙醇使氯化钠析出，纯化后，浓缩干燥，获得骆驼蓬总生物碱，获得骆驼蓬总生物碱，得率为6.04%（以骆驼蓬种子计）。

骆驼蓬醇提后的残渣用30倍的水加热回流提取三次，每次2小时，合并提取液，过滤，浓缩，加入95vt%乙醇，使溶液中乙醇浓度达到75vt%，静置48小时，离心，沉淀干燥，再用Sevage法除去沉淀中的蛋白质，既得骆驼蓬粗多糖，粗多糖得率为14.20%（以骆驼蓬种子计）。

实施例3

取50g骆驼蓬种子，烘干至恒重，用600mL 90vt%的乙醇加热回流提取骆驼蓬种子三次，每次2小时，合并提取液，过滤，干燥残渣，浓缩提取液，备用。

上述浓缩后的提取液上001型阳离子交换树脂柱，先用纯净水洗脱除质后，再用30vt%-80%的乙醇溶液进行洗脱，采用常规的三氯化铝显色反应鉴定黄酮（将样品滴于滤纸上，再滴上1%三氯化铝，紫外光下观察），洗脱过程中逐步提高乙醇的浓度（当用低浓度的乙醇洗脱至三氯化铝显色反应显示无黄酮时，提高乙醇的浓度，继续洗脱），洗脱流速控制在1-3 BV/h，收集的黄酮类洗脱液浓缩后上聚酰胺色谱柱，用水洗脱除杂后，以50vt%的乙醇水溶液反复洗脱纯化，洗脱流速控制在1-3 BV/h，以三氯化铝显色反应为标志，收集洗脱液，得到骆驼蓬总黄酮，得率为1.25%（以骆驼蓬种子计）。

上述洗脱后的001型阳离子交换树脂柱再用氯化钠乙醇水溶液（氯化钠4mol/L，乙醇浓度为30-80 vt %）梯度洗脱，采用碘化泌鉀显色反应鉴定生物碱，洗脱过程中逐步提高乙醇的浓度（当用低浓度的乙醇洗脱至碘化泌鉀显色反应显示无生物碱时，提高乙醇的浓度，继续洗脱），洗脱流速控制在1-3 BV/h，洗脱液浓缩，加入乙醇使氯化钠析出，纯化后，浓缩干燥，获得骆驼蓬总生物碱，获得骆驼蓬总生物碱，得率为5.64%（以骆驼蓬种子计）。

骆驼蓬醇提后的残渣用40倍的水加热回流提取三次，每次2小时，合并提取液，过滤，浓缩，加入95vt%乙醇，使溶液中乙醇浓度达到80vt%，静置72小时，离心，沉淀干燥，再用Sevage法除去沉淀中的蛋白质，既得骆驼蓬粗多糖，粗多糖得率为14.12%（以骆驼蓬种子计）。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种骆驼蓬的综合提取方法，包括如下步骤：

（1）骆驼蓬的种子用乙醇提取，过滤，得到滤液和残渣；

（4）步骤（2）用氯化钠乙醇水溶液洗脱得到的洗脱液，浓缩，加入乙醇除盐，得到骆驼蓬总生物碱；

步骤（1）所得的残渣加水，回流提取，所得提取液再加乙醇进行醇沉，沉淀除蛋白后，即得到骆驼蓬多糖；

步骤（2）中，所述氯化钠乙醇水溶液中氯化钠的浓度为2-4mol/L，乙醇的浓度为30-80vt%。

2.根据权利要求1所述骆驼蓬的综合提取方法，其特征在于，残渣用水提取时，料液比为1:(20-40)。

3.根据权利要求1所述骆驼蓬的综合提取方法，其特征在于，醇沉时，乙醇的浓度为70-85vt%。

4.根据权利要求1所述骆驼蓬的综合提取方法，其特征在于，步骤（2）中，用于洗脱阳离子交换树脂柱的乙醇水溶液浓度为30-80vt%。

5.根据权利要求1所述骆驼蓬的综合提取方法，其特征在于，步骤（3）中，用于洗脱聚酰胺色谱柱的乙醇水溶液浓度为30-60vt%。

6.根据权利要求1所述骆驼蓬的综合提取方法，其特征在于，步骤（1）中，骆驼蓬用浓度为60-90vt%的乙醇提取，料液比为1:(5-14)。