CN106109501A - 一种蛴螬中可抗肠道ev‑71病毒的有效成分及制备方法 - Google Patents

一种蛴螬中可抗肠道ev‑71病毒的有效成分及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于中药活性成分提取工艺及抗病毒有效部位的分离，涉及蛴螬抗肠道EV‑71病毒有效成分提取分离的新工艺以及在制药领域的新用途，具体涉及利用抗病毒追踪的方式提取制备蛴螬抗肠道EV‑71病毒的有效成分。具体步骤为采用蒸馏水回流提取蛴螬，醇沉，抗病毒，溶解沉淀，采用D101型号的大孔吸附树脂对蛴螬提取物进行分离，处理D101大孔树脂，上样于大孔树脂，不同浓度的洗脱剂洗脱，每200ml接一瓶每个浓度梯度洗脱至无色并浓缩，每个洗脱液进行抗病毒实验，确定抗病毒有效部位。本发明采用了抗病毒追踪的方法发现了蛴螬中抗肠道EV‑71病毒的有效成分，该有效成分对肠道EV‑71病毒具有较好的抵抗作用，其作为天然提取物具有安全性高等特点。

Description

一种蛴螬中可抗肠道EV-71病毒的有效成分及制备方法
技术领域
本发明涉及中药活性成分生产提取工艺以及结构鉴定领域，涉及蛴螬抗病毒有效部位提取的新思路新方法以及在制药领域的新用途，具体涉及利用抗病毒追踪的方式提取分离纯化蛴螬抗肠道EV-71病毒的有效成分。
背景技术
最近几年以来世界各地都受到了各种病毒的入侵，比如SARS病毒，甲型H1N1等，每次病毒的爆发都会引起人类的恐慌以及死亡，所以找到合适的抗病毒药物迫在眉睫。
蛴螬是金龟甲的幼虫，别名白土蚕、核桃虫。成虫通称为金龟甲或金龟子。按其食性可分为植食性、粪食性、腐食性三类，某些种类的蛴螬可入药，对人类有益。
我国蛴螬资源丰富，主要分布在黑龙江及长江以南地区以及内蒙古、陕西等地，药材主产于江苏、河南、河北、安徽、四川、山东和东北等地。
蛴螬为金龟子科昆虫朝鲜黑金龟子Holotrichia diomphalia Bates及同属近缘昆虫的干燥幼虫。蛴螬首次收载于《神农本草经》，其后历代典籍如《本草纲目》、《金匮要略》、《名医别录》等多有收载。蛴螬性味归经：咸，微温，有毒，有明目退翳、破血逐淤、治疗瘾瘕的功效，内服可用于妇女经闭、外用可治疗痔漏、痈疽、丹毒、跌打损伤等，此外还可治疗小儿唇紧、小儿脐疮、断酒不饮等。
近年来研究人员对蛴螬深入研究，发现蛴螬中含有多糖类、羧酸类、生物碱类、蛋白质、多肽和氨基酸等化学成分，并且含有丰富的微量元素；在药理活性方面的研究发现，蛴螬提取物具有抗菌、抗肿瘤、保肝、治疗肝硬化、治疗破伤风、治疗小儿哮喘、治疗中风和眼部疾病等多种生物活性，是一种极具开发价值和研究的动物药。
蛴螬对肠道EV-71病毒具有一定的治疗作用，实验表明蛴螬提取的有效成分对肠道EV-71病毒有很好的治疗作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是明确了蛴螬抗肠道EV-71病毒的有效成分，并为该有效成分的分离提取提供了一种利用抗病毒追踪的方式制备蛴螬抗病毒有效成分的新方法。 该有效成分是从蛴螬中提取分离得到可以用于肠道EV-71病毒感染的治疗。该方法可以较为简便的对以上有效成分进行分离提取。
本发明的优点是，本发明首次分离出了蛴螬中具有抗肠道EV-71病毒的一种有效成分，并发明了一种抗病毒追踪的方法对该有效成分进行了制备，此分离方法目的性强，简单节省了大量的人力物力，优于传统的系统分离。制备得到的有效成分对肠道EV-71病毒具有较好的治疗作用。
本发明蛴螬抗肠道EV-71病毒的有效部位为水提醇沉的沉淀部位，经大孔树脂分离后，水部位为蛴螬抗病毒的有效部位，该有效成分的制备方法，包括如下步骤：
（1）取一定量的蛴螬药材第一次加入12倍水，第二次加入10倍水，煎煮提取两次，每次2h。
（2）合并两次的提取液减压浓缩，浓缩至每毫升药液含有1克的药材，然后加乙醇调节乙醇的浓度为70%，静置48小时。过滤得到沉淀和上清液。
（3）将上清液回收乙醇，将沉淀用水溶解，分别进行抗病毒实验。实验显示沉淀的抗病毒效果较好。
（4）取一定的D101大孔吸附树脂用95%的乙醇浸泡24小时，之后装柱，用蒸馏水洗至无醇味，然后用5倍柱体积5%的盐酸水溶液进行冲洗浸泡3个小时，之后用蒸馏水冲至PH等于7，再用5倍柱体积的5%的NaOH水溶液进行冲洗浸泡3个小时，之后用蒸馏水冲至PH等于7，备用。
（5）取（3）中的沉淀上样于处理好的D101大孔树脂柱，分别用水，25%乙醇，50%乙醇，75%乙醇进行冲洗，每个洗脱液中每200ml接一瓶，并且冲洗到没有颜色之后再换下一个洗脱液。
（6）将上述接到的样品进行抗病毒实验。实验显示水部位抗病毒效果很好。
具体实施方式
实例1（1）取一定量的蛴螬药材第一次加入12倍水，第二次加入10倍水，煎煮提取两次，每次2h。合并两次提取液，减压浓缩至每毫升药液含有1克的药材，加乙醇调节溶液乙醇的浓度为70%，静置48小时。
（2）将（1）得到的醇沉液减压抽滤，得到沉淀，将沉淀用蒸馏水超声溶解。
（3）将（2）得到的溶液上样于处理好的D101大孔吸附树脂，用水进行冲洗，每200ml接一瓶，冲洗至无色。
（4）合并（3）中水洗脱部位，浓缩至一定体积，分别进行抗病毒研究。

Claims (7)

1.一种蛴螬中具有抗肠道EV-71病毒作用的有效成分以及一种利用抗病毒追踪的方式提取分离纯化该有效成分的工艺方法，在每一步的提取分离之后要进行抗病毒追踪出有效部位的所在，首先利用水提醇沉，其次利用D101大孔树脂分离，在每一步的提取分离之后要进行抗病毒追踪出有效部位的所在。
2.根据权利要求1所述的有效部位其特征在于该有效部位为水提醇沉的沉淀部位，经大孔树脂分离后，水部位为蛴螬抗病毒的有效部位。
3.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于水回流提取两次，第一次的料液比为1：12v，第二次的料液比为1:10v，提取时间两次都为2小时。
4.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于水提液的浓缩液浓度为1ml药液含有1g的药材，醇沉浓度为70%，醇沉时间为48小时。
5.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于醇沉之后进行减压抽滤，得到沉淀和上清液，然后进行抗病毒实验得到沉淀为抗病毒有效部位。
6.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于所用的大孔树脂型号为D101，洗脱液为蒸馏水，25%乙醇，50%乙醇，75%乙醇，每200ml接一瓶，每个梯度冲至无色。
7.根据权利要求1所述提取分离方法，其特征在于将蛴螬提取物的洗脱液进行抗病毒实验，得到水部位为有效部位。
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