CN106676043A - 一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌及其应用，该菌株的分类命名为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)，于2016年10月12日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号CGMCC No.13107。相关实验结果表明，该菌株无毒无害，对甜瓜枯萎病有明显的拮抗效果，应用前景广阔。

Description

一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物肥料技术领域，尤其是涉及一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌及其应用。
背景技术
甜瓜又称香瓜、熟瓜、哈密瓜等，因甜瓜果肉营养价值较高，具有消暑利尿、保护肝脏、补充维生素等功能，再加上色香味俱全，使得甜瓜深受大众喜爱。据联合国粮农组织统计，我国甜瓜种植面积为60.916万公顷，甜瓜产量为1553.88万吨，我国甜瓜种植面积和产量居各国之首。
随着甜瓜种植密度及复种指数的增加，甜瓜病虫害发生的频率也越来越高，其中甜瓜枯萎病则是影响甜瓜农业生产的主要病害之一。甜瓜枯萎病又称甜瓜萎蔫病，其病原菌属半知菌亚门丝孢纲瘤座孢目镰刀菌属的尖孢镰刀菌。甜瓜枯萎病的发生，主要是由根部感染引起。枯萎病病原菌菌丝首先侵入甜瓜根毛顶端细胞或根部伤口，接着菌丝在根部细胞中不断的繁殖扩大，之后由木质部进入维管束中，导致导管的堵塞，进而影响甜瓜植株水分运输，最终导致植物的枯萎死亡。甜瓜枯萎病的发生受许多方面因素的影响，如甜瓜品种、病原菌种类、土壤理化性质、气候、农业灌溉措施等。甜瓜枯萎病的防治方法有化学防治、抗病育种、农艺措施、生物防治等，其中生物防治因绿色无公害特性，目前已受到越来越多的人们关注。
目前，国内外市场上用于防治枯萎病的生物产品较少，其中在欧洲植保产品中经权威机构认可的生防产品只有24种，我国目前也有不少生物防治产品，但真正商业化的还不多。我实验室从海南省11市县甜瓜地土壤中分离筛选得到一株甲基营养型芽孢杆菌，该菌株对甜瓜枯萎病有显著的拮抗作用，是一株很有潜力的生防菌株。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌，及其在防治甜瓜枯萎病害上的应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌及其应用，该菌株分类命名为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)，于2016年10月12日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号CGMCC No.13107。
本发明甲基营养型芽孢杆菌可用于拮抗甜瓜枯萎病害中。
该甲基营养型芽孢杆菌于2011年9月中旬从海南省11个市县(三亚、陵水、保亭、乐东、五指山、儋州、白沙、临高、澄迈、文昌、琼海)甜瓜地土壤中筛选分离所得，其主要生物学特征：奶酪色，表面光滑，边缘规则；在液体培养基中呈沉淀性混浊，菌体杆状，革兰氏染色结果阳性。主要生理生化特性：在牛肉膏蛋白胨培养基上生长良好；接触酶实验呈阳性；氧化酶活性测试呈阳性。
采用BLAST(http:/www.Ncbi.nlm.nih.gov)将甲基营养型芽孢杆菌菌株16S rRNA基因序列与GenBank中序列进行比对，并选择代表性的模式种构建系统发育树。结果表明，该菌株与Bacillus methylotrophicus CBMB205T(EU194897)的同源性达99.8％且之间的形态生理生化特征一样，确定该菌株为甲基营养型芽孢杆菌。
本发明的有益技术效果是：本发明的甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病有明显的拮抗效果，可作为制备微生物肥料的功能菌株，开发应用前景广阔。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是甲基营养型芽孢杆菌的菌落形态图；
图2是甲基营养型芽孢杆菌拮抗病原真菌实验结果图；上左：甲基营养芽孢杆菌对甜瓜病原菌FJAT-9230；上右：甜瓜病原菌FJAT-9230；下左：甲基营养芽孢杆菌对甜瓜病原菌FJAT-9062；下右：甜瓜病原菌FJAT-9062。
图3是甲基营养型芽孢杆菌遗传稳定性实验结果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1:甲基营养型芽孢杆菌的活化培养
将拮抗菌划线接种至牛肉蛋白胨培养基(牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15-20g、去离子水1000mL、pH 7.4-7.6)平板上，待表面菌液干后，置于37℃恒温箱中培养2d后，观察其菌落形态(图1)：奶酪色，表面光滑，边缘规则；在液体培养基中呈沉淀性混浊，菌体杆状。检测其生理生化特性，具体见表1。
表1甲基营养型芽孢杆菌菌株的生理生化特征
注：“+”表阳性，“-”表阴性。
实施例2：甲基营养型芽孢杆菌拮抗病原真菌实验
平板对峙实验：以甜瓜枯萎病菌FJAT-9062、FJAT-9230为指示菌，将保存在-4℃环境下的菌株，用打孔器打取5mm菌饼点接至已经在PDA培养基(马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，去离子水1000mL)培养3d的病原菌平板四周，点接处距离病原菌中心2cm，每个平板点4处，培养4d后测定其拮抗指数。统计数据表明，甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病FJAT-9062、FJAT-9230的拮抗指数分别为2.17、2.13，其拮抗效果见图2。
拮抗指数作为拮抗菌对病原菌拮抗效果的一种表示方式，拮抗指数越大，拮抗菌对病原菌的拮抗效果越好，反之，则拮抗效果越差。本实验甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病的拮抗指数均大于2，拮抗效果很好，且甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病FJAT-9062的拮抗效果高于FJAT-9230。
实施例3：甲基营养型芽孢杆菌遗传稳定性实验
按照平板对峙实验方法对甲基营养型芽孢杆菌进行继代培养实验，逐代观测其拮抗指数的变化，从而确定菌种的遗传稳定性。本实验对甲基营养型芽孢杆菌第一代、第五代、第十代、第十五代、第二十代拮抗指数进行了测定，结果见图3。由图3可知，甲基营养型芽孢杆菌在第二十代时，仍然对甜瓜枯萎病FJAT-9062、FJAT-9230有拮抗效果，一定程度上说明了甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病FJAT-9062、FJAT-9230的拮抗效果较为持久，有利于该菌在较长时间内对该病原菌起抑制作用。
实施例4：甲基营养型芽孢杆菌对种子萌发的影响
将保存在-4℃环境下的菌株接种至PDB培养基(马铃薯200g，葡萄糖20g，去离子水1000mL)中，摇床振荡培养24h，即得拮抗菌菌悬液；挑取饱满的南海蜜甜瓜种子，用10％H2O2对种子进行表面消毒5min，后用无菌水清洗3-4次，再将种子浸泡于拮抗菌菌悬液中2h，同时以未加入拮抗菌的PDB培养基做对照，每处理30粒甜瓜种子，三次重复；浸泡完毕后，将甜瓜种子置于灭菌培养皿中的湿润无菌滤纸上，种子上加盖一层湿纱布，30℃催芽36h，计算种子的发芽率，统计结果见表2。
表2甲基营养型芽孢杆菌对种子萌发的影响
实验结果表明，甲基营养型芽孢杆菌不影响甜瓜种子的发芽，且在一定程度上可提高甜瓜种子发芽率，说明甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜种子无毒无害，其菌悬液对甜瓜种子有一定的促进作用。
实施例5：甲基营养型芽孢杆菌拮抗甜瓜枯萎病盆栽实验
选取长势一致的3叶甜瓜幼苗移栽到盆钵中，移栽7天后，对甜瓜苗进行接菌处理，每个处理3个重复，每个重复10盆，每盆1株甜瓜苗。接菌7天之后，记录甜瓜发病情况，计算其病情指数及相对防治效果，统计结果见表3、表4。各处理如下：
处理1：先接种107cfu/mL枯萎病病原菌悬浊液FJAT-9062 10mL，隔1天再接种107cfu/mL甲基营养型芽孢杆菌悬浊液10mL；
处理2：先接种107cfu/mL甲基营养型芽孢杆菌悬浊液10mL，隔1天再接种107cfu/mL枯萎病病原菌悬浊液FJAT-9062 10mL；
对照处理(CK)：只接种枯萎病病原菌悬浊液，标记为CK。
甜瓜枯萎病发病情况按标准划分为5级：0级：全株无病；1级：植株1/4以下叶面表现萎蔫症状；2级：植株1/4到1/2叶面表现萎蔫症状；3级：植株1/2以上叶面表现萎蔫症状：4级：全株萎蔫死亡。
病情指数＝[Σ(病级株数×病害级数)/(该处理盆栽苗总和×发病最重级的代表数值)]×100。
相对防治效果＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100％。
表3甜瓜枯萎病发病情况统计
表4甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病的防治效果
以上结果表明，先接入甲基营养型芽孢杆菌后接病原菌处理的甜瓜病情指数为30.56，小于先接病原菌后接入菌株的处理，说明在一定程度上甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病的发生有一定的预防作用。另外，不管是先病原菌之前或是之后接入甲基营养型芽孢杆菌，其防治效果均高于对照，且先接甲基营养型芽孢杆菌的处理其防治效果可达70.32％。可见，本发明的甲基营养型芽孢杆菌对甜瓜枯萎病有一定的预防及防治效果。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样定义，不会用理想化或过于正式的含义来解释。
最后所应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (3)

1.一株防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌，其特征在于，该菌株分类命名为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)，于2016年10月12日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号CGMCCNo.13107。
2.根据权利要求1所述防治甜瓜枯萎病的甲基营养型芽孢杆菌，其特征在于，该菌株的生物学特性为：奶酪色、表面光滑、边缘规则，在液体培养基中呈沉淀性混浊，菌体杆状；革兰氏染色实验、接触酶实验、氧化酶活性检测均呈阳性。
3.根据权利要求1或2所述甲基营养型芽孢杆菌在拮抗甜瓜枯萎病害中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107868766A (zh) * 2017-12-05 2018-04-03 中国热带农业科学院香料饮料研究所 菌株及其应用
CN108085284A (zh) * 2018-01-24 2018-05-29 大连理工大学 甲基营养型芽孢杆菌及包含该微生物的菌剂制备方法与应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103805534A (zh) * 2013-11-28 2014-05-21 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种甲基营养型芽胞杆菌及微生物菌剂和它们的应用
CN105039204A (zh) * 2015-06-16 2015-11-11 安徽农业大学 甲基营养型芽孢杆菌株及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103805534A (zh) * 2013-11-28 2014-05-21 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所 一种甲基营养型芽胞杆菌及微生物菌剂和它们的应用
CN105039204A (zh) * 2015-06-16 2015-11-11 安徽农业大学 甲基营养型芽孢杆菌株及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
邹立飞 等: "一株甜瓜枯萎病病原拮抗菌的筛选与防治效果初报", 《广东农业科学》 *
邹立飞: "甜瓜枯萎病病原拮抗菌的筛选及利用响应面法优化发酵条件", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107868766A (zh) * 2017-12-05 2018-04-03 中国热带农业科学院香料饮料研究所 菌株及其应用
CN107868766B (zh) * 2017-12-05 2020-09-01 中国热带农业科学院香料饮料研究所 菌株及其应用
CN108085284A (zh) * 2018-01-24 2018-05-29 大连理工大学 甲基营养型芽孢杆菌及包含该微生物的菌剂制备方法与应用
CN108085284B (zh) * 2018-01-24 2021-03-30 大连理工大学 甲基营养型芽孢杆菌及包含该微生物的菌剂制备方法与应用

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