CN104548085A - 一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物及其制备方法和应用。本发明的一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物，含有口蹄疫病毒的全病毒颗粒以及稳定冷冻保护剂，所述的稳定冷冻保护剂由以下物质组成：多元醇、缓冲溶液以及非离子表面活性剂。本发明提供的稳定冷冻保护剂，使疫苗抗原稳定，保护标记疫苗的效价和效果；在生产过程和冷链过程中保护标记疫苗抗原稳定或标记抗原库的抗原稳定，可在液体、冷冻的条件下较长时间保持标记抗原的效价或活性。

Description

一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种疫苗组合物及其制备方法和应用，特别涉及一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物及其制备方法和应用，本发明属于医药生物技术领域

背景技术

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth diseasevirus，FMDV)引起的偶蹄动物烈性接触性传染病，主要危害牛、羊、猪、骆驼等，发病率极高，传播速度极快。世界动物卫生组织将其列为A类人兽共患病首位。虽然该病的死亡率不高(幼畜除外)，但可造成动物生产性能下降，且扑杀动物需花费大量的人力、物力和财力，还会影响国际贸易，造成严重的经济损失和生物恐怖。

口蹄疫病毒属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒属。目前已知有7个血清型，A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3、ASIA1，每个血清型又有很多亚型。我国流行3个血清型且致病力最强、分布最广泛，分别为A型、O型以及ASIA1型。

疫苗接种是特异性预防FMD的有效手段，制备安全有效的疫苗是成功地预防、控制乃至最终消灭FMD的先决条件。FMD灭活疫苗具有良好的免疫原性，在预防和控制FMD的过程中发挥着重要作用，但在疫苗制备过程中和产品中的一些宿主细胞残余蛋白、核酸、牛血清白蛋白、化学试剂等如果不加以控制去除，免疫接种动物则引起动物严重副反应甚至死亡、特别是可能使动物致癌或影响肉类动物食品安全。

口蹄疫疫苗生产环节、冷链运输、田间使用中，适合的温度保存原液、半成品、成品对疫苗抗原活性或效价非常重要，但疫苗抗原活性稳定的温度范围非常狭窄，一般在每段工艺单元完成之间、疫苗库或抗原库、冷链运输、使用时保存在2-8℃，但不能冷冻，避免温度升高或低于零下破环抗原结构或活性。为保持疫苗稳定性或工艺过程中贮备抗原的稳定，多对疫苗或抗原进行冻干或冷冻，但由于灭活纯化抗原需要加入佐剂如铝盐、油佐剂增强其免疫作用，冻干或冷冻使抗原凝聚变性或分层，失去免疫原性和生物活性，因此有必要对口蹄疫抗原的稳定保护剂进行研究，筛选，以便应对规模化生产大量抗原处理、贮存或抗原库稳定需要，但不能影响后续乳化工艺配制疫苗和疫苗的最终田间使用，选择医学或兽医学允许使用安全疫苗抗原保护剂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种含有新型稳定冷冻保护剂的口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物及其制备方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明的一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物，其特征在于含有口蹄疫病毒的全病毒颗粒以及稳定冷冻保护剂，所述的稳定冷冻保护剂由以下物质组成：多元醇、缓冲溶液以及非离子表面活性剂。

在本发明中，优选的，在一个有效剂量的疫苗组合物中含有口蹄疫病毒的全病毒颗粒1-20微克/mL，多元醇10-50％(v/v)，非离子表面活性剂0.003-0.03mg/mL，10-100mM的缓冲溶液，疫苗pH介于7.0和9.0之间。

在本发明中，优选的，所述的多元醇为甘油、聚乙二醇以及聚氧丙烯甘油醚(polyoxypropylene glycerol ether)中的至少一种。

在本发明中，优选的，所述的聚乙二醇为聚乙二醇300或聚乙二醇400。

在本发明中，优选的，所述的非离子表面活性剂为吐温-20或土温-80。

在本发明中，优选的，所述的缓冲溶液是磷酸缓冲液、Tris缓冲液或HEPES缓冲液的一种或几种的混合物。

进一步的，本发明还提出了以上任一项所述的疫苗组合物在制备预防或治疗口蹄疫疾病药物中的应用。

本发明提供口蹄疫标记疫苗稳定冷冻保护剂配方和制备工艺方法涉及病毒学、免疫学、疫苗学和过程工艺学，特别涉及口蹄疫病毒标记疫苗配方以及制法，包括规模化口蹄疫病毒的纯化工艺、质量控制方法和指标。配方的制法包括生物反应器全悬浮无血清培养BHK-21和口蹄疫病毒疫苗株生产种子批，经过反复冻融、裂解或超声、核酸酶解、深层过滤、阴离子交换层析、灭活、PEG沉淀、酚氯仿抽取、蔗糖密度梯度离心纯化、分子筛凝胶纯化、除菌过滤、稀释乳化配制。可用于商用BHK-21适应或减毒株口蹄疫疫苗的纯化，也包括在其他敏感细胞系增殖的各型或亚型口蹄疫病毒疫苗，主要为BHK-21细胞系作为口蹄疫疫苗生产基质的各型或亚型的口蹄疫病毒标记抗原制备和贮存、运输、使用。

本发明所使用的稳定冷冻保护剂的特点和优点：

1、本发明提供的标记冷冻保护性配方，使疫苗抗原稳定，保护了标记疫苗的效价和效果；可在液体、冷冻的条件下较长时间保持标记抗原的效价或活性，有利于生产过程、冷链过程标记疫苗抗原的贮存。

2、配方中不含外源性的蛋白、多肽、寡肽，降低了动物疫病的传播风险。

本发明提供了口蹄疫标记疫苗改良、贮存稳定配方以及制法、使用。本发明的一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物含纯化灭活的完整的口蹄疫颗粒146S标记抗原和稳定冷冻保护剂。稳定冷冻保护剂可使口蹄疫标记抗原在4-8℃贮存24月。本发明的稳定冷冻保护剂由以下物质组成：多元醇、缓冲溶液以及非离子表面活性剂，该冷冻保护剂有效维持口蹄疫标记抗原146S的完整性、活性，在具体实施中贮存在不同温度下仍能够保持70-99.9％的病毒完整性或感染性。40℃液体贮存6个月，口蹄疫标记抗原仍能够保持80％的感染性或完整性。在本发明提供的多元醇为甘油、聚乙二醇以及聚氧丙烯甘油醚中的至少一种，在疫苗有效剂量中含10-50％(v/v)，研究表明甘油在疫苗原液中含30％(v/v)可维持口蹄疫病毒99.9％的感染性。根据发明，非离子表面活性剂为吐温-20或土温-80，在疫苗有效剂量中的含0.003-0.03mg/mL。疫苗配方pH介于7.0和9.0之间。缓冲液是磷酸缓冲液、Tris缓冲液，HEPES缓冲液的一种或混合物，摩尔浓度介于10和100mM之间。

本发明实例中提供长期稳定贮存口蹄疫抗原的方法，包括口蹄疫病毒原液、半成品、成品的方法以及用多元醇和缓冲液混合后，口蹄疫病毒液完整病毒颗粒保持的情况。

本发明的主要目的之一是口蹄疫病毒原液和疫苗成品在4-8℃以外的条件下保持其效价的稳定性或免疫原性的稳定性，在生产过程和使用过程超低温保存(-60℃以下)病毒制备液，克服贮存、运输和临床使用或田间使用时疫苗效价下降或无效的问题。发明提供了液体配方，保持口蹄疫病毒146S颗粒的完整性和含量稳定，在4℃下至少保存6月，60-100％的病毒完整、含量稳定。

本发明提供更重要的是冻干配方，可保持高度纯化口蹄疫病毒长期稳定，以便高效稳定的抗原库的建立和维持。

液体配方

本发明提供的液体长期贮存稳定的口蹄疫完整病毒颗粒配方需要多元醇，单独使用甘油时，甘油的浓度可达20-30％v/v，4℃贮存完整口蹄疫病毒长达6月，易于高压消毒，多用于药用的注射制剂，安全，是各个国家和地区批准使用的赋型剂之一。可保护多种病毒的完整性。

另外一种多元醇是聚乙二醇，由多种分子量的形式，只有PEG 400和PEG 300用于注射制剂，浓度可达30％v/v，无毒和无辐射。此外，聚氧丙烯甘油醚也无毒、多用于口服和注射药用制剂，并有防腐抗菌的作用。

Tween-20或Tween-80，本发明筛选医学或兽医学允许使用的原辅材料，非动物来源的非离子表面活性剂Tween-20或Tween-80，和传统有佐剂中的司本-80，性质类似，可使用在本发明的赋型剂或病毒保护剂中，但需要低浓度使用方可发挥保护病毒结构、大小和活性的作用，高浓度则起反作用，使疫苗效果降低或失效。选用吐温-20，在疫苗有效剂量中的含0.003-0.03mg/mL。

药用配方

考虑到口蹄疫疫苗用于偶蹄动物，可能和其他制剂混合使用，且不能引起副反应，药用配方仅限上述，用于口服、鼻内、肌肉的口蹄疫疫苗免疫用途。

附图说明

图1为口蹄疫病毒标记疫苗规模化生产的流程图；

图2为口蹄疫病毒标记疫苗规模化生产的质控方法和质控点。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1口蹄疫全病毒颗粒标记抗原的制备

包括以下步骤：

a)100000L生物反应器全悬浮培养BHK-21细胞，细胞密度达到3-5×10⁶/毫升时，按照病毒感染复数MOI0.01-0.1接种口蹄疫病毒细胞适应株(猪口蹄疫病毒/Mya98-XJ-2010株，内蒙古必威安泰生物科技有限公司制备)，制备病毒原液，搅拌速度不超过40rpm，培养4天收获病毒液，使用制备型低速连续流离心机离心除去细胞碎片，同时收获上清和沉淀，沉淀在0.2％Triton-X-100存在的条件下裂解口蹄疫病毒感染细胞和细胞膜碎片，反复冻融3次后、超声3次(最大输出功率3×30s)；用制备型低速连续流离心机离心收集上清液，合并上清液，其中口蹄疫病毒滴度为≥10^7.0logTCID₅₀/mL；

b)核酸酶解；

经步骤a)的病毒液，依次经过0.8μm、0.45μm、0.22μm的滤膜过滤和截留值100，000-300，000MWCO的膜包或中空纤维柱10倍超滤；

高度特异、高活性的核酸酶Benzonase按20-50×103单位/升加入到病毒裂解液中，2-8℃作用9-18小时；其中口蹄疫病毒滴度为10^7.0-10^8.0logTCID₅₀/mL；

c)深层过滤和超滤、强阴离子交换；

经步骤b)的病毒液，经0.22μm膜过滤，通过Q Sepharose XL离子交换吸附床或吸附膜，1000毫升介质处理40-50ml的病毒液，洗液为含有90mM氯化钠的4.7mM磷酸钠缓冲液(pH6.5-7.0)，用含0.35M氯化钠的120mM的磷酸钠和1mMEDTA的缓冲液(pH7.5)分步洗脱；其中口蹄疫病毒滴度为10^7.0-10^8.0logTCID₅₀/mL；

病毒裂解液经过滤和超滤除去了小分子量的物质，再经核酸酶消化大分子的病毒RNA以及细胞RNA，在多数情况下，阴离子交换树脂除去病毒液中的宿主细胞DNA或核酸，一些阴离子介质包括但不限于DEAE纤维素、DEAE琼脂糖、DEAE生物胶、DEAE葡聚糖。

d)PEG沉淀、氯仿抽取；

经步骤c)的病毒液用PEG-8000或PEG-6000沉淀，PEG-8000或PEG-6000配成40％的贮存液，6.2mM磷酸钠、1mMEDTA缓冲液配制5M氯化钠，本实施例中经核酸酶消化、层析纯化洗脱的病毒液用PEG-8000沉淀，使PEG-8000在病毒液里的浓度4％(W/V)，氯化钠浓度在100mM，剧烈搅拌后2-8℃1小时，制备型离心机以1000g离心10分钟，倒去上清，用含120mM氯化钠、6.2mM磷酸钠、1mMEDTA(pH7.5)缓冲液重悬沉淀，体积为病毒培养液的10-20％。

上述的病毒收获液作为口蹄疫病毒原液，加入抽提液，所述抽提液是通过将三氯甲烷和异戊醇按24∶1体积比混合后得到的，使大量的口蹄疫病毒颗粒停留在水相和水乳界面。病毒原液加入等体积的抽提液，上下混合1分钟，用制备型带有多管转头的离心机在20℃条件下3,000rpm离心10分钟，收获水相，对界面进行2次抽提，合并水相获得口蹄疫病毒抽提液。其中口蹄疫病毒滴度为10^7.0-10^8.0logTCID₅₀/mL；

e)灭活；

0.025％二乙烯亚胺，4℃灭活48小时或37℃灭活2小时

f)蔗糖密度梯度离心纯化；

步骤e)的原液一步连续流蔗糖等密度梯度超速离心纯化，所用离心机为生产制备型系列，大容量转头容积为3.2-8升，批处理抽提液2000升；口蹄疫病毒灭活液采用密度梯度超速离心，超速离心方式为连续流，梯度为不连续梯度，包括(1)离心力36000-60000g形成的梯度；(2)90000-120000g形成的梯度；(3)蔗糖梯度和口蹄疫灭活液的总体积为8L，灭活液中有微量的BHK-12细胞杂质和前段步骤中的残余；(4)口蹄疫病毒灭活液的流速10L/小时；步骤g)所用平衡缓冲液为0.04MPBS(pH 7.2-7.6)，60％蔗糖用缓冲液(0.04M磷酸，100mM NaCl，0.1％Triton-X-100，pH 7.6)配制，转子注入1.6升配好的60％蔗糖溶液；以20升/小时上样，处理口蹄疫病毒PEG沉淀重悬液2000升，转速32000rpm；

g)超滤透析、稀释、除菌过滤

步骤f)原液经超滤透析并浓缩25-50倍，浓缩后的原液经0.22μm膜除菌过滤；

i)原液储备或乳化配制；

原液储备或经稀释乳化配制，乳化采用的佐剂为V201。

口蹄疫病毒标记疫苗规模化生产流程图及质控方法和质控点如图1和图2所示，其中，具体的口蹄疫病毒标记疫苗规模化生产过程中各步骤的质量控制指标制如下表1所示。

实施例2口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物的制备

1、13微克口蹄疫全病毒颗粒标记抗原，实施例1制备；

2、稳定冷冻保护剂：由以下重量的各物质组成：按照体积比1∶1∶1混合的甘油、聚氧丙烯甘油醚以及聚乙二醇300的混合物300微升，吐温200.02毫克以及50mM的磷酸缓冲液1毫升；

3、将上述1和2中的口蹄疫全病毒颗粒标记抗原与稳定冷冻保护剂混合，调疫苗pH为8.0即得。

实施例3口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物的制备

1、20微克口蹄疫全病毒颗粒标记抗原，实施例1制备；

2、稳定冷冻保护剂：由以下重量的各物质组成：甘油300微升，吐温800.02毫克以及50mM的磷酸缓冲液与Tris缓冲液按照1∶1混合的混合物1毫升；

3、将上述1和2中的口蹄疫全病毒颗粒标记抗原与稳定冷冻保护剂混合，调疫苗pH为7.5即得。

实施例3口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物的制备

1、5微克口蹄疫全病毒颗粒标记抗原，实施例1制备；

2、稳定冷冻保护剂：由以下重量的各物质组成：按照体积比1∶1混合的甘油以及聚氧丙烯甘油醚的混合物400微升，吐温800.02毫克以及50mM的HEPES缓冲液1毫升；

3、将上述1和2中的口蹄疫全病毒颗粒标记抗原与稳定冷冻保护剂混合，调疫苗pH为8.5即得。

实施例4纯化标记抗原、浓缩抗原冷冻保护剂稳定性

口蹄疫病毒完整颗粒不同保护剂配方在-20℃、4℃、25℃、37℃、45℃贮存，不同时间取样，检测146S含量、抗原颗粒大小，146S含量按中国兽医药品监察所颁布的方法，HPLC病毒颗粒大小检测法采用中国药典2005年版附录19IIID)进行。

设置以下几组平行对比试验：

实验组1：3.3％(v/v)甘油+纯化抗原1微克/mL+3.3％(v/v)PEG300+3.3％(v/v)聚氧丙烯甘油醚+10mM PBS+0.003mg/mL吐温20(组分最低含量)

实验组2：纯化抗原1微克/mL+10mM PBS+5％(v/v)甘油+5％(v/v)PEG300

实验组3：20％(v/v)甘油+纯化抗原20微克/mL+20％(v/v)PEG300+10％(v/v)聚氧丙烯甘油醚+100mM PBS+0.03mg/mL吐温20(组分最高含量)

实验组4：纯化抗原20微克/mL+100mM PBS+PEG30050％(v/v)

实验组5：纯化抗原10微克/mL+15％(v/v)甘油+15％(v/v)PEG300+50mMPBS+0.02mg/mL吐温20(组分中间含量)

实验组6：纯化抗原10微克/mL+15％(v/v)PEG300+15％(v/v)聚氧丙烯甘油醚+50mM PBS+0.02mg/mL吐温20(组分中间含量)

实验组7：纯化抗原1微克/mL+10％(v/v)甘油+10mM PBS+0.003mg/mL吐温20(组分最低含量)

实验组8：纯化抗原1微克/mL+10mM PBS

结果见表2，表明本发明的稳定剂加入口蹄疫浓缩液中在常温下可保持口蹄疫抗原活性和完整达到60周，也就是至少1年，可便于大规模疫苗生产和运行条件、也方便保存，根据实际可设立常温粗制抗原库、常温精制抗原库，且由于浓缩纯化，体积不需很大，以应对紧急免疫的疫苗配制和乳化。纯化抗原加入本发明的稳定剂，在25℃、37℃、45℃可保持活性或完整性分别达至6月、4月、3周，这意味着口蹄疫疫苗不冻干在极端高温地区效期3周、在夏季南方地区应急免疫效期为4个月，在一般室温的条件下，运输和使用效期6月，方便简化了免疫中的冷链和运输。按冷链运输和使用，标记口蹄疫疫苗有效期至少为3.0年

实施例5灭活纯化口蹄疫病毒完整颗粒冷冻保护剂酸碱稳定性、抗凝集效果

选取广泛我国流行的口蹄疫病毒A型、O型、亚1疫苗株(中国兰州兽医研究所分发)，分别按照实施例1方法制备单价的灭活纯化口蹄疫颗粒原液，加入本发明的冷冻保护剂(纯化抗原1微克/mL+10％(v/v)甘油+10mM PBS+0.003mg/mL吐温20)，在4℃、25℃、37℃放置1年，取出观察抗原颗粒完整百分比，用HPLC法观察，观察25℃时各组分的抗凝效果。

表3 不同血清型的口蹄疫病毒抗原的不同pH条件的稳定性

表4 稳定剂不同成分防止口蹄疫病毒抗原聚合的效果

初步实验表明三种血清型口蹄疫病毒在发明的保护剂冷冻磷酸盐缓冲液配方中稳定。多数以单体蛋白的形式存在、尤其在生理酸碱条件下稳定，见表3。聚氧丙烯甘油醚(PG)、聚乙二醇300(PEG300)、甘油都有良好的抗凝集作用，阻止病毒抗原凝集或降解，对粗制灭活浓缩抗原的保护性好于纯化抗原，结果见表4。

实施例6长效口蹄疫病毒标记疫苗液体剂型和冻干佐剂疫苗剂型制备

口蹄疫病毒O、A、Asia 1疫苗株由中国兰州兽医研究所分发，适用到全悬浮BHK-12细胞，按实施例1制成纯化灭活的口蹄疫病毒液，经检验，口蹄疫病毒液质量符合规程要求和实施例1的检验标准，用本发明提供的口蹄疫稳定保护剂按疫苗有效剂量稀释后，按1∶1加入商用油佐剂混合乳化制成液体剂型，液体剂型按每剂1.2ml分装、包装。用发明提供的口蹄疫稳定保护剂稀释灭活纯化的口蹄疫病毒液，按0.5mg/L加入佐剂AL(OH)3，4-8℃吸附24-48小时，每隔4小时搅拌，吸附完成后按每剂1.2m1分装，按优选方法冻干，降温速率1-5℃/分，温度降至--20℃维持5小时，-45℃维持1小时，升温至-32℃加压至50-55微帕保持20小时，继续升温至30℃后维持11小时，完成冻干制备，成为口蹄疫病毒标记疫苗半成品，本发明提供的冻干保护剂，在铝佐剂存在的条件下制成冻干制剂，保证了口蹄疫抗原颗粒的吸附和不解离，并没有损坏口蹄疫标记抗原的完整性、含量或活性。

按口蹄疫病毒标记疫苗检定规程检验病毒146S颗粒大小和含量、以及残余水分，结果均能达到疫苗质量标准。

口蹄疫标记疫苗液体剂型配方：

一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物，含有口蹄疫病毒的全病毒颗粒1-20微克/mL以及稳定冷冻保护剂，所述的稳定冷冻保护剂由以下物质组成：多元醇10-50％(v/v)、10-100mM缓冲溶液以及非离子表面活性剂0.003-0.03mg/mL。疫苗pH介于7.0和9.0之间。

实施例7口蹄疫标记疫苗液体剂型和冻干剂型不同温度、不同时间的稳定性试验

口蹄疫标记疫苗液体剂型和冻干剂型的半成品制备完成后，对各单价的半成品取每批次的1％，分别放置于4-8℃、25℃、37℃、45℃，每隔一周或1月取出，液体佐剂疫苗半成品破乳、冻干佐剂疫苗复溶分离吸附佐剂，分别测定146含量，观察疫苗中灭活纯化口蹄疫病毒的颗粒完整以及大小，146S含量测定按农业部兽药监察所颁布的方法进行，并获得验证，纯化口蹄疫病毒颗粒大小完整性观察用HPLC或光扫描法。本发明提供的稳定冷冻保护剂，制成的疫苗在各种温度下稳定，疫苗中的146S含量在相当长时间稳定，病毒不凝聚、也不降解，三价口蹄疫病毒标记疫苗2种剂型的稳定性试验见表5。从结果可以看出，本发明提供的口蹄疫病毒标记抗原的稳定冷冻保护剂，可使疫苗中的抗原含量和完整性在45℃的条件下保持7天，在37℃的条件下口蹄疫标记抗原含量和完整性保持4周，在4-8℃活性或免疫原性保持2年；本发明提供的稳定冷冻保护剂，在铝佐剂存在的条件下制成冻干制剂，保证了口蹄疫抗原颗粒的吸附和不解离，并没有损坏口蹄疫标记抗原的完整性、含量或活性，在45℃的条件下冻干制剂的146含量不降保持7天，在37℃的条件下口蹄疫标记抗原含量和完整性保持6周，在4-8℃活性或免疫原性保持3年；相比没保护剂的油佐剂口蹄疫疫苗，效期延长1.5-2.5年，这有助于在极端高热、高温地区疫苗的防御和应急免疫。

表5A、O、Asial 三价口蹄疫标记疫苗液体剂型和冻干剂型的146S含量

Claims (7)

1.一种口蹄疫全病毒颗粒疫苗组合物，其特征在于含有口蹄疫病毒的全病毒颗粒以及稳定冷冻保护剂，所述的稳定冷冻保护剂由以下物质组成：多元醇、缓冲溶液以及非离子表面活性剂。

2.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于含有口蹄疫病毒的全病毒颗粒1-20微克/mL，多元醇10-50％(v/v)，非离子表面活性剂0.003-0.03mg/mL以及10-100mM的缓冲溶液，疫苗pH介于7.0和9.0之间。

3.如权利要求1或2所述的疫苗组合物，其特征在于所述的多元醇为甘油、聚乙二醇以及聚氧丙烯甘油醚中的至少一种。

4.如权利要求1或2所述的疫苗组合物，其特征在于所述的聚乙二醇为聚乙二醇300或聚乙二醇400。

5.如权利要求1或2所述的疫苗组合物，其特征在于所述的非离子表面活性剂为吐温-20或土温-80。

6.如权利要求1或2所述的疫苗组合物，其特征在于所述的缓冲溶液是磷酸缓冲液、Tris缓冲液或HEPES缓冲液的一种或几种的混合物。

7.权利要求1-6任一项所述的疫苗组合物在制备预防或治疗口蹄疫疾病药物中的应用。