CN103251646A - 蔓菁多糖的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明还提供了蔓菁多糖在制备抗低压缺氧的药物的用途。本发明还提供了一种抗低压缺氧的药物组合物。本发明中,蔓菁多糖具有良好的抗低压缺氧作用,能够较好地保护低压缺氧状态下的脑组织,有效防止低压缺氧损伤,可用于制备具有抗低压缺氧功效的绿色食品、药品或保健品,为预防或治疗高原反应、高原脑水肿等提供了新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及蔓菁多糖的新用途,以及耐低压缺氧的药物组合物。
背景技术
缺氧,是指因组织的氧气供应不足或用氧障碍,而导致组织的代谢、功能和形态结构发生异常变化的病理过程。缺氧是临床各种疾病中极常见的一类病理过程,脑、心脏等生命重要器官缺氧后,轻则造成组织损伤,重则导致机体死亡。
缺氧主要分为常压缺氧和低压缺氧。高原反应即属于低压缺氧,人体在低压和缺氧的双重条件下,容易产生急性高原病,如高原肺水肿、高原脑水肿等。高原脑水肿(high altitude cerebral edema)多发生在特高海拔地区,发病机制很复杂,主要变化是缺氧引起的脑间质水肿和脑细胞肿胀、中枢神经系统功能严重障碍,其特点为发病急,临床表现以严重头痛、呕吐、共济失调、进行性意识障碍为特征,病理改变主要有脑组织缺血或缺氧性损伤,脑循环障碍,因而发生脑水肿,颅内压增高。若治疗不当,常危及生命。当前对高原脑水肿等急性高原病的治疗方式主要有如下几种:(1)转移至低海拔,或使用高压氧袋或高压氧舱;(2)口服乙酰唑胺;(3)地塞米松静脉滴注;(4)静脉滴注甘露醇,降低颅内压;(5)利尿药;等。
目前部分研究者认为抗常压缺氧药物可能会治疗或预防低压缺氧,但这一观点欠妥。常压缺氧,是由空气中氧气含量较低,或机体自身原因导致的用氧障碍导致的,其空气中的氧气含量与气压、温度等条件均与高海拔环境存在明显差异,即常压缺氧无法模拟高原反应对人体造成的缺氧损伤,因此,将抗常压缺氧药物用于预防或治疗高原反应是缺乏科学依据的,若由平原进入高原,胡乱使用抗常压缺氧药物,很有可能为机体带来严重损伤,甚至是死亡。
蔓菁,为十字花科芸苔属植物芜菁Brassica rapa L.的根或叶,又称芜菁、大头菜,为常见的食用蔬菜,其味辛、甘、苦,性温,归胃、肝经,可消食下气,解毒消肿。现代研究发现,蔓菁中含有蛋白质、多糖、脂肪、钙、磷、核黄素、烟酸、维生素,以及咖啡酸、阿魏酸等有机酸类化合物,它具有抗菌、抗寄生虫,抑制甲状腺素合成,抗畸变,延缓衰老等作用。目前还未见蔓菁多糖耐缺氧的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供蔓菁多糖的新用途,本发明的另一目的在于提供一种抗低压缺氧的药物。
本发明提供了蔓菁多糖在制备抗低压缺氧的药物中的用途。
进一步地,所述药物为抗高原反应的药物。
更进一步地,所述药物为保护低压缺氧脑组织的药物。
优选地,所述药物为预防或治疗高原脑水肿的药物。
其中,所述蔓菁为十字花科芸苔属植物芜菁Brassica rapa L.的根或叶。
其中,所述蔓菁多糖是采用如下方法制备得到的:
(1)取蔓菁,先用60%v/v以上的乙醇提取后,干燥;
(2)取干燥后的药渣,加水提取,水提液加入乙醇至含醇量达60%v/v以上,静置,醇沉后,取沉淀,洗涤,干燥,即得蔓菁多糖。
进一步地,步骤(1)中,所述乙醇浓度为80%v/v;步骤(2)中,水提液加入乙醇至含醇量达80%v/v。
进一步地,洗涤所用溶剂依次为乙醇、丙酮、乙醚;其中,乙醇为95%v/v乙醇或无水乙醇。
本发明还提供了一种抗低压缺氧的药物,它是由蔓菁多糖为活性成分,加上常用的辅料制备而成制剂。
本发明中,蔓菁多糖具有良好的抗低压缺氧作用,能够较好地保护低压缺氧状态下的脑组织,有效防止低压缺氧造成的氧化损伤,可用于制备具有抗低压缺氧功效的绿色食品、药品或保健品,为预防或治疗高原反应、高原脑水肿等提供了新的选择。
附图说明
图1脑组织显微镜图谱(HE),其中,A-正常对照组×100,B-减压缺氧模型对照组×100,C-阳性药组×100,D-蔓菁多糖高剂量组×100,E-蔓菁多糖中剂量组×100,F-蔓菁多糖低剂量组×100
具体实施方式
实施例1蔓菁多糖的制备
称取用80%v/v乙醇提取后的干燥蔓菁药材粉末100g,加水3L于90℃浸提3次,每次2h,滤过,合并滤液,浓缩至料液比1:1,加95%v/v乙醇使其乙醇体积分数至80%,静置24h,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤至无色,真空冷冻干燥,即得蔓菁多糖。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
试验例1蔓菁多糖对低压缺氧动物模型的影响
2.1材料
2.1.1原材料
蔓菁粗多糖的制备:称取用80%乙醇提取后的干燥蔓菁药材粉末100g,加水3L于90℃浸提3次,每次2h,滤过,合并滤液,浓缩至料液比1:1,加95%乙醇使其乙醇体积分数至80%,静置24h,沉淀依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤至无色,真空冷冻干燥,即得。
阳性对照药:阳性对照药选用诺迪康胶囊(即红景天胶囊,Rhodiolacapsule):国药准字Z10980020号产品,西藏诺迪康药业股份有限公司出品。规格0.28g/粒,所用原料为圣地红景天,主要成分为红景天苷。
2.1.2实验动物
雄性ICR小鼠,体重(22±2)g,由成都达硕生物科技有限公司提供。动物生产许可证号:SCXK(川)2008-24。质量检测单位:四川省实验动物检测中心。
2.1.3化学药品与试剂
考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒;南京建成生物工程研究所
超氧化物歧化酶(T-SOD)测试盒,生产批号:20121119;南京建成生物工程研究所
丙二醛(MDA)测试盒,生产批号:20121119;南京建成生物工程研究所
苏木素(AR级),批号:110725;成都市科龙化工试剂厂
伊红(AR级),批号:110611;成都市科龙化工试剂厂
重铬酸钾:(AR级),批号:20110620;成都市科龙化工试剂厂
钠石灰:
凡士林:
其他试剂均为分析纯。
2.1.4仪器设备
UPUL-1-10T型超纯水机 成都超纯科技有限公司;
FreeZone2.5型冷冻干燥仪 美国LABCONCO公司;
切片机(徕卡-1015,德国);
TSJ-Q型全自动封闭式组织脱水机;
BMJ-Ⅲ型包埋机;
PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪(常州市中威医疗仪器有限公司);
显微镜Motic BA400等;
图像分析软件Motic Images Advanced。
恒温水浴锅、涡流混合器等为实验室常用设备。
FLYDWC50-ⅡA型低压低氧动物实验舱,贵州风雷航空军械有限责任公司
2.2实验方法
2.2.1药品配制
红景天胶囊按人体推荐剂量10倍量用蒸馏水配制成浓度为14mg/mL的溶液;蔓菁多糖分别用蒸馏水配成三个试样浓度(12.5、25和50mg/mL),灌胃前用超声分散处理;空白对照组用蒸馏水。
2.2.2实验动物分组
实验小鼠在25℃下饲养,自由采食饮水,通风。按体重随机分为10笼,每笼5只,2笼(10只)为一组;分别设阳性对照组、蔓菁多糖低剂量组、蔓菁多糖中剂量组、蔓菁多糖高剂量组和空白对照组,共5组。阳性对照组按0.28g/kg.bw.d剂量灌胃,蔓菁多糖低(0.25g/kg.bw.d)、中(0.5g/kg.bw.d)、高(1.0g/kg.bw.d)剂量组分别灌胃给药,每日上午9-10时进行,连续给药7天。每天给药前称量小鼠体重并记录。
2.2.3低压缺氧模型建立
正常对照组不作减压缺氧处理,减压缺氧模型组与各给药组在最后一次灌胃后,置于低压缺氧舱进行低压缺氧,舱内温度控制在(15±5)℃,湿度控制在55%(用钠石灰控制舱内CO2含量,无水氯化钙控制湿度)左右,10m·s-1的速度使舱内大气压降至-0.065Mpa(相当于海拔8000m),期间实时观察并计录小鼠行为状态;持续缺氧18h后,15min内使舱内大气压回升至常压,出舱,取血后处死,取脑组织代测(该动物模型参照“朱华玲,等,埃他卡林对急性低压缺氧所致大鼠脑水肿的预防作用,航天医学与医学工程,2006年4期”)。
2.2.4形态学观察
小鼠脑组织用4%多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,HE常规染色,光学显微镜观察。采用脑组织病理评分表对各组小鼠脑组织切片进行评分(参照“钟振东,许跃忠,钟浩,等.尼莫地平注射液对线栓法致大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型脑组织形态学的影响研究.四川生理科学杂志,2011,33(2):57-60.”),见表1。
表1脑组织病理评分表
2.2.5脑组织匀浆液的制备
待小鼠出舱后,迅速断头,冰浴取脑,剥除脑膜并用预冷的PBS(0.01M,pH7.4)冲净表面血液。滤纸吸干表面水分,称重,冰桶中匀浆后,按体重体积(1:9)将脑与匀浆介质混合,制成10%脑匀浆,4℃3000r/min离心10min,取上清液,备用。
2.2.6脑组织蛋白质含量测定
采用考马斯亮蓝法。取上述10%脑组织匀浆上清再用生理盐水按1:9稀释成1%组织匀浆,用南京建成生物科技研究所出品的考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒测定各小鼠脑组织蛋白含量。
2.2.7SOD活性及MDA含量测定
断头同时迅速抽取血,离心取血清,于-80℃冻存,备用。小鼠脑组织匀浆与血清用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性;用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量,实验操作按试剂盒说明进行。
2.2.8统计学处理
2.3结果与分析
2.3.1HE染色
光学显微镜下可见脑组织HE染色切片中,正常对照组脑灰质、白质区组织结构正常,灰质区细胞层次清楚,锥体及颗粒细胞排列整齐,细胞大小、数目、形态、分布均正常,细胞核、浆结构清晰,着色均匀,胞浆呈淡红色,细胞突起可见,胞核呈蓝色且较清亮,白质内神经纤维无水肿,坏死断裂等病变。间质正常,散在胶质细胞可见;减压缺氧模型对照组灰质区细胞层次欠清楚,神经细胞(锥体细胞)似减少,排列较乱、密集,部分退变的神经元为紫蓝色小体(密集嗜碱性深染不规则梭形结构),细胞浆、核不清,胶质细胞增生;白质区灶性致密红染(可能为神经纤维变性所致。)细胞内未见脂褐素颗粒(老年斑)及神经纤维缠绕等,海马周围可见退行性病变;阳性对照组和蔓菁多糖高剂量组脑灰质、白质区组织结构正常,灰质区细胞层次可见细胞数量基本正常,退变的神经元嗜碱性深染不规则梭形结构可见,数量较模型组少,皮质表层水肿,组织裂开,细胞间可见棕色细颗粒物,胶质细胞数量较多;灶性脑组织细胞层次混乱,灰质白质分界不清,神经纤维从横交错排列混乱,神经间间隙增宽(可能为神经纤维缠绕所致)。部分神经细胞及间质内见微细棕色颗粒。小鼠脑组织光镜检查,详细结果见表2,脑组织显微镜图谱见附图1。
表2小鼠脑组织光镜观察分值
2.3.2脑组织SOD活性、MDA含量
与正常对照组相比,减压缺氧模型对照组小鼠脑组织SOD活性明显下降(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01)。与减压缺氧模型对照组相比,预先给予红景天和蔓菁多糖(1.0g/kg·d-1)处理的小鼠脑组织SOD活性则升高(P<0.05),MDA含量较减压模型缺氧对照组显著降低(P<0.05),结果见表3。
表3蔓菁多糖对急性低压缺氧小鼠脑组织SOD活性、MDA含量的影响
注:①:与正常对照组相比,P<0.01;②:与减压缺氧模型组相比,P<0.05
2.3.3血清SOD活性、MDA含量
与正常对照组相比,减压缺氧模型对照组小鼠血清SOD活性明显下降(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01)。与减压缺氧模型对照组相比,预先给予红景天和蔓菁多糖(1.0g/kg·d-1)处理的小鼠血清SOD活性则升高(P<0.05),MDA含量较减压模型缺氧对照组显著降低(P<0.05),结果见表4。
表4蔓菁多糖对急性低压缺氧小鼠血清SOD活性、MDA含量的影响
注:①:与正常对照组相比,P<0.01;②:与减压缺氧模型组相比,P<0.05
3讨论
3.1小鼠常压缺氧实验研究表明:蔓菁多糖高剂量组与空白对照组比较差异显著(P<0.05),说明蔓菁多糖高剂量组能有效延长小鼠的常压耐缺氧存活时间,且1.0g/kg蔓菁多糖的作用效果与0.28g/kg阳性对照作用效果相当,说明蔓菁多糖具有较好的抗缺氧作用,为蔓菁抗缺氧保健食品的开发提供实验依据。
3.2脑缺氧可引起高能量化合物和ATP等降解,腺苷可代谢转变为黄嘌呤,以黄嘌呤氧化酶催化,使之产生尿酸和O2·-,O2·-生成过多会导致神经细胞膜脂质过氧化;此外,缺氧也可直接引起神经细胞膜去极化,使兴奋性氨基酸释放过多,NMDA受体活化,提高胞内Ca2+浓度,活化磷脂酶A2,使花生四烯酸和氧自由基生成增加,促使膜脂质过氧化进一步加剧,而膜脂质过氧化是引起神经细胞功能障碍和死亡的原因之一。
3.3蔓菁多糖对低压下的缺氧保护作用,表明蔓菁多糖可避免或治疗高原反应,防止高原缺氧状态下组织的氧化损伤;同时,蔓菁多糖可以有效预防和治疗低压缺氧导致的白质及血管水肿,表明蔓菁多糖可有效预防或治疗高原脑水肿。
3.4本发明制备的蔓菁多糖对低压缺氧的预防、治疗作用显著优于现有方法制备的多糖。
综上所述,本发明中,蔓菁多糖具有良好的抗低压缺氧作用,能够较好地保护低压缺氧状态下的脑组织,有效防止低压缺氧造成的氧化损伤,可用于制备具有抗低压缺氧功效的绿色食品、药品或保健品,为预防或治疗高原反应、高原脑水肿等提供了新的选择。
Claims (9)
1.蔓菁多糖在制备抗低压缺氧的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于:所述药物为抗高原反应的药物。
3.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于:所述药物为保护低压缺氧脑组织的药物。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于:所述药物为预防或治疗高原脑水肿的药物。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的用途,其特征在于:所述蔓菁为十字花科芸苔属植物芜菁Brassica rapa L.的根或叶。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的用途,其特征在于:所述蔓菁多糖是采用如下方法制备得到的:
(1)取蔓菁,先用60%v/v以上的乙醇提取后,干燥;
(2)取干燥后的药渣,加水提取,水提液加入乙醇至含醇量达60%v/v以上,静置,醇沉后,取沉淀,洗涤,干燥,即得蔓菁多糖。
7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于:步骤(1)中,所述乙醇浓度为80%v/v;步骤(2)中,水提液加入乙醇至含醇量达80%v/v。
8.根据权利要求6所述的用途,其特征在于:洗涤所用溶剂依次为乙醇、丙酮、乙醚;其中,乙醇为95%v/v乙醇或无水乙醇。
9.一种抗低压缺氧的药物,其特征在于:它是由蔓菁多糖为活性成分,加上常用的辅料制备而成的制剂。
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