CN104459114A - 一种抗干扰单组份酶底物显色试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH值为4.0-6.0。本发明通过将抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH设置为4.0-6.0，使抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段时，具有较好的稳定性、且具有较小的显色背景；且单组份的显色液避免了酶底物显色试剂在使用之间需要将A、B液混合的步骤，减少了操作时间，提高了效率，避免了酶底物显色试剂的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了酶底物显色试剂的灵敏度。

Description

一种抗干扰单组份酶底物显色试剂
技术领域
本发明涉及酶底物显色试剂领域，具体地，涉及一种抗干扰单组份酶底物显色试剂。
背景技术
  酶底物即TMB，用于ELISA反应。底物产生一种可溶性淡蓝色的末端产物，可在370或635nm在分光光度计上读取。其适用于酶联免疫反应中的显色阶段的定量和定性分析。其检验的原理是：当标记在抗体或抗原上的酶与显色液中的酶底物、双氧水等反应，加入终止液后溶液由无色变成黄色，黄色深浅反应ELISA体系中抗原抗体结合的多少，从而判断某种抗原或抗体的多少。在通过酶标仪测度吸光值，判断免疫反应的程度。
现有市售的酶联免疫试剂盒所采用酶底物显色剂液大多为双组份，分A液和B液，使用之前需要先混匀，在使用上存在缺点一是不够方便，二是在包装材料上存在成本提高和资源浪费；三是使用中的混合过程容易造成批间质量不均一；四是还存在稳定性差、保存时间短、显色背景高、灵敏度低等的缺点。
现有技术的酶底物显色试剂及其制备方法，由A液和B液等体积混合后得到，所述A液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸0.01-0.5mol/L，磷酸氢二钠0.01-0.5mol/L，过氧化氢0.01-0.5mol/L，EDTA0.1-1mmol/L；所述B液包括酶底物、HCl和聚乙烯吡咯烷酮，所述酶底物的摩尔浓度为0.1-1mmol/L，所述HCl的摩尔浓度为0.01-0.5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.1-10%。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，以克服现有显色液显色背景高、稳定性差、灵敏度低的问题。
此外，本发明还包括上述抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用。
本发明解决上述问题所采用的技术方案是：一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml， 酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为4.0-6.0。
现有的酶底物显色试剂为双组份显色液，在使用前需要将两种组分混匀后才能进行显色测试，该过程不仅浪费时间，操作麻烦，且会导致在混合两种组分时显色液的有效成分挥发，从而导致酶底物显色试剂的灵敏度降低；且现有的显色液没有对其pH进行限定，使得现有显色液在显色过程中显色背景较高，且稳定性差；本发明将酶底物显色试剂设置为单组份，且将其显色液的pH值设置为4.0-6.0，此外，本发明的抗干扰单组份酶底物显色试剂中将传统的过氧化氢过氧化脲替换成过硼酸钠，其具有更好的氧化性。
实验证明，抗干扰单组份酶底物显色试剂在pH置为4.0-6.0之间具有较好的稳定性，且在显色过程中具有显小的显色背景。
进一步地，PH值为4.5-5.0。
实验证明，酶底物显色试剂在pH置为4.5-5.0为抗干扰单组份酶底物显色试剂稳定性最好的pH值，且具有最小的显色背景。
进一步地，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。
实验证明，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g的抗干扰单组份酶底物显色试剂具有更好的稳定性。
进一步地，酶底物的质量设置为10-30mg。
将酶底物的质量设置为10-30mg能有效的提高显色效果，提高显色的灵敏度。
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用，将所述的单组份酶底物显色试剂应用到酶联免疫试剂盒。
综上，本发明的有益效果是：
1、通过将本发明所述范围内的抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段，避免了酶底物显色试剂在使用之间需要将A、B液混合的操作步骤，简化操作流程，减少了操作时间，提高了效率，同时避免了因A、B液不同批次间的差异导致混合的显色剂的显色效果；避免了酶底物显色试剂的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了酶底物显色试剂的灵敏度
2、通过将抗干扰单组份酶底物显色试剂的pH设置为4.0-6.0，使抗干扰单组份酶底物显色试剂用于酶联免疫反应中的显色阶段时，具有较好的稳定性、且具有较小的显色背景。
具体实施方式
下面结合实施例，对发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml， 酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为4.0。
实施例2：
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml， 酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为4.5。
实施例3：
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml， 酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为5.0。
实施例4：
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠16g，过硼酸钠0.1g，甘油20ml， 酶底物5mg，10mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为6.0。
实施例5：
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸10g，磷酸氢二钠20g，过硼酸钠0.5g，甘油30ml， 酶底物40mg，30mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为5.0。
实施例6：
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷酸氢二钠18g，过硼酸钠0.2g，甘油25ml， 酶底物10mg，20mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为5.0。
实施例7：
一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷酸氢二钠18g，过硼酸钠0.2g，甘油25ml， 酶底物30mg，20mL乙醇，所述单组份酶底物显色试剂的PH值为5.0。
表1
表2
表1是抗干扰单组份显色液的性能比较数据；
表2是单独的过硼酸钠与过氧化氢、过氧化脲的吸光度值比较。
现有的酶底物显色试剂在酶联免疫反应的显色阶段的显色时间一般都是20min左右，如表1所示，本发明的实施例1至实施例7的显色时间均低于20min，故本发明的抗干扰单组份酶底物显色试剂具有更好的灵敏度，其中，实施例6、实施例7具有较短的显色时间，证明证明酶底物在10-30mg时具有更快好的灵敏度。
现有的酶底物显色试剂的的吸光度一般都在5.0左右，如表1所示，本发明的实施例1至实施例6的的吸光度均大于5.0，故本发明的抗干扰单组份酶底物显色试剂具有更好的显色效果，其中，实施例2、实施例5、实施例6、实施例7具有更高的吸光度值，证明pH在4.5-5.0之间具有问好的稳定效果，实施例6、实施例7具有最高的吸光度值，证明柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g的1000mL抗干扰单组份酶底物显色试剂具有更好的稳定性。
如表2所示，与过氧化氢、过氧化脲相比，过硼酸钠具有更好的氧化性。
本发明通过将现有的双组份酶底物显色试剂设计为抗干扰单组份酶底物显色试剂，且将酶底物显色试剂的pH值调节为4.0-6.0，pH值在该范围下的酶底物显色试剂具有更好的灵敏度、稳定性、显色效果，尤其是pH值在4.5-5.0之间。吸光度越大，在显色过程的显色背景越小，显色效果越好，故pH在4.0-6.0具有较小的显色背景，pH在4.5-5.0之间具有最小的显色背景。
如上所述，可较好的实现本发明。

Claims (5)

1.一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml， 酶底物5-40mg，10-30mL乙醇，所述抗干扰单组份酶底物显色试剂的PH值为4.0-6.0。
2.根据权利要求1所述的一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，所述PH值为4.5-5.0。
3.根据权利要求1或2所述的一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，所述柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。
4.根据权利要求1或2所述的一种抗干扰单组份酶底物显色试剂，其特征在于，所述酶底物的质量设置为10-30mg。
5.一种如权利要求1或2所述的抗干扰单组份酶底物显色试剂的应用，其特征在于，将所述的单组份酶底物显色试剂应用到酶联免疫试剂盒。
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