CN103385950B

CN103385950B - 一种金樱子总黄酮的制备方法

Info

Publication number: CN103385950B
Application number: CN201310306633.0A
Authority: CN
Inventors: 高品一; 刘学贵; 金梅; 蒋福宇; 吴志宇; 张振学
Original assignee: Shenyang University of Chemical Technology
Current assignee: Shenyang University of Chemical Technology
Priority date: 2013-07-22
Filing date: 2013-07-22
Publication date: 2015-08-26
Anticipated expiration: 2033-07-22
Also published as: CN103385950A

Abstract

一种金樱子总黄酮的制备方法，涉及中药提取方法，包括以下步骤：将干燥的金樱子果皮粉碎后用8-16倍量的55%-75%乙醇溶解，微波提取2-5次，每次6-40分钟，趁热过滤，合并提取液减压浓缩成浸膏，将浸膏溶解拌样后上聚酰胺减压柱色谱，收集15-75%乙醇水洗脱液，减压回收溶剂，沉淀物干燥即得金樱子总黄酮。与传统方法相比该方法可以大大缩短提取时间、提高总黄酮得率和纯度。通过该方法获得的金樱子总黄酮作为制备治疗高血压以及心脑血管及其并发症的药物的用途或作为制备功能食品、保健品的原始材料的用途。

Description

一种金樱子总黄酮的制备方法

技术领域

本发明涉及一种中药提取方法，特别是涉及一种金樱子总黄酮的制备方法。

背景技术

金樱子总黄酮药用价值：金樱子( Rose Laevigata Michx. ),又名油瓶果子、糖罐子、黄茶瓶、倒挂金钩、蜂糖罐等。是蔷薇科蔷薇属植物。其根、茎、叶、果、花均可入药。广泛分布在我国的东南、西南、华中及华南等地区，是一种开发前景非常好的野生经济植物。药理研究显示金樱子果实具有抑菌、抗动脉粥样硬化、促进胃液分泌、降血脂等作用，其药理作用与黄酮类物质有关系。黄酮类化合物是一类以2-苯基色原酮为基本母核的多酚类化合物，其结构常连接甲基、酚羟基、异戊烯基、甲氧基等官能团。另外它还可以与糖结合形成苷。黄酮类物质广泛存在于各类植物中，且广泛应用于化工、食品和医药工业中。目前，国内外学者对黄酮类物质提取的研究已经成为一个热点。金樱子产量大、分布广泛、果实中又含有丰富的黄酮类化合物，所以金樱子总黄酮作为天然植物来源的药用原料或者中间体，具有重要的应用价值。

微波辅助提取通过使用少量溶剂和较少能量来支持，是一项环境友好的绿色提取技术，其作用机理有其他方法完全不同。微波辅提法是利用微波能使提取物在极短时间内温度迅速升高，从而使被提取物质从植物体系中快速分离出来。因此，微波辅提法可以提高提取速率，达到强化传质、缩短提取时间的目的。该方法具有提取率高、提取效率高、能耗小、设备简单等优点，非常适合于结构稳定的黄酮类化合物的提取。

目前金樱子总黄酮的提取方法主要以传统的水热回流法为主，该方法过程复杂，速度慢，成本高，且提取的总黄酮收率为5.3-5.6%。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金樱子总黄酮的制备方法，该方法缩短了提取时间、提高总黄酮得率和纯度，获得的金樱子总黄酮可作为制备治疗高血压以及心脑血管及其并发症的药物、或作为制备功能食品、保健品的原始材料。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种金樱子总黄酮的制备方法，所述方法包括以下过程：

A按重量百分配比制备金樱子粗提物：

将中药金樱子干燥果皮粉碎后按常规用8-16倍体积量的55%-75%乙醇水溶液浸泡20-120分钟，微波加热提取2-5次，每次6-40分钟，合并提取液，减压浓缩至浸膏，得金樱子粗提物；

B按重量百分配比制备金樱子总黄酮：

浸膏用混合溶剂溶解后按浸膏：聚酰胺=1：1-1：3快速拌样后上聚酰胺40-200目减压柱色谱，先用水冲至无色，然后用乙醇/水进行洗脱，收集15-75%乙醇水洗脱液，减压回收溶剂，沉淀物干燥即得金樱子总黄酮。

所述的一种金樱子总黄酮的制备方法，所述溶剂选自水、甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇、石油醚、正己烷中的一种或几种。

所述的一种金樱子总黄酮的制备方法，所述得到的金樱子总黄酮优选再次上大孔树脂精制1次。

所述的一种金樱子总黄酮的制备方法，所述大孔树脂优选D-101、HPD-100、HPD-600、HPD-900，HP-20，AB-8或ADS-7。

本发明的优点与效果是：

通过该方法获得的金樱子总黄酮作为制备治疗高血压以及心脑血管及其并发症的药物、或作为制备功能食品、保健品的原始材料。

附图说明

图1 微波助提法单因素乙醇浓度考察结果曲线图；

图2 微波助提法单因素提取时间考察结果曲线图；

图3 微波助提法单因素提取次数考察结果曲线图；

图4 微波助提法单因素溶媒量考察结果曲线图；

图5 传统加热提法单因素乙醇浓度考察结果曲线图；

图6 传统加热提法单因素提取时间考察结果曲线图；

图7 传统加热提法单因素提取次数考察结果曲线图；

图8 传统加热提法单因素溶媒量考察结果曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细说明。比照图1-图4微波助提法单因素考察结果曲线图，及图5-图8传统加热提法单因素考察结果曲线图举例。

实施例1

准确称取20份（4组）10g金樱子果实粉末分别置于圆底烧瓶中，分别对乙醇/水比例（45%、55%、65%、75%、85%）；微波提取时间（4min、6min、8min、10min、12min）；提取次数（1次、2次、3次、4次、5次）；溶媒量（80mL、90mL、100mL、110mL、120mL）进行单因素考察，结果见图1，从而确定L9(34)正交实验因素水平见表1.

对比例1

准确称取20份（4组）10g金樱子果实粉末分别置于圆底烧瓶中，分别对乙醇/水比例（45%、55%、65%、75%、85%）；回流提取时间（30min、60min、90min、120min、150min）；提取次数（1次、2次、3次、4次、5次）；溶媒量（80mL、90mL、100mL、110mL、120mL）进行单因素考察，结果见图2，从而确定L9(34)正交实验因素水平见表2.

实施例2

准确称取9份10g金樱子粉末分别置于圆底烧瓶中，按L9(34)正交表（表3）进行微波提取，离心后取上清液按照标准曲线的方法测定其吸光值并计算其黄酮提取率。以提取时间作为横坐标，黄酮提取率作为纵坐标。结果见表3。正交实验数据处理是采用正交实验直观分析的方法，结果表明，乙醇浓度、提取时间、提取次数、因溶媒4个量素对金樱果实总黄酮提取含量的影响的显著性为:溶媒量(D)＞乙醇浓度(A)＞提取时间(B)＞提取次数(C)。从方差分析结果(表4)可以看出：乙醇浓度(A)和溶媒量(D)对黄酮提取率有显著影响，提取时间(B)和提取次数(C)对结果影响不大。表5中b值显示，最优水平搭配为A2B2C3D2，即10倍溶媒量，用65%乙醇溶解，提取3次，每次8 min。

对比例2

准确称取9份10g金樱子粉末分别置于圆底烧瓶中，按L9(34)正交表（表5）进行传统提取，离心后取上清液按照标准曲线的方法测定其吸光值并计算其黄酮提取率。以提取时间作为横坐标，黄酮提取率作为纵坐标。结果见表5。正交实验数据处理是采用正交实验直观分析的方法，结果表明，乙醇浓度、提取时间、提取次数、因溶媒4个量素对金樱果实总黄酮提取含量的影响的显著性为:乙醇浓度(A)＞提取次数(C)＞溶媒量(D)＞提取时间(B)。从方差分析结果(表6)可以看出：乙醇浓度(A)对黄酮提取率有显著影响，而提取时间(B)，提取次数(C)和溶媒量(D)对结果影响不大。最优水平搭配为A3B3C2D2，即10倍溶媒量，用75%乙醇溶解，提取2次，每次90 min。

实施例3

取3份金樱子果实粉末，每份10g，按照微波助提法的最佳工艺条件进行提取，即按10倍溶媒量，用65%乙醇溶解，提取3次，每次8 min。将其离心后取上清液按照标准曲线的方法测定其吸光值并计算其黄酮提取率，结果见表7。

对比例3

取3份金樱子果实粉末，每份10g，按照上述传统加热提法提取金樱子果实中黄酮的最佳工艺条件进行提取，即按10倍溶媒量，用75%乙醇溶解，提取2次，每次90 min。将其离心后取上清液按照标准曲线的方法测定其吸光值并计算其黄酮提取率，结果见表7。

结果表明，两种提取方法之间存在较大的差异，微波助提取24min的黄酮含量(9.05%)就超过了水醇提取3h的效果(8.06%)，大大缩短了黄酮提取所用的提取时间，且微波助提法的黄酮提取率平均值为9.05% (RSD=1.22%),这表明该实验方案稳定，提取率较高，具有实际应用的价值。

实施例4

取10g金樱子果实粉末，按照微波助提法的最佳工艺条件进行提取，即按10倍溶媒量，用65%乙醇溶解，提取3次，每次8 min。合并提取液，减压浓缩至浸膏，得金樱子粗提物。浸膏用乙酸乙酯和乙醇1：5混合溶剂溶解后按（浸膏：聚酰胺=1：2）快速拌样后上聚酰胺（100目）减压柱色谱，先用水冲至无色，然后用乙醇/水进行洗脱，收集15-75%乙醇水洗脱液，减压回收溶剂，沉淀物干燥即得金樱子总黄酮，测得总黄酮纯度为76.5%。

实施例5

取10g金樱子果实粉末，按照微波助提法的最佳工艺条件进行提取，即按10倍溶媒量，用65%乙醇溶解，提取3次，每次8 min。合并提取液，减压浓缩至浸膏，得金樱子粗提物。浸膏用乙酸乙酯和乙醇1：5混合溶剂溶解后按（浸膏：聚酰胺=1：2）快速拌样后上聚酰胺（100目）减压柱色谱，先用水冲至无色，然后用乙醇/水进行洗脱，收集15-75%乙醇水洗脱液，减压回收至无醇味，水液上ADS-7型大孔树脂柱吸附后，依次用水、10%乙醇液、20-70%，80-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集20-70%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得金樱子总黄酮，测得总黄酮纯度为80.5%。

表1 微波助提法正交实验因素水平编码表

表2 传统加热提法正交实验因素水平编码表

表3 微波助提法正交实验结果

实验项目	A	B	C	D	黄酮提取率/(%)
						1	1	1	1	1	7.28
2	1	2	2	2	7.42
						3	1	3	3	3	4.07
4	2	1	2	3	4.07
						5	2	2	3	1	8.82
6	2	3	1	2	7.03
						7	3	1	3	2	5.65
8	3	2	1	3	2.90
						9	3	3	2	1	2.67
b	6.261	5.670	5.739	6.262
						b	6.643	6.384	4.724	6.703
b	3.745	4.595	6.186	3.684
						Rb	2.898	1.789	1.462	3.019

表4 微波助提法黄酮提取率方差分析表

因素	偏差平均和	自由度	F比	F临界值	显著性
						A	14.880	2	1.524	4.460	*
B	4.866	2	0.498	4.460
						C	3.367	2	0.345	4.460
D	15.954	2	1.634	4.460	*
						误差	39.07	8

表5 传统加热提法正交实验结果

实验项目	A	B	C	D	黄酮提取率/(%)
						1	1	1	1	1	3.75
2	1	2	2	2	4.02
						3	1	3	3	3	2.71
4	2	1	2	3	2.95
						5	2	2	3	1	2.37
6	2	3	1	2	4.55
						7	3	1	3	2	5.21
8	3	2	1	3	5.05
						9	3	3	2	1	6.45
b	3.495	3.972	4.451	4.193
						b	3.293	3.815	4.477	4.595
b	5.573	4.572	3.433	3.571
						Rb	2.280	0.757	1.044	1.024

表6 传统加热提法黄酮提取率方差分析表

因素	偏差平均和	自由度	F比	F临界值	显著性
						A	9.557	2	2.685	4.460	*
B	0.958	2	0.269	4.460
						C	2.127	2	0.598	4.460
D	1.597	2	0.449	4.460
						误差	14.24	8

表7 优化工艺条件的验证结果

实验号	传统加热提法/(%)	微波助提法/(%)
			1	8.14	9.04
2	8.09	8.94
			3	7.95	9.16
平均值	8.06	9.05
			RSD	1.21%	1.22%
提取时间/次	180min(3h)	24min

Claims

1.一种金樱子总黄酮的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下过程：取10g金樱子果实粉末，按照10倍体积量的65%乙醇溶解，微波加热提取3次，每次8min，合并提取液，减压浓缩至浸膏，得金樱子粗提物；浸膏用乙酸乙酯和乙醇1：5混合溶剂溶解后按浸膏：聚酰胺=1：2快速拌样后上聚酰胺100目减压柱色谱，先用水冲至无色，然后用乙醇/水进行洗脱，收集15-75%乙醇水洗脱液，减压回收至无醇味，水液上ADS-7型大孔树脂柱吸附后，依次用水、10%乙醇液、20-70%乙醇液、80-90%乙醇液洗脱至流出液无色，收集20-70%乙醇洗脱液，减压蒸干，即得金樱子总黄酮，测得总黄酮纯度为80.5%。