CN104513841A - 一种抗菌肽发酵生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物发酵领域，要解决的技术问题是抗菌肽生产成本高，效率低，本发明为解决上述问题，提供一种抗菌肽发酵生产方法，节约了成本，提高了生产效率。本发明采用牛骨蛋白胨作为原料，牛骨蛋白胨每吨一万多，大大降低了成本，并且培养周期短，提高了培养效率，发酵培养PH值范围放宽了，便于操作控制。
Description
技术领域
本发明属于生物发酵领域，具体涉及一种抗菌肽发酵生产方法。
背景技术
抗菌肽是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，这类活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点，抗菌肽对细菌有很强的杀伤作用，尤其是其对某些耐药性病原菌的杀灭作用更引起了人们的重视。除此之外，人们还发现，某些抗菌肽对部分病毒、真菌、原虫和癌细胞等有杀灭作用，甚至能提高免疫力、加速伤口愈合过程，抗菌肽的广泛的生物学活性显示了其在医学上良好的应用前景，其应用价值很大。
目前发酵生产抗菌肽一般利用植物蛋白胨作为培养基原料，植物蛋白胨价格比较贵，每吨4万多，成本高，原来发酵温度为36-37℃恒温培养，发酵周期需要32小时，生产效率低，并且PH范围小，只能控制在5.4-5.6之间，不易操作。
发明内容
本发明针对上述抗菌肽生产成本高，效率低的问题，提供一种抗菌肽发酵生产方法，节约了成本，提高了生产效率。
本发明采取的技术方案为：
一种抗菌肽发酵生产方法，包括以下步骤：
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:80～120，摇床培养，搅拌速度为180～220rpm/min，温度30～34℃，培养时间8～12小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨8～12g
酵母提取物3～7g
食盐3～7g
用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30-34℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:6～7，PH5.2～6.0，温度30-34℃，搅拌速度为180～220rpm/min，整体发酵时间为16～20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10～20%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：
玉米：2～4%
豆粨：1～3%
牛骨蛋白胨：0.5～1.5%
硫酸铵：0.5～1.5%
葡萄糖：0.1～0.5%
磷酸二氢钾：0.2～0.4%
麦芽糖：0.5～1.5%
消泡剂：0.015～0.025%。
上述抗菌肽发酵生产方法，包括以下步骤：
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:100，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，温度30-34℃，培养时间10小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨10g
酵母提取物5g
食盐 5g
用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30-34℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:7，PH5.2-6.0，温度30-34℃，搅拌速度为200rpm/min，整体发酵时间为16-20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10-20%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：
玉米：3%
豆粨：2%
牛骨蛋白胨：1%
硫酸铵：1%
葡萄糖：0.3%
磷酸二氢钾：0.3%
麦芽糖：1%
消泡剂：0.02%。
本发明采用牛骨蛋白胨作为原料，牛骨蛋白胨每吨一万多，大大降低了成本，并且培养周期短，提高了培养效率，发酵培养PH值范围放宽了，便于操作控制。
具体实施方式
实施例1
一次10L发酵罐的抗菌肽发酵生产
（1）、摇瓶培养：按照配方配制200mL培养基，平均分装与3个500ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:80，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min， 30℃培养10小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨 2g
酵母提取物 1g
食盐 1g
用蒸馏水定容至200ml，高压灭菌备用；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至32℃，移种量1:35，PH5.2-6.0，温度32℃，搅拌速度为200rpm/min，每2小时取样检测，接种后10时补料，整体发酵时间为16-24小时，显微镜检测菌体数量多，大小均已，没有其他杂菌生长，合格后放罐用，培养基配方为：
玉米：3%
豆粨：2%
牛骨蛋白胨：1%
硫酸铵：1%
葡萄糖：0.3%
磷酸二氢钾：0.3%
麦芽糖：1%
消泡剂：0.02%。
实施例2
一次1m3发酵罐的抗菌肽发酵生产
（1）、摇瓶培养：按照配方配制3L培养基，平均分装与20个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用试管菌种接种，接种量1:500，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，34℃培养10小时，检测合格后得菌种，待用；培养基配方：
牛骨蛋白胨 30g
酵母提取物 15g
食盐 15g
用蒸馏水定容至3l，高压灭菌备用；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至33℃，移种量1:35，PH5.2-6.0，温度33℃，搅拌速度为200rpm/min，每2小时取样检测，接种后10小时补料，整体发酵时间为16-24小时，显微镜检测菌体数量多，大小均已，没有其他杂菌生长，合格后放罐用，培养基配方为：
玉米：3%
豆粨：2%
牛骨蛋白胨：1%
硫酸铵：1%
葡萄糖：0.3%
磷酸二氢钾：0.3%
麦芽糖：1%
消泡剂：0.02%。
实施例3
一次30m3发酵罐的抗菌肽发酵生产
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1.5L培养基，平均分装与20个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用试管菌种接种，接种量1:500，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，32℃培养10小时，检验合格后的菌种，待用；培养基配方：
牛骨蛋白胨 15g
酵母提取物 7.5g
食盐 7.5g
用蒸馏水定容至1.5l，高压灭菌备用；
（2）、种子罐培养：按照配方配制300L培养基，高温灭菌降至31℃，然后接种，接种量1:200，PH5.2-6.0，温度31℃，搅拌速度为35-40 rpm/min，每2小时取样检测一次，生长时间为12小时，显微镜检测菌体数量多，大小均一，没有其他杂菌生长，培养基配方为：
玉米面：3%
豆粨：2%
牛骨蛋白胨：1%
硫酸铵：1%
葡萄糖：0.3%
磷酸二氢钾：0.3%
消泡剂：0.02%。
（3）、 发酵罐发酵：按照配方配制20m3培养基，高温灭菌冷却至31℃，移种量1:100，PH5.2-6.0，温度31℃，补料前通气量0.6:1，补料后通气量0.8:1，搅拌速度为80-90 rpm/min，每2小时取样检测，接种后10小时补料，整体发酵时间为16-24小时，检测合格后放罐，培养基配方为：
玉米：3%
豆粨：2%
牛骨蛋白胨：1%
硫酸铵：1%
葡萄糖：0.3%
磷酸二氢钾：0.3%
实施例4：一种抗菌肽发酵生产方法，包括以下步骤：
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:80，摇床培养，搅拌速度为180rpm/min，温度30℃，培养时间8小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨8g
酵母提取物3g
食盐3g
用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:6，PH5.2，温度30℃，搅拌速度为180rpm/min，整体发酵时间为16小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：
玉米：2%
豆粨：1%
牛骨蛋白胨：0.5%
硫酸铵：0.5%
葡萄糖：0.1%
磷酸二氢钾：0.2%
麦芽糖：0.5%
消泡剂：0.015%。
实施例5：一种抗菌肽发酵生产方法，包括以下步骤：
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:100，摇床培养，搅拌速度为195rpm/min，温度32℃，培养时间10小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨10g
酵母提取物5g
食盐4.8g
用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至32℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:6.5，PH5.5，温度31℃，搅拌速度为195rpm/min，整体发酵时间为19小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的12%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：
玉米：3%
豆粨：2%
牛骨蛋白胨：1%
硫酸铵：1.2%
葡萄糖：0.3%
磷酸二氢钾：0.2%
麦芽糖：1%
消泡剂：0.02%。
实施例6：一种抗菌肽发酵生产方法，包括以下步骤：
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1: 120，摇床培养，搅拌速度为220rpm/min，温度34℃，培养时间12小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨12g
酵母提取物7g
食盐7g
用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至34℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2: 7，PH6.0，温度34℃，搅拌速度为220rpm/min，整体发酵时间为16～20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的20%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：
玉米：4%
豆粨：3%
牛骨蛋白胨：1.5%
硫酸铵：1.5%
葡萄糖：0.5%
磷酸二氢钾：0.4%
麦芽糖：1.5%
消泡剂：0.025%。
Claims (2)
1. 一种抗菌肽发酵生产方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:80～120，摇床培养，搅拌速度为180～220rpm/min，温度30～34℃，培养时间8～12小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨8～12g
酵母提取物3～7g
食盐3～7g
用蒸馏水定容至1L，高压来菌制得枯草杆菌菌种；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30-34℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:6～7，PH5.2～6.0，温度30-34℃，搅拌速度为180～220rpm/min，整体发酵时间为16～20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10～20%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：
玉米：2～4%
豆粨：1～3%
牛骨蛋白胨：0.5～1.5%
硫酸铵：0.5～1.5%
葡萄糖：0.1～0.5%
磷酸二氢钾：0.2～0.4%
麦芽糖：0.5～1.5%
消泡剂：0.015～0.025%。
2.根据权利要求1所述的抗菌肽发酵生产方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）、摇瓶培养：按照配方配制1L培养基，平均分装与10个1000ml三角瓶中，高温灭菌冷却后，用枯草杆菌接种，接种量1:100，摇床培养，搅拌速度为200rpm/min，温度30-34℃，培养时间10小时；培养基配方：
牛骨蛋白胨10g
酵母提取物5g
食盐 5g
用蒸馏水定容至1L，高压灭菌制得枯草杆菌菌种；
（2）、发酵罐发酵：按照配方配制7L培养基，高温灭菌冷却至30-34℃，采用枯草杆菌菌种进行发酵，菌种与培养基比例为0.2:7，PH5.2-6.0，温度30-34℃，搅拌速度为200rpm/min，整体发酵时间为16-20小时，在发酵过程中，每2小时取样检测，12小时后补加第一步培养基，加入量为第2步的枯草杆菌菌种和第2步培养基总体积量的10-20%，显微镜下检测菌体数量较多，大小均匀，没有其他杂菌生长，合格后得到含有抗菌肽的发酵物，培养基配方为：
玉米：3%
豆粨：2%
牛骨蛋白胨：1%
硫酸铵：1%
葡萄糖：0.3%
磷酸二氢钾：0.3%
麦芽糖：1%
消泡剂：0.02%。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106148458A (zh) * | 2016-08-30 | 2016-11-23 | 林州中农颖泰生物肽有限公司 | 一种抗菌肽的发酵生产方法 |
| CN114214255A (zh) * | 2022-01-10 | 2022-03-22 | 清远一生自然生物研究院有限公司 | 一种抗菌肽菌种培养基配方及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101538601A (zh) * | 2008-03-19 | 2009-09-23 | 北京市科威华食品工程技术有限公司 | 一种酶技术生产牛骨蛋白胨的方法 |
| CN101974586A (zh) * | 2010-08-18 | 2011-02-16 | 南京农业大学 | 一种枯草芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在饲料中的应用 |
| CN102952835A (zh) * | 2011-08-29 | 2013-03-06 | 中农颖泰林州生物科园有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌发酵生产天蚕素抗菌肽的方法 |
| CN103194411A (zh) * | 2013-04-08 | 2013-07-10 | 中国农业大学 | 一株枯草芽孢杆菌及其在生产抗菌肽中的应用 |
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2013
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101538601A (zh) * | 2008-03-19 | 2009-09-23 | 北京市科威华食品工程技术有限公司 | 一种酶技术生产牛骨蛋白胨的方法 |
| CN101974586A (zh) * | 2010-08-18 | 2011-02-16 | 南京农业大学 | 一种枯草芽孢杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在饲料中的应用 |
| CN102952835A (zh) * | 2011-08-29 | 2013-03-06 | 中农颖泰林州生物科园有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌发酵生产天蚕素抗菌肽的方法 |
| CN103194411A (zh) * | 2013-04-08 | 2013-07-10 | 中国农业大学 | 一株枯草芽孢杆菌及其在生产抗菌肽中的应用 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106148458A (zh) * | 2016-08-30 | 2016-11-23 | 林州中农颖泰生物肽有限公司 | 一种抗菌肽的发酵生产方法 |
| CN114214255A (zh) * | 2022-01-10 | 2022-03-22 | 清远一生自然生物研究院有限公司 | 一种抗菌肽菌种培养基配方及其制备方法 |
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