CN105560308B - 金花葵花在制备用于预防和治疗前列腺疾病的产品中的应用 - Google Patents
金花葵花在制备用于预防和治疗前列腺疾病的产品中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种关于金花葵花的新的应用方法，利用金花葵花制备用于防治前列腺疾病的药物。本发明提供另外一种关于金花葵花的新的应用方法，利用金花葵花制备用于防治前列腺疾病的保健品。一种用于防治前列腺疾病的金花葵花水煎液的制备方法，取金花葵花原料，加水煎煮0.5‑1h，然后过滤，收集滤液；向滤渣中再次加水，煎煮0.5‑1h，煎煮完成后过滤，合并两次滤液，即得到金花葵花水煎液。本发明的目的在于提供一种关于金花葵花在制备用于防治前列腺疾病的产品中的应用，由金花葵花制得的中药制剂和保健品对前列腺炎和前列腺增生有明显的改善效果，可显著降低前列腺增生指数，降低血清DHT、T水平，并且能显著升高血清E2水平。
Description
技术领域
本发明属于天然产物应用领域，具体涉及金花葵花在制备用于防治前列腺疾病的产品中的应用。
背景技术
金花葵为一年生草本锦葵科秋葵属植物。鲜花含有多种生物活性物质，其生物黄酮含量高达6％，含全价蛋白质、高聚糖胶、膳食纤维、微量元素硒、锌、多种不皂化物等，有调节人体内分泌、免疫力，增加人体抗力抗衰老、防癌、降血脂功效。此外，其丰富的天然植物雌激素，可延长女性青春期，减轻中老年更年期综合症。花可直接入口鲜食、凉拌、热炒、做汤或掺面食食用，或以花泡水代茶等。其鲜花入口后人会有一种奇、鲜、爽、香、心旷神怡的感受，具有缓解紧张情绪，调整心态功能。嫩果具有和黄秋葵相同的效果，可清炒、做汤、生吃。金花葵花药食兼用，《本草纲目》已记载黄蜀葵的药用价值，能清热、凉血、解毒，其花无毒，具有清利湿热、消炎镇痛之功效，内服主治五淋、水肿，外用治疗汤水烫伤。果实、种子具有补脾健胃、生肌功效，治疗消化不良、不思饮食、跌打损伤等。《嘉佑本草》记载:黄蜀葵花主治小便淋漓及催生、治诸恶疮。现代医学研究表明，该花的总黄酮有镇痛、抗脑缺血和治疗口腔溃疡等作用。其所含全价蛋白质、高聚糖胶、膳食纤维、微量元素硒、锌、多种不皂化物等，具有显著调节人体内分泌、免疫力，增加人体抗力，改善心脑血管及微循环功能，增强机体抗氧化能力，抗心脑缺血、缺氧、抗炎、镇疼，抗疲劳、抗衰老、抗癌、防癌、降血脂功效。此外，其丰富的天然植物雌激素，对于延长女性青春期，减轻或避免中老年更年期综合症也有奇效。金花葵也含有丰富的金丝桃苷成分，而金丝桃苷具有较强的止咳作用、同化作用，另外，还具有较强的抑制眼醛糖还原酶的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种关于金花葵花在制备用于防治前列腺疾病的产品中的应用，由金花葵花制得的中药制剂和保健品对前列腺炎和前列腺增生有明显的改善效果，可显著降低前列腺增生指数，降低血清DHT、T水平，并且能显著升高血清E2水平。
本发明提供一种关于金花葵花的新的应用方法，利用金花葵花制备用于防治前列腺疾病的药物。
作为对上述应用的进一步优化，所述药物为金花葵花水煎液，其制备方法为：取金花葵花原料，加水煎煮0.5-1h，然后过滤，收集滤液；向滤渣中再次加水，煎煮0.5-1h，煎煮完成后过滤，合并两次滤液，即得到金花葵花水煎液。更进一步地，所述的金花葵花在温度为90-110℃条件下进行煎煮。所述的金花葵花原料煎煮前先用温度为40-50℃的温水浸泡1-3h。
与现有技术相比，本发明至少具有下述优点及有益效果：
本发明首次采用金花葵花制备用于防治前列腺疾病的药品。金花葵花中的总黄酮成分对前列腺炎和前列腺增生有明显的改善效果，可显著降低前列腺增生指数，降低血清DHT、T水平，并且能显著升高血清E2水平。对于前列腺炎，可以显著减少前列腺组织中白细胞数、显著增加卵磷脂小体密度，显著减轻前列腺、附睾组织的病理变化。
附图说明
图1为金花葵花对前列腺增生模型小鼠前列腺组织形态影响对比图；
图2为金花葵花对前列腺增生模型小鼠胸腺组织形态影响对比图；
图3为金花葵花对前列腺增生模型小鼠脾脏组织形态影响对比图；
图4为金花葵花对前列腺增生模型小鼠肾脏组织形态影响对比图；
图5为金花葵花对前列腺增生模型小鼠睾丸组织形态影响对比图；
图6为金花葵花对前列腺增生模型小鼠附睾组织形态影响对比图；
图7为金花葵花对前列腺炎模型小鼠前列腺组织形态影响对比图；
图8为金花葵花对前列腺炎模型小鼠肾脏组织形态影响对比图；
图9为金花葵花对前列腺炎模型小鼠睾丸组织形态影响对比图；
图10为金花葵花对前列腺炎模型小鼠附睾组织形态影响对比图。
具体实施方式
为使本发明的内容更明显易懂，以下结合具体实施例，对本发明进行详细描述。
一种用于防治前列腺疾病的金花葵花水煎液的制备方法，取金花葵花原料，加水煎煮0.5-1h，然后过滤，收集滤液；向滤渣中再次加水，煎煮0.5-1h，煎煮完成后过滤，合并两次滤液，即得到金花葵花水煎液。
为了使本发明具有更好的实施效果，所述的金花葵花在温度为90-110℃条件下进行煎煮。所述的金花葵花原料煎煮前先用温度为40-50℃的温水浸泡1-3h，为了具有更好的效果，还可以在泡水前进行炒制。
应用研究数据
一、金花葵花对小鼠前列腺增生模型的影响
1实验材料
1.1实验动物
昆明种小鼠，雄性，20～23g，山东省实验动物中心提供，合格证号：NO.37005400000003。饲养在河南中医学院实验动物中心，饲料为消毒饲料，垫料为消毒垫料，均由河南省实验动物中心提供。饮水为消毒蒸馏水。饲养条件：温度20～25℃，相对湿度40％～60％，自然光照，每笼10只，常规饲养，隔天更换垫料。
1.2实验药物和试剂金花葵花，由汝州银地实业有限公司提供；金花葵总黄酮，由河南中医学院化学室提供，含量﹥60％。非那雄胺片非那雄胺胶囊，武汉人福药业有限责任公司生产，批号20140202；癃闭舒胶囊，石家庄科迪药业有限公司生产，批号150714；丙酸睾酮注射液，上海通用药业股份有限公司生产，批号140902。注射用青霉素钠(400万单位)，华北制药有限公司生产，批号F4013504；氯化钠注射液，河南科伦药业有限公司生产，批号C114092201-2；甲醛，中国莱阳市双双化工有限公司生产，批号20140519；水合氯醛，天津市光复精细化工研究所生产，批号20150606；双氢睾酮(DHT)试剂盒，美国R&D公司生产，批号20150401A；雌二醇(E2)试剂盒，美国R&D公司生产，批号20150401A；睾酮(T)试剂盒，美国R&D公司生产，批号20150401A。
1.3实验仪器
FA(N)/JA(N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；HWS12型电热恒温水浴锅，上海一恒科学仪器有限公司；KDC-160HR高速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司；OLYMPUS BX61电动显微镜，日本OLYMPUS公司；680型酶标仪，美国BIO-RAD公司；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司。
2实验方法取SPF级雄性KM小鼠，体重20～23g，随机取10只作为空白组，另9组造小鼠前列腺增生模型，每组10只，分别为大、中、小剂量金花葵水煎液组，大、中、小剂量金花葵总黄酮组，癃闭舒组，非那雄胺组和模型组。造模小鼠9组均每日皮下注射丙酸睾酮5mg/kg(溶于大豆油)，连续3周，空白组注射等量溶媒。癃闭舒组以及非那雄胺等组分别灌服相应药物，模型组及空白组灌服同体积生理盐水。每日灌胃给药1次，连续给药3周。大、中、小剂量金花葵总黄酮组(72mg/kg、36mg/kg、18mg/kg临用前用0.5％CMC溶液配成7.2、3.6、1.8mg/ml浓度的金花葵总黄酮大、中、小混悬液，给药体积0.1ml/10g)，大、中、小剂量金花葵水煎液组(3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg，用生理盐水分别配制成浓度为300、150、75mg/ml浓度的大、中、小水煎液金花葵，给药体积0.1ml/10g)，非那雄胺组(1.25mg/Kg，相当于临床剂量的15倍，临用前用0.5％CMC溶液配成0.125mg/ml浓度的癃闭舒胶囊混悬液，给药体积0.1ml/10g)，癃闭舒组(450mg/Kg，相当于临床剂量的15倍，临用前用0.5％CMC溶液配成45mg/ml浓度的癃闭舒胶囊混悬液，给药体积0.1ml/10g)、模型组(灌服同体积0.5％CMC溶液)。空白组(灌服同体积0.5％CMC溶液)。每日灌胃给药1次，连续给药3周。于末次给药后2h(禁食不禁水12h)，小鼠称重后眼眶取血，离心，分离血清，按照试剂盒说明说测血清中睾酮(T)、双氢睾酮(DHT)、雌二醇(E2)水平；然后脱颈椎处死小鼠，迅速取前列腺、附睾、肾、胸腺及脾脏，称前列腺湿重，计算前列腺指数(前列腺指数＝前列腺湿重mg/小鼠体重g)；将前列腺、附睾、肾、胸腺及脾脏于10％甲醛溶液中固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组前列腺组织的形态变化。
3统计学处理方法
数据分析用SPSS17.0医用统计包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用LSD法，方差不齐者用Games-Howell法检验，等级资料采用Ridit检验。
4实验结果
4.1对前列腺增生模型小鼠前列腺指数、血清E2、T和DHT水平的影响
表1 金花葵对前列腺增生模型小鼠前列腺指数、血清E2、T和DHT水平的影响( n＝10)
**P＜0.01，*P＜0.05，表示与模型组相比
与空白组相比，模型组前列腺指数和血清T、DHT水平显著升高(P＜0.01)，血清E2水平显著降低(P＜0.01)，与模型组相比，癃闭舒组，非那雄胺组及大、中、小剂量金花葵总黄酮组，大、中剂量金花葵水煎液组均可显著降低动物前列腺指数和显著降低血清DHT及T水平(P＜0.01)，显著升高血清E2水平(P＜0.05)，小剂量金花葵总黄酮组可显著降低动物前列腺指数和血清DHT水平(P＜0.01)，明显降低血清T水平(P＜0.05)，显著升高血清E2水平(P＜0.01)。
4.2对前列腺增生模型小鼠前列腺组织形态的影响
各组小鼠前列腺组织病理观察：空白组小鼠前列腺腺体、腺上皮细胞及间质未见增生，基本正常，见图1-1。模型组小鼠前列腺腺体和部分腺上皮细胞可见明显增生，间质显著增生，见图1-2。非那雄胺组小鼠前列腺腺体增生得到明显抑制，只是部分腺上皮细胞仍增生，间质基本正常，见图1-3。癃闭舒组小鼠前列腺腺体增生得到明显抑制，只是部分腺上皮细胞仍增生，间质基本正常，见图1-4。大剂量金花葵总黄酮组小鼠前列腺腺体增生、腺上皮细胞增生得到一定抑制，间质基本正常，见图1-5。中剂量金花葵总黄酮组小鼠前列腺腺体增生、腺上皮细胞增生得到一定抑制，间质基本正常，见图1-6。小剂量金花葵总黄酮组小鼠前列腺腺体有所增生、间质稍有增生，见图1-7。大剂量金花葵水煎液组小鼠前列腺腺体增生、腺上皮细胞增生得到一定抑制，间质基本正常，见图1-8。中剂量金花葵水煎液组组小鼠前列腺腺体增生、腺上皮细胞增生得到一定抑制，间质基本正常，见图1-9。小剂量金花葵总黄酮组小鼠前列腺腺体有所增生，间质稍有增生，见图1-10。
根据半定量标准测定实验各组动物前列腺增生结果：
表2 金花葵对前列腺增生模型小鼠前列腺组织形态的影响
| 组别 | n | - | + | ++ | +++ |
| 空白组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
| 模型组 | 10 | 0 | 1 | 1 | 8 |
| 非那雄胺组 | 10 | 4 | 2 | 2 | 2 |
| 癃闭舒组 | 10 | 4 | 5 | 1 | 0 |
| 大剂量金花葵总黄酮组 | 10 | 5 | 1 | 3 | 1 |
| 中剂量金花葵总黄酮组 | 10 | 4 | 3 | 0 | 3 |
| 小剂量金花葵总黄酮组 | 10 | 4 | 3 | 0 | 3 |
| 大剂量金花葵水煎液组 | 10 | 2 | 3 | 3 | 2 |
| 中剂量金花葵水煎液组 | 10 | 3 | 4 | 1 | 2 |
| 小剂量金花葵水煎液组 | 10 | 5 | 1 | 1 | 3 |
“_”腺上皮和间质正常；“+”腺上皮增生，呈柱状，偶见假乳头形成或间质有少量纤维结缔组织增生、平滑肌增生；“++”腺上皮增生，有少量乳头或假乳头和间质有少量纤维结缔组织、平滑肌增生；“+++”腺上皮增生,较多乳头或假乳头状突起，间质中纤维结缔组织、平滑肌明显增生，成宽的条带状。
从上表可看出，经Ridit检验，与空白对照组比，模型组出现显著的前列腺增生病理变化(P﹤0.01)，说明造模型成功。与模型组比，非那雄胺组、癃闭舒组和大剂量金花葵总黄酮组可显著减轻模型小鼠前列腺增生病理变化(P﹤0.01)；中、小剂量金花葵总黄酮组和大、中、小剂量金花葵水煎液组可明显减轻模型前列腺增生病理变化(P﹤0.05)。
4.3对前列腺增生模型小鼠胸腺组织形态的影响各组小鼠胸腺组织的病理观察：空白组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集正常，排列密集，见图2-1。模型组胸腺小叶边界不清，皮质变薄，淋巴细胞正常但排列稀疏，见图2-2。非那雄胺组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显病理改变，见图2-3。癃闭舒组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显病理改变，见图2-4。大剂量金花葵总黄酮组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显的病理改变，见图2-5。中剂量金花葵总黄酮组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显的病理改变，见图2-6。小剂量金花葵总黄酮组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显的病理改变，见图2-7。大剂量金花葵水煎液组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显的病理改变，见图2-8。中剂量金花葵水煎液组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显的病理改变，见图2-9。小剂量金花葵水煎液组胸腺小叶边界清楚，髓质皮质分界清晰，淋巴细胞密集未见明显的病理改变，见图2-10。
采用测微尺，对实验各组小鼠胸腺进行测定最宽处和最窄处求得均数，则为皮质厚度。
表3 金花葵对前列腺增生模型小鼠胸腺皮质的厚度的影响
注：**P＜0.01，*P＜0.05，表示与模型组相比
从上表可看出，与空白组相比，模型组胸腺皮质厚度显著降低(P＜0.01)，与模型组相比，癃闭舒组，非那雄胺组，大、中、小剂量金花葵总黄酮组和大、中、小剂量金花葵水煎液组均可显著升高模型小鼠胸腺皮质厚度(P＜0.01)。
4.4对前列腺增生模型小鼠脾脏组织形态的影响
各组小鼠脾脏组织的病理观察结果：空白组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结正常，淋巴细胞正常，见图3-1。模型组小鼠脾小结变小，淋巴细胞正常但稀疏，见图3-2。非那雄胺组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞未见明显的病理改变，见图3-3。癃闭舒组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞未见明显的病理改变，见图3-4。大剂量金花葵总黄酮组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞未见明显的病理改变，见图3-5。中剂量金花葵总黄酮组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞未见明显的病理改变，见图3-6。小剂量金花葵总黄酮组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞均基本正常，见图3-7。大剂量金花葵水煎液组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞未见明显的病理改变，见图3-8。中剂量金花葵水煎液组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞未见明显的病理改变，见图3-9。小剂量金花葵水煎液组小鼠脾脏红髓和白髓分界清晰，脾小结、淋巴细胞均基本正常，见图3-10。
采用测微尺对脾小结进行测定，每只动物脾脏选测三个脾小结，以脾小动脉为中心计算两边脾小结大小求得均数为脾小结厚度。
表4 金花葵对前列腺增生模型小鼠脾脏皮质的厚度的影响
注：**P＜0.01，*P＜0.05，表示与模型组相比
从上表可看出，与空白组相比，模型组脾小结厚度显著降低(P＜0.01)，与模型组相比，癃闭舒组，非那雄胺组，大、中、小剂量金花葵总黄酮组和大、中、小剂量金花葵水煎液组均可显著升高动物脾小结厚度(P＜0.01)。
4.5对前列腺增生模型小鼠肾脏组织形态的影响
各组小鼠肾脏组织的病理观察结果：空白组小鼠肾脏肾小球、肾小囊、肾小管及上皮细胞均正常，见图4-1。模型组小鼠肾脏肾小球、肾小囊、肾小管未见明显的病理改变，见图4-2。非那雄胺组小鼠肾脏肾小球、肾小囊、肾小管未见明显的病理改变，见图4-3。癃闭舒组小鼠肾脏肾小球、肾小囊、肾小管未见明显的病理改变，见图4-4。大剂量金花葵总黄酮组小鼠肾脏肾小球、肾小囊及肾小管未见有明显病理改变，见图4-5。中剂量金花葵总黄酮组小鼠肾脏肾小球、肾小囊及肾小管未见有明显病理改变，见图4-6。小剂量金花葵总黄酮组小鼠肾脏肾小球、肾小囊及肾小管及上皮细胞均基本正常，见图4-7。大剂量金花葵总黄酮组小鼠肾脏肾小球、肾小囊及肾小管未见有明显病理改变，见图4-8。中剂量金花葵水煎液组小鼠肾脏肾小球、肾小囊及肾小管未见有明显病理改变，见图4-9。小剂量金花葵水煎液组小鼠肾脏肾小球、肾小囊及肾小管及上皮细胞均基本正常，见图4-10。
4.6对前列腺增生模型小鼠睾丸组织形态的影响
各组小鼠睾丸组织的病理观察结果：空白组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见图5-1；模型组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见图5-2；非那雄胺组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞基本正常，精子正常，见图5-3；癃闭舒组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞基本正常，精子正常，见图5-4；金花葵总黄酮大剂量组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见图5-5；金花葵总黄酮中剂量组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见照图5-6；金花葵总黄酮小剂量组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见图5-7；金花葵水煎液大剂量组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见图5-8；金花葵水煎液中剂量组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见图5-9；金花葵水煎液小剂量组小鼠睾丸中曲细精管内的各级精原细胞正常，精子正常，见图5-10；
4.7对前列腺增生模型小鼠附睾组织形态的影响
各组小鼠附睾组织的病理观察结果：空白组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-1；模型组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-2；非那雄胺组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-3；癃闭舒组小鼠附睾中管状上皮细胞基基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-4；金花葵总黄酮大剂量组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有精子，见图6-5；金花葵总黄酮中剂量组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-6；金花葵总黄酮小剂量组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-7；金花葵水煎液大剂量组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有精子，见图6-8；金花葵水煎液中剂量组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-9；金花葵水煎液小剂量组小鼠附睾中管状上皮细胞基本正常，管腔内有大量的精子，见图6-10。
小结
采用丙酸睾酮皮下注射造小鼠前列腺增生模型成功，模型组前列腺指数和血清T、DHT水平显著升高，血清E2水平显著降低；前列腺组织出现显著增生；胸腺皮质和脾脏皮质出现显著萎缩。
金花葵水煎液组及各剂量金花葵总黄酮组均可降低动物前列腺增生指数，降低血清DHT,T水平，升高E2水平，减轻前列腺组织的相关病理变化。大、中、小剂量金花葵总黄酮组和大、中剂量金花葵水煎液组均可显著降低动物前列腺指数和显著降低血清DHT及T水平，显著升高血清E2水平，小剂量金花葵总黄酮组可显著降低动物前列腺指数和血清DHT水平，明显降低血清T水平，显著升高血清E2水平；大剂量金花葵总黄酮组可显著减轻模型小鼠前列腺增生病理变化，中、小剂量金花葵总黄酮组和大、中、小剂量金花葵水煎液组可明显减轻模型前列腺增生及附睾病理变化；大、中、小剂量金花葵总黄酮组和大、中、小剂量金花葵水煎液组均可显著升高模型小鼠胸腺皮质厚度；大、中、小剂量金花葵总黄酮组和大、中、小剂量金花葵水煎液组均可显著升高动物脾小结厚度。提示金花葵及金花葵总黄酮均可显著改善小鼠前列腺增生病理变化。
二、金花葵花对小鼠前列腺炎模型的影响
1实验材料
1.1实验动物小鼠，昆明种，雄性，25～30g，动物合格证编号0021890，购于山东省医学实验动物中心，饲养在河南中医学院实验动物中心(许可证号SYXK(豫)2015-0005)；饲料为消毒饲料，垫料为消毒垫料，均由河南省实验动物中心提供；饮水为消毒蒸馏水；饲养条件：温度20～25℃，相对湿度40％～60％，自然光照，每笼10只，常规饲养，隔天更换垫料。
1.2实验药物和试剂金花葵花，有平顶山银地集团提供。前列康片(每片含油菜花花粉0.5g)，浙江康恩贝制药股份有限公司，批号140522；消痔灵注射液(每支10ml)，吉林省集安益盛药业股份有限公司，批号13102402；水合氯醛，天津市光复精细化工研究所，批号20130606；注射用青霉素钠，华北制药股份有限公司，批号F4013504；氯化钠注射液，河南科伦药业有限公司，批号C114092201-2；甲醛，中国莱阳市双双化工有限公司，批号20140519。
1.3实验仪器
JY601电子秤，上海民桥医疗器械有限公司；FA(N)/JA(N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司；OLYMPUS光学显微镜；BL-2000医用图像分析系统，成都泰盟科技有限公司。
2实验方法
2.1造模与分组实验室常规饲养1周后，挑选体重在28～30g的雄性小鼠用于实验。随机选取10只作为空白对照组，其余用于造前列腺炎模型。造模小鼠分别称重，腹腔注射10％水合氯醛(0.03ml/10g)，麻醉成功后，用酒精消毒皮肤，进行手术；于下腹正中切口达腹腔，提出膀胱及两侧精囊，暴露膀胱背侧前列腺(背侧叶)，用微量注射器准确注入25％消痔灵注射液0.02ml，送回腹腔；分层缝合肌肉、皮肤，用酒精消毒手术伤口，待小鼠清醒后放回鼠笼常规饲养；术后肌内注射青霉素20万u/kg，连用3天，以预防感染。术后第8天，挑选恢复情况好的造模小鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，即模型组，前列康组，高、中、低剂量金花葵花组。
2.2给药方法
2.2.1实验用药的配制
金花葵花高、中、低剂量组小鼠每日给药剂量分别为3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg，用生理盐水分别配制成浓度为150、75、37.5mg/ml的溶液；前列康片：前列康按成人临床用量的15倍给药。小鼠每日剂量为1.5g/kg，临用前用生理盐水配成浓度为0.075g/ml的混悬液；消痔灵注射液：临用前用灭菌注射用水配制成25％的浓度。
2.2.2给药剂量和方法
空白对照组与模型组，从造模第8天起，按0.2ml/10g体重给予蒸馏水灌胃，每日1次，连续3周。阳性对照组从造模第8天起，按0.2ml/10g体重给予前列康胶囊混悬液灌胃，每日1次，连续3周。金花葵花高、中、低剂量组按0.2ml/10g体重给予相应的药物灌胃。
2.3指标测定
小鼠24h内饮水量：于造模后的第14天和第28天分别测定每组小鼠24h内的饮水量。
末次给药1h后(禁食12小时)，称重，之后处死小鼠，迅速取出前列腺组织，取10mg左右前列腺组织，剪碎，加20倍蒸馏水，充分振摇，进行白细胞计数以及卵磷脂小体密度评分(满视野为4分，3/4视野为3分，1/2视野为2分，1/4视野为1分)。另取一部分前列腺组织以及睾丸、附睾、胸腺、脾脏固定于10％福尔马林溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组前列腺、睾丸、附睾、胸腺、脾脏的组织形态学变化。
2.4统计学处理方法
数据分析用SPSS 13.0for windows统计软件包进行数据资料的统计学处理，计量资料用平均数±标准差表示，组间比较用单因素方差分析，计数资料采用Ridit分析。
3实验结果
3.1对前列腺炎模型小鼠饮水量的影响
分别在造模后的第14天和第28天，分别测定每组小鼠在24h内的饮水量，结果见表5。
表5 金花葵花对前列腺炎模型小鼠饮水量的影响(ml)
从上表可看出，模型组小鼠在造模后第14天和第28天饮水量均比空白对照组少，分别减少6.52％和17.02％，提示随着造模时间的延长，模型小鼠前列腺炎症状加重。与模型组比，高、中、低剂量金花葵花组在第14天和第28天可使模型小鼠饮水量分别增加3.48％、13.48％，2.17％、12.29％，1.96％、7.57％，说明随着给药时间延长，对前列腺炎症状改善越明显。
3.2对前列腺炎模型小鼠前列腺组织中白细胞数及卵磷脂小体密度的影响按相应实验方法及标准，观察并记录前列腺组织中白细胞总数及卵磷脂小体密度积分，结果见表6。
表6 金花葵花对前列腺炎模型小鼠前列腺组织中白细胞数及卵磷脂小体密度的影响
★★表示与模型组相比，P＜0.01
从上表可看出，与空白对照组比，模型组前列腺组织中白细胞数显著增加(P﹤0.01)、卵磷脂小体密度积分显著减少(P﹤0.01)，说明造前列腺炎模型成功。与模型组相比，高、中、低剂量金花葵花组和前列康组前列腺中白细胞数均显著减少(P﹤0.01)，前列腺卵磷脂小体密度积分均显著增加(P﹤0.01)，且以金花葵花高、中剂量效果明显。金花葵花具有改善前列腺炎模型小鼠前列腺炎症状的作用。
3.3对前列腺炎模型小鼠前列腺、睾丸、附睾、肾脏、胸腺和脾脏组织形态的影响
3.3.1对小鼠前列腺组织形态的影响(如图7)
各组前列腺组织形态观察：空白对照组前列腺腺体正常，腺上皮均呈皱褶状排列，间质未见炎细胞浸润和纤维的增生。模型组前列腺出现明显增生，腺腔扩张，腺腔内有大量的炎细胞渗出，主要有中性粒细胞和淋巴细胞，间质也有明显的炎细胞浸润和纤维的增生。前列康组前列腺腺体部分扩大，部分腺上皮细胞呈皱褶状排列，腺体周围出现少量纤维增生和少量的炎细胞。高剂量金花葵组前列腺腺体正常，腺上皮细胞呈皱褶状排列，间质未见纤维的增生，偶见炎细胞浸润。
中剂量金花葵组前列腺腺腔基本恢复正常，腺体上皮细胞大部分呈皱褶状排列，间质中有少量的纤维增生和炎细胞。低剂量金花葵组前列腺出现明显的增生，腺腔明显扩张，上皮变平呈扁平状，间质中有少量的纤维增生和炎症细胞浸润。
表7 金花葵对前列腺炎模型小鼠前列腺组织的影响
| 组别 | 动物数 | - | + | ++ | +++ |
| 空白对照组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
| 模型组 | 10 | 0 | 0 | 6 | 4 |
| 前列康组 | 10 | 1 | 4 | 3 | 2 |
| 高剂量金花葵花组 | 10 | 3 | 6 | 1 | 0 |
| 中剂量金花葵花组 | 10 | 2 | 5 | 3 | 0 |
| 低剂量金花葵花组 | 10 | 0 | 4 | 5 | 1 |
“-”前列腺腺体、腺上皮和间质均正常；“+”前列腺腺体少有扩张，腺体周围少有纤维增生和少量的炎细胞浸润；“++”前列腺腺体明显增生、腺腔扩张，腺腔内有少量脱落的腺上皮与炎细胞，间质有少量纤维增生和炎细胞浸润；“+++”前列腺腺体明显增生、腺腔扩张，腺腔内有少量脱落的腺上皮与大量的炎细胞，间质有明显的纤维增生和炎细胞浸润。
从上表可看出，经Ridit检验，与空白对照组比，模型组出现显著的前列腺炎病理变化(P＜0.01)，说明造模型成功。与模型组比，高、中剂量金花葵组可显著减轻模型前列腺炎病理变化(P＜0.01)，前列康组和低剂量金花葵组可明显减轻模型前列腺炎病理变化(P＜0.05)，以高剂量金花葵对小鼠前列腺炎症的改善作用为优。
3.3.2对小鼠肾脏组织形态的影响(如图8)
各组肾脏组织形态观察：空白对照组肾小球、肾小囊、肾小管及上皮细胞均正常。模型组肾小球、肾小囊、肾小管未见明显的病理改变。前列康组肾小球基本正常，肾小囊未见异常，少数肾小管上皮细胞出现空泡变性。高剂量金花葵组肾小球、肾小囊正常；少数肾小管上皮细胞出现空泡变性。中剂量金花葵组肾小球、肾小囊及肾小管未见有明显病理改变。低剂量金花葵组肾小球、肾小囊及肾小管及上皮细胞均基本正常。
表8 金花葵对前列腺炎模型小鼠肾脏组织的影响
| 组别 | 动物数 | - | + | ++ | +++ |
| 空白对照组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
| 模型组 | 10 | 8 | 2 | 0 | 0 |
| 前列康组 | 10 | 9 | 1 | 0 | 0 |
| 高剂量金花葵花组 | 10 | 9 | 1 | 0 | 0 |
| 中剂量金花葵花组 | 10 | 10 | 0 | 0 | |
| 低剂量金花葵花组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
“-”肾小球、肾小囊、肾小管及上皮细胞均正常；“+”肾小球、肾小囊、肾小管及上皮细胞约有25％细胞出现泡变；“++”肾小球、肾小囊、肾小管及上皮细胞约有50％细胞出现泡变；“+++”肾小球、肾小囊、肾小管及上皮细胞约有75％细胞出现泡变。
从上表可看出，空白对照组肾脏组织均正常，与空白对照组比，模型组有2只大鼠肾脏出现轻度病理改变，各给药组均可使肾脏病理改变减少，前列康组合高剂量金花葵组各有1只大鼠有轻度肾脏病理变化，中、低剂量组金花葵组无肾脏病理变化。
3.3.3对小鼠睾丸组织形态的影响(如图9)
光镜下对小鼠睾丸组织观察可见：空白对照组、病理模型组、金花葵高、中、低各组睾丸曲细精管各级精原细胞、支持细胞及间质均正常
3.3.4对小鼠附睾组织形态的影响
各组小鼠附睾组织形态：空白对照组附睾的附睾管和间质均正常。模型组附睾中附睾管内含有丰富的精子，管腔周围出现明显纤维增生和炎细胞浸润。前列康组附睾管内含有丰富的精子，管腔周围有大量纤维增生和炎细胞浸润。高剂量金花葵组附睾管和间质细胞均正常。中剂量金花葵组附睾周围纤维增生明显变薄减少，炎细胞明显减少。低剂量金花葵组附睾周围可见明显纤维增生和少数炎细胞。
表9 金花葵对前列腺炎模型小鼠附睾组织的影响
| 组别 | 动物数 | - | + | ++ | +++ |
| 空白对照组 | 10 | 10 | 0 | 0 | 0 |
| 模型组 | 10 | 0 | 3 | 6 | 1 |
| 前列康组 | 10 | 2 | 6 | 2 | 0 |
| 高剂量金花葵花组 | 10 | 5 | 4 | 1 | 0 |
| 中剂量金花葵花组 | 10 | 2 | 7 | 1 | 0 |
| 低剂量金花葵花组 | 10 | 0 | 6 | 4 | 0 |
“-”附睾腺体周围无纤维增生和炎细胞浸润，均正常；“+”附睾腺体周围有少数纤维增生和炎细胞浸润；“++”附睾腺体周围有明显纤维增生和炎细胞浸润；“+++”附睾腺体周围有大量纤维增生和炎细胞浸润。
从上表可看出，经Ridit检验，与空白对照组比，模型组出现显著的附睾病理变化(P＜0.01)，说明造模型成功。与模型组比，高、中剂量金花葵组可显著减轻模型附睾病理变化(P＜0.01)，前列康组可明显减轻模型附睾病理变化(P＜0.05)，低剂量金花葵组仅有减轻附睾病理变化的趋势(P＜0.05)。
3.3.5对胸腺和脾脏组织的影响(如图10)
光镜下可见对各组小鼠的胸腺和脾脏组织形态均无明显异常变化。
4.小结
消痔灵注射液所致小鼠前列炎模型成功，可使小鼠饮水量减少，前列腺组织中白细胞数增多、卵磷脂小体密度降低，前列腺、附睾出现显著病理变化。金花葵对消痔灵注射液所致小鼠前列炎模型有好的改善作用，可增加模型小鼠饮水量，可显著减少前列腺组织中白细胞数、显著增加卵磷脂小体密度，显著减轻前列腺、附睾组织的病理变化。
Claims (4)
1.金花葵花在制备用于防治前列腺疾病的药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物为金花葵花水煎液，其制备方法为：取金花葵花原料，加水煎煮0.5-1h，然后过滤，收集滤液；向滤渣中再次加水，煎煮0.5-1h，煎煮完成后过滤，合并两次滤液，即得到金花葵花水煎液。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的金花葵花在温度为90-110℃条件下进行煎煮。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的金花葵花原料煎煮前先用温度为40-50℃的温水浸泡1-3h。
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Address after: 467500 south of East section of Huoyang Avenue, Ruzhou City, Pingdingshan City, Henan Province Patentee after: HENAN HONGYE BIOTECHNOLOGY (Group) Co.,Ltd. Address before: 467500 Zhao Zhuangkang Plaza, West Ring Road, Pingdingshan, Henan, Ruzhou Patentee before: HENAN HONGYE BIOTECHNOLOGY (Group) Co.,Ltd. |
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