CN104541980B

CN104541980B - 一种菌柄细的白灵菇及其栽培方法

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Publication number: CN104541980B
Application number: CN201510006895.4A
Authority: CN
Inventors: 黄晨阳; 陈强; 赵梦然; 张金霞; 邹亚杰; 高巍; 邬向丽; 曲积彬
Original assignee: Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS
Current assignee: Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS
Priority date: 2015-01-07
Filing date: 2015-01-07
Publication date: 2017-02-22
Anticipated expiration: 2035-01-07
Also published as: CN104541980A

Abstract

本发明公开了属于食用菌领域的一种菌柄细的白灵菇；本发明白灵菇(Pleurotus eryngii var.tuoliensis)菌株中农白灵4号，已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCC No.10194。本发明还公开了中农白灵4号的栽培方法，包括母种繁殖、原种培养、栽培中培养、低温刺激、出菇管理和采收等。本发明提供了一种新的白灵菇菌株，丰富了白灵菇的种类；本发明中农白灵4号的子实体商品价值较高，菌盖呈贻贝状，质地硬，外观漂亮，出菇整齐。此外，农业式栽培平均单菇重247.0g，每袋能出2个菇，生物学效率高。

Description

一种菌柄细的白灵菇及其栽培方法

技术领域

本发明属于食用菌领域，具体涉及一种菌柄细的白灵菇，以及该白灵菇的栽培方法。

背景技术

白灵菇(Pleurotus eryngii var.tuoliensis，又名阿魏蘑、刺芹侧耳阿魏变种、白阿魏蘑、刺芹侧耳白色变种、翅鲍菇、玉雪阿魏菇、西天白灵芝、天山神菇等)属于侧耳属(Pleurotus)，中文学名为白灵侧耳(或者将拉丁学名Pleurotus eryngii var.tuoliensis直译为：刺芹侧耳托里变种)。白灵菇子实体肥厚洁白、质地细腻爽口，营养丰富，是一种极为珍贵的大型食用菌。白灵菇兼性寄生于半枯死的新疆阿魏的茎基部和根上，野生资源极其稀少。

“白灵菇”名称来自1997年北京金信食用菌有限公司从新疆购进阿魏蘑菌袋，在北京大面积出菇成功，真菌分类学家卯晓岚先生将其中文学名定为白灵侧耳，拉丁学名定为Pleurotus nebrodensis，并记载于《中国大型真菌》(卯晓岚主编，河南科学技术出版社，2000年)。但是后来研究发现我国的白灵侧耳与欧洲真正的Pleurotus nebrodensis不同，我国的白灵侧耳学名应为Pleurotus eryngii var.tuoliensis(Kawai等.mycoscience,2008,49:75-79；黄晨阳等.植物遗传资源学报,2011,12(5):825-827,823)。并已获得权威的国际真菌学名数据库(http://www.indexfungorum.org/)的承认，即白灵菇的学名为Pleurotus eryngii var.tuoliensis。

白灵菇是一种食用和药用价值都很高的珍稀食用菌，它有农业式栽培和工厂化栽培两种栽培方式，白灵菇栽培存在如下主要难题：(1)、菌种少。目前，国家认定的白灵菇菌种只有4个，全国主要栽培菌种估计不超过10个，其中工厂化栽培主要是中农1号，农业式栽培主要是中农翅鲍。这些品种均存在缺点，如中农1号生物学效率偏低，子实体较软，不耐贮藏；中农翅鲍栽培周期长，子实体水渍多，外观差。(2)、后熟期长。白灵菇是典型需要后熟的种类，后熟期通常在2个月左右，从接种到开始出菇需要120天左右。(3)、生物学效率低。白灵菇培养周期太长，后熟完成后，栽培料失水率高，若出菇前不补水(如工厂化栽培)，生物学效率只有30％～40％，若出菇前补水(如农业式栽培覆土)，生物学效率可达到60％以上。

发明内容

针对现有的白灵菇菌种少的缺点，本发明目的在于提供一种新的菌柄细的白灵菇。

本发明另一目的在于提供上述白灵菇的栽培方法。

本发明的目的通过如下技术方案来实现：

本发明一种白灵菇(Pleurotus eryngii var.tuoliensis)菌株中农白灵4号，已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏(保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其保藏编号为CGMCC No.10194。

上述白灵菇菌株中农白灵4号的栽培方法，包括如下步骤：

(1)、母种繁殖：按1:80～100的重量比比例将直径大小0.3～0.5cm的中农白灵4号菌种接种于母种培养基上，在22～28℃、空气相对湿度为40～60％、避光条件下培养10～12天，得中农白灵4号母种；

(2)、原种培养：按照重量百分比为3～5％的比例将步骤(1)中所得的中农白灵4号母种接种于栽培培养料上，在22～28℃、空气相对湿度为40～60％、避光条件下培养28～35天，得中农白灵4号原种；

(3)、栽培种培养：按照重量百分比为3～5％的比例将步骤(2)中所得的中农白灵4号原种接种于栽培培养料上，在22～28℃、空气相对湿度为40～60％、避光条件下培养28～35天，得中农白灵4号栽培种；

(4)、冷却接种:按照重量百分比为5～8％的比例将步骤(3)中所得的中农白灵4号栽培种接种于栽培培养料上，在22～28℃、空气相对湿度为40～60％、避光条件下培养30～40天，菌丝长满培养料；

(5)、搔菌：将袋口打开，用消毒刮铲除去料面上的菌皮，松扎上口，然后将菌袋松扎上，继续培养3～5天，直至菌丝恢复；

(6)、低温刺激：将菌袋置于1～3℃低温下刺激7～14天；或大棚温度在0～15℃时，保持昼夜温差10～15℃，刺激10～15天；

(7)、出菇管理和采收：出现原基后，在5～18℃(农业式栽培)或12～14℃(工业式栽培)，空气相对湿度为75～85％，光照500～800勒克斯，通风良好，环境CO₂≤1000×10^-6条件下培养20～30天；当子实体菌盖充分展开,但仍有微微卷边,孢子未释放时采收子实体。

上述栽培方法步骤(1)中所述的菌种指菌丝。

上述栽培方法步骤(1)中所述的母种培养基的原料组成成分及其重量比例为：去皮马铃薯块180～300g(取汁)，葡萄糖15～20g，磷酸二氢钾0.5～3g，硫酸镁0.5～3g，琼脂15～25g,水1000ml,pH值自然。

上述栽培方法步骤(2)、(3)或(4)中所述的栽培培养料的原料组成成分及其重量百分比为：棉籽壳75～81％，麦麸8～15％，玉米粉2～8％，石灰1～3％；再以料水比为1：1.8～2.3的比例加入水。

上述栽培方法中所述的栽培培养料的组成成分及其重量百分比优选为：棉籽壳81％，麦麸12.5％，玉米粉3.5％，石灰3％，料水比1：1.86，即含水量为65％。

上述栽培方法步骤(1)、(2)、(3)或(4)中所述的温度优选为24～26℃，进一步优选为25℃。

上述栽培方法步骤(1)、(2)、(3)或(4)中所述的空气相对湿度优选为60％。

上述栽培方法步骤(4)中所述的接种方法为先拔出菌袋中央事先插入的空心塑料棒，将栽培种接入拔出空心塑料棒后留下的孔洞中。

上述栽培方法步骤(1)中所述的母种培养基的制备方法，包括按照比例将去皮马铃薯块(直径约1cm)置于600ml水中，沸水煮30min，4层纱布过滤，取汁液；向所得汁液中加入少于400ml水，再加葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂，定容至1000ml，边搅拌边小火加热，至以上成分完全溶解，分装试管(规格为20mm×200mm)，121℃灭菌30min；摆斜面，备用。所用琼脂可以是琼脂条或琼脂粉。

上述栽培方法步骤(2)、(3)中所述的栽培培养料的制备方法为：按照比例将各原料组分混合，搅拌均匀；再按照料水比加入水，搅拌均匀，装瓶/袋，栽培培养料采用高压灭菌，在125℃保持150min。

上述栽培方法步骤(4)中所述的栽培培养料的制备方法为：按照比例将各原料组分混合，搅拌均匀；再按照料水比加入水，搅拌均匀，栽培袋采用聚丙烯或聚乙烯袋，栽培袋厚度一般5～6丝，菌袋折径17cm，长35cm；将制备好的栽培培养料装入袋中，要求松紧适度，装好后袋口内翻压入中间的洞孔中，并插入空心棒，摆放于消毒筐中，即进行灭菌。一般采用常压灭菌，从蒸锅内上大气后，在100℃下保持12～14小时，待冷却后接种。

本发明白灵菇中农白灵4号的分离驯化过程：

2009年5月，本发明人在新疆塔城地区裕民县砖厂附近戈壁滩采集到寄生在新疆阿魏根部的野生白灵菇子实体，通过子实体组织分离得到菌丝(菌种)，检测菌丝rDNA-ITS大小和序列，鉴定其为白灵菇(Pleurotus eryngii var.tuoliensis)，将分离得到的菌种于2009-2011年栽培，每年对菇形良好的子实体进行组织分离，均在difcoPDA培养基(BDdifcoPDA培养基的组成及其比例:BDdifcoPDA粉末39g，蒸馏水1000ml)上培养，从中筛选出菌丝生长速度快、生长健壮、菌落圆整的菌株。2012、2013年栽培试验发现2011年筛选出的1601号菌株出菇表现优异，命名为中农白灵4号。

本发明的优点和有益效果：(1)本发明提供了一种新的白灵菇菌株，丰富了白灵菇的类型；(2)该菌株的菌盖呈雪白色，长径平均11.5厘米，短径平均10.4厘米，厚度平均5.1厘米；菌柄中生，白色，上下等粗，质地硬，表面光滑，菌柄平均长5.0厘米，平均粗4.7厘米；菌褶呈乳白色，无网纹。(3)本发明中农白灵4号的子实体商品价值较高，菌盖呈贻贝状，质地硬，外观漂亮，出菇整齐，形态一致性高。(4)中农白灵4号农业式栽培平均单菇重247.0±35.3g，每袋能出2个菇；生物学效率高。

附图说明：

图1.中农白灵4号的子实体照片。

图2.采用引物P4扩增的5个白灵菇菌株的ISSR图谱；其中M为Marker，1为华杂13，2为中农翅鲍，3为KH2，4为中农1号，5为中农白灵4号。

图3.采用引物P24扩增的5个白灵菇菌株的ISSR图谱；其中M为Marker，1为华杂13，2为中农翅鲍，3为KH2，4为中农1号，5为中农白灵4号。

图4.中农白灵4号的IGS2经Hap Ⅱ酶切电泳图谱；其中1为中农1号，2为中农白灵4号。

图5.中农白灵4号的IGS2经Rsa Ⅰ酶切电泳图谱；其中1为中农1号，2为中农白灵4号。

具体实施方式：

以下通过实例对本发明作进一步说明，但是对本发明不构成任何限制。

实施例1中农白灵4号的分类鉴定：

(一)中农白灵4号的形态特征及分类鉴定：

中农白灵4号原基散生，白色；成熟时，菌盖呈雪白色，贻贝状，质地硬，长径平均11.5厘米，短径平均10.4厘米，厚度平均5.1厘米；菌柄中生，白色，上下等粗，质地硬，表面光滑，菌柄平均长5.0厘米，平均粗4.7厘米；菌褶呈乳白色，无网纹。菌盖长宽比约1.1:1，菌柄的长宽比约1.1:1，菌盖长和菌柄长之比约2.3:1。子实体出菇整齐，形态的一致性高于80％(见图1)。根据《中国大型真菌》(卯晓岚主编，河南科学技术出版社，2000年出版)，对比第66页有关白灵菇的照片及相应特征描述，中农白灵4号与白灵菇的相关描述一致，即中农白灵4号在分类上属于白灵菇，正如技术背景介绍的白灵菇拉丁学名变更，它正确的拉丁学名为Pleurotus eryngii var.tuoliensis。

(二)与通过国家认定的4个白灵菇菌株的ISSR图谱对比鉴定分析

(1)、试验菌株：对照菌株：通过国家认定的白灵菇菌株只有4个，即华杂13号、中农翅鲍、KH2和中农1号；本发明菌株：中农白灵4号

(2)、试验方法：以菌株的DNA为模板，分别以P4或P24为引物进行ISSR扩增，得ISSR扩增产物；所述的引物序列分别如下：

P4：5’-GGATGCAACACACACACAC-3’(SEQ ID No.1)

P24：5’-CACGAGAGAGAGAGAGA-3’(SEQ ID No.2)

ISSR扩增体系为：dNTP(2.5mM)1.5μL，引物(10μmol)1μL，Ex Taq ^TM DNA聚合酶0.5U，10×Ex Taq PCR缓冲液2μL，DNA模板4μL，用ddH₂O补齐至20μL；ISSR反应条件：94℃4min；94℃50s，55℃50s，72℃2min，共35个循环；72℃补齐7min。将扩增产物在1.0％琼脂糖凝胶上进行电泳检测，检测ISSR扩增结果。

结果以P4为引物扩增的ISSR图谱(见图2)和以P24为引物扩增的ISSR图谱(见图3)中均可以看出中农白灵4号与华杂13、中农翅鲍、KH2、中农1号均存在明显差异性条带，说明中农白灵4号为一种新的白灵菇(Pleurotus eryngii var.tuoliensis)菌株。

(三)利用IGS2-RFLP图谱对中农白灵4号进行分类鉴定

试验菌株：中农白灵4号和中农1号

试验方法：(1)、DNA提取：按常规方法提取中农白灵4号DNA。

(2)、引物：InvSR1R和5SRNAR。

InvSR1R：5’-ACTGGCAGAATCAACCAGGTA-3’(SEQ ID No.3)

5SRNAR：5’-ACCGCATCCCGTCTGAT-3’(SEQ ID No.4)

(3)、限制性内切酶：Hap Ⅱ、Rsa Ⅰ。

IGS2-PCR扩增体系：dNTP(2.5mM each)4μL，InvSR1R、5SRNAR各2.5μL，Ex Taq ^TMDNA聚合酶1.25U，1×PCR缓冲液，模板25ng，用ddH₂O补齐至50μL。IGS2-RFLP反应条件：94℃1min，60℃1min，72℃3min，共35个循环；72℃，7min。酶切体系：限制性内切酶(10U/μL)1μL，PCR产物6μL，10×buffer 1μL，用水补齐至10μL。置于37℃下酶切4小时。1.2％琼脂糖凝胶电泳，在紫外凝胶成像系统下检测酶切反应结果。数据处理采用Quantity One分析软件。

结果中农白灵4号的IGS2经Hap Ⅱ酶切(见图4)生成大小为609bp、661bp、979bp、1487bp、1675bp、2561bp的6个片段；经Rsa Ⅰ酶切(见图5)生成大小为454bp、724bp、1838bp的3个片段。经对比发现，中农白灵4号与其他白灵菇菌株的带型均有明显差异，说明中农白灵4号是一种新的白灵菇菌株。

实施例2本发明白灵菇中农白灵4号的栽培试验

(1)母种的繁殖：按1:100的重量比比例将0.3～0.5cm大小的中农白灵4号菌种(已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCC No10194)接种于母种培养基上，在25℃、空气相对湿度为60％、避光条件下培养12天，长满试管(试管规格20mm×200mm)斜面，得到中农白灵4号母种；其中母种培养基的制备方法为：将去皮马铃薯切块(直径约1cm)200g，置于约600ml水中，沸水煮30min，4层纱布过滤，取汁液；向所得汁液中加入少于400ml冷水，再加20g葡萄糖、2g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁、15g琼脂粉，定容至1000ml，搅拌至琼脂粉无结团，小火加热并同时搅拌，至以上成分完全溶解，分装试管(规格20mm×200mm)，121℃灭菌30min；摆斜面，得到母种培养基。

(2)原种培养：按照重量百分比5％的比例将步骤(1)所得中农白灵4号母种接种于栽培培养料上，在25℃、空气相对湿度60％、避光条件下培养30天，得中农白灵4号原种；所述的栽培培养料按照如下方法制备：按照重量百分比比例将棉籽壳81％，麦麸12.5％，玉米粉3.5％，石灰3％混合，搅拌均匀；再按照料水比1：1.86的重量比例加入水，搅拌均匀，装菌袋，菌袋规格为17cm×33cm、厚4丝的聚丙烯袋，装袋高度10cm，皮筋扎口，采用高压灭菌，在125℃保持150min。菌袋灭菌完毕后，取出摊凉。

(3)栽培种培养：按照重量百分比为5％的比例将步骤(2)所得中农白灵4号原种接种于栽培培养料(其组成成分及其比例同步骤(2))上，在25℃、空气相对湿度60％、避光条件下培养28天，得中农白灵4号栽培种。

(4)、栽培培养料的制备：参照步骤(2)准备栽培培养料，装袋，菌袋规格为17cm×35cm、厚4丝的聚丙烯袋，料高16cm左右，中间插入长13cm的食用菌塑料空心棒，用直径3.5cm套环和配套棉塞盖封口；采用常压菌灭菌，在100℃保持14小时。

(5)、冷却接种：将冷却室打扫干净后消毒，将步骤(4)所得菌袋放入冷却室至温度降低至常温。在无菌条件下，取出菌袋中的食用菌空心塑料棒，按照重量百分比5％的比例，将中农白灵4号栽培种接种到菌袋中央的孔洞中，用套环和配套棉塞盖封口；在25℃，空气相对湿度60％，暗光，通风良好，培养30天长满菌袋。

(6)、搔菌：将袋口打开，用消毒刮铲除去料面3平方厘米大小的菌皮，松扎上口，然后将菌袋松扎上，继续培养5天，直至菌丝恢复。

(7)、低温刺激：将菌袋放入冷库1℃条件下低温刺激7天。

(8)、出菇管理和采收：将经过步骤(7)处理的菌袋，转入出菇房，控制温度在12℃，空气相对湿度85％，光照500～800勒克斯，通风良好，环境CO₂≤1000×10^-6条件下培养28天；当子实体菌盖充分展开,但仍有微微卷边,孢子未释放时采收子实体；采收时从子实体根部割下，用保鲜纸包裹后装箱。

综上，本发明中农白灵4号的栽培周期为100-110天；农业式栽培单菇重247.0±35.3g，每袋能出2个菇，生物学效率高；本发明中农白灵4号的子实体(见图1)商品价值较高，它的菌盖为贻贝状，颜色雪白，质地硬。菌盖长径平均11.5厘米，短径平均10.4厘米，厚度平均5.1厘米；菌柄中生，平均长5.0cm，平均粗4.7cm。适合农业式栽培。

Claims

1.一种白灵菇(Pleurotus eryngii var.tuoliensis)菌株中农白灵4号，已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCCNo.10194。