CN104560976A

CN104560976A - 一种快速检测长穗偃麦草抗赤霉病基因的分子标记及应用

Info

Publication number: CN104560976A
Application number: CN201510001602.3A
Authority: CN
Inventors: 孔令让; 郭军; 李安飞; 王宏伟
Original assignee: Shandong Agricultural University
Current assignee: Shandong Agricultural University
Priority date: 2015-01-04
Filing date: 2015-01-04
Publication date: 2015-04-29
Anticipated expiration: 2035-01-04
Also published as: CN104560976B

Abstract

本发明属于遗传学领域，具体提供了一种快速检测长穗偃麦草抗赤霉病基因的分子标记及应用，借助于经过诱导的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病短片段易位系的易位位置，结合原位杂交技术，寻找与其紧密连锁的分子标记，用于小麦抗赤霉病育种、抗赤霉病性状的早期分子辅助选择，以提高育种效率。

Description

一种快速检测长穗偃麦草抗赤霉病基因的分子标记及应用

技术领域：

本发明分子遗传育种领域，涉及一种快速检测长穗偃麦草抗赤霉病基因的分子标记及应用。

背景技术：

小麦是世界上最重要的粮食作物之一。据报道，到2050年，全世界人口总数将达90多亿，而要满足人类的粮食需求，在现有产量(680万吨)基础上，粮食产量至少要提高70％。

小麦赤霉病是由禾谷镰刀菌引起的一种重要的穗部病害，其不仅降低小麦产量，而且还降低小麦的食用品质。研究表明，长穗偃麦草7el2染色体上携带有一个主效抗赤霉病位点，因此，如何将这一主效基因用于小麦抗赤霉病遗传改良就成了育种家们的研究热点。

普通小麦(Triticum aestivum)属于异源六倍体，其基因组包括A、B和D三个基组，每个基组包含7条染色体，共21条染色体，分别为1A，2A，3A，4A，5A，6A，7A，1B，2B，3B，4B，5B，6B，7B，1D，2D，3D，4D，5D，6D和7D。

近年来，随着分子标记技术的发展和高密度遗传图谱的构建，已经从小麦的21染色体上发现了249个QTL(数量性状位点)。尽管如此，目前生产上大量利用的主要是来自苏麦3号的抗赤霉病基因Fhb1。然而，小麦的近缘植物(黑麦、偃麦草等)中含有众多优异基因，能够用于小麦的遗传改良。加之，在目前申请的专利中，还未曾有利用长穗偃麦草来改良小麦赤霉病抗性的报道。因此，有必要从小麦近缘植物中发掘新的抗赤霉病基因，并用于小麦抗赤霉病遗传改良。

目前，已经从长穗偃麦草中发现了两个主效抗赤霉病位点，分别是来自于二倍体长穗偃麦草7E染色体的抗赤霉病位点和来自十倍体长穗偃麦草7el₂染色体长臂上的抗赤霉病位点。这两个抗赤霉病位点可以引入到感赤霉病普通小麦品种中，选育出抗赤霉病、高产品种。但是，传统育种方法费时、费力、表型鉴定困难，育种效率低，通过分子标记辅助选择育种可以有效解决这一问题。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明借助于经过诱导(中国春Ph1b突变体)的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病短片段易位系的易位位置，结合原位杂交技术，寻找与其紧密连锁的分子标记，用于小麦抗赤霉病育种、抗赤霉病性状的早期分子辅助选择，以提高育种效率。

本发明采用以下技术方案：

获得小麦-长穗偃麦草抗赤霉病短片段易位系即本发明利用的对象，具体方法为：

(1)中国春Ph1b突变体与供体亲本KS24-2(7DS.7el₂L)进行杂交，获得F₁；

(2)F₁与中国春Ph1b突变体进行回交，获得BC₁F₁；

(3)BC₁F₁植株中，选择携带ph1b基因纯合的单株，同时携带外源染色体的杂合单株，进行自交，获得BC₁F₂；

(4)借助于分子标记辅助选择，对BC₁F₂植株进行基因型确定，选择携带最少外源染色体的单株自交，命名为SDAU1881和SDAU1886；

为方便进行研究，发明人将其保存于山东农业大学小麦分子育种研究室小麦种质保藏中心，保藏日期为2014.06.20，保藏编号分别为SDAU1881和SDAU1886，并对公众开放该种质资源。

确定该种抗赤霉病小麦的抗赤霉病基因：通过对获得的两个短片段株系(SDAU1881和SDAU1886)进行抗赤霉病鉴定，同时结合基因组原位杂交技术(GISH)，明确该抗赤霉病基因在小麦染色体上的位置；根据已发表的粗山羊草D基因组序列，开发与偃麦草抗赤霉病基因紧密连锁的分子标记，并对开发的分子标记进行实用性验证。

长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop在小麦染色体上的位置：

以小麦基因组DNA为封阻DNA，以长穗偃麦草基因DNA为探针DNA，对获得的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病株系(SDAU1881和SDAU1886)进行外源基因的鉴定，将该抗赤霉病基因定位在小麦7DL染色体上，易位类型为7DS.7DL-7el2L。利用中国春、中国春缺四体材料(N7AT7B，N7BT7D和N7DT7A)、中国春缺失系材料(7AL-16，7AL-1，7DL-5，7DL-2和7DL-3)对Xcfa2240(发表于2010年山东农业大学的硕士毕业论文“长穗偃麦草7E遗传图谱构建及小麦抗赤霉病和叶锈病基因定位”中，但其定位于7E染色体上，与本发明存在差异)进行小麦染色体定位和染色体物理定位；利用中国春缺四体材料将该分子标记定位在小麦7A染色体和7D染色体上，大小分别为280bp和237bp；利用中国春缺失系材料将该分子标记定位在小麦7A和7D染色体上的物理位置分别为7AL16-0.9-1.0和7DL3-0.82-1.0。从而将抗赤霉病基因定位在小麦7DL3-0.82-1.0范围内；

虽然现有技术中有将该抗病基因在长穗偃麦草染色体7el₁和7el₂上进行的定位的报道，但是仅仅根据报道的内容还不能确定在小麦-长穗偃麦草易位染色体上该分子标记是否能够有效，故而本发明的发明人针对小麦-长穗偃麦草抗赤霉病染色体易位系进行了深入的研究工作，并利用新创制的短片段易位系结合D基因组的序列，开发了本发明所获得的全新的分子标记，从而为该抗病基因的分子标记辅助选择提供了更丰富的可利用资源，具有更加现实的实用意义。

而发明人进一步研究发现与长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop紧密连锁的分子标记，根据已发表的粗山羊草D基因组序列，开发了7个多态性分子标记，其中有6个标记在小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源中没有扩增条带，而在小麦中有扩增条带，只有1个分子标记在小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源以及普通小麦品种中均有扩增条带，该分子标记命名为XsdauK352，其在长穗偃麦草中的扩增条带大小为483bp和210bp。

因此发明人确定长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop连锁的分子标记，选自分子标记XsdauK352；除此之外，还可以选择Xcfa2240作为分子标记用于小麦育种中；

用上游引物Xcfa2240-F：SEQ ID NO.1，下游引物Xcfa2240-R：SEQ ID NO.2对抗赤霉病小麦KS24-2、SDAU1881和SDAU1886以及感病品种中国春和Thatcher进行PCR扩增；结果显示该分子标记在小麦(中国春和Thacher)中有两个扩增条带，其大小分别为245bp和280bp；在KS24-2、SDAU1881和SDAU1886中也有两个扩增条带，其大小分别为237bp和280bp。结合上述抗赤霉病基因定位在小麦7DL3-0.82-1.0范围内的判定，可以看出只有大小为237bp的条带，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，与抗赤霉病基因Fhblop紧密连锁。

用上游引物XsdauK352-F：SEQ ID NO.3，下游引物XsdauK352-R：SEQ ID NO.4对抗赤霉病小麦KS24-2、SDAU1881和SDAU1886以及感病品种中国春和Thatcher进行PCR扩增；结果发现该分子标记在中国春和Thatcher中的扩增条带大小为490bp；在KS24-2、SDAU1881和SDAU1886中有两个扩增条带，其大小为483bp和210bp，与上述研究结果相同。

长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop连锁的分子标记(Xcfa2240和XsdauK352)的实用性评价：

以亲本KS24-2和35份小麦品种(1为显矮3号；2为邯6172；3为山农23；4为WB17-04-9；5为旱9；6为藁城9415；7为泰农18；8为潍9903；9为周麦16；10为旱10；11为良星618；12为淮阴0454；13为旱12；14为旱21；15为石家庄8号；16为烟农19；17为北京837；18为鲁麦14；19为贵州8131-1；20为金麦6号；21为山农18；22为亚星1号；23为山农优麦2号；24为Marquis；25为小偃6号；26为兰考906；27为济麦22；28为扬麦158；29为山农15；30为望水白；31为Apogee；32为枣9967；33为山农614238；34为临麦9号；35为Grandin；36为KS24-2)为材料，对上述两个分子标记在这些小麦中进行PCR扩增；

结果发现，Xcfa2240在小麦中的扩增条带类型有5种类型，即Nul l、222bp、237bp、245bp和280bp，其中大小为237bp的条带与抗赤霉病基因紧密连锁，能够用于抗赤霉病基因的分子标记辅助选择；XsdauK352在小麦中的扩增条带类型有6种类型，即Null、485bp、490bp、493bp、483bp和210bp，其中大小为483bp和210bp的条带与抗赤霉病基因紧密连锁，能够用于抗赤霉病基因的分子标记辅助选择。上述两个分子标记均可用于小麦-长穗偃麦草抗赤霉病基因的分子标记辅助选择(或聚合育种)。

本发明所述的分子标记引物在筛选长穗偃麦草抗赤霉病品系和小麦-长穗偃麦草抗赤霉病染色体工程系(染色体附加系、代换系和易位系)中的应用，利用分子标记Xcfa2240或XsdauK352对长穗偃麦草抗赤霉病品系和小麦-长穗偃麦草抗赤霉病染色体工程系(染色体附加系、代换系和易位系)的基因组DNA进行扩增，扩增产物电泳分离。如果能够扩增到所述分子标记的目标条带，则说明待鉴定小麦品种中含有长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop；反之，则不含有该基因。

本发明所述的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源可以利用分子标记Xcfa2240和XsdauK352进行分子标记辅助选择育种，利用分子标记Xcfa2240或XsdauK352对创制的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源及其衍生品种(系)的基因组DNA进行扩增，扩增产物电泳分离，通过判断能否扩增到所述分子标记对应的目标条带，预测出筛选品种是否携带长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop。所述的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源的衍生品种(系)是指以小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源(SDAU1881和SDAU1886)为亲本，通过杂交或遗传转化方法获得的小麦品种。

用于扩增所述的分子标记Xcfa2240或XsdauK352的引物，分子标记Xcfa2240引物如下：

Xcfa2240-F：5' TGCAGCATGCATTTTAGCTT 3'(SEQ ID No.1)；

Xcfa2240-R：5' TGCCGCACTTATTTGTTCAC 3'(SEQ ID No.2)。

分子标记XsdauK352引物如下：

XsdauK352-F：5' CTTTCCAACGCCGTATCATT 3'(SEQ ID No.3)；

XsdauK352-R：5' ATTGCGCTGACTGTTGTTTG 3'(SEQ ID No.4)。

基于上述研究成果，发明人进一步开发了本发明所述分子标记的具体应用：

本发明所述的分子标记引物在克隆偃麦草抗赤霉病基因Fhblop中的应用。

本发明所述的分子标记引物在鉴定长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop中的应用，其主要利用分子标记Xcfa2240或XsdauK352(任意一种)对创制的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源及其衍生品种(系)的基因组DNA进行扩增，扩增产物电泳分离。如果能够扩增到所述分子标记的目标条带，则说明待鉴定小麦品种中含有长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop。反之，则不含有该基因。所述的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源的衍生品种(系)是指以小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源(SDAU1881和SDAU1886)为亲本，通过杂交或遗传转化方法获得的小麦品种。

本发明所述的分子标记引物在筛选长穗偃麦草抗赤霉病品系和小麦-长穗偃麦草抗赤霉病染色体工程系(染色体附加系、代换系和易位系)中的应用，利用分子标记Xcfa2240或XsdauK352(任意一种)对长穗偃麦草抗赤霉病品系和小麦-长穗偃麦草抗赤霉病染色体工程系(染色体附加系、代换系和易位系)的基因组DNA进行扩增，扩增产物电泳分离。如果能够扩增到所述分子标记的目标条带，则说明待鉴定小麦品种中含有长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop。反之，则不含有该基因。

本发明所述的分子标记的确定方法，包括以下步骤：

中国春Ph1b突变体与供体亲本KS24-2(7DS.7el₂L)进行杂交，获得F₁。F₁与中国春Ph1b突变体进行回交，获得BC₁F₁。

BC₁F₁植株中，选择携带ph1b基因纯合的单株，同时携带外源染色体杂合的单株，进行自交，获得BC₁F₂。

借助于分子标记辅助选择，对BC₁F₂植株进行基因型确定，选择携带最少外源染色体的单株自交。对获得的短片段株系进行抗赤霉病鉴定，同时结合基因组原位杂交技术(GISH)确定外源染色体片段在小麦染色体上的位置。

根据已发表的粗山羊草D基因组序列，开发与长穗偃麦草抗赤霉病基因紧密连锁的分子标记，并对开发的分子标记进行实用性验证。

其中，PCR扩增的反应体系中，PCR试剂组成为：含50-100ngDNA的2ul模板，1.5ul 10XPCRbuffer(含Mg²⁺)，1.2uldNTP，左右引物各1.0ul，0.15ul R-Taq DNA polymerase，8.15ul H₂O。PCR扩增程序为94℃预变性5min；然后94℃变性50s，55℃复性30s，72℃延伸50s，35个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存。PCR扩增反应后，扩增产物在丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺质量比39:1的非变性聚丙烯酰胺上电泳分离，再用银染法染色检测判定是否含有对应的条带。

本发明的有益效果为：

(1)本发明不受环境条件限制，通过获得的与长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop紧密连锁的分子标记Xcfa2240和XsdauK352，预测小麦的赤霉病抗性，根据目的条带的大小，为准确筛选出携带偃麦草抗赤霉病基因Fhblop的品系提供可能，这将大大提高小麦抗赤霉病育种效率。

(2)小麦的赤霉病抗性是由数量性状控制的，因此，当长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop处于杂合状态时，抗病性表现为部分抗性，而位于小麦7D染色体上的引物Xcfa2240或XsdauK352与抗赤霉病基因Fhblop紧密连锁，从而可以在筛选出该基因的基础上，通过简单杂交和农艺性状观察选择，便可在低世代选育出稳定的抗赤霉病小麦品系，这可以大大减少育种中操作过程，降低育种成本，提高选择效率。

(3)本发明的另一个贡献是提供了该抗赤霉病基因的物理定位结果，从而为接下来该抗赤霉病基因的表达分析、克隆等研究提供方便和材料基础。此外，本发明提供的两个紧密连锁的分子标记Xcfa2240和XsdauK352均为SSR标记，较之其它类型分子标记使用更为方便、快速。

附图说明

图1A为中国春和两份小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源(SDAU1881和SDAU1886)的穗部抗赤霉病鉴定示意图；

图1B为图1A的彩色示意图；

结合图1可知，图中死亡部分组织代表接种(禾谷镰刀菌)21天后，赤霉病的扩展情况，可以看出，中国春和济麦22有2/3左右的穗子表现为死亡，说明感赤霉病；而SDAU1881和SDAU1886、聚合系SDAU1903和SDAU1906、济麦22遗传改良系SDAU2003和SDAU2028的穗子在接种21天后，并没有扩展或扩展很少，说明这些材料对赤霉病具有很高的抗扩展性；

图2为小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源KS24-2、SDAU1881和SDAU2003的原位杂交鉴定；

图中箭头所示浅色片段代表长穗偃麦草的染色体组分，其余为小麦的染色体组分；由图2可见，原始供体材料KS24-2携带1对罗伯逊易位染色体；而小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源SDAU1881和SDAU2003均携带较小的长穗偃麦草染色体片段；

图3为共显性分子标记Xcfa2240在中国春、Thacher、SDAU1881、SDAU1886、KS24-2、7el2、Thinopyrum ponticum中的扩增结果；

图中M为100bp ladder；1为Thinopyrum pont icum；2为7el2；3为KS24-2；4为SDAU1881；5为SDAU1886；6为CS；7为Thatcher；

图4为共显性分子标记Xcfa2240在中国春、中国春缺四体材料(N7AT7B，N7BT7D和N7DT7A)、中国春缺失系材料(7AL-16，7AL-1，7DL-5，7DL-2和7DL-3)中的扩增结果；

途中M为100bp ladder；1为CS；2为N7AT7B；3为N7BT7D；4为N7DT7A；5为7AL-1；6为7AL-16；7为7DL-5；8为7DL-2；9为7DL-3；

图5为共显性分子标记XsdauK352在中国春、Thacher、SDAU1881、SDAU1886、KS24-2、7el2、CS、Thinopyrum ponticum中的扩增结果；

图6为两个共显性分子标记Xcfa2240和XsdauK352在35个小麦品种中的扩增结果；

图中M.100bp ladder；1为显矮3号；2为邯6172；3为山农23；4为WB17-04-9；5为旱9；6为藁城9415；7为泰农18；8为潍9903；9为周麦16；10为旱10；11为良星618；12为淮阴0454；13为旱12；14为旱21；15为石家庄8号；16为烟农19；17为北京837；18为鲁麦14；19为贵州8131-1；20为金麦6号；21为山农18；22为亚星1号；23为山农优麦2号；24为Marquis；25为小偃6号；26为兰考906；27为济麦22；28为扬麦158；29为山农15；30为望水白；31为Apogee；32为枣9967；33为山农614238；34为临麦9号；35为Grandin；36为KS24-2。

具体实施方式

实施例1小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源的创制

2008年，在山东农业大学温室配置杂交组合(KS24-2X CS Ph1b mutant)，获得F₁；2009年，将获得F₁与CS Ph1b mutant进行杂交，获得BC₁F₁，并对获得的植株进行分子标记鉴定，在分子标记鉴定的基础上，携带目标基因和外源片段的BC₁F₁自交获得BC₁F₂。2010年和2011年，借助于分子标记和基因组原位杂交，获得小麦-长穗偃麦草短片段易位系；2012年、2013年和2014年对获得的小麦-长穗偃麦草短片段种质资源进行抗赤霉病鉴定。

由图1和图2可以看出，新创制的小麦-长穗偃麦草抗赤霉病种质资源SDAU1881和SDAU1886，具有较小的染色体片段，同时其对赤霉病的抗性水平明显提高。

实施例2长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop的定位

利用原位杂交技术，以中国春基因组DNA为封阻DNA，以长穗偃麦草基因DNA为探针DNA，同时，结合分子标记技术，对获得的小麦-偃麦草抗赤霉病株系进行外源基因进行了定位。

PCR扩增的反应体系中，PCR试剂组成为：含50-100ngDNA的2ul模板(从中国春、Thatcher、KS24-2、7el₂(7D)、SDAU1881、SDAU1886、N7AT7B，N7BT7D、N7DT7A、7AL-16，7AL-1，7DL-5，7DL-2和7DL-3中提取基因组DNA)，1.5ul 10XPCR buffer(含Mg²⁺)，1.2uldNTP，左右引物(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2)各1.0ul，0.15ul R-Taq DNA polymerase，8.15ulH₂O。PCR扩增程序为94℃预变性5min；然后94℃变性50s，55℃复性30s，72℃延伸50s，35个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存。PCR扩增反应后，扩增产物在丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺质量比39:1的非变性聚丙烯酰胺上电泳分离，再用银染法染色检测。

检测结果由图2、3和4可以看出，长穗偃麦草7el2染色体与小麦7D染色体发生了重组，并且长穗偃麦草的抗赤霉病片段易位到普通小麦7D染色体长臂末端上，由此，将长穗偃麦草的抗赤霉病基因定位在小麦7DL3-0.82-1.0范围内。

实施例3长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop紧密连锁分子标记的开发

根据已发表的粗山羊草D基因组的序列信息，并下载7DL染色体近末端的14个scaffold(scaffold48913、scaffold89301、scaffold35216、scaffold38207、scaffold72072、scaffold70783、scaffold5083、scaffold11459、scaffold21010、scaffold23、scaffold76033、scaffold21011、scaffold92632、scaffold32834)，利用Primer 3.0设计SSR引物，以中国春、Thatcher、SDAU1881、SDAU1886、KS24-2、7el2(7D)和Thinopyrum pont icum为材料，进行PCR扩增，寻找与抗赤霉病基因Fhblop紧密连锁的分子标记。

PCR扩增的反应体系中，PCR试剂组成为：含50-100ngDNA的2ul模板(从Th.ponticum、中国春、Thatcher、KS24-2、7el₂(7D)、SDAU1881、SDAU1886中提取基因组DNA)，1.5ul 10XPCRbuffer(含Mg²⁺)，1.2uldNTP，左右引物，0.15ul R-Taq DNA polymerase，8.15ul H₂O。PCR扩增程序为94℃预变性5min；然后94℃变性50s，55℃复性30s，72℃延伸50s，35个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存。PCR扩增反应后，扩增产物在丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺质量比39:1的非变性聚丙烯酰胺上电泳分离，再用银染法染色检测。

结果表明，根据上述14个scaffold，发明人共设计了21个分子标记，并以上述7个材料的基因组DNA为模板进行扩增，其中7个分子标记在7D与7el间表现为多态性；只有一个分子标记表现为共显性分子标记，其为XsdauK352，其对应的左右引物为XsdauK352-F：5'CTTTCCAACGCCGTATCATT 3'(SEQ ID No.3)；XsdauK352-R：5' ATTGCGCTGACTGTTGTTTG 3'(SEQID No.4)。

其对应的扩增结果如图5所示，结果发现该分子标记在中国春和Thatcher中的扩增条带大小为490bp；在KS24-2、SDAU1881和SDAU1886中有两个扩增条带，其大小为483bp和210bp。

实施例4长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop紧密连锁分子标记的验证

以35个小麦品种和亲本KS24-2为实验材料，对获得的两个SSR分子标记Xcfa2240和XsdauK352进行验证，

PCR扩增的反应体系中，PCR试剂组成为：含50-100ngDNA的2ul模板(从35个小麦品种或品系和KS24-2中提取的基因组DNA)，1.5ul 10XPCR buffer(含Mg²⁺)，1.2uldNTP，左右引物(SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4)，0.15ul R-Taq DNApolymerase，8.15ul H₂O。PCR扩增程序为94℃预变性5min；然后94℃变性50s，55℃复性30s，72℃延伸50s，35个循环；最后72℃延伸10min；4℃保存。PCR扩增反应后，扩增产物在丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺质量比39:1的非变性聚丙烯酰胺上电泳分离，再用银染法染色检测。

由图3、5和6可见，Xcfa2240在小麦中的扩增条带类型有5种类型，即Null、222bp、237bp、245bp和280bp，其中大小为237bp的条带与抗赤霉病基因紧密连锁，能够用于抗赤霉病基因的分子标记辅助选择；

XsdauK352在小麦中的扩增条带类型有6种类型，即Nul l、485bp、490bp、493bp、483bp和210bp，其中大小为483bp和210bp的条带与抗赤霉病基因紧密连锁，能够用于抗赤霉病基因的分子标记辅助选择。上述两个分子标记均可用于小麦-长穗偃麦草抗赤霉病基因的分子标记辅助选择育种。

图6中只有KS24-2扩增后才具有与Xcfa2240相关的大小为237bp的条带和与XsdauK352相关的大小为483bp和210bp的条带，与其他35个小麦品种的扩增条带均不一样，表现出了特异性和唯一性，也说明了在小麦分子辅助选择育种中，Xcfa2240与XsdauK352能够快速而准确地选择到抗赤霉病品系，而其他35个小麦品种均不具备抗赤霉病特性。

Claims

1.一种快速检测长穗偃麦草抗赤霉病基因的分子标记，所述的分子标记为Xcfa2240或XsdauK352，其特征在于：用于扩增所述的分子标记Xcfa2240或XsdauK352的引物如下，其中分子标记Xcfa2240引物如下：

Xcfa2240-F：5'TGCAGCATGCATTTTAGCTT 3'，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

Xcfa2240-R：5'TGCCGCACTTATTTGTTCAC 3'，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

分子标记XsdauK352引物如下：

XsdauK352-F：5'CTTTCCAACGCCGTATCATT 3'，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

XsdauK352-R：5'ATTGCGCTGACTGTTGTTTG 3'，其核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.权利要求1所述分子标记在克隆偃麦草抗赤霉病基因Fhblop中的应用。

3.权利要求1所述分子标记在鉴定长穗偃麦草抗赤霉病基因Fhblop中的应用。

4.权利要求1所述的分子标记在筛选长穗偃麦草抗赤霉病品系和小麦-长穗偃麦草抗赤霉病染色体工程系中的应用。