CN104561237A - 一种血氨试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了测定血清中氨含量的试剂盒的制备方法和应用。本发明试剂包括试剂a和试剂b。试剂a包括缓冲液、α-酮戊二酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,试剂b包括缓冲液、谷氨酸脱氢酶和稳定剂,本试剂盒解决了谷氨酸脱氢酶和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的稳定性问题,可长期保存使用,也可现配现用,本发明血氨液体单试剂稳定性良好,解决了冻干剂需要冻干和复溶的繁琐问题,测值准确,自动检测系统,保存周期长易于在各大医院推广。

Description

一种血氨试剂盒
技术领域
本发明涉及一种检测氨含量的试剂,尤其涉及测定血清中氨含量的液体双试剂,属于血清中氨含量的检测领域。
背景技术
测定血清中氨含量的实验方法通常有比色法、离子交换法、氨电极法和酶法等。谷氨酸脱氢酶法较其他方法操作简便,适用于自动生化分析仪,其反应原理是:氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-KG和NADH反应,生成L-谷氨酸和NAD+,通过监测NADH的下降速率,与同样处理的校准液比较,可计算出血清中氨的含量。
应用于临床诊断的AMM试剂盒多为谷氨酸脱氢酶法,存在单、双、三试剂等多种液体剂型及干片制剂。
中国发明专利00111788.2公开了一种测定血氨的试剂,加入金属离子螯合剂,可在更宽pH值条件下,阻止NADH和NADPH的氧化,但稳定性欠佳。中国发明专利200410043900.0公开了一种酶法测定血氨的干粉试剂,稳定期达两年,但需要冻干和复溶使用,增加了试剂成本和使用的繁琐;申请号为200410041963.2的中国发明专利申请公开了一种液体试剂,采用不同的酶反应原理,但并未涉及到试剂的有效期。因此目前缺乏一种保存效期长的血氨检测试剂。
发明内容
本发明的主要目的是提供稳定性好、保存效期长的血氨检测试剂盒。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的:
一种双试剂测定血氨的试剂盒,包括试剂a和试剂b,其特征在于所述试剂盒试剂a包括:缓冲液、α-酮戊二酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和稳定剂;试剂b包括缓冲液、谷氨酸脱氢酶和稳定剂。
本发明所述试剂a中各组分的浓度为:缓冲液50-200mM、α-酮戊二酸5-30mM、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.15-0.5mM、稳定剂占单体试剂总体积的0.05-5%。
本发明所述试剂b中各组分的浓度为:缓冲液50-300mM、谷氨酸脱氢酶10000-30000U。
本发明所述试剂b中各组分的浓度为:缓冲液50-200mM、谷氨酸脱氢酶500-50000U。
本发明所述的试剂盒,其特征在于所述试剂a和试剂b中的缓冲液选自3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、吗啉代丙烷磺酸缓冲液或3-(环己胺基)丙磺酸缓冲液中的至少一种或多种。
本发明所述的试剂盒,其特征在于所述缓冲液的pH为7.0-11.0。
本发明所述稳定剂选自牛血清白蛋白、EDTA钠/钾盐、乙二醇或TritonX-100中的至少一种或多种。
本发明所述试剂盒在检测血清中氨含量的用途。
在临床实验中,本发明所制备的血氨液体单试剂与对照试剂测值相关性良好,因此本发明所制备的血氨测定液体单试剂稳定,测值准确度高。
附图说明
图1本发明实施例1和2所制备的试剂盒与对照试剂的相关性曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1
试剂盒组成:
试剂a:Tris缓冲液(pH9.0)50mM,α-酮戊二酸20mM,牛血清白蛋白0.1%,NADH0.25mM。
试剂b:Tris缓冲液(pH8.0)50mM,谷氨酸脱氢酶8000U,TritonX-1000.2%。
实施例2
试剂盒组成:
表1
试剂a组分 浓度
Tris缓冲液(pH9.0) 50mM
α-酮戊二酸 20mM
牛血清白蛋白 0.1%
NADH 0.25mM
试剂b组分 浓度
Tris缓冲液(pH8.0) 100mM
谷氨酸脱氢酶 6000U
TritonX-100 0.2%
试验例2
试剂盒的临床相关性试验:将实施例1、2制备的试剂盒与对照试剂同时测定20例临床病人样本,进行临床相关性试验。
试验结果:见表2和图1.
表2
从表2的测值及图1的临床相关性曲线可以看出,实施例所制备的试剂盒与试剂测值相关性良好,因此本发明所制备的血氨测定液体单试剂稳定,测值准确度高。
根据本发明提供的制备方法制备的血氨液体单试剂稳定性良好,解决了冻干剂需要冻干和复溶的繁琐问题,可现配现用,(2-8)℃可稳定18个月,测值准确,适用于手动、半自动、自动检测系统,易于在各大医院推广使用。

Claims (8)

1.一种血氨试剂盒,包括试剂a和试剂b,其特征在于所述试剂盒试剂a包括:缓冲液、α-酮戊二酸、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和稳定剂;试剂b包括缓冲液、谷氨酸脱氢酶和稳定剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于所述试剂a中各组分的浓度为:缓冲液50-200mM、α-酮戊二酸5-30mM、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.15-0.5mM、稳定剂占单体试剂总体积的0.05-5%。
3.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于试剂b中各组分的浓度为:缓冲液50-300mM、谷氨酸脱氢酶10000-30000U。
4.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于试剂b中各组分的浓度为:缓冲液50-200mM、谷氨酸脱氢酶500-50000U。
5.根据权利要求1~4任一权利要求所述的试剂盒,其特征在于所述试剂a和试剂b中的缓冲液选自3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、吗啉代丙烷磺酸缓冲液或3-(环己胺基)丙磺酸缓冲液中的至少一种或多种。
6.根据权利要求1-4任一权利要求所述的试剂盒,其特征在于所述缓冲液的pH为7.0-11.0。
7.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于所述稳定剂选自牛血清白蛋白、EDTA钠/钾盐、乙二醇或TritonX-100中的至少一种或多种。
8.权利要求1所述试剂盒在检测血清中氨含量的用途。
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