CN104479045A - 一种制备具有免疫调节活性新疆芜菁多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种热水浸提制备具有免疫调节活性的新疆芜菁多糖的方法。该方法包括新疆芜菁块根干燥，粉碎，80％乙醇除杂，热水浸提，抽滤取上清液，减压浓缩，无水乙醇沉淀，离心，沉淀经过乙醚、乙醇和丙酮依次洗涤，烘干至恒重，即为新疆芜菁多糖。MTT法分析新疆芜菁多糖的免疫调节活性，发现其对小鼠腹腔巨噬细胞增殖具有显著的促进作用。本发明的新疆芜菁多糖制备方法具有提取得率高、成本低、多糖结构完整、无污染等优点，制备的新疆芜菁多糖具有显著的免疫调节活性，因此在食品工业及医药行业具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及从十字花科芸苔属芸苔种块根中提取相关成分的技术领域，具体涉及一种制备具有免疫调节活性新疆芜菁多糖的方法。
背景技术
新疆芜菁属于十字花科芸苔属芸苔种，两年生草本植物，块根肉质，类球形，扁球形或长椭圆形，外表上端较绿，下端为绿白色，具有芥菜气味，味辛。花期为每年的4～5月，秋季采收，主产于中国新疆天山西南、塔里木西北地区，在新疆南部种植非常广泛，是新疆维吾尔等少数民族喜爱的并有较长食用历史的传统药食同源植物。临床用于滋阴润肺、平喘、止咳、清除体内异常粘液质等异常体液。在《本草纲目》、《太平圣惠方》、《世医得效方》中早有记载：称其具有美容、醒酒、促进消化，增强体质等功效。药理研究发现，植物多糖具有抗衰老、抗诱变、免疫调节、抗辐射和抑制癌细胞生长的功效，但是迄今为止，国内外对新疆芜菁多糖的系统研究鲜见于报道。
发明内容
本发明旨在提供一种得率高、成本低、无污染的制备具有免疫调节活性新疆芜菁多糖的方法，实现本发明的具体方案如下：
(1)取新疆芜菁块根洗净，30℃烘干，粉碎，过60目筛，得颗粒均匀的粉碎物；
(2)将步骤(1)制得的粉碎物，用80％乙醇浸泡除杂两次，每次4h，抽滤弃上清，所得残留物自然晾干；
(3)将步骤(2)所得残留物按液料比40-80mL/g，加蒸馏水进行热水浸提，提取温度80-100℃，时间1-5h，提取次数1-5次，得提取液；
(4)将步骤(3)所得提取液抽滤取上清液；
(5)将步骤(4)所得上清液在50℃条件下，减压浓缩至合适的体积，在浓缩液中加3倍无水乙醇，4℃沉淀过夜，离心(4000rpm，10min)取沉淀；
(6)将步骤(5)所得沉淀物依次用乙醚、乙醇和丙酮洗涤，30℃烘干至恒重，即为新疆芜菁多糖；
(7)将步骤(6)所得多糖用DMEM培养基分别配制成一系列浓度溶液，MTT法测定其对小鼠腹腔巨噬细胞的体外增殖作用。
2、根据专利要求1所述的一种热水提取具有免疫调节活性的新疆芜菁多糖的方法，其特征在于：所述步骤(2)的液料比75mL/g，提取温度93℃，提取时间4h，提取次数3次。
制备的新疆芜菁多糖为白色粉末，该多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的促进作用呈现剂量和时间依赖关系，当多糖浓度为200μg/mL与作用24h时，增值指数为1.34。
附图说明
图1提取温度(℃)和液料比(mL/g)对新疆芜菁多糖提取率的影响
图2提取时间(h)和液料比(mL/g)对新疆芜菁多糖提取率的影响
图3提取温度(℃)和提取时间(h)对新疆芜菁多糖提取率的影响
图4新疆芜菁多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的体外增殖作用(24h)
图5新疆芜菁多糖的红外吸收图谱
具体实施方式
下面通过实施例，对本发明作进一步描述。
实施例1：
(1)取新疆芜菁块根洗净，30℃烘干，粉碎，过60目筛，得颗粒均匀的粉碎物；
(2)将步骤(1)制得的粉碎物，用80％乙醇浸泡除杂两次，每次4h，抽滤弃上清，所得残留物自然晾干；
(3)将步骤(2)所得残留物按液料比40-80mL/g，加蒸馏水进行热水浸提，提取温度80-100℃，时间1-5h，提取次数1-5次，得提取液；
(4)将步骤(3)所得提取液抽滤取上清液；
(5)将步骤(4)所得上清液在50℃条件下，减压浓缩至合适的体积，在浓缩液中加3倍无水乙醇，4℃沉淀过夜，离心(4000rpm，10min)取沉淀；
(6)将步骤(5)所得沉淀物依次用乙醚、乙醇和丙酮洗涤，30℃烘干至恒重，即为新疆芜菁多糖；
(7)将步骤(6)所得多糖用DMEM培养基分别配制成一系列浓度溶液，MTT法测定其对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖的促进作用。
制备的新疆芜菁多糖为白色粉末，该多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的促进作用呈现剂量和时间依赖关系，当多糖浓度为200μg/mL与作用24h时，增值指数为1.34。
新疆芜菁多糖提取率按下面公式计算：
多糖提取率(％)＝[粗多糖质量(g)/除杂原料质量(g)]×100％
增值指数＝(样品孔吸光度/空白孔吸光度)×100％
实施例2：
制备具有免疫调节活性新疆芜菁多糖的提取条件优化实验
(1)制备具有免疫调节活性新疆芜菁多糖的提取条件优化的单因素实验
①液料比对新疆芜菁多糖提取率的影响
液料比设置为40、50、60、70和80mL/g五个梯度，提取温度、提取时间和提取次数分别为90℃、2h和1次。不同液料比的多糖提取率见表1：
由表1可以看出：液料比超过70mL/g以后，提取率缓慢下降，故选取70mL/g为响应面中心点。
②提取温度对新疆芜菁多糖提取率的影响
提取温度设置80、85、90、95和100℃五个梯度，提取时间、液料比和提取次数分别为2h、70mL/g和1次。不同提取温度的多糖提取率见表2：
由表2可以看出：95℃和100℃时，虽然提取率高，但为了节能考虑，选取95℃为响应面中心点。
③提取时间对新疆芜菁多糖提取率的影响
提取时间设置为1、2、3、4和5h五个梯度，提取温度、液料比和提取次数分别为95℃、70mL/g和1次。不同提取时间的多糖提取率见表3：
由表3可以看出：提取时间4h以后，提取率基本不再上升，故选取4h为响应面中心点。
④提取次数对新疆芜菁多糖提取率的影响
提取次数设置为1、2、3、4和5五个梯度，提取温度、提取时间和液料比分别为95℃、4h和70mL/g。不同提取次数的多糖提取率见表4：
由表4可以看出：提取次数超过3次以后，提取率基本保持不变，故响应面分析时提取次数设为3次。
(2)制备具有免疫调节活性新疆芜菁多糖的提取条件优化的响应面分析实验
制备具有免疫调节活性新疆芜菁多糖的提取条件优化的响应面分析实验结果如表5：
根据表5结果，用Design Expert8.0.7软件分析得到多元回归方程为：
Y＝7.1785X1+1.6985X2+9.6775X3+0.00305X1X2+0.0695X1X3-0.10275X2X3-0.03895X1 2-0.010388X2 2-1.06875X3 2-415.9375
(其中Y为提取率，X1为提取温度，X3为液料比，X3为提取时间)
根据方程计算得到最佳提取条件为：液料比75.11mL/g，提取温度93.18℃，提取时间4.3h。在此条件下，新疆芜菁多糖的提取率为21.89％。考虑到实际操作的方便性，最终得出新疆芜菁多糖最佳提取工艺为：提取温度93℃，液料比为75mL/g，提取时间为4h，提取次数为3次。
综上所述仅为本发明的较佳施例而已，并非用来限定本发明的实施范围。即凡依本发明申请专利范围的内容所做的等效变化与修饰都应为本发明的技术范畴。
Claims (2)
1.一种热水浸提制备具有免疫调节活性的新疆芜菁多糖的方法，其特征在于包括以下操作步骤：
(1)取新疆芜菁块根洗净，30℃烘干，粉碎，过60目筛，得颗粒均匀的粉碎物；
(2)将步骤(1)制得的粉碎物，用80％乙醇浸泡除杂两次，每次4h，抽滤弃上清，所得残留物自然晾干；
(3)将步骤(2)所得残留物按液料比40-80mL/g，加蒸馏水进行热水浸提，提取温度80-100℃，时间1-5h，提取次数1-5次，得提取液；
(4)将步骤(3)所得提取液抽滤取上清液；
(5)将步骤(4)所得上清液在50℃条件下，减压浓缩至合适的体积，在浓缩液中加3倍无水乙醇，4℃沉淀过夜，离心(4000rpm，10min)取沉淀；
(6)将步骤(5)所得沉淀物依次用乙醚、乙醇和丙酮洗涤，30℃烘干至恒重，即为新疆芜菁多糖；
(7)将步骤(6)所得多糖用DMEM培养基分别配制成一系列浓度溶液，MTT法测定其对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖的促进作用。
制备的新疆芜菁多糖为白色粉末，该多糖对小鼠腹腔巨噬细胞增殖的促进作用呈现剂量和时间依赖关系，当多糖浓度为200μg/mL与作用24h时，增值指数为1.34。
2.根据专利要求1所述的一种热水提取具有免疫调节活性的新疆芜菁多糖的方法，其特征在于：所述步骤(2)的液料比75mL/g，提取温度93℃，提取时间4h，提取次数3次。
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