CN102204570A - 链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用 - Google Patents

链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN102204570A
CN102204570A CN2011100882018A CN201110088201A CN102204570A CN 102204570 A CN102204570 A CN 102204570A CN 2011100882018 A CN2011100882018 A CN 2011100882018A CN 201110088201 A CN201110088201 A CN 201110088201A CN 102204570 A CN102204570 A CN 102204570A
Authority
CN
China
Prior art keywords
alternaric bacteria
rhizoctonia solani
application
metabolic products
prevention
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011100882018A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102204570B (zh
Inventor
俞晓平
申屠旭萍
董胜张
郝培应
边亚琳
马正
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Jiliang University
Original Assignee
China Jiliang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Jiliang University filed Critical China Jiliang University
Priority to CN 201110088201 priority Critical patent/CN102204570B/zh
Publication of CN102204570A publication Critical patent/CN102204570A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102204570B publication Critical patent/CN102204570B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明涉及微生物技术领域，本发明所述的樟树内生真菌是从浙江杭州天目山采集的樟树植物活体中采用内生真菌分离技术分离获得的，经微生物分类学鉴定，命名为链格孢菌(Alternaria alternata)31，该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期2010年12月31日，保藏登记号CGMCC No.4508。本发明最显著的特征是该菌株液体发酵能够产生对植物真菌病害病原菌如黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium)和番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)等有抑制作用的活性代谢产物，是农业上重要的微生物资源。

Description

链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及生防内生真菌——链格孢菌(Alternaria alternata)的培养及其代谢产物的应用。
背景技术
植物体内都存在大量的内生真菌，内生真菌最早发现于牧草，后来又在木本植物、草本植物、禾本植物、苔藓、地衣、海藻等植物中被发现。迄今的研究表明，植物内生真菌可增强宿主的抗病性、提高植物的生产力、抗逆抗虫等。发挥这些作用是由于内生真菌在植物体内繁殖和生长，并在体内产生有生物活性的次生代谢产物。因此，内生真菌可能成为生物防治中有潜力的生物控制剂，在生态农业和生物农药研制方面具有重要的用途。近年来植物内生真菌已引起了微生物学家、生态学家、植物保护学家的广泛兴趣，逐渐成为国内外研究的热点。目前微生物源生物化学农药的研究和开发在我国十分活跃，但微生物资源及其应用潜力尚没有得到充分的发挥，而植物内生真菌即是这样一类有待开发的新兴微生物资源。
目前对植物病害的防治，主要采用化学农药杀灭病原菌，但化学农药对人畜的毒副作用和残留问题至今仍难以有效的解决。利用内生真菌产生的抗病原真菌的活性物质进行植物病原真菌病害的生物防治，则具有周期短、易于研究、便于生产和低毒等优点。
本发明从樟树中分离到一株生防内生真菌，并对该菌株发酵代谢产物进行了抑菌作用研究。该发明为微生物源农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株。
发明内容
本发明的目的是针对化学农药不安全与微生物源农药种类较少的不足，提供一种从樟树中分离筛选出的内生真菌-链格孢菌(Alternaria alternata)；本发明的另一目的是提供利用该菌株代谢产物防治植物真菌病害的方法。
本发明链格孢菌的分离、筛选与鉴定：
是于2008年6月在浙江杭州天目山采集的樟树茎中，经分离、纯化、培养、发酵和活性测定等步骤获得并保存；经微生物分类学鉴定为链格孢菌(Alternaria alternata)，定名为链格孢菌(Alternaria alternata)31。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏日期2010年12月31日，保藏登记号CGMCCNo.4508。
链格孢菌31，其固体培养特征为：菌落在PDA平板上28℃培养6-7天扩展至直径为9cm，初期浅灰色稀疏，菌丝沿培养基表面匍匐生长，中间灰黑色，边缘灰白色，反面黑色，菌丝具隔，分枝。显微形态特征：分生孢子梗单生；分生孢子椭圆形，圆形。
本发明所述的链格孢菌31，经发酵提取可获得对部分植物真菌病害病原菌具有抑制作用的代谢产物。
本发明目的通过以下技术方案来实现：
一种防治黄瓜立枯病、番茄灰霉病或西瓜枯萎病等植物真菌病害微生物代谢产物的制备方法，按以下步骤进行：
(1)菌种的活化培养：将分离保存的链格孢菌31菌种移至马铃薯葡萄糖PDA固体平板上，在28℃±1℃条件下培养，至菌丝覆盖整个培养皿，用直径为4mm打孔器打孔获得菌饼，供接种用；
(2)发酵培养：发酵培养液为每1000mL中含有黄豆饼粉20g，玉米粉15g，可溶性淀粉20g，麸皮10g，蛋白胨8g，NH4NO3 3g，(NH4)2SO4 5g，CaCO3 5g，MgSO4 1g，每300mL三角瓶装发酵培养液60mL；配制后121℃灭菌20min，待冷却至40℃在无菌条件下挑取1直径为4mm菌饼，在28℃±1℃条件下，摇床转速180转/分钟，发酵培养126h；
(3)发酵物提取：发酵完毕，离心收集发酵上清液，用常规有机溶剂萃取经真空浓缩后获得浸膏，用于抑菌活性测定。
本发明的有益效果：
一是本发明从植物樟树茎中分离筛选出代谢物对部分植物真菌病害病原菌具有较强抑制作用的链格孢菌31，这为农业上防治植物真菌病害病原菌提供了一种微生物菌株；
二是本发明提供了利用链格孢菌31发酵获得活性代谢产物的方法；该代谢产物可应用于植物真菌病害的防治，为农用杀菌剂的开发增添了新的途径。
具体实施方式
实施例1：(链格孢菌31的分离与筛选)
本发明于2008年6月在浙江杭州天目山采集樟树茎，经表面消毒、内生真菌分离、培养、发酵、活性测定以及对抑制植物真菌病害病原菌活性菌株的筛选等步骤，从中获得链格孢菌31，保存。
链格孢菌31抑菌活性测定：取经0.22μm膜过滤的发酵上清液1mL于无菌培养皿内，与9mL冷却至50℃的PDA培养基迅速混匀，冷却后在每个培养基平面分别放1个直径为4mm的黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)或西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium)或番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)等供试菌菌饼，菌饼接于培养皿中央(培养皿直径为9cm)，置培养箱中28℃培养72h，以无菌水处理作为对照，重复3次；采用十字交叉法测定菌落直径，以下列公式计算抑制率：
Figure BSA00000469508800021
测定结果表明：链格孢菌31代谢产物对黄瓜立枯病菌、西瓜枯萎病菌和番茄灰霉病菌的抑制率分别为90.9％、87.5％和84.6％。
实施例2：(链格孢菌31发酵代谢产物的制备方法)
按以下步骤进行：
(1)菌种的活化培养：将分离保存的链格孢菌31菌种移至马铃薯葡萄糖PDA固体平板上，在28℃±1℃条件下培养，至菌丝覆盖整个培养皿，用直径为4mm打孔器打孔获得菌饼，供接种用；
(2)发酵培养：发酵培养液为每1000mL中含有黄豆饼粉20g，玉米粉15g，可溶性淀粉20g，麸皮10g，蛋白胨8g，NH4NO3 3g，(NH4)2SO4 5g，CaCO3 5g，MgSO4 1g，每300mL三角瓶装发酵培养液60mL；配制后121℃灭菌20min，待冷却至40℃在无菌条件下挑取1直径为4mm菌饼，在28℃±1℃条件下，摇床转速180转/分钟，发酵培养126h；
(3)发酵物提取：发酵完毕后离心收集发酵液，加入等体积乙酸乙酯萃取，取下层，再用等体积正丁醇萃取，取上层，在真空条件下浓缩至浸膏，得正丁醇萃取物，供抑菌活性测定。
以下实施例3、4中所述的链格孢菌31代谢产物均为实施例2所制产品；所述产品的百分含量均为质量/体积百分比。
实施例3：(链格孢菌31代谢产物对黄瓜立枯病菌、西瓜枯萎病菌和番茄灰霉病菌的抑制作用)
(1)准确称取链格孢菌31代谢产物0.18g，并加入10mL体积的无菌水，超声波震荡充分溶解，最终配置成浓度为18g/L的母液；
(2)抑菌活性测定：取上述母液分别稀释成浓度为1800mg/L和900mg/L的溶液，取各浓度溶液1mL于无菌培养皿内，与9mL冷却至50℃的PDA培养基迅速混匀(链格孢菌31代谢产物终浓度为180mg/L和90mg/L)，冷却后在每个培养基平面分别放1个直径为4mm的西瓜枯萎病菌或黄瓜立枯病菌或番茄灰霉病菌菌饼，菌饼接于培养皿中央(培养皿直径为9cm)，置培养箱中28℃培养36h，以常规化学药剂和无菌水处理作为对照，重复3次；采用十字交叉法测定菌落直径，以下列公式计算抑制率：
Figure BSA00000469508800031
试验例：(本发明产品与常规农药防治效果对比试验)
试验结果见表1。从表1看出，链格孢菌31代谢产物抑制效果较常规化学药剂略优，且安全。
表1链格孢菌31代谢产物对供试病原真菌的抑制效果
Figure BSA00000469508800032
“-”表示未试验。

Claims (2)

1.链格孢菌(Alternaria alternata)31代谢产物防治黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)的应用。
2.权利要求1所述的应用，其中链格孢菌31代谢产物由以下方法获得：链格孢菌31经斜面活化培养、发酵培养获得发酵液，加入等体积乙酸乙酯萃取，取下层，再用等体积正丁醇萃取，取上层，在真空条件下浓缩至浸膏，得正丁醇萃取物，所述的链格孢菌31已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏登记号为CGMCC No.4508。
CN 201110088201 2011-04-08 2011-04-08 链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用 Expired - Fee Related CN102204570B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201110088201 CN102204570B (zh) 2011-04-08 2011-04-08 链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN 201110088201 CN102204570B (zh) 2011-04-08 2011-04-08 链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102204570A true CN102204570A (zh) 2011-10-05
CN102204570B CN102204570B (zh) 2013-01-30

Family

ID=44693846

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN 201110088201 Expired - Fee Related CN102204570B (zh) 2011-04-08 2011-04-08 链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102204570B (zh)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103070198A (zh) * 2013-01-07 2013-05-01 中国计量学院 一种防治真菌病害代谢产物的制备方法
CN103222480A (zh) * 2013-01-07 2013-07-31 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
CN103222482A (zh) * 2013-01-07 2013-07-31 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治番茄早疫病菌中的应用
CN103222481A (zh) * 2013-01-07 2013-07-31 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治水稻纹枯病菌中的应用
CN103232942A (zh) * 2013-04-22 2013-08-07 安徽农业大学 绣线菊内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法
CN104342389A (zh) * 2014-09-29 2015-02-11 中国计量学院 链霉菌菌株及其防治黄瓜枯萎病联合应用
ES2696982A1 (es) * 2017-07-21 2019-01-21 Univ La Laguna Hongos endófitos HTF58 Alternaria alternata y HRO8 Fusarium acuminatum de Artemisa thuscula y Artemisa austriaca como antifúngicos de uso agrícola
CN111676143A (zh) * 2020-06-29 2020-09-18 新疆农业科学院植物保护研究所 一种交链格孢（Alternaria alternata）在瓜列当生防中的应用
CN113604363A (zh) * 2021-08-18 2021-11-05 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种茄链格孢菌及其应用
CN113773967A (zh) * 2021-08-19 2021-12-10 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种致密链格孢菌及其应用
CN113773966A (zh) * 2021-08-18 2021-12-10 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种细极链格孢菌及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1880309A (zh) * 2004-09-29 2006-12-20 汕头市双骏生物科技有限公司 新化合物、新菌株、及应用该菌株生产该新化合物的方法
CN101484010A (zh) * 2006-06-16 2009-07-15 乌迪内大学 用作葡萄霜霉菌拮抗剂物质的包含内生真菌互隔交链孢霉菌和/或其代谢物的抗真菌组合物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1880309A (zh) * 2004-09-29 2006-12-20 汕头市双骏生物科技有限公司 新化合物、新菌株、及应用该菌株生产该新化合物的方法
CN101484010A (zh) * 2006-06-16 2009-07-15 乌迪内大学 用作葡萄霜霉菌拮抗剂物质的包含内生真菌互隔交链孢霉菌和/或其代谢物的抗真菌组合物

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103222481B (zh) * 2013-01-07 2015-03-11 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治水稻纹枯病菌中的应用
CN103222480A (zh) * 2013-01-07 2013-07-31 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
CN103222482A (zh) * 2013-01-07 2013-07-31 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治番茄早疫病菌中的应用
CN103222481A (zh) * 2013-01-07 2013-07-31 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治水稻纹枯病菌中的应用
CN103070198A (zh) * 2013-01-07 2013-05-01 中国计量学院 一种防治真菌病害代谢产物的制备方法
CN103222480B (zh) * 2013-01-07 2015-04-01 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
CN103222482B (zh) * 2013-01-07 2015-01-28 中国计量学院 盐屋链霉菌代谢产物在防治番茄早疫病菌中的应用
CN103232942A (zh) * 2013-04-22 2013-08-07 安徽农业大学 绣线菊内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法
CN103232942B (zh) * 2013-04-22 2014-05-14 安徽农业大学 绣线菊内生真菌的抗植物病原菌发酵液的制备方法
CN104342389A (zh) * 2014-09-29 2015-02-11 中国计量学院 链霉菌菌株及其防治黄瓜枯萎病联合应用
ES2696982A1 (es) * 2017-07-21 2019-01-21 Univ La Laguna Hongos endófitos HTF58 Alternaria alternata y HRO8 Fusarium acuminatum de Artemisa thuscula y Artemisa austriaca como antifúngicos de uso agrícola
CN111676143A (zh) * 2020-06-29 2020-09-18 新疆农业科学院植物保护研究所 一种交链格孢（Alternaria alternata）在瓜列当生防中的应用
CN113604363A (zh) * 2021-08-18 2021-11-05 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种茄链格孢菌及其应用
CN113773966A (zh) * 2021-08-18 2021-12-10 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种细极链格孢菌及其应用
CN113604363B (zh) * 2021-08-18 2023-04-28 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种茄链格孢菌及其应用
CN113773967A (zh) * 2021-08-19 2021-12-10 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种致密链格孢菌及其应用
CN113773967B (zh) * 2021-08-19 2023-04-28 杨凌未来中科环保科技有限公司 一种致密链格孢菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN102204570B (zh) 2013-01-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102204570B (zh) 链格孢菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
CN102217656B (zh) 链格孢菌代谢产物在防治番茄灰霉病菌中的应用
CN102204571B (zh) 链格孢菌代谢产物在防治西瓜枯萎病菌中的应用
CN102191184B (zh) 一株生防内生真菌-链格孢菌
CN103952362A (zh) 一株对多种植物病原菌具抑菌活性的柑橘内生放线菌
CN103160442A (zh) 一株对柑橘木虱具强致病力的淡紫拟青霉菌株
Suarez et al. Isolation of bacteria at different points of Pleurotus ostreatus cultivation and their influence in mycelial growth
CN105441331B (zh) 一株露湿漆斑菌及其应用
CN103255068B (zh) 一种拟盾壳霉菌
CN102204572B (zh) 稻黑孢菌46代谢产物在防治菜豆炭疽病菌中的应用
CN104531543A (zh) 灰毛豆内生真菌tpl25及其在防治植物病害中的应用
CN106434488A (zh) 一种具有抑制大豆疫霉根腐病的昆虫病原线虫共生菌及应用
CN102210329B (zh) 局限曲霉28代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
CN102191185B (zh) 一株生防内生真菌-局限曲霉菌
CN102197842B (zh) 一种控制苹果展青霉素的方法
CN103087949B (zh) 一株生防内生放线菌——盐屋链霉菌
CN103222479B (zh) 盐屋链霉菌代谢产物在防治菜豆炭疽病菌中的应用
CN104357373A (zh) 一种利用硝酸钠促进捕食线虫真菌产生分生孢子的方法
CN102210330B (zh) 稻黑孢菌46代谢产物在防治番茄灰霉病菌中的应用
CN102210331B (zh) 稻黑孢菌46代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
CN102204569B (zh) 局限曲霉28代谢产物在防治水稻纹枯病菌中的应用
CN103222483B (zh) 盐屋链霉菌代谢产物在防治番茄灰霉病菌中的应用
CN103222480B (zh) 盐屋链霉菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌中的应用
CN103222481B (zh) 盐屋链霉菌代谢产物在防治水稻纹枯病菌中的应用
CN103222482B (zh) 盐屋链霉菌代谢产物在防治番茄早疫病菌中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20130130

Termination date: 20170408

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee