CN104585059B

CN104585059B - 一种阿魏菇及其栽培方法

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Publication number: CN104585059B
Application number: CN201510006890.1A
Authority: CN
Inventors: 陈强; 黄晨阳; 赵梦然; 张金霞; 邹亚杰; 高巍; 曲积彬; 邬向丽
Original assignee: Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS
Current assignee: Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS
Priority date: 2015-01-07
Filing date: 2015-01-07
Publication date: 2017-03-15
Anticipated expiration: 2035-01-07
Also published as: CN104585059A

Abstract

本发明公开了属于食用菌领域的一种阿魏侧耳菌株。本发明阿魏侧耳(Pleurotus eryngii var.ferulae)菌株中农阿魏1号，已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCC No.10191。本发明还公开了阿魏侧耳的栽培方法和一种母种培养基。本发明提供了新的阿魏侧耳菌株，实现了阿魏侧耳的商业化栽培；其次，本发明中农阿魏1号生长周期短；本发明阿魏菇单菇重量高，平均单菇重可达226.4g；此外，本发明提供的适于阿魏菇栽培的母种培养基，克服了阿魏菇在PDA培养基上生长缓慢的缺点，大大提高了阿魏菇的生长速度。

Description

一种阿魏菇及其栽培方法

技术领域

本发明属于食用菌领域，具体涉及一种阿魏菇以及该阿魏菇的栽培方法。

背景技术

刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)是侧耳属(Pleurotus)内具有重要经济价值的种，其下的变种有12个，其中国内常见的变种有白灵菇(Pleurotus eryngiivar.tuoliensis)、杏鲍菇(Pleurotus eryngii var.eryngii)、阿魏侧耳(俗称阿魏菇)(Pleurotus eryngii var.ferulae)。杏鲍菇是我国工厂化栽培量最大的种，白灵菇存在少量的工厂化栽培和较大量的农业式栽培。由于以前分类鉴定错误，现有文献中报道的阿魏菇(标注的拉丁学名为Pleurotus ferulae或Pleurotus eryngii或Pleurotus nebrodensis)实际上指的是白灵菇(Pleurotus eryngii var.tuoliensis)，它们的典型特征是子实体呈白色。而目前分类学上的阿魏菇(Pleurotus eryngii var.ferulae)很少见于已有的文献报道，其子实体呈灰色，中国国内仅分布于新疆塔城地区，数量稀少。塔城地区的野生白灵菇、阿魏菇都生长于戈壁滩，受残酷的自然环境影响，野生白灵菇、阿魏菇的子实体外观一样，均呈现土灰色，肉眼不容易分辨，故当地人均把它们当作白灵菇。本申请人从塔城地区采集的2000余株菌株中阿魏菇的比例不到10％，数量非常少。阿魏菇在食用菌上最常用的PDA培养基上培养生长非常缓慢，在25℃下培养35天以上也长不满直径9cm的PDA平板，而白灵菇、杏鲍菇在25℃下培养10-12天就能长满直径9cm的PDA平板。阿魏菇没有商业化栽培的主要原因可能是适宜栽培的菌种数量稀少、并且在常用的PDA培养基上生长缓慢。

发明内容

针对目前阿魏菇难以进行商业化栽培的问题，本发明目的在于提供一种可用于商业化栽培的阿魏侧耳菌株。

本发明另一目的在于提供上述阿魏侧耳菌株的栽培方法。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

本发明一种阿魏侧耳(Pleurotus eryngii var.ferulae)菌株中农阿魏1号，已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏(保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其保藏编号为CGMCC No.10191。

上述阿魏侧耳菌株中农阿魏1号的栽培方法，包括如下步骤：

(1)、母种繁殖：按1:80～100的重量比比例将直径大小0.3～0.5cm的中农阿魏1号菌种接种于母种培养基上，在22～28℃、空气相对湿度为40～60％、避光条件下培养12～18天，得中农阿魏1号母种；

(2)、原种繁殖：按照重量百分比为3～5％的比例将步骤(1)中所得的中农阿魏1号母种接种于栽培培养料上，在22～28℃、空气相对湿度为40～60％、避光条件下培养28～35天，得中农阿魏1号原种；

(3)、栽培种繁殖：按照重量百分比为3～5％的比例将步骤(2)中所得的中农阿魏1号原种接种于栽培培养料上，在22～28℃、空气相对湿度为40～60％、避光条件下培养28～35天，得中农阿魏1号栽培种；

(4)、按照重量百分比为5～8％的比例将(3)中所得的中农阿魏1号栽培种接种于栽培培养料上，在22～28℃、空气相对湿度为40～65％、暗光、通风良好条件下培养30～40天，菌丝长满栽培培养料；

(5)、搔菌：将菌袋口打开，用消毒刮铲除去栽培培养料表面上的菌皮，松扎上口，然后将菌袋松扎上，继续培养3～5天，直至挖去菌丝的地方恢复白色；

(6)、低温刺激：将菌袋置于5～20℃中，保持昼夜温差在10℃～15℃下5～7天；

(7)、出菇管理和采收：出现原基后，在温度为5～18℃(农业式栽培)或6～10℃(工业式栽培)，空气相对湿度为75％～85％，光照500～800勒克斯，通风良好，环境CO₂≤1000×10^-6条件下培养20～30天；当子实体菌盖充分展开,但仍有微微卷边,孢子未释放时采收子实体。

上述栽培方法步骤(1)中所述的菌种指菌丝。

上述栽培方法步骤(1)中所述的母种培养基的原料组成成分及其重量比例为：去皮马铃薯块180～300g(取汁)，葡萄糖15～20g，磷酸二氢钾0.5～3g，硫酸镁0.5～3g，微量元素水溶肥料(多元微肥)(北京大仁微肥有限公司，)0.5～2.0g，琼脂15～25g,水1000ml,pH值自然。

上述微量元素水溶肥料可于北京大仁微肥有限公司购买。

上述栽培方法步骤(2)、(3)或(4)中所述的栽培培养料的原料组成成分及其重量百分比为：棉籽壳75～81％，麦麸8～15％，玉米粉2～8％，石灰1～3％；再以料水比为1：1.8～2.3的比例加入水。

上述栽培方法中所述的栽培培养料的组成成分及其重量百分比优选为：棉籽壳81％，麦麸12.5％，玉米粉3.5％，石灰3％；料水比1：1.86，即含水量为65％。

上述栽培方法步骤(1)、(2)、(3)或(4)中所述的温度优选为24～26℃，进一步优选为25℃。

上述栽培方法步骤(1)、(2)、(3)或(4)中所述的空气相对湿度优选为60％。

上述栽培方法步骤(4)中所述的接种的方法为：先拔出菌袋中央事先插入的空心塑料棒，将栽培种接入拔出空心塑料棒后留下的孔洞中。

上述栽培方法步骤(1)中所述的母种培养基的制备方法，包括按照比例将去皮马铃薯块(直径约1cm)置于600ml水中，沸水煮30min，4层纱布过滤，取汁液；向所得汁液中加入少于400ml水，再加葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、微量元素水溶肥料(北京大仁微肥有限公司)、琼脂，定容至1000ml，边搅拌边小火加热，至以上成分完全溶解，分装试管，121℃灭菌30min；摆斜面，备用。所用琼脂可以是琼脂条或琼脂粉。

上述栽培方法步骤(2)或(3)中所述的栽培培养料的制备方法为：按照比例将各原料组分混合，搅拌均匀；再按照料水比加入水，搅拌均匀，装瓶/袋，栽培培养料采用高压灭菌，在125℃保持150min。

上述栽培方法步骤(4)中所述的栽培培养料的制备方法为：按照比例将各原料组分混合，搅拌均匀；再按照料水比加入水，搅拌均匀，栽培袋采用聚丙烯或聚乙烯袋，栽培袋厚度一般5～6丝，菌袋折径17cm，长35cm；将制备好的栽培培养料装入袋中，要求松紧适度，装好后袋口内翻压入中间的洞孔中，并插入空心棒，摆放于消毒筐中，即进行灭菌。一般采用常压灭菌，从蒸锅内上大气后，在100℃下保持12～14小时，待冷却后接种。

本发明阿魏侧耳中农阿魏1号的分离驯化过程：

2009年5月，本发明人在新疆塔城地区裕民县戈壁滩采集到寄生在新疆阿魏根部的野生食用菌子实体，通过子实体组织分离得到菌丝(菌种)，将分离到的菌种于2009年冬季进行栽培。在进行母种培养时，在PDA培养基上发现有些菌株培养特征与已有的白灵菇不相符合，它们生长非常缓慢，雪白的菌丝集束生长，气生菌丝凸起，菌丝很容易刮起来，培养35天也不能长满直径9cm的PDA平板。而白灵菇生长较快，菌丝平伏生长，菌丝进入培养基内不容易刮起来，10～12天长满直径9cm的PDA平板。初步认为它们不是白灵菇，也不是杏鲍菇；出菇特征也不相同，这些菌株出菇快，60～70天就可以采收，而白灵菇多数是90～120天才能采收；这些菌株形态各异，共同的特征是子实体全是灰色的，而白灵菇子实体是白色的。故确定这些菌株不是白灵菇。通过检测菌丝细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(CO1)时发现这些菌株是阿魏侧耳(Pleurotus eryngii var.ferulae)(宋驰等.菌物学报,2011,04:663-668)。从这些阿魏菇菌株出菇的子实体中，挑选出菇快、出菇整齐、产量高、质地硬的2145号菌株，2010年～2013年的出菇试验表明，2145号菌株表现优异，命名为中农阿魏1号。

本发明的优点和有益效果：(1)本发明提供了一种新的阿魏菇菌株，实现了阿魏菇的商业化栽培；(2)本发明阿魏菇单菇重量高，菇体平均长度9.9cm，平均宽度8.5cm，农业式栽培平均单菇重可达226.4±54.5g；(3)本发明阿魏菇品质好，表面光滑、质地紧密；(4)本发明栽培方法生物学效率高，每袋能出2个菇，生物学效率在65％左右。

附图说明：

图1.中农阿魏1号的子实体照片。

图2.中农阿魏1号和中农1号的IGS2经HapⅡ酶切电泳图谱；其中1为中农1号，2为中农阿魏1号。

图3.中农阿魏1号和中农1号的IGS2经RsaⅠ酶切电泳图谱；其中1为中农1号，2号为中农阿魏1号。

具体实施方式：

以下通过实例对本发明作进一步说明，但是对本发明不构成任何限制。

实施例1中农阿魏1号的形态特征及分类鉴定

(一)、形态特征鉴定分类：中农阿魏1号原基丛生，灰白色；商品菇菌盖灰褐色，盖顶平展，表面有形似大理石花纹；菇体平均长度9.9cm，平均宽度8.5cm，质地紧密；菌柄浅灰色，近保龄球形，平均长7.1cm，平均直径6.1cm，表面光滑，质地紧密；菌褶呈浅黄色，有网纹。在PDA培养基上，培养35天左右，菌落直径6.0-6.5cm，后期培养基干涸停止生长。菌落纯白色，气生菌丝凸起呈馒头状，匍匐菌丝较少，菌丝很容易刮起来。根据牟川静(牟川静等.新疆阿魏侧耳及其驯化培养特征,食用菌,1986,5:4-5)对阿魏侧耳形态特征的描述，确定中农阿魏1号在分类上属于阿魏侧耳，其拉丁学名为Pleurotus eryngii,异名为Pleurotus ferula。随着分子生物学在分类鉴定中的应用，国际权威的真菌命名数据库(IndexFungorum)承认阿魏侧耳为Pleurotus eryngii种下的ferula变种(http:// www.indexfungorum.org/names/Names.asp下搜索Pleurotus eryngii，第7条)，其拉丁学名为Pleurotus eryngii var.ferulae。

(二)对中农阿魏1号的IGS2-RFLP鉴定分析

1、试验材料：中农阿魏1号，中农1号

2、方法如下：

(1)、IGS2-PCR扩增：按常规方法提取中农阿魏1号的DNA，以InvSR1R和5SRNAR为引物进行PCR扩增，得PCR产物；其中所述的InvSR1R和5SRNAR引物的序列为：

InvSR1R：5’-ACTGGCAGAATCAACCAGGTA-3’(SEQ ID No.1)

5SRNAR：5’-ACCGCATCCCGTCTGAT-3’(SEQ ID No.2)

IGS2-PCR扩增体系为：dNTP(2.5mM each)4μL，Primer l(InvSR1R)、Primer 2(5SRNAR)各2.5μL，Ex Taq ^TM DNA聚合酶1.25U，1×PCR缓冲液，DNA模板25ng，用ddH₂O补齐至50μL。IGS2-RFLP反应条件：94℃1min；60℃1min；72℃3min；共35个循环；然后在72℃，7min延伸。

(2)、限制性内切酶：HapⅡ、RsaⅠ。

酶切反应体系为：限制性内切酶(10U/μL)1μL，PCR产物6μL，10×buffer 1μL，用水补齐至10μL；置于37℃下酶切4小时；酶切产物在1.2％琼脂糖凝胶电泳，并在紫外凝胶成像系统下检测酶切反应结果。数据处理采用Quantity One分析软件。

结果中农阿魏1号的IGS2经HapⅡ酶切(见图2)生成大小为1023bp和 2561bp的2个片段；经RsaⅠ酶切(见图3)生成大小为454bp、1235bp和2078bp的3个片段。经与现有菌株的对比，中农阿魏1号与其他菌株的酶切图谱不同，说明中农阿魏1号为一种新的阿魏菇菌株。

实施例2本发明阿魏侧耳中农阿魏1号的栽培试验

按照如下方法进行：

(1)母种的繁殖：按1:80的重量比比例将0.3～0.5cm大小的中农阿魏1号菌种(已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏(保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其保藏编号为CGMCC No10191)接种于母种培养基上，在25℃、空气相对湿度为60％、避光条件下培养16天，菌丝长满试管斜面，得中农阿魏1号母种；其中母种培养基按照如下方法制备：将去皮马铃薯切块(直径约1cm)200g，置于约600ml水中，沸水煮30min，4层纱布过滤，取汁液；向所得汁液中加入少于400ml冷水，再加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁0.5g、微量元素水溶肥料(北京大仁微肥有限公司生产)0.5g，琼脂粉15g，定容至1000ml，搅拌至琼脂粉无结团，小火加热并同时搅拌，至以上成分完全溶解，分装试管，121℃灭菌30min；摆斜面，得到母种培养基。

(2)原种繁殖：按照重量百分比5％的比例将步骤(1)所得的中农阿魏1号母种接种于栽培培养料上，在26℃、空气相对湿度60％，避光条件下培养30天，得中农阿魏1号原种；所述的栽培培养料按照如下方法制备：按照重量百分比比例将棉籽壳81％，麦麸12.5％，玉米粉3.5％，石灰3％混合，搅拌均匀；再按照料水比1：1.86的重量比例加入水，搅拌均匀，装菌袋，菌袋规格为17cm×33cm、厚4丝的聚丙烯袋，装袋高度10cm，皮筋扎口，采用高压灭菌，在125℃保持150min。菌袋灭菌完毕后，取出摊凉。

(3)栽培种繁殖：按照重量百分比5％的比例将步骤(2)所得的中农阿魏1号原种接种于栽培培养料(其组成成分及其重量百分比见步骤(2))，在25℃、空气相对湿度60％，避光条件下培养28天，得中农阿魏1号栽培种。

(4)栽培培养料的制备：参照步骤(2)制备栽培培养料，装袋，菌袋规格为17cm×35cm、厚4丝的聚丙烯袋，料高16cm左右，中间插入长13cm的食用菌塑料空心棒，用直径3.5cm套环和配套棉塞盖封口；采用常压菌灭菌，在100℃保持14小时；每袋干料700g。

(5)冷却接种：将冷却室打扫干净后消毒，将步骤(4)所得菌袋放入冷却室至温度降低至常温。在无菌条件下，取出菌袋中的食用菌空心塑料棒，按照重量百分比5％的比例将步骤(3)所得的中农阿魏1号栽培种接种到菌袋中央的孔洞中，用套环和配套棉塞盖封口，在室温24℃，空气相对湿度65％，暗光，通风良好条件下培养30天，菌丝长满菌袋。

(6)搔菌：将袋口打开，用消毒刮铲除去料面3～6平方厘米大小的菌皮，松扎上口，然后将菌袋松扎上，继续培养3～5天，直至挖去菌丝的地方恢复白色。

(7)低温刺激：将菌袋置于10℃中，保持昼夜温差10℃，刺激7天；

(8)出菇管理和采收：将经过步骤(7)处理的菌袋，转入出菇大棚，控制温度在18℃，空气相对湿度85％，光照800勒克斯，通风良好，环境CO₂≤1000×10^-6条件下培养25天；当子实体菌盖充分展开,但仍有微微卷边,孢子未释放时采收子实体；采收时从子实体根部割下，用保鲜纸包裹后装箱。

结果本发明中农阿魏1号(见图1)单菇重226.4±54.5g，每袋能出2个菇，菇体平均长度9.9cm，平均宽度8.5cm，质地紧密；生物学效率为226.4×2/700＝64.6％，栽培周期70天左右，菇菌盖灰褐色，盖顶平展，表面有形似大理石花纹；菌柄浅灰色，近保龄球形，平均长7.1cm，平均直径6.1cm，表面光滑，质地紧密；菌褶呈浅黄色，有网纹。适合农业式栽培。

上述结果说明本发明中农阿魏1号生长周期短(70天左右)、产量高、生物学效率高(64.6％)，此外，在本发明阿魏菇在添加了微量元素水溶肥料的PDA培养基中生长速度快，16天左右菌落直径6.5-7.0cm，说明该培养基适于阿魏菇的生长发育。

Claims

1.一种阿魏侧耳(Pleurotus eryngii var.ferulae)菌株中农阿魏1号，已于2014年12月12日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCCNo.10191。