CN105039204A - 甲基营养型芽孢杆菌株及其应用 - Google Patents

Abstract

甲基营养型芽孢杆菌株，其保藏号为：CGMCC？No.10779。本发明还提供甲基营养型芽孢杆菌株CGMCC？No.10779在拮抗植物病原菌中的应用，尤其是在拮抗麦冬炭疽病病原菌中的应用。本发明有益效果体现在：1.本发明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCC？No.10779对多种植物病原菌，如西瓜枯萎病、棉花枯萎病、玉米小斑病病原菌具有拮抗作用，尤其是对麦冬炭疽病病原菌具有非常高效的拮抗作用，是一种防治植物病害效果高、环境友好、生物防治大的拮抗菌株，具有良好的开发应用前景。2.本发明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCC？No.10779耐盐能力强，在氯化钠含量达9％的培养基上依然能够生长，抗逆能力强，可适用于环境较为恶劣的土地，潜在应用价值高。

Description

甲基营养型芽孢杆菌株及其应用

技术领域

本发明属于微生物的开发和应用领域，具体地说涉及一种甲基营养型芽孢杆菌株及其应用。

背景技术

随着农业生产集约化、可持续发展的要求，作物病虫害已经成为制约现代农业可持续发展的瓶颈。尤其是土传病害中的枯萎病、黄萎病、根腐病、菌核病、青枯病等，它们通过土壤传播，引起作物根部及全株发病，给农业生产造成严重损失。而现在大量使用的化学农药造成了土壤、水资源污染，严重威胁着人们的健康，抗病品种的选育周期又很长，由于以上传统方法的局限性，使得寻找一种环境友好、安全无毒无污染的生物防治新途径显得迫切重要，而分离筛选高效拮抗菌株是进行生物防治研究的基础。

国内外的学者已经分离筛选到了许多拮抗菌株并进行了相关研究，哈茨木霉(Trichodermahar-zianum)、粘帚霉(Gliocladium)、青霉菌(Penicillium)、毛壳菌(Chaetomium)等属的真菌均已被开发为真菌杀菌制剂用于多种植物病害的防治。郝晓娟等证实铜绿假单胞菌对香蕉、番茄、西瓜、甜瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌等均有良好的离体拮抗效果。王刚等和KazempourM.N.运用荧光假单胞菌Pseudomonasfluorescens防治黄瓜和水稻立枯病也取得了很好的效果。ZhengY.等筛选到了能够拮抗棉花黄萎病的高效菌株镰刀菌FusariumoxysporumstrainBy125，NectriahaematococcaBx247和拟茎点霉属Phomopsissp.By231。

在众多的生防拮抗菌株中细菌类的芽孢杆菌属是土壤优势微生物种群之一，由于能够产生芽孢，有着很强的抗逆能力和抗菌防病作用。它广泛分布于不同的环境中，除在土壤和植物表面存在外，还能在植物体内定殖。目前发现的有应用价值的芽孢杆菌主要有扭脱芽孢杆菌(B.extorquens)、胶质芽孢杆菌(B.mucilgiosns)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)、侧孢芽孢杆菌(B.laterosporus)等。但这些芽孢杆菌的功能大都比较单一，分离筛选对多种植物病原菌具有拮抗作用的的高效菌株是目前研究的热点和关键问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种对多种植物病原菌具有良好拮抗作用的甲基营养型芽孢杆菌株。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种从宣城地区杨柳地土壤中筛选出的甲基营养型芽孢杆菌株，该菌株的保藏号为：CGMCCNo.10779，保藏日期为2015年5月4日，中文名(拉丁文学名)为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

保藏号是CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株的形态特征为：该菌株为革兰氏阳性菌，形状为杆状，鞭毛特征明显，单菌落为圆形，污白色、不透明、中央隆起、边缘整齐，后期有褶皱。

本发明还提供保藏号是CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株在拮抗植物病原菌中的应用，尤其是在拮抗麦冬炭疽病病原菌中的应用。

本发明还提供防治植物病害的生物菌剂，它含有保藏号是CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株。

本发明还提供防治植物病害的杀菌制剂，它为保藏号是CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株的发酵液或发酵液的上清液。

本发明还提供所述的防治植物病害的杀菌制剂的制备方法，包括以下步骤：将保藏号为CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基，在160～240rpm、30℃的条件下，进行恒温发酵培养，培养所得的发酵液或发酵液的上清液即为所述防治植物病害的杀菌制剂。

本发明有益效果体现在：

1.本发明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对多种植物病原菌，如西瓜枯萎病、棉花枯萎病、玉米小斑病病原菌具有拮抗作用，尤其是对麦冬炭疽病病原菌具有非常高效的拮抗作用，是一种防治植物病害效果高、环境友好、生物防治大的拮抗菌株，具有良好的开发应用前景。

2.本发明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的耐盐能力强，在氯化钠含量达9％的培养基上依然能够生长，抗逆能力强，可适用于环境较为恶劣的土地，潜在应用价值高。

3.本发明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779应用方便，其菌株体和发酵液均可用于防治植物病害。

4.本发明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779能够产生芽孢，增加了耐热等抵抗恶劣环境的能力，使用范围更广，降低了对该菌剂储存运输环境的要求，使用更加方便。

5.本发明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的菌体细胞、菌液、发酵上清液均有拮抗功效，使用范围广。

附图说明

图1是菌株N5的扫描电镜观察形态图。

图2是菌株N5的菌落形态图。

图3是依据16SrDNA序列构建的菌株N5同属相关种的系统发育树图。

图4是甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对黑线炭疽菌、胶胞炭疽菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、玉米小斑病菌生长的影响。

图5是甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的发酵液上清对西瓜枯萎病病原菌生长的影响。

图6是甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对黑线炭疽菌菌丝的影响。

图7是甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对西瓜枯萎病病原菌菌丝的影响。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述：

实施例1

甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的筛选及鉴定，包括以下步骤：

(1)病原菌的活化

接种针以无菌操作勾取少量待活化黑线炭疽菌的菌丝与培养基接种到PDA平板的中央，分别接种3块，在26℃的条件下进行恒温培养，制备孢子悬液；

(2)样品采集与土壤悬液的制备

从宣城地区杨柳地土壤中采集细菌样品，采集土样时，先去除表土，取5～20cm处深的土样；利用稀释法进行分离，称取10.0g土样倒入含有100ml无菌水的三角瓶中摇匀，然后放入80℃的水浴锅中加热中(每隔3min摇匀一次)，20min后放入冷水中降温，依次梯度稀释，制得土壤悬液；

(3)涂平板

吸取50μl黑线炭疽菌的孢子悬液与50μl土壤悬液同时涂布于PDA培养基上，在28℃的条件下进行恒温培养；

挑选具有抑菌圈的菌株划线分离纯化，分离出的菌株以菌株N5作为暂时命名。

(4)菌株N5的鉴定

<4A>形态学鉴定：革兰氏染色及菌落形态观察

取培养24h的菌株N5单菌落，涂于载玻片上进行革兰氏染色并用显微镜下观察；取培养14h的菌株N5的菌液1ml，3000rpm离心收集菌株N5菌体，经pH7.0的磷酸缓冲液(PBS)漂洗3次，4％戊二醛固定过夜、0.1mol/LPBS漂洗3次，用30％、50％、70％、95％、100％梯度乙醇脱水、丙酮置换后二氧化碳临界点干燥喷金后扫描电镜观察菌株N5菌体的形态特征，鉴定方法参阅东秀珠等人编著的《常见细菌鉴定收藏》(北京：科学出版社，2001：349-398)。测定结果见图1和图2，从图1和图2可以看出：

菌株N5为杆状细菌，有鞭毛，为革兰氏阳性菌，但菌落为圆形、污白色、不透明，不易挑起，菌落直径2-3mm、中央隆起，边缘整齐、表面后期有褶皱。

<4B>生理生化特性鉴定：

生理生化特征的测定方法参阅《植物病研究方法》(北京：农业出版社，1977：161-224)

测定结果如下：

菌株N5最适培养基为牛肉膏蛋白胨培养基，最适生长30℃，适宜生长pH为5～10；在含有9％的氯化钠固体培养基上生长良好；可以利用葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘露醇、麦芽糖、乳糖、果糖、鼠李糖、木糖作为碳源，不能利用半乳糖作为碳源；菌株N5过氧化氢试验为阳性反应；可以使明胶液化；甲基红试验呈阳性反应；VP试验为阴性反应。

其中，所述最适牛肉膏蛋白胨培养基配方为：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，调pH值至7.2，定容至1000ml。

进一步对菌株N5的其它生理生物化学反应进行检测，其生物学特性如表1所示。

表1

注：“I”表示生长缓慢，“II”代表生长一般，“III”代表生长旺盛，“+”代表阳性反应，“-”代表阴性反应。

<4C>分子生物学鉴定

采用SDS蛋白酶K法提取细菌基因组DNA，PCR引物采用细菌16SrDNA通用引物，27F(5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG)；1492R(5′-TACGGCTACCTTGTTAGGACTT)。PCR反应体系：10×TaqDNA聚合酶buffer2.5μl，25mM氯化镁溶液1.5μl，引物27F和1492R(10mM)各0.5μl，2.5mMdNTP2μl，5U/μlTaq酶0.15μl，模板DNA0.5μl，补水至25μl；PCR扩增条件：94℃预变性5min，94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸1min，30个循环；然后72℃延伸10min。将扩增后的产物进行琼脂糖凝胶电泳实验。将进行PCR扩增后的基因组送至生工进行测序，测试的菌株N516SrDNA序列(1411bp)如下：

TGCAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTAGGAGCCA

将测序结果用bioedit去除载体序列后，登陆eztaxon-e.ezbiocloud网站，进行序列相似性分析；所有序列先用Clustal软件比对分析，MEGA4.0软件分析生成系统发育树，结果见图3，结果显示菌株N5与数据库中BacillusmethylotrophicusCBMB205^T(EU194897)相似性为100％，菌株N5与BacillusmethylotrophicusCBMB205^T(EU194897)聚为一支，结合菌株N5的菌落形态特征、生理生化特征、同源性和系统发育分析，菌株N5被鉴定为甲基营养型芽孢杆菌株(Bacillusmethylotrophicus)。

实施例2

甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对黑线炭疽菌、胶胞炭疽菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、玉米小斑病菌生长的影响

2.1甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对黑线炭疽菌、胶胞炭疽菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、玉米小斑病菌的抑菌率测定

通过平板对峙法，检测甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对黑线炭疽菌、胶胞炭疽菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、玉米小斑病菌的抑制效果。测试方法为：将植物病原菌接种于PDA平板上，26℃培养3天后，用直径5mm的打孔器打取菌落生长一致的菌块，点种于PDA平板中央，病菌一侧2cm处划线接入甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779，以只接病原菌为对照，每个处理3个重复，26℃恒温培养；待对照组的病原菌长满整个培养皿后，观察实验组抑菌带的有无，选取抑菌带最宽的菌株，并计算其抑制率。其中，抑制率＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照平板菌落直径×100％。试验结果见图4和表2，图4中植物病原菌自左至右分别为：黑线炭疽菌、胶胞炭疽菌、棉花枯萎病菌、西瓜枯萎病原菌-2、玉米小斑病菌。

表2甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对多种植物病原菌的抑菌率

结果表明：甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对黑线炭疽菌的抑制率最强，高达82％，对胶胞炭疽菌的抑制率次之，达74％，对西瓜枯萎病菌-2生理小种抑制率也很好，高达65％；同时对棉花枯萎病和玉米小斑病原菌抑制率均在50％以上，而在相同的测试条件下，现有甲基营养型芽孢杆菌株对上述所有病原菌的抑菌率均在40％以下。综合来看甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对多种植物病原菌都有较强大的拮抗作用，具有很大的潜在应用价值。

2.2甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的发酵液上清液对黑线炭疽菌、胶胞炭疽菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、玉米小斑病菌的抑菌率测定

将甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779接种于盛有50ml牛肉膏蛋白胨培养基的250ml三角瓶中，于30℃、200rpm的条件下震荡培养72h，获得发酵液，将发酵液在12000rpm的条件下离心30min，取上清液用于抑菌率的测定。

配置PDA培养基，灭菌后待冷却至45℃左右时加入发酵上清液(按稀释40倍)，制成带毒平板，以牛肉膏蛋白胨液体培养基代替发酵液上清作为空白对照CK；用直径5mm的打孔器将病原菌的PDA平板培养物打取菌块，将菌块点种于前面的带毒平板中央，于26℃培养4～7天，观察滤液的抑菌效果，测量菌落直径并计算抑菌率，设置三组平行重复，计算公式如下：生长抑菌率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/(对照菌落直径-菌块直径)×％。试验结果见图5和表3。

表3甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的发酵上清液对五种植物病原菌的抑制率

结果表面：甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的发酵上清液对上述几种植物病原菌均有高效抑制作用。以西瓜枯萎病病原菌为例，甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的发酵上清液对西瓜枯萎病病原菌的菌丝生长速率的抑制作用非常明显，西瓜枯萎病病原菌在实验平板上的生长几乎完全被抑制(图5左侧)，而对照组生长正常(图5右侧)。在甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的发酵上清液抑菌作用下，西瓜枯萎病病原菌的生长速率明显减缓；且甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779的发酵上清液对西瓜枯萎病病原菌的抑制率在一周内都保持较高的水平，培养10天依然能保持较高的抑菌效果。

实施例3

甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对黑线炭疽菌和西瓜枯萎病病原菌菌丝的影响

将黑线炭疽菌、西瓜枯萎病病原菌接种于PDA平板上，26℃培养3天后，用直径5mm的打孔器打取菌落生长一致的菌块，点种于PDA平板中央，病菌一侧2cm处划线接入甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779，以只接病原菌为对照，每个处理3个重复，26℃恒温培养；待对照组的病原菌长满整个培养皿后，观察其抑菌带的有无，观察其抑制效果。选取菌丝块，用戊二醛固定，经过常规方法处理，扫描电镜观察。将选好的菌丝块(5mm×5mm，厚度约为3mm)，放入体积分数为4％的戊二醛中，于4℃下固定24h后，用pH7.2的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，每次10min，然后经系列浓度的乙醇水溶液(体积分数分别为30％、50％、80％、95％、100％)梯度脱水，然后用丙酮置换2次，每次20min。将菌块取出后二氧化碳临界点干燥、镀金后在扫描电镜下观察、拍照。观察结果如图6和图7所示。图6和图7的A处为对照组照片，B、C处为实验组照片。

实验结果表明：扫描电子显微镜观察发现，作为对照的黑线炭疽菌菌丝生长良好，细胞形态长而均匀；接种甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779后，植物病原菌的菌丝出现了不同程度的萎缩、菌丝细胞膨大、畸变、甚至断裂现象。图6B中菌丝中部细胞膨大呈球状或突起，有些菌丝甚至断裂，图6C中菌丝畸形球状细胞外壁皱缩干瘪并破裂。结合几丁质酶实验(本菌株不产几丁质酶或活性很低)，可以推断甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对病原真菌的抑制作用，不是通过芽孢菌株产生的几丁质酶破坏菌丝细胞的细胞壁实现的，而是通过产生一种或某些代谢物质抑制真菌菌丝细胞生长，使菌丝细胞膨大、畸变、甚至断裂、衰亡，而达到抑制病原真菌的目的的。西瓜病原菌菌丝扫描电镜结果如图7所示，经甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779处理后菌丝(图7B、C)直径与对照(图7A)相比明细变小很多，菌丝细小并有许多小突起。

实施例4

甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对植物生长的影响

将甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779接种至牛肉膏蛋白胨培养液中，28℃、160rpm培养24h。取5ml菌液，3500rpm离心10min，弃上清，加入无菌水制成菌悬液，同时调节菌液浓度，使OD₆₀₀值介于0.8～1.0之间。在无菌平皿中加入一片灭菌的干燥滤纸，并在每个平皿加入2ml无菌水和2ml菌悬液，此时平皿中的液体既不会淹没种子，也可以保持种子的湿润。同时在空白对照中加入4ml无菌水。挑选发芽度均一的种子，分别将两个品种的种子随机加入到上述平皿中，每皿加入5粒。28℃培养5d，每天补充无菌水，保持平皿内水分的适当充足，测量平皿内发芽种子的株高、根长、次级根数、鲜重等生物量。

结果显示，与接种西瓜枯萎病病原菌相比，接种甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779后(N5+F)对平均茎高、根长、次级根数及鲜重等促进明显，分别提高了69％、109％、150％和83％，表现出良好的防病促生能力；同时只接种甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779与添加无菌水的空白对照相比在平均茎高、根长、次级根数及鲜重方面分别提高了36％、64％、13％及12％，说明甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779在促进植物生长方面有一定的潜能。

表4甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对圭谷欣抗西瓜平皿促生实验结果

注：CK为不加菌液，F为接种西瓜枯萎病病原菌，N5为单加甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779，N5+F为同时接种西瓜枯萎病病原菌和甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779。

实施例5

甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779对NaCl的耐受性

配置氯化钠浓度0～12％范围的牛肉膏蛋白胨培养基，将18～24h幼龄菌种划线接种于培养基中，28℃培养，3天后观察菌株生长状况，连续传三代培养。实验结果见表5。

表5NaCl的耐受性

注：“+”表示生长状况，+的个数表示生长的旺盛程度，“－”表示没有生长，“+-”表示长势微弱，几乎不生长。

结果表明，NaCl浓度达到9％之后，甲基营养型芽孢杆菌株CGMCCNo.10779在NaCl浓度为9％的培养基中仍然能够生存，但NaCl浓度达到12％后生长微弱，基本不能生长。而现有的甲基营养型芽孢杆菌株对NaCl的耐受性只能达到7％左右。

应当理解本文所述的例子和实施方式仅为了说明，本领域技术人员可根据它做出各种修改或变化，在不脱离本发明精神实质的情况下，都属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.甲基营养型芽孢杆菌株，其保藏号为：CGMCCNo.10779。

2.如权利要求1所述的甲基营养型芽孢杆菌株在拮抗植物病原菌中的应用。

3.如权利要求2所述的甲基营养型芽孢杆菌株在拮抗植物病原菌中的应用，其特征在于：所述植物病原菌为麦冬炭疽病病原菌。

4.防治植物病害的生物菌剂，其特征在于：含有保藏号是CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株。

5.防治植物病害的杀菌制剂，其特征在于：它为保藏号是CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株的发酵液或发酵液的上清液。

6.如权利要求5所述的防治植物病害的杀菌制剂的制备方法，包括以下步骤：将保藏号为CGMCCNo.10779的甲基营养型芽孢杆菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基，在160～240rpm、30℃的条件下，进行恒温发酵培养，培养所得的发酵液或发酵液的上清液即为所述防治植物病害的杀菌制剂。