CN104515813A - 一种达沙替尼中间体的分析检测方法 - Google Patents

一种达沙替尼中间体的分析检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种达沙替尼中间体的分析检测方法，用于达沙替尼中间体的质量控制，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱（C18，4.6×250mm，5μm），以缓冲盐溶液、乙腈和三氟乙酸混合体系为流动相，以检测波长为320nm，柱温为20～30℃，进行高效液相色谱法分析检测。本发明的分析检测方法选用普通的色谱柱及液相色谱系统，价格低廉，实用性高，可以有效的将达沙替尼中间体及其杂质分开，而且该方法具有分析时间短，灵敏度高，线性关系良好，操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠的优点。

Description

一种达沙替尼中间体的分析检测方法
技术领域
本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是一种达沙替尼中间体的分析检测方法。
背景技术
达沙替尼是一种口服酪氨酸激酶抑制剂，于2006年经FDA批准，用于治疗由BCR-ABL激酶突变引起的白血病，其疗效优于伊马替尼，且未发现耐药性。
N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-[(6-氯-2-甲基-4-嘧啶基)氨基]-5-噻唑甲酰胺是达沙替尼的重要中间体，其化学式为C16H13Cl2N5OS，结构式为：
达沙替尼中间体的分析检测对反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品的质量，Alban J.Allentoff等人的文献（Synthesis of14C-labeledand13C-,15N-labeled dasatinib and its piperazine N-dealkyl metabolite，J.LabelCompd.Radiopharm2008,51：41–47）中公开了该中间体的一种HPLC分析方法，但该方法较为繁琐，分析时间长，且使用的色谱柱价格较贵，在研发及生产中普遍应用的实用性低，不适合推广使用，所以建立一种成本低廉、使用普通色谱柱及液相系统且操作简单，但稳定有效的分析检测方法对达沙替尼中间体进行分析检测是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种使用普通色谱柱及液相系统且操作简单，但稳定有效的达沙替尼中间体的高效液相色谱分析检测方法，用于达沙替尼中间体的质量控制。
为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：
一种达沙替尼中间体的分析检测方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱（C18，4.6×250mm，5μm），以缓冲盐溶液、乙腈和三氟乙酸混合体系为流动相，以检测波长为320nm，柱温为20～30℃，进行高效液相色谱法分析检测。
所述的缓冲盐溶液选自醋酸钠溶液或醋酸铵溶液，浓度为0.01～0.05mol/L，优选为醋酸钠溶液。
所述流动相中缓冲盐溶液：乙腈的体积比为45～65:55～35，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
进一步地，流动相中缓冲盐溶液：乙腈：三氟乙酸的体积比优选为50～60:50～40，最优选为55:45，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
所述的柱温优选为25℃。
本发明所述的分析检测方法，可通过以下步骤实现：
A、取达沙替尼中间体适量，加流动相溶解，配制成每1mL含达沙替尼中间体0.04～0.32mg的样品溶液；
B、设置流动相流速为0.5～1.2mL/min，检测波长320nm，柱温为20～30℃；
C、取A的样品溶液10μL注入液相色谱仪，完成达沙替尼中间体的分析检测；
其中：
高效液相色谱仪：Agilent1100液相色谱系统，DAD检测器；
色谱柱：Boston Boschrom ODS C18（4.6×250mm，5μm）；
流动相：0.05mol/L的醋酸钠溶液：乙腈=55:45，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%；
检测波长：320nm；
柱温：25℃；
流速：1.0mL/min。
与现有技术相比，本发明涉及的分析检测方法，选用普通的色谱柱及液相色谱系统，价格低廉，实用性高，可以有效的将达沙替尼中间体及其杂质分开，所得峰形对称性较好，分析时间短，主峰保留时间在12.7min左右（Alban J.Allentoff等人的文献中的方法在15.1min左右），而且本发明分析方法及仪器的灵敏度高（检测限为0.4859ng），操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠，即本发明虽采用成本低廉的普通色谱柱及液相色谱系统，却取得了意想不到的更好的分析检测效果，从而可以用于达沙替尼中间体的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。
附图说明
图1实施例1的达沙替尼中间体HPLC图谱。
图2实施例2的达沙替尼中间体HPLC图谱。
图3实施例3的达沙替尼中间体HPLC图谱。
图4实施例4的达沙替尼中间体HPLC图谱。
图5实施例9的达沙替尼中间体线性工作曲线。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
实施例1
仪器与条件：Agilent1100液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：BostonBoschrom ODS C18（4.6×250mm，5μm），检测波长320nm，柱温25℃，流速1.0mL/min，流动相：0.05mol/L的醋酸钠溶液：乙腈=55:45，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
实验步骤：将达沙替尼中间体用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含达沙替尼中间体0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1。
附图1表明，在该色谱条件下，达沙替尼中间体峰和杂质峰可以完全分离，且峰形较好，其中达沙替尼中间体峰的保留时间在12.706min，对称因子0.969。
实施例2
仪器与条件：Agilent1100液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：BostonBoschrom ODS C18（4.6×250mm，5μm），检测波长320nm，柱温25℃，流速0.5mL/min，流动相：0.01mol/L的醋酸钠溶液：乙腈=65:35，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
实验步骤：将达沙替尼中间体用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含达沙替尼中间体0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图2。
附图2表明，在该色谱条件下，达沙替尼中间体峰和杂质峰可以完全分离，且峰形较好，其中达沙替尼中间体峰的保留时间在18.667min，对称因子1.001。
实施例3
仪器与条件：Agilent1100液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：BostonBoschrom ODS C18（4.6×250mm，5μm），检测波长320nm，柱温25℃，流速1.2mL/min，流动相：0.03mol/L的醋酸钠溶液：乙腈=45:55，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
实验步骤：将达沙替尼中间体用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含达沙替尼中间体0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图3。
附图3表明，在该色谱条件下，达沙替尼中间体峰和杂质峰可以完全分离，且峰形较好，其中达沙替尼中间体峰的保留时间在11.537min左右，对称因子0.939。
实施例4
仪器与条件：Agilent1100液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：BostonBoschrom ODS C18（4.6×250mm，5μm），检测波长320nm，柱温25℃，流速1.0mL/min，流动相：0.05mol/L的醋酸铵溶液：乙腈=55:45，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
实验步骤：将达沙替尼中间体用流动相溶解并定量稀释制成每1mL中含达沙替尼中间体0.2mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图4。
附图4表明，在该色谱条件下，达沙替尼中间体峰和杂质峰可以完全分离，且峰形较好，其中达沙替尼中间体峰的保留时间在14.038min，对称因子0.944。
实施例5
系统适应性实验
仪器与条件：同实施例1。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，分别计算达沙替尼中间体峰峰面积以及保留时间的相对标准偏差，实验结果见表1。
表1达沙替尼中间体系统适用性实验结果
由表1可知，达沙替尼中间体峰的对称因子为0.96左右，理论板数较高，峰面积的相对标准偏差为0.11%，保留时间的相对标准偏差为0.035%。可见，该色谱条件下，达沙替尼中间体峰峰形较好，而且相对标准偏差较小，所得结果稳定可靠。
实施例6
重复性实验
仪器与条件：同实施例1。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液，同法配制6份供试品溶液。取供试品溶液，连续进样六次，按面积归一化法计算达沙替尼中间体含量，并计算其相对标准偏差，实验结果见表2。
表2达沙替尼中间体重复性实验结果
由表2可知，各供试品溶液中达沙替尼中间体的含量没有明显差异，相对标准偏差为0.0072％，可见本分析检测方法的重复性良好。
实施例7
耐用性实验
仪器与条件：Agilent1100液相色谱系统，DAD检测器，色谱柱：BostonBoschrom ODS C18（4.6×250mm，5μm），检测波长320nm。
实验步骤：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1mL中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液。分别通过改变柱温、流速和流动相配比（三氟乙酸含量保持0.2％），记录达沙替尼中间体含量的变化情况（按面积归一化法计算），实验结果见表3。
表3达沙替尼中间体耐用性实验结果
由表3可知，改变柱温、流速和流动相配比后，达沙替尼中间体含量的测定结果没有明显差异，可见本发明分析检测方法的耐用性良好。
实施例8
检测限
仪器与条件：同实施例1。
实验步骤：取达沙替尼中间体约10mg，精密称定，置50ml量瓶中作为储备液。加溶剂采用逐步稀释法，以S/N≈3时的浓度作为检测限浓度，此时达沙替尼中间体的浓度为0.04859μg/ml，检测限为0.4859ng。可见本方法及仪器的灵敏度较高。
实施例9
线性与范围
仪器与条件：同实施例1。
实验步骤：取达沙替尼中间体52.52mg，精密称定，置50ml量瓶中，加溶剂超声溶解并稀释至刻度，即得线性储备液。精密量取线性储备液1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，6.0ml，7.5ml分别置25ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，依法测定。以供试品溶液的浓度为横坐标，以达沙替尼中间体峰峰面积为纵坐标进行线性回归，得线性回归方程为y=43197x+167.77，工作曲线见附图5。
由附图5可知，图中趋势线的相关系数R2=0.9991，可见在该色谱条件下，达沙替尼中间体在0.04～0.32mg/mL的浓度范围内线性关系良好。

Claims (6)

1.一种达沙替尼中间体的分析检测方法，采用高效液相色谱法进行分析检测，其特征在于包括以下步骤：
A、取达沙替尼中间体适量，加流动相溶解，配制成每1mL含达沙替尼中间体0.04～0.32mg的样品溶液；
B、设置流动相流速为0.5～1.2mL/min，检测波长320nm，柱温为20～30℃；
C、取A的样品溶液10μL注入液相色谱仪，完成达沙替尼中间体的分析检测；
其中，色谱柱：C18，4.6×250mm，5μm；
所述流动相是缓冲盐溶液、乙腈和三氟乙酸的混合体系，按体积比计，缓冲盐溶液：乙腈为45～65:55～35，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%，缓冲盐溶液的浓度为0.01～0.05mol/L。
2.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于：所述流动相中缓冲盐溶液：乙腈的体积比为50～60:50～40，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
3.如权利要求2所述的分析检测方法，其特征在于：所述流动相中缓冲盐溶液：乙腈的体积比为55:45，三氟乙酸体积为前两者体积和的0.2%。
4.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于：所述缓冲盐溶液为醋酸钠溶液或醋酸铵溶液。
5.如权利要求4所述的分析检测方法，其特征在于：所述缓冲盐溶液为醋酸钠溶液。
6.如权利要求1所述的分析检测方法，其特征在于：所述的流动相流速为1.0mL/min，柱温为25℃。
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