CN104585041B - 一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法 - Google Patents
一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104585041B CN104585041B CN201510074785.1A CN201510074785A CN104585041B CN 104585041 B CN104585041 B CN 104585041B CN 201510074785 A CN201510074785 A CN 201510074785A CN 104585041 B CN104585041 B CN 104585041B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- oil palm
- callus
- blade
- culture
- wpm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属植物组织培养技术领域，涉及一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法，是在成龄油棕距生长点纵向往上部位凿洞，取出其中幼嫩叶片，消毒后切成小片，接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养，培养条件：暗培养，培养温度26～30℃；经45～60天诱导培养，开始出现愈伤组织。本发明工艺简单，操作方便，通过在生长点以上凿洞采集幼嫩叶片，对外植体母树伤害极小，采后恢复快，叶片处理后接种到愈伤组织诱导培养基上，可获得诱导率较高且质地良好愈伤组织，为高效的油棕体细胞胚再生植株技术体系奠定良好的基础，对稀有油棕优异种质资源保护及其开发利用具有现实意义。
Description
技术领域
本发明属植物组织培养技术领域，涉及一种植物外植体取材及其愈伤组织诱导方法，具体是一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法。
背景技术
油棕是热带地区重要油料作物之一，有“世界油王”之美誉，其油脂可作为食用油脂、工业原料、生物能源等，用途比较广泛，市场需求量大，产业发展迅速，世界各地热带亚热带地区竞相引种种植油棕。目前油棕商业种植普遍采用duru和pisifera杂交的F1代种植材料，其个体间产量差异大，最高产单株产量可高出平均值40％。而这些优异油棕单株是基因杂合体，其后代遗传性状难以保存亲本优良特性，况且油棕只有一个生长点，难以实现传统的无性系繁育。通过组织培养，所获得的油棕种植材料既保存亲本优良的遗传性状，且个体间遗传性状又均一，是解决对优异油棕单株进行种苗繁育遇到的遗传性状分离和无法实现传统无性系繁育问题的有效途径。
外植体取材及其愈伤组织诱导是油棕组织培养关键的第一步。目前在油棕组培中选用嫩叶作为外植体材料最为广泛，也是商业化程度最高。其取材方法主要是切取生长点附近以上整个叶鞘筒，然后在无菌条件下层层剥除外面的老叶鞘(包括叶柄)然后取其中幼嫩小叶作外植体。此方法需切除母树大量已具功能叶片，外植体采集后植株仅存极少叶片，基本损毁整个树冠，同时伤口大且离生长点近，因而容易造成母树生长点坏死，因此采后管护要求高，即使管护防护处理得当，采后母树得以存活，其完全恢复也需要1-2年的漫长时间。现今已公开油棕叶片外植体采集方法劳动强度大，外植体采后母树恢复需时长甚至存在母树死亡的风险。而散落于我国各地的油棕优异种质多为园林、行道绿化树，并且这些具有特定生态适应性优株数量极少(有的特定生态类型油棕居群中仅有1株)，出于不破坏绿化景观和种质资源保护考虑，目前所用油棕叶片外植体采集方法不适用。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法，通过在生长点以上叶鞘筒凿洞后采集其中幼嫩叶片，处理后接种到愈伤组织诱导培养基上诱导愈伤组织，可获得质地良好愈伤组织，为高效油棕体细胞胚再生植株提供了一种安全简便的外植体采集方法与高效的愈伤组织诱导技术，对稀有油棕种质资源例如散落于我国各地的油棕优异种质资源保护及其开发利用具有现实意义。
本发明所采用的技术方案：
一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法，其步骤如下：
1、叶片外植体材料采集：在成龄油棕距生长点纵向往上部位凿洞，取出其中幼嫩叶片。外植体采后对小洞喷涂油漆，并用硬质老叶柄封堵洞口，再将封堵后的整个洞口喷涂油漆，以达到防腐和防虫鼠的效果。
2、叶片外植体材料消毒：将获得的叶片，在无菌条件下，修除边角，切成适合大小，置于0.1％升汞中浸泡3～12min，然后用无菌水冲洗4～5次，消毒后备用。
3、将经消毒的叶片切成小片，接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养，培养条件：暗培养，培养温度26～30℃；经45～60天诱导培养，开始出现愈伤组织。所述愈伤组织诱导培养基是以改良的WPM为基础培养基，并添加5～15mg/LTDZ、8～24mg/L麦草畏、2000mg/L活性炭、6g/L琼脂、0.5～5mg/L泛酸钙、0.05～0.5mg/L生物素、100～1000mg/L水解酪蛋白，培养基灭菌前调其pH5.6；所述改良的WPM是以WPM培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、蔗糖含量分别为：10～15mg/L、10～15mg/L、45g/L。
本发明工艺简单，操作方便，通过在生长点以上凿洞采集幼嫩叶片，对外植体母树伤害极小，采后恢复快，叶片处理后接种到愈伤组织诱导培养基上，可获得诱导率较高且质地良好愈伤组织，为高效的油棕体细胞胚再生植株技术体系奠定良好的基础，同时避免了母树因外植体采集伤树致死造成的稀有油棕种质资源流失风险，对稀有油棕优异种质资源保护及其开发利用具有现实意义。
附图说明
图1采集到的幼嫩叶片外植体及取材创口。
图2外植体采集后树冠损毁程度及取材创口涂封。
图3切取油棕整个叶鞘筒方法(对照)采集外植体对母树树冠损毁程度。
图4微创伤采集的叶片诱导培养60天获得质地良好的愈伤组织。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例一
1、叶片外植体材料采集：选取3株树龄12年的油棕，分别在距生长点纵向往上30、50、70cm处凿小洞(长×宽×深为10cm×6cm×14cm)，取出其中幼嫩叶片(见附图1)。外植体采后对小洞喷涂红色油漆，并用硬质老叶柄封堵洞口，再将封堵后的整个洞口喷涂红色油漆，以达到防腐和防虫鼠的效果，外植体刚采后创口及树冠损毁程度见附图2，而切取油棕整个叶鞘筒方法(对照)采集外植体对母树树冠损毁程度见附图3，3个月后恢复情况见表1。
表1 油棕叶片外植体微创伤取材后母树树冠损毁及恢复情况
注：取材方法：1距生长点30cm处凿小洞；2距生长点50cm处凿小洞；3距生长点70cm处凿小洞；4切取整个叶鞘筒(对照)，对照取材方法参照专利号ZL201210243321.5.的方法。
2、叶片外植体材料消毒：取在距生长点纵向往上30cm处获得的叶片，在无菌条件下，修除边角，切成适合大小，置于0.1％升汞中浸泡7min，然后用无菌水冲洗5次，消毒后备用。
3、将经消毒的叶片切成大小为1cm×2cm的小片，接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养，培养条件：暗培养，培养温度26～30℃。经50天左右诱导培养，开始出现愈伤组织，60天获得质地良好的愈伤组织(见附图4)。所述愈伤组织诱导培养基：改良WPM+5mg/LTD Z+24mg/L麦草畏+2000mg/L活性炭+6g/L琼脂+1.0mg/L泛酸钙+0.3mg/L生物素+600mg/L水解酪蛋白，培养基灭菌前调其pH5.6。所述改良WPM是以WPM培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、蔗糖含量分别为：12mg/L、10mg/L、45g/L。
实施例二
1、叶片外植体材料采集：选取一株树龄12年的油棕，在距生长点纵向往上50cm处凿小洞(长×宽×深为10cm×6cm×14cm)，取出其中幼嫩叶片。外植体采后对小洞喷涂红色油漆，并用硬质老叶柄封堵洞口，再将封堵后的整个洞口喷涂红色油漆，以达到防腐和防虫鼠的效果。
2、叶片外植体材料消毒：将获得的叶片，在无菌条件下，修除边角，切成适合大小，置于0.1％升汞中分别浸泡3min、7min、12min然后用无菌水冲洗4次，消毒后备用。
(3)将经消毒的叶片切成大小为1cm×2cm的小片，接种到愈伤组织诱导培养基进行培养，培养条件：暗培养，培养温度26～30℃。经50天左右诱导培养，开始出现愈伤组织，培养90天后统计愈伤组织诱导效果。所述愈伤组织诱导培养基：改良WPM+10mg/L TDZ+16mg/L麦草畏+2000mg/L活性炭+6g/L琼脂+3.5mg/L泛酸钙+0.2mg/L生物素+400mg/L水解酪蛋白，培养基灭菌前调其pH5.6。所述改良WPM是以WPM培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、蔗糖含量分别为：15mg/L、11mg/L、45g/L。外植体灭菌及诱导效果见表2。
表2 不同消毒时间对油棕叶片外植体消毒效果(培养90天)
实施例三
1、叶片外植体材料采集：在树龄12年的油棕距生长点纵向往上50cm处凿小洞(长×宽×深为10cm×6cm×14cm)，取出其中幼嫩叶片。外植体采后对小洞喷涂红色油漆，并用硬质老叶柄封堵洞口，再将封堵后的整个洞口喷涂红色油漆，以达到防腐和防虫鼠的效果。
2、叶片外植体材料消毒：将获得的叶片，在无菌条件下，修除边角，切成适合大小，置于0.1％升汞中浸泡7min，然后用无菌水冲洗5次，消毒后备用。
3、将经消毒的叶片切成大小为1cm×2cm的小片，分别接种到愈伤组织诱导培养基进行培养，愈伤组织诱导培养基分别为：Ci1：改良WPM+5mg/LTDZ+24mg/L麦草畏+2000mg/L活性炭+6g/L琼脂；Ci2：改良WPM+10mg/LTDZ+16mg/L麦草畏+2000mg/L活性炭+6g/L琼脂；Ci3：改良WPM+15mg/LTDZ+8mg/L麦草畏+2000mg/L活性炭+6g/L琼脂；培养条件：培养基灭菌前调其pH5.6，暗培养，培养温度26～30℃；经50天左右诱导培养，开始出现愈伤组织，90天愈伤组织诱导率见表3。所述改良WPM是以WPM培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、蔗糖含量分别为：12mg/L、10mg/L、45g/L，并添加4.0mg/L泛酸钙、0.4mg/L生物素、700mg/L水解酪蛋白。
表3 不同浓度激素配比对油棕叶片愈伤组织诱导率的影响(90天)
| 培养基编号 | 接种叶片块数 | 出愈叶片块数 | 愈伤组织诱导率(％) |
| Ci1 | 100 | 49 | 49.00 |
| Ci2 | 100 | 58 | 58.00 |
| Ci3 | 100 | 53 | 53.00 |
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法，其特征在于，其步骤如下：
1)、叶片外植体材料采集：在成龄油棕距生长点纵向往上部位凿洞，取出其中幼嫩叶片；
2)、叶片外植体材料消毒：将获得的叶片，在无菌条件下，修除边角，切成适合大小，置于0.1％升汞中浸泡3～12min，然后用无菌水冲洗4～5次，消毒后备用；
3)、将经消毒的叶片切成小片，接种到愈伤组织诱导培养基上进行培养，培养条件：暗培养，培养温度26～30℃；经45～60天诱导培养，开始出现愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基是以改良的WPM为基础培养基，并添加5～15mg/L TDZ、8～24mg/L麦草畏、2000mg/L活性炭、6g/L琼脂、0.5～5mg/L泛酸钙、0.05～0.5mg/L生物素、100～1000mg/L水解酪蛋白，培养基灭菌前调其pH5.6；所述改良的WPM是以WPM培养基为基础，在其它成分不变的条件下调整其中盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、蔗糖含量分别为：10～15mg/L、10～15mg/L、45g/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510074785.1A CN104585041B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510074785.1A CN104585041B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104585041A CN104585041A (zh) | 2015-05-06 |
| CN104585041B true CN104585041B (zh) | 2016-09-07 |
Family
ID=53111383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510074785.1A Active CN104585041B (zh) | 2015-02-12 | 2015-02-12 | 一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104585041B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108094214B (zh) * | 2018-01-25 | 2019-12-03 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种油棕体细胞悬浮培养获得再生植株的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MY146503A (en) * | 2001-08-13 | 2012-08-15 | Malaysian Palm Oil Board | Method and compositions for the production of transgenic plants |
| CN102715091A (zh) * | 2012-07-06 | 2012-10-10 | 中国热带农业科学院椰子研究所 | 一种油棕组织培养的繁殖方法 |
| CN102893862B (zh) * | 2012-07-16 | 2013-12-18 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种油棕胚性愈伤组织的诱导方法 |
-
2015
- 2015-02-12 CN CN201510074785.1A patent/CN104585041B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104585041A (zh) | 2015-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103109743B (zh) | 一种湖州百合组培快繁方法 | |
| CN104813939B (zh) | 一种荷花再生体系的构建方法 | |
| CN103734014B (zh) | 一种地枫皮的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103348920B (zh) | 一种奇楠沉香优质种苗快速繁殖方法 | |
| CN106577281B (zh) | 黄花远志茎段组培高成苗率培育方法 | |
| CN104855292B (zh) | 一种牛樟茎段组培快繁的方法 | |
| CN105850747B (zh) | 一种多肉植物虹之玉的组织快速繁殖方法及其培养的虹之玉 | |
| CN105165627B (zh) | 一种花榈木组培消毒灭菌配方和组培方法 | |
| CN106172016A (zh) | 一种五加皮组培快繁方法 | |
| CN105918121A (zh) | 一种利用走马胎叶片快速繁殖种苗的方法 | |
| CN103141388A (zh) | 一种海葱组织培养的方法 | |
| CN104488722B (zh) | 一种南美叉柱花的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN106359101A (zh) | 一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN110278877A (zh) | 一种丝瓜未受精子房诱导培养基及诱导培养方法 | |
| CN110140564A (zh) | 利用光合高脂膜剂防控烟草病毒病的方法 | |
| CN105230433A (zh) | 一种美国红枫的扦插繁殖方法 | |
| CN105432466B (zh) | 一种海桐体细胞胚胎发生和植株再生的方法 | |
| CN103975855A (zh) | 一种铁皮石斛的单倍体育种方法 | |
| CN104957039B (zh) | 网纹草的快速繁殖与养护方法 | |
| CN104585041B (zh) | 一种油棕嫩叶微创伤取材及其愈伤组织诱导方法 | |
| CN104396746B (zh) | 一种黄花贝母不定芽诱导增殖方法 | |
| CN108142281A (zh) | 一种杜仲组织培养方法 | |
| CN106613973B (zh) | 利用组培苗叶片再生不定芽快速繁育羊踯躅的方法 | |
| CN105409884A (zh) | 一种杂交培育黄羽乌鸡的方法 | |
| CN109247147A (zh) | 一种茶树快速扦插生根的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |