CN104480170A - 氧化型辅酶i制备方法 - Google Patents

氧化型辅酶i制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104480170A
CN104480170A CN201410792996.4A CN201410792996A CN104480170A CN 104480170 A CN104480170 A CN 104480170A CN 201410792996 A CN201410792996 A CN 201410792996A CN 104480170 A CN104480170 A CN 104480170A
Authority
CN
China
Prior art keywords
nicotinamide
adenine dinucleotide
preparation
ribose
enzymes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201410792996.4A
Other languages
English (en)
Inventor
郁庆明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201410792996.4A priority Critical patent/CN104480170A/zh
Publication of CN104480170A publication Critical patent/CN104480170A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种氧化型辅酶I制备方法，所述方法是将核糖先进行溴代，再和烟酰胺进行偶联，得到烟酰胺核糖；再用基因工程的方法，在大肠杆菌里表达人NRK1和NNMT酶，用镍离子螯合柱纯化得到二个酶；在缓冲体系内，以合成的烟酰胺核糖为底物，加入二种酶和ATP反应，即可制备氧化型辅酶I。本发明是一个低成本的工业化制备氧化型辅酶I的方法。

Description

氧化型辅酶I制备方法
技术领域
本发明涉及一种氧化型辅酶I制备方法。
背景技术
传统的氧化型辅酶I的制备方法，是采用酵母作为原料提取制备。工艺复杂，工业化成本高，价格较高，医药行业尚可以接受。但高昂的成本限制了它在其它工业化应用。特别是近期采用生物还原法制备医药中间体，对辅酶I的需求，非常巨大，采用传统方法制备辅酶，成本较高，市场难以接受，低成本制备氧化型辅酶I的工艺研发非常重要，是拓展辅酶I在其它工业领域使用的瓶颈。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足，提供一种成本低、适合工业化生产的氧化型辅酶I制备方法。
本发明的目的是这样实现的：
一种氧化型辅酶I制备方法，所述方法是将保护核糖先进行溴代，再和烟酰胺进行偶联，得到烟酰胺核糖；再用基因工程的方法，在大肠杆菌里表达人NRK1和NNMT酶，用镍离子螯合柱纯化得到二个酶；在一定缓冲体系内，以合成的烟酰胺核糖为底物，加入二种酶和ATP（三磷酸腺苷）反应，即可制备氧化型辅酶I，是一个低成本的工业化制备氧化型辅酶I的方法。
所述的缓冲体系为磷酸缓冲液。
以合成的烟酰胺核糖为底物，加入二种酶和ATP（三磷酸腺苷），在37℃反应16-24小时，制备氧化型辅酶I。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
合成烟酰胺核糖为底物，用酶法合成氧化型辅酶已有大量文献和专利报道，但制备烟酰胺核糖的方法都是采用价格昂贵的三氟甲磺酸三甲基硅酯作为催化试剂，我们采用溴代糖的方法，合成烟酰胺核糖，生产成本制备成本显著下降，非常适合工业化。
商业化的NRK1和NNMT酶价格昂贵，我们用基因重组的方法获得了人NRK1和NNMT酶cDNA，并实现在大肠杆菌里的高效表达，并用镍离子螯合柱进行纯化，获得低成本高质量的酶，极大地降低了酶的成本。
本申请建立的用溴代核糖合成烟酰胺核糖和自行用重组的方法制备辅酶I合成相关的酶，实现辅酶I的低成本制备。本申请建立的方法可以实现低成本制备氧化型辅酶I，为氧化型辅酶I在生物还原领域的使用提供必要的保证，是一个低成本的工业化制备氧化型辅酶I的方法。
具体实施方式
实施例1：
将乙酰化的核糖，溶于DMF通入溴化氢，将5位的进行溴代，然后加入烟酰胺，得到保护的溴代核糖，加入烟酰胺，反应24小时，加入氨水去掉核糖上保护基，得到烟酰胺核糖。
将上述得到的烟酰胺核糖，溶于磷酸缓冲液，加入2倍摩尔量的ATP一定比例和适量的NRK1和NNMT酶，37℃反应16-24小时，用TLC监控氧化型的辅酶I的生成和ATP的减少，直到接近反应完全。反应完的产物用阴离子交换树脂纯化，得到纯度98%的氧化型辅酶I。

Claims (3)

1.一种氧化型辅酶I制备方法，其特征在于：所述方法是将核糖先进行溴代，再和烟酰胺进行偶联，得到烟酰胺核糖；再用基因工程的方法，在大肠杆菌里表达人NRK1和NNMT酶，用镍离子螯合柱纯化得到二个酶；在缓冲体系内，以合成的烟酰胺核糖为底物，加入二种酶和ATP反应，即可制备氧化型辅酶I。
2.根据权利要求1所述的一种氧化型辅酶I制备方法，其特征在于，所述的缓冲体系为磷酸缓冲液。
3.根据权利要求1或2所述的一种氧化型辅酶I制备方法，其特征在于，以合成的烟酰胺核糖为底物，加入二种酶和ATP反应条件为：在37℃反应16-24小时。
CN201410792996.4A 2014-12-20 2014-12-20 氧化型辅酶i制备方法 Pending CN104480170A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410792996.4A CN104480170A (zh) 2014-12-20 2014-12-20 氧化型辅酶i制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410792996.4A CN104480170A (zh) 2014-12-20 2014-12-20 氧化型辅酶i制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104480170A true CN104480170A (zh) 2015-04-01

Family

ID=52754773

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410792996.4A Pending CN104480170A (zh) 2014-12-20 2014-12-20 氧化型辅酶i制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104480170A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105463007A (zh) * 2016-01-08 2016-04-06 南京工业大学 基于离子束介导技术构建重组大肠杆菌生产辅酶i的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102605027A (zh) * 2012-03-06 2012-07-25 苏州汉酶生物技术有限公司 一种氧化型辅酶ii的酶催化制备方法
CN102605026A (zh) * 2012-03-06 2012-07-25 苏州汉酶生物技术有限公司 一种氧化型辅酶i的制备方法
CN102876759A (zh) * 2012-10-29 2013-01-16 尚科生物医药（上海）有限公司 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法
CN103103234A (zh) * 2012-11-02 2013-05-15 邦泰生物工程(深圳)有限公司 利用固定化酶合成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102605027A (zh) * 2012-03-06 2012-07-25 苏州汉酶生物技术有限公司 一种氧化型辅酶ii的酶催化制备方法
CN102605026A (zh) * 2012-03-06 2012-07-25 苏州汉酶生物技术有限公司 一种氧化型辅酶i的制备方法
CN102876759A (zh) * 2012-10-29 2013-01-16 尚科生物医药（上海）有限公司 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法
CN103103234A (zh) * 2012-11-02 2013-05-15 邦泰生物工程(深圳)有限公司 利用固定化酶合成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nad)的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WOLFRAM TEMPEL ET AL.: "Nicotinamide Riboside Kinase Structures Reveal New Pathways to NAD+", 《PLOS BIOLOGY》 *
陈洪超编著: "《有机化学（供生命科学及相关专业用）》", 31 January 2009, 高等教育出版社 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105463007A (zh) * 2016-01-08 2016-04-06 南京工业大学 基于离子束介导技术构建重组大肠杆菌生产辅酶i的方法
CN105463007B (zh) * 2016-01-08 2018-07-31 苏州至汇生物科技有限公司 基于离子束介导技术构建重组大肠杆菌生产辅酶i的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11028414B2 (en) Inositol preparation method
CN104059872B (zh) 高产n-乙酰氨基葡萄糖代谢工程菌及其构建方法和应用
WO2018120069A1 (zh) 一种酶法制备β- 烟酰胺单核苷酸的方法
JP2018511343A5 (zh)
US12098402B2 (en) Construction method and application of microorganism capable of realizing high production of lacto-N-neotetraose
CN102605026B (zh) 一种氧化型辅酶i的制备方法
US20240035057A1 (en) Construction Method and Application of Microorganism Capable of Realizing High Production of Lacto-N-tetrose
CN102605027B (zh) 一种氧化型辅酶ii的酶催化制备方法
WO2011004980A3 (ko) 트리사이클릭 유도체의 제조방법
EP4324927A1 (en) Enzyme composition for preparing ?-nicotinamide mononucleotide, and application thereof
CN109913489B (zh) 由食用微生物表达的多酶反应体系制备肌醇的方法
CN102443597A (zh) 糖核苷酸的酶法制备
CN111269870A (zh) 一种高产胞苷酸的重组大肠杆菌及其应用
CN108277244B (zh) 固定化酶级联反应制备景天庚酮糖及醛糖
CN104130967A (zh) 一株共表达l-乳酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的大肠杆菌及其构建方法与应用
CN104480170A (zh) 氧化型辅酶i制备方法
CN109777845A (zh) 一种l-2-氨基丁酸的制备方法
CN111705096A (zh) 一种酶转化法生产β-烟酰胺单核苷酸的方法
CN104745660B (zh) 一种酶法合成制备海藻糖的方法
WO2014146242A1 (zh) 一种氧化型辅酶 ii 的酶催化制备方法
CN103820506B (zh) 一种基因重组菌发酵生产辅酶q10的方法
Cao et al. A sustainable pH shift control strategy for efficient production of β-poly (L-malic acid) with CaCO 3 addition by Aureobasidium pullulans ipe-1
CN107805646A (zh) 一种大肠杆菌全细胞催化生产根皮素的方法
CN107602648B (zh) 一种5’-腺苷酸的制备方法
CN103923959B (zh) 一种基于酶促异构化反应和连续色谱分离原位耦合的d‑塔格糖生产方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20150401

RJ01 Rejection of invention patent application after publication