CN104428295A - 核转运调节剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式I的化合物，及其药学上可接受的盐，包含式I化合物的药物组合物，以及利用所述化合物、盐和组合物治疗与CRM1活性有关的各种病症的方法。

Description

核转运调节剂及其应用
相关申请
本申请要求2012年5月9日提交的美国临时申请No.61/644,802和2013年3月15日提交的美国临时申请No.61/798,188的权益。上述申请的全部教导通过引用并入本文中。
发明背景
大多数主要的人类实体和血液恶性肿瘤的细胞表现出各种致瘤蛋白、肿瘤抑制蛋白和细胞周期调节蛋白的异常细胞定位(Cronshaw等，2004，Falini等2006)。例如，某些p53突变导致定位在细胞质中而不是细胞核中。这导致正常生长调节丧失，即使肿瘤抑制蛋白功能完整。在其他肿瘤中，野生型p53隔离在细胞质中或迅速降解，再次导致它的抑制功能丧失。恢复功能性p53蛋白的适当核定位可正常化肿瘤性细胞的一些性质(Cai等，2008；Hoshino等2008；Lain等1999a；Lain等1999b；Smart等1999)，可修复癌细胞对DNA损伤剂的敏感性(Cai等，2008)，并可导致已长成的肿瘤消退(Sharpless&DePinho 2007，Xue等，2007)。对于其他肿瘤抑制蛋白例如叉头蛋白(Turner和Sullivan2008)和c-Abl(Vignari和Wang 2001)，已经获得类似数据。另外，在自身免疫性疾病的发病机理中可能涉及若干肿瘤抑制蛋白和生长调节蛋白的异常定位(Davis 2007，Nakahara 2009)。CRM1抑制在家族性癌症综合征(例如，由于失去一个p53等位基因的Li-Fraumeni综合征、BRCA1或2癌症综合征)中可以提供特别引人瞩目的效用，在所述综合征中特定的肿瘤抑制蛋白(TSP)缺失或功能障碍并且其中通过全身(或局部)施用CRM1抑制剂来增加TSP水平可以帮助恢复正常的肿瘤抑制蛋白功能。
特定的蛋白质和RNA被专门的转运分子转运入和转运出细胞核，所述转运分子如果将分子转运到细胞核中的话，它们被分类为输入蛋白，如果它们将分子转运出细胞核的话，就被分类为输出蛋白(Terry等，2007；Sorokin等2007)。被转运进出细胞核的蛋白质含有核输入/定位(NLS)或输出(NES)序列，使它们与相关的转运蛋白相互作用。染色体区域维持蛋白1(Crm1)，也称为输出蛋白-1或Xpo 1，是主要的输出蛋白。
在若干肿瘤中已经报告了Crm1的过表达，包括人类卵巢癌(Noske等，2008)、子宫颈癌(van der Watt等，2009)、胰腺癌(Huang等，2009)、肝细胞癌(Pascale等，2005)和骨肉瘤(Yao等，2009)，并且Crm1的过表达独立地与这些肿瘤类型中差的临床结果相关联。
抑制Crm1阻断了肿瘤抑制蛋白和/或生长调节蛋白例如p53、c-Abl、p21、p27、pRB、BRCA1、IkB、ICp27、E2F4、KLF5、YAP1、ZAP、KLF5、HDAC4、HDAC5或叉头蛋白(例如FOXO3a)从细胞核外流，它们与基因表达、细胞增殖、血管生成和表观遗传学有关。Crm1抑制剂已经显示出即使在存在激活性致癌信号或生长刺激信号下仍然引起癌细胞凋亡，而不伤害正常(未转化的)细胞。大多数的Crm1抑制研究利用了天然产物Crm1抑制剂细霉素B(LMB)。LMB本身对肿瘤细胞是高毒性的，但是耐受差，在动物(Roberts等，1986)和人类(Newlands等，1996)中有显著的胃肠毒性。衍生化LMB以提高类药性质产生了保持抗肿瘤活性并且在动物肿瘤模型中耐受更好的化合物(Yang等，2007，Yang等，2008，Mutka等，2009)。因此，核输出抑制剂在肿瘤性和其他增殖性病症中可具有有益的效果。然而，迄今为止，供体外和体内使用的小分子、类药Crm1抑制剂是少见的。
除了肿瘤抑制蛋白之外，Crm1还输出涉及许多炎性过程的若干关键蛋白。这些包括IkB、NF-kB、Cox-2、RXRα、Commd1、HIF1、HMGB1、FOXO、FOXP和其它。转录激活因子的核因子κB(NF-kB/rel)族(因发现它驱动免疫球蛋白κ基因表达而命名)调节涉及炎症、增殖免疫和细胞存活的各种基因的mRNA表达。在基础条件下，NF-kB的蛋白抑制剂(称为IkB)与细胞核中的NF-kB结合，并且复合物IkB-NF-kB使得NF-kB转录功能失活。响应炎性刺激，IkB从IkB-NF-kB复合物中解离，释放NF-kB并且暴露它强有力的转录活性。许多活化NF-kB的信号通过靶定IkB进行蛋白水解来这样做(IkB的磷酸化使得它“被标记”供泛素化并然后蛋白水解)。所述核IkBa-NF-kB复合物可通过Crm1被输出到细胞质，它在细胞质中解离并可重新激活NF-kB。泛素化的IkB也可以从所述NF-kB复合物解离，恢复NF-kB转录活性。通过LMB抑制人类中性粒细胞和巨噬细胞样细胞(U937)中Crm1诱导的输出，不仅导致转录失活的核IkBa-NF-kB复合物的累积，而且即使在细胞刺激下也阻止了NF-kB的初始活化(Ghosh 2008，Huang 2000)。在不同的研究中，用LMB处理抑制了肺微血管内皮细胞中IL-1β诱导的NF-kBDNA结合(NF-kB转录激活中的第一步)、IL-8表达和细胞间粘附分子表达(Walsh 2008)。COMMD1是兼具NF-kB和缺氧诱导因子1(HIF1)转录活性的另一种核抑制剂。通过抑制Crm1阻断COMMD1的核输出导致NF-kB和HIF1转录活性的抑制提高(Muller 2009)。
Crm1还介导类视黄醇X受体α(RXRα)转运。RXRα在肝脏中高度表达并且在调节胆汁酸、胆固醇、脂肪酸、类固醇以及异生物质代谢和体内稳态中发挥主要作用。在肝脏发炎期间，主要由于炎症介导的通过Crm1的RXRα核输出所致，核RXRα水平明显降低。Lep B能够防止IL-1β诱导的细胞质RXRα水平在人类肝源性细胞中的增加(Zimmerman 2006)。
Crm1-介导的核输出在NF-kB、HIF-1和RXRα信号传导中的作用提示，阻断核输出可在多个组织和器官间的许多炎性过程中可能有益，所述多个组织和器官包括脉管系统(脉管炎，动脉炎，风湿性多肌痛，动脉粥样硬化)、皮肤病的(参见上面)、风湿病的(类风湿和相关的关节炎，牛皮癣关节炎，脊椎关节病，结晶性关节病，系统性红斑狼疮，混合结缔组织病，肌炎综合征，皮肌炎，包含体肌炎，未分化结缔组织病，Sjogren氏综合征，硬皮病和重叠综合征，等等)。
CRM1抑制通过抑制/激活一系列转录因子如ICp27、E2F4、KLF5、YAP1、ZAP来影响基因表达。
Crm1抑制在许多皮肤病综合征间具有潜在的治疗效果，包括炎性皮肤病(异位性皮炎，过敏性皮炎，化学性皮炎，牛皮癣)、晒伤(紫外线/紫外损伤)和感染。CRM1抑制，用LMB研究得最好，显示了对正常角化细胞的效果甚微，而对受到紫外、TNFa或其他炎性刺激的角化细胞发挥抗炎活性(Kobayashi&Shinkai 2005，Kannan&Jaiswal2006)。Crm1抑制还上调NRF2(核因子红细胞相关因子2)活性，其保护角化细胞(Schafer等，2010，Kannan&Jaiswal 2006)和其他细胞类型(Wang等，2009)免受氧化性损伤。LMB诱导感染了致癌人乳头瘤病毒(HPV)株例如HPV16的角化细胞的凋亡，但不诱导未感染的角化细胞的凋亡(Jolly等，2009)。
Crm1还介导关键神经保护蛋白的转运，这在神经变性疾病包括帕金森氏(Parkinson)病(PD)、阿尔茨海默氏(Alzheimer)病和肌萎缩侧索硬化中可能是有用的。例如，(1)迫使核保留关键神经保护性调节蛋白例如NRF2(Wang 2009)、FOXA2(Kittappa等，2007)，停在神经元细胞中，和/或通过(2)通过将IκB隔离到胶质细胞的细胞核中而抑制NFκB转录活性，Crm1抑制可以减慢或防止在这些病症中存在的神经元细胞死亡。还有证据将异常胶质细胞增殖与CRM1水平或CR1功能异常联系起来(Shen 2008)。
主要通过CRM1介导的完整的核输出也是许多病毒完整成熟所需要的。在它们的生命周期中涉及核输出和/或CRM1本身的病毒包括人类免疫缺陷性病毒(HIV)、腺病毒、猿1型逆转录病毒、博纳病(Bornadisease)病毒、流行性感冒(通常的株以及H1N1和禽类H5N1株)、乙型肝炎(HBV)和丙型肝炎(HCV)病毒、人乳头瘤病毒(HPV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、Dungee、严重的急性呼吸综合征冠状病毒、黄热病毒、西尼罗河病毒、单纯疱疹病毒(HSV)、巨细胞病毒(CMV)、和Merkel细胞多瘤病毒(MCV)(Bhuvanakantham 2010，Cohen 2010，Whittaker 1998)。预期将来将发现依靠完整的核输出的其他病毒感染。
HIV-1Rev蛋白，其穿过核仁通行并在细胞核和细胞质之间穿梭，促进含有Rev应答元件(RRE)RNA的未剪接和单剪接HIV转录物通过所述CRM1输出途径输出。使用CRM1抑制剂例如LepB或PKF050-638抑制Rev介导的RNA转运可阻遏所述HIV-1转录过程，抑制新的HIV-1病毒粒子产生，并从而降低HIV-1水平(Pollard 1998，Daelemans 2002)。
登革病毒(DENV)是常见的虫媒传播病毒病登革热(DF)和它的更严重并可能致死的登革出血热(DHF)的病原体。DHF似乎是对DENV的过度旺盛的炎性响应的结果。NS5是DENV的最大和最保守的蛋白质。CRM1调节NS从所述细胞核转运到细胞质，NS5功能的大多数在细胞质中介导。抑制CRM1介导的NS5输出导致病毒产生动力学的改变并降低炎性趋化因子白介素-8(IL-8)的诱导，为由DENV和其他医学重要的黄热病病毒包括丙型肝炎病毒引起的疾病提供了新的途径(Rawlinson 2009)。
利用CRM1离开细胞核的其他病毒编码RNA结合蛋白包括1型HSV外被蛋白(VP13/14，或hUL47)、人类CMV蛋白pp65、SARS冠状病毒ORF 3b蛋白、和RSV基质(M)蛋白(Williams 2008，Sanchez2007，Freundt 2009，Ghildyal 2009)。
有意思的是，这些病毒中许多与特定类型的人类癌症有关，包括由于长期HBV或HCV感染引起的肝细胞癌(HCC)、由于HPV引起的子宫颈癌、和与MCV有关的Merkel细胞癌。CRM1抑制剂因此可以对病毒感染过程以及由于这些病毒的肿瘤转化过程均具有有益的效果。
CRM1控制所述核定位，并因此控制多种DNA代谢酶包括组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)、组蛋白乙酰基转移酶(HAT)、和组蛋白甲基转移酶(HMT)的活性。已经证明用不可逆CRM1抑制剂抑制心肌细胞肥大，并且认为与已知抑制肥大遗传程序的酶——HDAC5的核保留(和活化)有关系(Monovich等，2009)。因此，CRM1抑制在肥大性综合征、包括某些形式的充血性心力衰竭和肥厚型心肌病中可能具有有益的效果。
CRM1还与其他病症有关系。Leber氏病(以视黄醛神经节细胞退化和视觉丧失为特征的遗传性病症)与CRM1转换失活有关(Gupta N2008)。还有证据将神经变性病与核转运异常联系起来。
鉴于上述，希望发现调节核转运的化合物。
发明内容
本发明涉及可用作核转运调节剂的化合物及其药学上可接受的盐，包含本发明化合物的药学上可接受的组合物和利用所述组合物治疗各种病症的方法。现在已经发现，本发明的核转运调节剂、及其药学上可接受的盐和/或组合物提供了理想的体内暴露，如通过AUC在小鼠中测量的，同时与其他调节剂相比，表现出较低的脑渗透水平。本发明的化合物具有下面的通式I：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文中的定义和描述。
本发明的化合物及其药学上可接受的组合物可用于治疗与核转运不当引发的异常细胞应答有关的各种疾病、病症或病状。这样的疾病、病症或病状包括本文中描述的那些。
本发明提供的化合物还可用于生物和病理现象中核转运调节的研究；由这样的激酶介导的细胞内信号转导途径的研究；和新的核转运调节剂的比较评价。
附图说明
前述事项从下面本发明的示例性实施方式的更具体描述中将是显而易见的。
图1是平均肿瘤体积作为时间的函数的图，并显示了在用介质、80mg/kg环磷酰胺、15mg/kg化合物2或7.5mg/kg化合物2处理的小鼠上Z-138异种移植肿瘤的组平均体积(误差棒表示每组的SEM)。
图2是平均肿瘤体积作为时间的函数的图，并显示了在用介质、5mg/kg顺铂、110mg/kg化合物2或5mg/kg化合物2处理的小鼠上A549异种移植肿瘤的组平均体积(误差棒表示每组的SEM)。
图3A是总关节炎评分作为时间的函数的图，并显示了用介质、地塞米松、4mg/kg化合物2或7.5mg/kg化合物2处理的抗胶原蛋白抗体诱导的雄性BALB/c关节炎小鼠在12-天观察期内的临床关节炎评分(￥＝地塞米松处理组与介质处理组有显著差异；#＝7.5mg/kg化合物2处理组与介质处理组有显著差异；化合物2处理组与介质处理组有显著差异)。
图3B是平均后爪作为时间的函数的图，并显示了用介质、地塞米松、4mg/kg化合物2或7.5mg/kg化合物2处理的抗胶原蛋白抗体诱导的雄性BALB/c关节炎小鼠在12-天观察期内的组平均后爪厚度(￥＝地塞米松处理组与介质处理组有显著差异；#＝7.5mg/kg化合物2处理组与介质处理组有显著差异；化合物2处理组与介质处理组有显著差异)。
图4A是关节肿胀作为时间的函数的图，并显示了在未处理大鼠和根据CIA模型处理的大鼠、用阳性对照或用化合物2处理的大鼠中按0-4等级测量的关节肿胀。
图4B是随时间变化的临床评分图，并显示了未处理大鼠和根据CIA模型处理的大鼠、用阳性对照或用化合物2处理的大鼠的临床关节炎评分。
图5是在CIA模型中每个处理组的代表性图像，并显示了未处理大鼠和根据所述模型处理的大鼠、用阳性对照或用化合物2处理的大鼠的后爪的组织病理。
图6A是耳厚度作为时间的函数的图，并显示了用介质、PMA和介质、PMA和化合物2或PMA和培他米松处理的雌性BALB/c小鼠的组平均左耳厚度。
图6B是耳厚度作为时间的函数的图，并显示了用介质、PMA和介质、PMA和化合物2或PMA和培他米松处理的雌性BALB/c小鼠的组平均右耳厚度。
图6C是疾病活动性作为时间的函数的图，并显示了用介质、PMA和介质、PMA和化合物2或PMA和培他米松处理的雌性BALB/c小鼠的组平均左耳疾病活动性。
图6D是疾病活动性作为时间的函数的图，并显示了用介质、PMA和介质、PMA和化合物2或PMA和培他米松处理的雌性BALB/c小鼠的组平均右耳疾病活动性。
图7A是疾病活动性指数作为时间的函数的图，并显示了在施用IMQ之前用介质、IMQ和介质、IMQ和1μM化合物2、或IMQ和10mg/kg环磷酰胺处理的雄性BALB/c小鼠的疾病活动性。
图7B是疾病活动性指数作为时间的函数的图，并显示了在施用IMQ之后用介质、IMQ和介质、IMQ和1μM化合物2、或IMQ和10mg/kg环磷酰胺处理的雄性BALB/c小鼠的疾病活动性。
图8A是累计食物摄入作为时间的函数的图，并显示了用介质(VEH)、1.5mg/kg化合物或3.0mg/kg化合物2处理的瘦Zucker大鼠和肥胖Zucker大鼠的累计食物摄入。
图8B是平均食物摄入作为时间的函数的图，并显示了用介质(VEH)、1.5mg/kg化合物或3.0mg/kg化合物2处理的瘦Zucker大鼠和肥胖Zucker大鼠的平均食物摄入。
图9是体重改变百分比作为时间的函数的柱状图，并显示了用介质(VEH)、1.5mg/kg化合物或3.0mg/kg化合物2处理的瘦Zucker大鼠和肥胖Zucker大鼠在实验的处理期(研究第10和17天)期间和在清除期(研究第24天)期间的体重改变百分比。
图10A是累计食物摄入作为时间的函数的图，并显示了喂饲正常饲料的大鼠以及喂饲高脂膳食和用介质、1.5mg/kg化合物或3.0mg/kg化合物2处理的大鼠，在研究的基线、处理和清除阶段期间的累计食物摄入。
图10B是平均体重作为时间的函数的图，并显示了喂饲正常饲料的大鼠以及喂饲高脂膳食和用介质、1.5mg/kg化合物或3.0mg/kg化合物2处理的大鼠，在研究的基线、处理和清除阶段期间的平均体重。
图11是体重改变百分比作为时间的函数的柱状图，并显示了喂饲正常饲料的大鼠以及喂饲高脂膳食和用介质、1.5mg/kg化合物或3.0mg/kg化合物2处理的的大鼠的体重改变百分比。
图12A是在各种条件、包括剔除条件下的Nrf2表达图。
图12B是在各种条件、包括剔除条件下的NQO1表达图。
图12C是在各种条件、包括剔除条件下的EPHX1表达图。
图13A是COX-2mRNA表达的倍数改变柱状图，并显示了化合物1不影响COX-2转录。未处理的海拉细胞(HeLa cells)(对照)通过qRT-PCR的COX-2mRNA表达分析与用10μM化合物1、20ng/mlTNFα、或10μM化合物1+20ng/ml TNFα处理的海拉细胞进行比较。
图13B是COX-2蛋白表达强度的图，并显示了化合物1抑制TNFα-诱导的COX-2蛋白表达。
图14A是用DMSO、20ng/mL TNFα、或化合物1+20ng/mL TNFα处理的细胞的图像，并显示了各种炎症相关CRM1货物蛋白(cargoprotein)的定位。
图14B是用DMSO、20ng/mL TNFα、或化合物1+20ng/mL TNFα处理的细胞的图像，并显示了IκB、NFκB、NRF2、PPARγ和RXRα的定位。
图15A是在MWM试验中达到平台的潜伏期随时间变化的图，并显示了在所述MWM试验的采集阶段期间，假处理、对照处理、黄体酮处理和不同剂量的化合物1对小鼠达到所述平台的潜伏期的影响(数据表示为平均值±SEM)。
图15B是细胞因子浓度的图，并显示了大鼠血浆中几种细胞因子的浓度。
图15C是接受假病变(假性)、CCI+介质(对照)、或CCI+化合物1(6mg/kg)的动物的全脑照片，并显示了在振动切片机切片之前定性目测检查全脑的结果。所述检查指出假性动物都没有(4个中的0个)呈现对背内侧皮质组织的损伤。全然相反，全部四个CCI对照呈现出局限于该皮质区域的严重双侧损伤。接受化合物1的CCI动物显示范围从中等到最小的损伤。要注意，在化合物1组中表现出最严重损伤的大脑比CCI对照组中的所有大脑都较不显著。
图15D是假处理(假性)、CCI+介质处理(对照)和CCI+化合物1处理(KPT)动物的NeuN标记的背侧皮质区和腹侧皮质区的低倍显微照片。
图15E是在假处理(假性)、CCI+介质处理(对照)和CCI+化合物1处理(KPT)动物中免疫荧光标记的大鼠IgG和TNFα的显微照片。
图16A是临床评分随时间变化的图，并显示了未处理的雌性Lewis大鼠、对照雌性关节炎Lewis大鼠、或用化合物2处理的雌性关节炎Lewis大鼠的临床关节炎评分。
图16B是关节肿胀随时间变化的图，并显示了在未处理的雌性Lewis大鼠、对照雌性关节炎Lewis大鼠、或用化合物2处理的雌性关节炎Lewis大鼠中以0-4等级测量的关节肿胀。
图17A是未处理的雌性Lewis大鼠、对照雌性关节炎Lewis大鼠、和用化合物2处理的雌性关节炎Lewis大鼠跗骨的骨矿物质密度(BMD)图。
图17B是通过三维微CT成像显现的未处理的雌性Lewis大鼠、对照雌性关节炎Lewis大鼠、或用化合物2处理的雌性关节炎Lewis大鼠的后爪。
图17C是滑液中IL-1β的浓度随时间变化的图，并显示了在2号CIA研究的第21和27天从A组(未处理)、B组(模型)和C组(化合物2，5mg/kg，QoD)收集的滑液中IL-1β的浓度。
图17D是滑液中IL-6的浓度随时间变化的图，并显示了在2号CIA研究的第21和27天从A组(未处理)、B组(模型)和C组(化合物2，5mg/kg，QoD)收集的滑液中IL-6的浓度。
图17E是滑液中MCP-1的浓度随时间变化的图，并显示了在2号CIA研究的第21和27天从A组(未处理)、B组(模型)和C组(化合物2，5mg/kg，QoD)收集的滑液中MCP-1的浓度。
图17F是滑液中CRP的浓度随时间变化的图，并显示了在2号CIA研究的第21和27天从A组(未处理)、B组(模型)和C组(化合物2，5mg/kg，QoD)收集的滑液中CRP的浓度。
图17G是血浆中IL-1β的浓度随时间变化的图，并显示了在2号CIA研究的第15、21和27天从A组(未处理)、B组(模型)和C组(化合物2，5mg/kg，QoD)收集的血浆样本中IL-1β的浓度。
图18A是本文中描述的雌性小鼠的MOG诱导的EAE鼠模型的示意图。
图18B是临床评分随研究日的变化的图，并显示了在本文中描述的MOG诱导的EAE鼠模型中介质处理、地塞米松处理和化合物1处理对雌性小鼠临床评分的影响。
图19是用化合物1或它的适宜介质局部或全身处理的伤口照片，并显示了在创伤后第5天进行的伤口形态评价的结果。
具体实施方式
本发明的化合物
第一种实施方式提供了式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自氢和C1-C4烷基；
R2选自O和S；和
R3选自-N(R4)-(C3-C6环烷基)、-C1-C6烷基、-(C0-C4亚烷基)-杂环基、和-(C0-C4亚烷基)-杂芳基，其中R3的任何烷基、亚烷基、杂环基或杂芳基部分被任选地和独立地取代；并且
R4选自氢和C1-C4烷基。
在第一种实施方式的第一个方面，R1选自氢和甲基。其余变量的值如第一种实施方式所述。
在第一种实施方式的第二个方面，R1是氢。其余变量的值如第一种实施方式所述。
在第一种实施方式的第三个方面，R2是O。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一或第二个方面所述。
在第一种实施方式的第四个方面，R2是S。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第三个方面所述。
在第一种实施方式的第五个方面，R4是氢。
在第一种实施方式的第六个方面，R3选自-N(R4)-(C3-C6环烷基)、-C3-C6烷基、-(C0-C1亚烷基)-杂环基、和-(C0-C4亚烷基)-杂芳基，其中R3的任何烷基和亚烷基部分任选被-N(R5)2取代，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基；R3的任何杂环基和杂芳基部分在环中包含至少一个氮原子；并且R3的任何杂环基和杂芳基部分任选被C1-C4烷基取代。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第一种实施方式的第七个方面，R3选自-C(CH3)3、-CH(NH2)-CH(CH3)2、-NH-环丙基、-(CH2)0-1-吡嗪基、哌啶基、羟基哌啶基、N-甲基哌啶基、-CH2-吗啉-4-基、和甲基吡唑基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第一种实施方式的第八个方面，R3选自-C(CH3)3、-CH(NH2)-CH(CH3)2、-NH-环丙基、-(CH2)0-1-吡嗪-2-基、哌啶-3-基、-CH2-吗啉-4-基、和5-甲基-1-H-吡唑-4-基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第一种实施方式的第九个方面，R3选自-C(CH3)3、-NH-环丙基、-CH2-吡嗪-2-基、-吡嗪-2-基、-CH2-吗啉-4-基、和5-甲基-1-H-吡唑-4-基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
第二种实施方式是式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐，其中R3选自-N(R4)-(C3-C6环烷基)、-C3-C6烷基、-(C0-C1亚烷基)-杂环基、和-(C0-C1亚烷基)-杂芳基，其中：
R3的任何烷基或亚烷基部分任选被-N(R5)2取代，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基；
R3的任何杂环基和杂芳基部分在环中包含至少一个氮原子；和
R3的任何杂环基和杂芳基部分任选被C1-C4烷基取代。
在第二种实施方式的第一个方面，R3选自-C(CH3)3、-CH(NH2)-CH(CH3)2、-NH-环丙基、-(CH2)0-1-吡嗪基、哌啶基、羟基哌啶基、N-甲基哌啶基、-CH2-吗啉-4-基、和甲基吡唑基。
在第二种实施方式的第二个方面，R3选自-C(CH3)3、-CH(NH2)-CH(CH3)2、-NH-环丙基、-(CH2)0-1-吡嗪-2-基、哌啶-3-基、-CH2-吗啉-4-基、和5-甲基-1-H-吡唑-4-基。
在第二种实施方式的第三个方面，R3选自-C(CH3)3、-NH-环丙基、-CH2-吡嗪-2-基、-吡嗪-2-基、-CH2-吗啉-4-基、和5-甲基-1-H-吡唑-4-基。
第三种实施方式提供式I的化合物、或其药学上可接受的盐，其中R3选自-N(R4)-(C3-C6环烷基)、-C3-C6烷基、-(C0-C1亚烷基)-杂环基、和-(C0-C1亚烷基)-杂芳基，其中：
任何R3的任何烷基或亚烷基部分任选地和独立地被选自氧代和-N(R5)2的一个或多个取代基取代，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基；
R3的任何杂环基部分在环中包含至少一个氮原子，并任选被选自C1-C4烷基和氧代的一个或多个取代基取代；和
R3的任何杂芳基部分在环中包含至少一个氮原子并任选被一个或多个C1-C4烷基取代。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第三种实施方式的第一个方面，R3是-(C0-C1亚烷基)-杂环基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第三种实施方式的第二个方面，R3是-(C0-C1亚烷基)-杂环基，其中所述杂环基选自吡嗪基、哌啶基、吗啉基和吡唑基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第三种实施方式的第三个方面，R3是-(C0-C1亚烷基)-杂环基，其中所述杂环基是吗啉基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第三种实施方式的第四个方面，R3是-(C1亚烷基)-杂环基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
在第三种实施方式的第五个方面，R3是-(C1亚烷基)-吗啉基。其余变量的值如第一种实施方式、或其第一至第五个方面所述。
示例性的式I化合物在表1中列举。
表1 示例性的式I化合物
在一些实施方式中，本发明的化合物选自化合物1至11的任何一种。在这些实施方式的一个方面，所述化合物选自化合物1、2、3、4、8和11的任何一种。
药代动力学(PK)在药物发现和发展中发挥着日益增加的作用。药代动力学是药物吸收、分布、代谢和/或排泄的时间过程的定量研究。当施用药物时，药物迅速从它的施用位置分配到全身血液循环中。治疗剂分布程度的一个度量是血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)，计算到最后测量的浓度(AUCt)并外推到无限(AUCInf)。AUC因此是定量药物暴露的常用度量标准。
一般而言，治疗剂的暴露越高，所述治疗剂的作用越大。然而，治疗剂的高度暴露可对某些组织例如脑具有有害效应。虽然由内皮细胞之间的紧密连接构成的保护网络，血脑屏障(BBB)，限制了亲水和/或大的分子的扩散，但具有高AUC的药物仍然能够渗透BBB和/或脑脊液。这样的渗透经常是不希望的并可导致不想要的副作用。当前药物发现工作的目标部分地在于在最大化药物暴露(即AUC)同时最小化大脑渗透之间取得平衡。
脑血比(B:P)是量化治疗剂在脑组织中与在循环中的相对分布的这样一种方法。这样的比率提供了给定治疗剂的脑渗透的一个指示。当靶向定位在中枢神经系统(CNS)、包括脑和脑脊液中的疾病时，高的脑血比是优选的。然而，对于非CNS治疗剂而言，低的脑血比通常是优选的，以最小化脑渗透从而避免潜在的副作用。因此，为了避免在脑和CNS组织中不想要的治疗剂蓄积，低脑血比是优选的。
如实施例部分更详细地陈述的，本发明的化合物与其他核转运抑制剂、例如2011年3月5日提交并在2011年11月10日作为US2009/0275607公布的共同拥有的美国专利申请No.13/041,377中公开的那些相比，显示出较高的AUC和/或较低的B:P。在一些实施方式中，本发明提供了式I的化合物，其中所述化合物当在小鼠中以10mg/kg口服施用时具有<1μM(小于1μM)的核输出活性，大于约3500的AUCInf；并且B:P小于约2.5。
在审查以下的发明详细说明后，本发明的新特征将变得对本领域技术人员显而易见。然而，应该理解，所提供的本发明详细说明和具体实例，虽然指示了本发明的某些实施方式，但只供说明的目的，因为根据本发明的详细说明和随后的权利要求，在本发明的精神和范围内的各种改变和修改对本领域技术人员将变得显而易见。
化合物和定义
本发明的化合物包括以上大致描述的那些，并通过本文中公开的类别、亚类和种类进一步说明。在本文中使用时，除非另外指出，应该运用以下定义。对于本发明而言，化学元素根据CAS版本的Handbookof Chemistry and Physics第75版的元素周期表来确定。另外，有机化学的一般原理描述于“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，UniversityScience Books，Sausalito：1999，和“March’s Advanced OrganicChemistry”，第5版，Smith，M.B.和March，J.编著，John Wiley&Sons，New York：2001中，其全部内容通过引用在此并入。
除非在本说明书内另外规定，本说明书中使用的命名法则总体遵循1979年牛津Pergamon Press的Nomenclature of Organic Chemistry，A、B、C、D、E、F和H章节，其以其示例性化学结构名称和命名化学结构的规则通过引用并入本文中。任选地，化合物的名称可以利用化学命名程序产生：ACD/ChemSketch，5.09版/2001年9月，Advanced ChemistryDevelopment,Inc.，加拿大多伦多。
本发明的化合物可以具有非对称中心、手性轴和手性面(例如，如：E.L.Eliel和S.H.Wilen，Stereo-chemistry of Carbon Compounds，John Wiley&Sons，New York，1994，1119-1190页所述)，并作为消旋体、消旋混合物和作为各种非对映体或对映体存在，本发明包括所有可能的异构体及其混合物，包括光学异构体。
术语“卤代”或“卤素”在本文中使用时是指卤素，并包括，例如但不限于，放射性和非放射性两种形式的氟、氯、溴、碘等等。
术语“烷基”在本文中使用时，除非另有指示，是指直链或支链的饱和一价烃基，通常是C1-C12，优选C1-C6。因此，“C1-C6烷基”是指具有一至六个碳原子的直链或支链饱和一价烃基(例如，1、2、3、4、5或6)。烷基的例子包括但不限于，甲基、乙基、丙基、异丙基和叔丁基。
应理解，本发明的化合物上的取代基和取代型式可由本领域普通技术人员选择，以提供化学稳定的而且可容易地通过本领域已知的技术、以及下面陈述的那些方法合成的化合物。一般而言，术语“取代”，无论其前面是否存在术语“任选”，都是指所指明部分的一个或多个氢被合适的取代基替代。除非另有指示，当在任何给定结构中多于一个位置可被多于一个选自指定基团的取代基取代时，“任选取代的基团”可在所述基团的每个可取代位置处具有合适的取代基，所述取代基在每个位置处可以相同或不同。或者，“任选取代的基团”可以是未取代的。
本发明设想的取代基组合优选是导致形成稳定的或化学可行的化合物的那些取代基。如果取代基本身被多于一个基团取代，应理解这些多个基团可以在相同的碳原子上或不同的碳原子上，只要产生稳定的结构即可。术语“稳定的”，在本文中使用时，是指当经受条件时基本上不改变的化合物，从而允许它们的生产、检测，和在某些实施方式中，它们的回收、纯化、和针对本文中公开的一种或多种目的的应用。
在“任选取代的基团”的可取代碳原子上合适的单价取代基独立地是卤素；–(CH2)0–4R○；–(CH2)0–4OR○；
-O(CH2)0-4R○，-O–(CH2)0–4C(O)OR○；–(CH2)0–4CH(OR○)2；
–(CH2)0–4SR○；–(CH2)0–4Ph，其可以用R○取代；–(CH2)0–4O(CH2)0–1Ph，其可以用R○取代；–CH＝CHPh，其可以用R○取代；–(CH2)0–4O(CH2)0–1-吡啶基，其可以用R○取代；–NO2；–CN；–N3；-(CH2)0–4N(R○)2；
–(CH2)0–4N(R○)C(O)R○；
–N(R○)C(S)R○；-(CH2)0–4N(R○)C(O)NR○ 2；-N(R○)C(S)NR○ 2；
–(CH2)0–4N(R○)C(O)OR○；-N(R○)N(R○)C(O)R○；-N(R○)N(R○)C(O)NR○ 2；
-N(R○)N(R○)C(O)OR○；–(CH2)0–4C(O)R○；–C(S)R○；-(CH2)0-4C(O)OR○；
–(CH2)0–4C(O)SR○；-(CH2)0–4C(O)OSiR○ 3；
–(CH2)0–4OC(O)R○；-OC(O)(CH2)0–4SR–，SC(S)SR○；
–(CH2)0–4SC(O)R○；–(CH2)0–4C(O)NR○ 2；–C(S)NR○ 2；-C(S)SR○；
–SC(S)SR○，-(CH2)0–4OC(O)NR○ 2；-C(O)N(OR○)R○；
–C(O)C(O)R○；-C(O)CH2C(O)R○；–C(NOR○)R○；-(CH2)0–4SSR○；
–(CH2)0–4S(O)2R○；–(CH2)0–4S(O)2OR○；-(CH2)0–4OS(O)2R○；
–S(O)2NR○ 2；-(CH2)0–4S(O)R○；-N(R○)S(O)2NR○ 2；
–N(R○)S(O)2R○；-N(OR○)R○；–C(NH)NR○ 2；
–P(O)2R○；-P(O)R○ 2；-OP(O)R○ 2；–OP(O)(OR○)2；SiR○ 3；–(C1–4直链或支链亚烷基)O–N(R○)2；或–(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)O-N(R○)2，其中每个R○可以如下所定义被取代并且独立地是氢、C1–6脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph、-CH2-(5-6元杂芳基环)、或5–6元饱和的、部分不饱和的、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环，或者，尽管有以上定义，但两个独立存在的R○与它们的居间原子合起来，形成3–12元的饱和、部分不饱和、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基单环或双环，其可以如下面所定义被取代。
R○(或由两个独立存在的R○与它们的居间原子一起形成的环)上的合适的单价取代基，独立地是卤素，-(CH2)0-2R●、–(卤代R●)、–(CH2)0–2OH、–(CH2)0–2OR●、–(CH2)0–2CH(OR●)2；-O(卤代R●)、–CN、–N3、–(CH2)0–2C(O)R●、–(CH2)0–2C(O)OH、–(CH2)0–2C(O)OR●、–(CH2)0–2SR●、–(CH2)0–2SH、–(CH2)0–2NH2、–(CH2)0–2NHR●、–(CH2)0–2NR● 2、–NO2、–SiR● 3、–OSiR● 3、-C(O)SR●–(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)OR●、或–SSR●，其中每个R●是未取代的，或在前面有“卤代”的情况下是只被一种或多种卤素取代的，并且独立地选自C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph、或5–6元饱和的、部分不饱和的、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环。R○的饱和碳原子上合适的二价取代基包括＝O和＝S。
“任选取代的基团”的饱和碳原子上合适的二价取代基包括以下：＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、–O(C(R* 2))2–3O–、和–S(C(R* 2))2–3S–，其中每个独立存在的R*选自氢、可以如下面所定义被取代的C1–6脂族基、或未取代的5–6元饱和的、部分不饱和的、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环。与“任选取代的”基团的连位可取代碳结合的合适的二价取代基包括：–O(CR* 2)2–3O–，其中每个独立存在的R*选自氢、可以如下面所定义被取代的C1–6脂族基、或未取代的5–6元饱和的、部分不饱和的、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环。
R*–的脂族基团上合适的取代基包括卤素、R●、-(卤代R●)、-OH、–OR●、–O(卤代R●)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR●、–NH2、–NHR●、–NR● 2、和–NO2，其中每个R●是未取代的，或在前面有“卤代”的情况下只被一种或多种卤素取代，并且独立地是C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph、或5–6元饱和的、部分不饱和的、或具有独立地选自氮、氧和硫的0–4个杂原子的芳基环。
“任选取代的基团”的可取代氮上的合适取代基包括– 其中每个独立地是氢、可以如下面所定义被取代的C1–6脂族基、未取代的–OPh、或未取代的5–6元饱和的、部分不饱和的、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基环，或者，尽管有以上定义，但两个独立存在的与它们的居间原子合起来，形成未取代的3–12元饱和的、部分不饱和的、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基单环或双环。
的脂族基团上合适的取代基独立地是卤素、–R●、-(卤代R●)、–OH、–OR●、–O(卤代R●)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR●、–NH2、–NHR●、–NR● 2、或-NO2，其中每个R●是未取代的，或在前面有“卤代”的情况下只被一种或多种卤素取代，并且独立地是C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph、或5–6元饱和的、部分不饱和的、或具有0–4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的芳基的环。
杂芳基上优选的取代基可选自OH、SH、硝基、卤素、氨基、氰基、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12卤代烷基、C1-C12卤代烷氧基和C1-C12烷硫基(alkyl sulfanyl)。烷基、亚烷基和杂环基上优选的取代基包括在杂芳基和氧代基上的优选取代基。在一种实施方式中，烷基、亚烷基、杂环基或杂芳基上的取代基是具有式-N(R5)2的氨基，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基。
烷基、亚烷基、杂环基和杂芳基上的取代基可以选自-OH、-SH、硝基、卤素、氨基、氰基、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12卤代烷基、C1-C12卤代烷氧基和C1-C12烷硫基。在一种实施方式中，所述取代基是具有式-N(R5)2的氨基，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基。
术语“环烷基”，在本文中使用时，是指饱和环烃，即其中所有环原子是碳的化合物。环烷基的例子包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。在一些实施方式中，环烷基可任选被选自-OH、-SH、卤素、氨基、硝基、氰基、C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12卤代烷基和C1-C12卤代烷氧基的一种或多种取代基取代。
术语“杂芳基”，在本文中使用时，是指含有一个或多个杂原子(O，S，或N)的芳族基团。杂芳基是单环或多环的，例如单环杂芳基环与一个或多个碳环芳族基团或其他单环杂芳基基团稠合。本发明的杂芳基还可以包括被一个或多个氧代部分取代的环系。杂芳基的例子包括但不限于，吡啶基、哒嗪基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲哚嗪基(indolizinyl)、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、嘌呤基、噁二唑基、噻唑基、噻二唑基、呋吖基、苯并呋吖基、苯并噻吩基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基、二氢喹啉基、四氢喹啉基、二氢异喹啉基、四氢异喹啉基、苯并呋喃基、呋喃吡啶基、吡咯并嘧啶基、和氮杂吲哚基。
前述杂芳基基团可以是C-连接的或N-连接的(在可能这样的情况下)。例如，源自于吡咯的基团可以是吡咯-1-基(N-连接的)或吡咯-3-基(C-连接的)。
“杂环基”是指含有1、2、3、4或5个独立地选自N、O或S的杂原子的环状4-13元饱和或不饱和脂族环。当一个杂原子是S时，它可以任选是单或二氧化的(即-S(O)-或-S(O)2-)。所述杂环基可以是单环、稠合双环、桥接双环、螺环双环或多环。
“氧代”是指＝O。
在本文中使用时，术语“烯基”是指具有2至12个碳原子并具有至少一个碳-碳双键的饱和直链或支链非环状烃。烯基可以任选被一个或多个取代基取代。
在本文中使用时，术语“炔基”是指具有2至12个碳原子并具有至少一个碳-碳三键的饱和直链或支链非环状烃。炔基可以任选被一个或多个取代基取代。
在本文中使用时，术语“亚烷基”是指与化合物的其余部分具有两个连接点的烷基。亚烷基的非限制性例子包括亚甲基(-CH2-)、亚乙基(-CH2CH2-)、正亚丙基(-CH2CH2CH2-)、异亚丙基(-CH2CH(CH3)-)等等。亚烷基可以任选被一个或多个取代基取代。
术语“卤代烷基”，在本文中使用时，包括被一个或多个F、Cl、Br或I取代的烷基，其中烷基在上文定义。
术语“烷氧基”，在本文中使用时，是指“烷基-O-”基团，其中烷基在上文定义。烷氧基的例子包括甲氧基或乙氧基。
在本文中使用时，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内，适合与人类和低等动物接触而没有过度的毒性、刺激、变态反应等并且与合理的效益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域公知的。例如，S.M.Berge等.，在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1–19中详细描述了药学上可接受的盐，所述文献通过引用并入本文中。本发明化合物的药学上可接受的盐包括源自于合适的无机和有机酸和碱的那些盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的例子是与无机酸例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸例如乙酸、三氟乙酸(2,2,2-三氟乙酸)、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸或通过使用本领域中采用的其他方法例如离子交换而形成的氨基的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2–羟基–乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2–萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3–苯基丙酸盐、磷酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐(22,2-三氟乙酸盐)、十一烷酸盐、戊酸盐等等。
源自于适当的碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1–4烷基)4盐。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等等。当适当时，其他药学上可接受的盐包括利用反离子例如卤根、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵、和胺阳离子。
除非另有说明，本文中描述的结构还意味着包括所述结构的所有异构(例如，对映、非对映和几何(或构象))形式；例如，对于每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体、以及Z和E构象异构体。因此，本化合物的单一立体化学异构体以及对映、非对映和几何(或构象)混合物在本发明的范围之内。除非另有说明，本发明化合物的所有互变异构形式在本发明的范围之内。另外，除非另有说明，本文中描述的结构还意味着包括仅在一种或多种富同位素的原子存在下而不同的化合物。例如，具有本结构的化合物包括氢被氘或氚替换或碳被富13C-或14C-的碳替换，在本发明的范围之内。这样的化合物可用于，例如，作为分析工具、作为生物检定中的探针、或作为本发明的治疗剂。
术语“药学上可接受的盐”是指与患者的治疗相容的酸加成盐或碱加成盐。
在一些实施方式中，形成合适的盐的示例性无机酸包括但不限于，盐酸、氢溴酸、硫酸和磷酸以及酸金属盐例如正磷酸一氢钠和硫酸氢钾。形成合适的盐的说明性的有机酸包括单、二和三羧酸。说明性的这样的酸是，例如，乙酸、三氟乙酸(2,2,2-三氟乙酸)、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯基乙酸、肉桂酸、水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、对甲苯磺酸和其他磺酸，例如甲磺酸和2-羟基乙磺酸。所述单或二酸盐都可以形成，并且这样的盐可以以水合、溶剂化或基本无水的形式存在。一般而言，这些化合物的酸加成盐与它们的游离碱形式相比更可溶于水和各种亲水有机溶剂，并且通常表现出较高的熔点。其他非药学上可接受的盐例如草酸盐可以用于例如分离式I的化合物供实验室使用、或供随后转化成药学上可接受的酸加成盐。
“药学上可接受的碱加成盐”是由式I表示的酸化合物或任何它的中间体的任何无毒性的有机或无机碱加成盐。形成合适的盐的说明性无机碱包括但不限于，氢氧化锂、钠、钾、钙、镁或钡。形成合适的盐的说明性有机碱包括脂族、脂环族或芳族有机胺，例如甲胺、三甲胺和皮考啉或氨。选择适当的盐可能是重要的，使得分子中其它地方的酯官能团(如果有的话)不水解。适当的盐的选择标准将是本领域技术人员已知的。
式I化合物的酸加成盐最适合由药学上可接受的酸形成，并且包括例如用无机酸例如盐酸、硫酸或磷酸和有机酸例如琥珀酸、马来酸、乙酸、三氟乙酸或富马酸形成的那些。其他非药学上可接受的盐例如草酸盐可以用于例如分离式I的化合物供实验室使用、或供随后转化成药学上可接受的酸加成盐。在本发明范围内还包括本发明化合物的碱加成盐(例如钠、钾和铵盐)、溶剂合物和水合物。给定的化合物盐转化成期望的化合物盐通过应用本领域技术人员公知的标准技术来实现。
术语“立体异构体”是个体分子仅仅它们的原子在空间的取向不同的所有异构体的通用术语。它包括镜象异构体(对映体)、几何(顺式/反式)异构体和具有多于一个彼此是非镜象的手性中心的化合物的异构体(非对映体)。
术语“处理”或“治疗”是指在临时或永久基础上减轻症状、消除症状的起因，或防止或减慢所指出的病症或病状的症状出现。
术语“治疗有效量”是指在治疗中有效或减轻病症或病状的一种或多种症状的严重程度的化合物的量。
当引入本文中公开的要素时，该要素不带数量以及带有“所述”是指具有一个或多个该要素。术语“包含”、“具有”、“包括”旨在开放式的并且是指可以有除所列出要素以外的其他要素。
应用，制剂和施用
药学上可接受的组合物
根据另一种实施方式，本发明提供了包含本发明化合物或其药学上可接受的衍生物以及药学上可接受的载体、佐剂或介质的组合物。本发明的组合物中化合物的量是使得在生物样品中或在患者中有效地可测量地抑制CRM1的量。在某些实施方式中，配制本发明的组合物供施用于需要这样的组合物的患者。术语“患者”，在本文中使用时，是指动物。在一些实施方式中，所述动物是哺乳动物。在某些实施方式中，所述患者是兽医学上的患者(即，非人类哺乳动物患者)。在一些实施方式中，所述患者是狗。在其他实施方式中，所述患者是人类。
术语“药学上可接受的载体、佐剂或介质”是指无毒性的载体、佐剂或介质，其不破坏与其一起配制的化合物的药理学活性。可用于本发明组合物中的药学上可接受的载体、助剂或介质包括但不限于，离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白例如人血清白蛋白，缓冲物质例如磷酸盐，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的偏(partial)甘油酯混合物，水，盐或电解质例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠，锌盐，胶态二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯基吡咯烷酮，纤维素基物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜡，聚乙烯-聚氧化丙烯嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂。
本发明的组合物可以口服、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)、通过吸入喷雾、局部、直肠、鼻、颊、阴道或通过植入的储药器施用。在一些实施方式中，提供的化合物或组合物是可静脉内和/或腹膜内施用的。
术语“胃肠外”在本文中使用时包括皮下、静脉内、肌内、眼内、玻璃体内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、肝内、腹膜内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，所述组合物是口服、皮下、腹膜内或静脉内施用的。本发明组合物的无菌注射形式可以是水性或油性悬液。这些悬液可以根据本领域已知的技术利用合适的分散或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂也可以是在胃肠外可接受的无毒性稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受介质和溶剂包括水、林格氏(Ringer's)溶液和氯化钠等渗液。另外，无菌的不挥发油常规用作溶剂或悬浮介质。
本发明的药学上可接受的组合物可以采用任何口服可接受的剂型包括但不限于胶囊、片剂、水性悬液或溶液进行口服来施用。在口服应用的片剂情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服施用而言，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服应用需要水性悬液时，所述活性成分与乳化和悬浮剂组合。如果需要，也可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。在一些实施方式中，提供的口服制剂配制成立即释放或持续/延迟释放。在一些实施方式中，所述组合物适合于颊或舌下施用，包括片剂、糖锭(lozenge)和锭剂(pastille)。提供的化合物也可以是微囊化形式。
或者，本发明的药学上可接受的组合物可以供直肠给药的栓剂形式施用。本发明的药学上可接受的组合物也可以局部施用，尤其是当治疗靶标包括通过局部施用易达到的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或肠道下部的疾病。对于这些区域或器官的每一个，都容易制备合适的局部制剂。
肠道下部的局部施用可以用直肠栓剂制剂(参见上文)或合适的灌肠制剂来实行。也可以使用局部透皮贴。
对于眼用，提供的药学上可接受的组合物可以配制为微粉化悬液或软膏例如矿脂。
本发明的药学上可接受的组合物也可以通过鼻气溶胶或吸入施用。
在一些实施方式中，本发明的药学上可接受的组合物被配制用于腹膜内施用。
可以与载体材料结合以产生单一剂型的组合物的本发明化合物的量将根据所治疗的主体、具体的给药模式而变化。在一种实施方式中，提供的组合物应该配制成使得可向接受这些组合物的患者施用剂量为0.01-100毫克/千克体重/天之间的所述抑制剂。在另一种实施方式中，所述剂量是从约0.5至约100毫克/千克体重，或每4至120小时1毫克至1000毫克/剂，或根据具体药物的需要量。通常，本发明的药物组合物将每天施用约1至约6次。
还应该理解，任何具体患者的特定剂量和治疗方案将取决于各种因素，包括所使用的特定化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、给药次数、排泄速率、药物组合、和治疗医生的判断以及被治疗的具体疾病的严重程度。所述组合物中本发明化合物的量还将取决于所述组合物中的具体化合物。
根据患者状况的改善，如有必要，可以施用维持剂量的本发明的化合物、组合物或组合。随后，当症状已经减轻到期望的水平时，可以根据症状的变化将给药的剂量或频率或二者降低到保持所述改善的状况的水平。然而，在疾病症状的任何复发时，患者可能需要在长期基础上的间歇性治疗。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
本文中描述的化合物和组合物通常可用于抑制CRM1，因此可用于治疗与CRM1活性有关的一种或多种病症。因此，在某些实施方式中，本发明提供了用于治疗CRM1介导的病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用本发明化合物、或其药学上可接受的组合物的步骤。本文中描述的化合物和组合物还可以施用于培养中的细胞，例如体外或离体，或施用于受试者，例如体内，以治疗、预防、和/或诊断各种病症，包括下文中描述的那些。
本发明中利用的化合物作为CRM1抑制剂的活性可以体外、体内或在细胞系中检测。检测本发明中利用的化合物作为CRM1抑制剂的详细条件在下面实施例中陈述。
在本文中使用时，术语“CRM1介导的”病症或病状，在本文中使用时是指已知CRM1在其中发挥作用的任何疾病或其他有害的病状。因此，本发明的另一种实施方式涉及治疗已知CRM1在其中发挥作用的一种或多种疾病或减轻其严重度。在一些实施方式中，本发明提供了在受试者中治疗与p53、p73、p21、pRB、p27、IκB、NFκB、c-Abl、FOXO蛋白、COX-2、或HDAC(组蛋白脱乙酰基酶)的表达或活性有关的疾病的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的本文中描述的化合物。在另一种实施方式中，本发明涉及治疗选自增殖性病症(例如癌)、炎性病症、自身免疫病症、病毒感染、眼科病症或神经变性病症的疾病或病况或减轻其严重度的方法，其中所述方法包括向有需要的患者施用本发明的化合物或组合物。在更具体的实施方式中，本发明涉及治疗癌症或减轻其严重度的方法。以上病症的具体例子在下面详细阐述。
可由本发明的化合物治疗的癌症包括但不限于，血液恶性肿瘤(白血病，淋巴瘤，骨髓瘤包括多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征和骨髓增生性综合征)和实体瘤(癌例如前列腺、乳腺、肺、结肠、胰腺、肾、卵巢以及软组织癌和骨肉瘤，以及间质瘤)。乳腺癌(BC)可包括基底细胞样乳腺癌(BLBC)、三阴性乳腺癌(TNBC)以及具有BLBC和TNBC二者的乳腺癌。另外，乳腺癌可包括浸润性或非浸润性导管癌或小叶癌，乳腺的管状、髓样、黏液、乳头状、筛状癌，男性乳癌，复发性或转移性乳腺癌，乳腺的叶状肿瘤和乳头的Paget氏病。
可由本发明的化合物治疗的炎性病症包括但不限于，多发性硬化症，类风湿性关节炎，变性性关节病、系统性狼疮，系统性硬化，脉管炎综合征(小、中和大脉管)，动脉粥样硬化，炎性肠病，肠道易激综合征，Crohn氏病，粘液性结肠炎，溃疡性结肠炎，胃炎，败血症，牛皮癣和其他皮肤炎性病症(例如湿疹、异位性皮炎，接触性皮炎，荨麻疹，硬皮病，和具有急性炎性成分的皮肤病，天疱疮，类天疱疮，过敏性皮炎)，和荨麻疹性综合征。
可由本发明的化合物治疗的病毒病包括但不限于，急性发热性咽炎，咽结膜热，流行性角膜结膜炎，婴儿胃肠炎，柯萨奇病毒(Coxsackie)感染，传染性单核细胞增多症，Burkitt淋巴瘤，急性肝炎，慢性肝炎，肝硬化，肝细胞癌，原发性HSV-1感染(例如，儿童龈口炎，成人扁桃腺炎和咽炎，角膜结膜炎)，潜伏HSV-1感染(例如口唇疱疹和感冒疮)，原发性HSV-2感染，潜伏HSV-2感染，无菌性脑膜炎，传染性单核细胞增多症，巨细胞包涵体病，卡波西(Kaposi)氏肉瘤，多中心型巨淋巴结增生症(Castleman)，原发性渗出性淋巴瘤，AIDS，流行性感冒，Reye综合征，麻疹，感染后脑脊髓炎，腮腺炎，增生性上皮病变(例如，寻常、扁平、跖和生殖器疣，喉乳头状瘤，疣状表皮发育不良)，宫颈癌，鳞状细胞癌，义膜性喉炎，肺炎，细支气管炎，感冒，小儿麻痹症，狂犬病，流行性感冒样综合征，严重的细支气管炎伴肺炎，风疹，先天性风疹，水痘，和带状疱疹。可由本发明的化合物治疗的病毒病还包括慢性病毒感染，包括乙型肝炎和丙型肝炎。
示例性的眼科病症包括但不限于，黄斑水肿(糖尿病性和非糖尿病性黄斑水肿)，湿性和干性形式的年龄相关黄斑变性，老年性黄斑盘状变性，囊样黄斑水肿，眼睑水肿，视网膜水肿，糖尿病性视网膜病，脉络膜视网膜病，新生血管性黄斑病，新生血管性青光眼，葡萄膜炎，虹膜炎，视网膜血管炎，眼内炎，全眼球炎，转移性眼炎，脉络膜炎，视网膜色素上皮炎，结膜炎，睫状体炎，巩膜炎，巩膜外层炎，视神经炎，脑桥后视神经炎，角膜炎，睑缘炎，渗出性视网膜脱离，角膜溃疡，结膜溃疡，慢性钱币状角膜炎，与缺氧或缺血有关的眼病，早产儿视网膜病变，增生型糖尿病性视网膜病变，息肉状脉络膜血管病变，视网膜血管瘤样增生，视网膜动脉阻塞，视网膜静脉阻塞，Coats氏病，家族性渗出性玻璃体视网膜病变，无脉病(Takayasu氏病)，Eales病，抗抗磷脂综合征，白血病性视网膜病变，血液高粘滞性综合征，巨球蛋白血症，干扰素相关的视网膜病变，高血压性视网膜病变，辐射视网膜病变，角膜上皮干细胞缺乏或白内障。
可由式I的化合物治疗的神经变性疾病包括但不限于，帕金森氏病，阿尔茨海默氏病和亨廷顿(Huntington)氏病，以及肌萎缩侧索硬化(ALS/Lou Gehrig氏病)。
本文中描述的化合物和组合物还可以用于治疗异常组织生长和纤维变性的病症，包括扩张性心肌病、肥厚性心肌病、限制性心肌病、肺纤维化、肝脏纤维变性、肾小球肾炎、多囊肾病(PKD)和其他肾病。
本文中描述的化合物和组合物还可以用于治疗与食物摄入相关的病症，例如肥胖和食欲过盛。
在另一种实施方式中，本文中描述的化合物或组合物可以用于治疗或预防过敏症和呼吸障碍，包括哮喘、支气管炎、肺纤维化、过敏性鼻炎、氧毒症、肺气肿、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征、和任何慢性阻塞性肺病(COPD)。
在一些实施方式中，与CRM1活性有关的病症或病状是肌营养不良，关节炎例如骨关节炎和类风湿性关节炎，强直性脊柱炎，外伤性脑损伤，脊髓损伤，败血症，风湿性疾病，癌症动脉粥样硬化，1型糖尿病，2型糖尿病，钩端螺旋体病肾病，青光眼，视网膜病，老化，头痛，疼痛，复杂性区域疼痛综合征，心脏肥大，肌肉萎缩，分解代谢障碍，肥胖，胎儿生长停滞，高胆固醇血症，心脏病，慢性心力衰竭，缺血/再灌注，中风，脑动脉瘤，心绞痛，肺病，囊性纤维化，酸诱发的肺损伤，肺动脉高压，哮喘，慢性阻塞性肺病，Sjogren氏综合征，透明膜病，肾病，肾小球病，酒精性肝病，肠病，腹膜子宫内膜异位，皮肤病，鼻窦炎，间皮瘤，无汗性外胚层发育不良，behcet氏病，色素失调症，肺结核，哮喘，克罗恩氏病，结肠炎，眼过敏症，阑尾炎，paget氏病，胰腺炎，牙周炎，子宫内膜异位，炎性肠病，炎性肺病，二氧化硅诱发的疾病，睡眠呼吸暂停，AIDS，HIV-1，自身免疫性疾病，抗磷脂综合征，狼疮，狼疮肾炎，家族性地中海热，遗传性周期性综合征，社会心理应激病，神经病理病，家族性淀粉样多发性神经病变，炎性神经病，帕金森氏病，多发性硬化症，阿尔茨海默氏病，肌萎缩性脊髓侧索硬化症，亨廷顿氏病，白内障，或听力损失。
在其他实施方式中，与CRM1活性有关的病症或病状是颅脑损伤，葡萄膜炎，炎性疼痛，过敏原诱发的哮喘，非过敏原诱发的哮喘，肾小球性肾炎，溃疡性结肠炎，坏死性小肠结肠炎，高免疫球蛋白血症D伴回归热(HIDS)，TNF受体相关的周期性综合征(TRAPS)，冷吡啉(cryopyrin)相关的周期性综合征，Muckle-Wells综合征(荨麻疹耳聋淀粉样变性)，家族性寒冷性荨麻疹，新生儿发病的多系统炎性疾病(NOMID)，周期性发热，口疮性口炎，咽炎和腺炎(PFAPA综合征)，Blau综合征，化脓性无菌关节炎，坏疽性脓皮病，痤疮(PAPA)，白介素-1受体拮抗剂缺乏症(DIRA)，蛛网膜下腔出血，多囊肾病，移植，器官移植，组织移植，骨髓发育异常综合征，刺激物诱发的炎症，植物刺激物诱发的炎症，毒叶藤/漆油诱发的炎症，化学刺激物诱发的炎症，蜂螫伤诱发的炎症，虫咬诱发的炎症，晒斑，烧伤，皮炎，内毒素血症，肺损伤，急性呼吸窘迫综合征，酒精性肝炎，或寄生虫感染引起的肾脏损伤。
在其他方面，本发明提供了式I的化合物在制备用于治疗与受试者中p53、p73、p21、pRB、p27、IκB、NFκB、c-Abl、FOXO蛋白、COX-2或HDAC的表达或活性有关的疾病的药物中的用途。在一些实施方式中，本发明提供了式I的化合物在制备用于治疗癌症和/或肿瘤病症、血管生成、自身免疫病症、炎性病症和/或疾病、表观遗传、激素病症和/或疾病、病毒病、神经变性病症和/或疾病、创伤和眼科病症的药物中的用途。
在一些实施方式中，本发明提供了用于抑制生物样品中CRM1的方法，所述方法包括将所述生物样品与式I的化合物的药学上可接受的盐或其药学上可接受的组合物接触，或向所述患者施用所述药学上可接受的盐或组合物。
肿瘤性病症
本文中描述的化合物或组合物可用于治疗肿瘤性病症。“肿瘤性病症”是以具有自发增长或复制能力的细胞为特征的疾病或病症，例如以增殖性细胞生长为特征的异常状态或状况。示例性的肿瘤性病症包括：癌，肉瘤，转移病症，例如源于前列腺、脑、骨、结肠、肺、乳腺、卵巢和肝来源的肿瘤，造血肿瘤病症，例如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和其他恶性浆细胞病症，以及转移性肿瘤。流行的癌症包括：乳腺、前列腺、结肠、肺、肝和胰腺癌。用所述化合物治疗可以以有效量来改善所述肿瘤性病症的至少一个症状，例如，降低细胞增殖、缩小肿瘤块等等。
所公开的方法可用于预防和治疗癌症，包括例如，实体瘤、软组织肿瘤及其转移肿瘤，以及可用于家族性癌症综合征例如Li Fraumeni综合征、家族性乳腺-卵巢癌症(BRCA1或BRAC2突变)综合征等等。所公开的方法还可用于治疗非实体癌症。示例性的实体瘤包括各种器官系统的恶性肿瘤(例如，肉瘤，恶性腺瘤，和癌)，例如肺、乳腺、淋巴、胃肠道(例如结肠)和泌尿生殖道(例如，肾、尿道上皮或阴囊肿瘤)、咽、前列腺和卵巢的那些恶性肿瘤。示例性的腺癌包括结肠直肠癌、肾细胞癌、肝癌、非小细胞肺癌、和小肠癌。
由国立癌症研究所(National Cancer Institute)描述的示例性的癌症包括：急性淋巴细胞性白血病，成人；急性淋巴细胞性白血病，儿童；急性骨髓性白血病，成人；肾上腺皮质癌；肾上腺皮质癌，儿童；AIDS相关的淋巴瘤；AIDS相关的恶性肿瘤；肛门癌；星形细胞瘤，儿童小脑；星形细胞瘤，儿童大脑；胆管癌，肝外；膀胱癌；膀胱癌，儿童；骨癌、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤；脑干神经胶质瘤，儿童；脑肿瘤，成人；脑肿瘤，脑干神经胶质瘤，儿童；脑肿瘤，小脑星形细胞瘤，儿童；脑肿瘤，大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤，儿童；脑肿瘤，室管膜瘤，儿童；脑肿瘤，成髓细胞瘤，儿童；脑肿瘤，幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童；脑肿瘤，视路和下丘脑神经胶质瘤，儿童；脑肿瘤，儿童(其他)；乳腺癌；乳腺癌和妊娠；乳腺癌，儿童；乳腺癌，男性；支气管腺瘤/类癌瘤，儿童；类癌瘤，儿童；类癌瘤，胃肠道；癌，肾上腺皮质；癌，胰岛细胞；未知的原发癌；中枢神经系统淋巴瘤，原发性；小脑星形细胞瘤，儿童；大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤，儿童；子宫颈癌；儿童癌症；慢性淋巴细胞性白血病；慢性粒细胞性白血病；慢性骨髓增殖性疾病；腱鞘透明细胞肉瘤；结肠癌；结肠直肠癌，儿童；皮肤T-细胞淋巴瘤；子宫内膜癌；管膜瘤，儿童；卵巢上皮癌；食管癌；食管癌，儿童；尤文氏(Ewing)家族肿瘤；颅外生殖细胞肿瘤，儿童；性腺外生殖细胞肿瘤；肝外胆管癌；眼癌，眼内黑素瘤；眼癌，视网膜母细胞瘤；胆囊癌；胃癌；胃癌，儿童；胃肠道类癌肿瘤；颅外生殖细胞肿瘤，儿童；生殖细胞肿瘤，性腺外；生殖细胞肿瘤，卵巢；妊娠滋养细胞肿瘤；神经胶质瘤，儿童脑干；胶质瘤，儿童视路和下丘脑神经；毛细胞白血病；头颈癌；肝细胞(肝)癌，成人(原发性)；肝细胞(肝)癌，儿童(原发性)；霍奇金(Hodgkin)氏淋巴瘤，成人；霍奇金氏淋巴瘤，儿童；妊娠期霍奇金氏淋巴瘤；下咽癌；下丘脑和视路神经胶质瘤，儿童；眼内黑素瘤；胰岛细胞癌(内分泌胰腺)；卡波西氏肉瘤；肾癌；喉癌；喉癌，儿童；白血病，急性淋巴细胞性，成人；白血病，急性淋巴细胞，儿童；白血病，急性髓细胞样，成人；白血病，急性髓细胞样，儿童；白血病，慢性淋巴细胞性；白血病，慢性骨髓性；白血病，毛细胞；嘴唇和口腔癌；肝癌，成人(原发性)；肝癌，儿童(原发性)；肺癌，非小细胞；肺癌，小细胞；淋巴细胞性白血病，成人急性；淋巴细胞性白血病，儿童急性；淋巴细胞性白血病，慢性；淋巴瘤，AIDS相关的；淋巴瘤，中枢神经系统(原发性)；淋巴瘤，皮肤T-细胞；淋巴瘤，霍奇金氏，成人；淋巴瘤，霍奇金氏，儿童；淋巴瘤，妊娠期霍奇金氏；淋巴瘤，非霍奇金氏，成人；淋巴瘤，非霍奇金氏，儿童；淋巴瘤，妊娠期非霍奇金氏；淋巴瘤，原发性中枢神经系统；巨球蛋白血症，Waldenstrom氏；男性乳癌；恶性间皮瘤，成人；恶性间皮瘤，儿童；恶性胸腺瘤；成髓细胞瘤，儿童；黑素瘤；黑素瘤，眼内；Merkel细胞癌；间皮瘤，恶性；原发性不明的转移性鳞状颈癌；多发性内分泌肿瘤综合征，儿童；多发性骨髓瘤/浆细胞瘤；蕈样真菌病；骨髓增生异常综合征；粒细胞性白血病，慢性；骨髓性白血病，儿童急性；骨髓瘤，多发；骨髓增生性疾病，慢性；鼻腔和鼻窦癌；鼻咽癌；鼻咽癌，儿童；神经母细胞瘤；非霍奇金氏淋巴瘤，成人；非-霍奇金氏淋巴瘤，儿童；妊娠期非霍奇金氏淋巴瘤；非小细胞肺癌；口腔癌，儿童；口腔和唇癌；口咽癌；骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤；卵巢癌，儿童；卵巢上皮癌；卵巢生殖细胞肿瘤；卵巢低恶性潜能肿瘤；胰腺癌；胰腺癌，儿童；胰腺癌，胰岛细胞；鼻窦和鼻腔癌；甲状旁腺癌；阴茎癌；嗜铬细胞瘤；松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童；垂体肿瘤；浆细胞瘤/多发性骨髓瘤；胸膜肺母细胞瘤；妊娠和乳腺癌；妊娠和霍奇金氏淋巴瘤；妊娠和非霍奇金氏淋巴瘤；原发性中枢神经系统淋巴瘤；原发性肝癌，成人；原发性肝癌，儿童；前列腺癌；直肠癌；肾细胞(肾)癌；肾细胞癌，儿童；肾盂和输尿管，移行细胞癌；视网膜母细胞瘤；横纹肌肉瘤，儿童；唾液腺癌；唾液腺癌，儿童；肉瘤，尤文氏家族肿瘤；肉瘤，卡波西氏；肉瘤(骨肉瘤)骨恶性纤维组织细胞瘤；肉瘤，横纹肌肉瘤，儿童；肉瘤，软组织，成人；肉瘤，软组织儿童；Sezary综合征；皮肤癌；皮肤癌，儿童；皮肤癌(黑素瘤)；皮肤癌，Merkel细胞；小细胞肺癌；小肠癌；软组织肉瘤，成人；软组织肉瘤，儿童；原发性不明的鳞状细胞颈癌，转移性；胃癌；胃癌，儿童；幕上原始神经外胚层肿瘤，儿童；T-细胞淋巴瘤，皮肤；阴囊癌；胸腺瘤，儿童；胸腺瘤，恶性；甲状腺癌；甲状腺癌，儿童；肾盂和输尿管的移行细胞癌；滋养细胞肿瘤，妊娠；原发部位未知的癌，儿童；儿童的不常见癌症；输尿管和肾盂，移行细胞癌；尿道癌；子宫肉瘤；阴道癌；视路和下丘脑神经胶质瘤，儿童；外阴癌；Waldenstrom氏巨球蛋白血症；和Wilms氏肿瘤。
其他示例性的癌症包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和套细胞淋巴瘤(MCL)。
如前所述的癌症的转移癌也可以根据本文中描述的方法治疗或预防。
联合治疗
在一些实施方式中，本文中描述的化合物与其他的“第二”治疗剂或治疗一起施用。可以从通常用于治疗所指定的疾病或病状的单一治疗的任何药剂中，做出第二治疗剂的选择。在本文中使用时，术语“一起施用”和相关术语是指同时或顺序施用本发明的治疗剂。例如，本发明的化合物可以与另一种治疗剂以分开的单位剂型同时或顺序施用或以单一单位剂型一起施用。因此，本发明提供了包含式I的化合物、其他治疗剂、和药学上可接受的载体、佐剂或介质的单一单位剂型。
在向受试者施用第二治疗剂的本发明的一种实施方式中，本发明化合物的有效量小于它在不施用第二治疗剂的情况下的有效量。在另一种实施方式中，第二治疗剂的有效量小于它在不施用本发明化合物的情况下的有效量。以这种方式，可以最小化与高剂量的任一种药剂有关的不希望的副作用。其他潜在的优点(包括但不限于改进给药方案和/或降低药物成本)对本领域技术人员将是显而易见的。所述其他药剂可以与本发明的化合物分开，作为多剂方案的一部分施用。或者，那些药剂可以是单一剂型的一部分，与本发明的化合物一起混合成单一组合物。
癌症联合治疗
在一些实施方式中，本文中描述的化合物与其他癌症治疗一起施用。示例性的其他癌症治疗包括，例如：化疗，靶向治疗例如抗体治疗，激酶抑制剂，免疫治疗，和激素治疗，表观遗传治疗，蛋白体抑制剂，和抗血管生成治疗。这些治疗中每一种的例子在下面提供。在本文中使用时，术语“联合”和相关术语是指同时或顺序施用本发明的治疗剂。例如，本发明的化合物可与另一种治疗剂以分开的单位剂型同时或顺序施用或以单一单位剂型一起施用。因此，本发明提供了包含本发明的化合物、其他治疗剂、和药学上可接受的载体、佐剂或介质的单一单位剂型。
可与载体材料结合产生单一剂型的本发明化合物和其他治疗剂(在包含如上所述的其他治疗剂的那些组合物中)二者的量将根据治疗的主体和具体的施用方式而变化。优选地，本发明的组合物应该配制成使得可施用在0.01-100毫克/千克体重/天的本发明化合物之间的剂量。
化疗
在一些实施方式中，本文中描述的化合物与化疗一起施用。化疗是用可破坏癌细胞的药物治疗癌症。“化疗”通常是指与靶向治疗相比，通常迅速影响分裂细胞的细胞毒性药物。化疗药物以各种可能的方式妨碍细胞分裂，例如，妨碍DNA的复制或新形成染色体的分离。虽然一定程度的特异性可以来自许多癌细胞不能修复DNA损伤(而正常细胞通常能)，但大多数形式的化疗靶向所有迅速分裂的细胞而不是癌细胞特异性的。
用于癌症治疗中的化疗剂的例子包括，例如，抗代谢剂(例如，叶酸、嘌呤、和嘧啶衍生物)和烷基化剂(例如，氮芥，亚硝基脲，铂，磺酸烷基酯，肼，三氮烯，氮丙啶，纺锤体毒素，细胞毒性剂，拓扑异构酶抑制剂等等)。示例性的药剂包括阿柔比星，放线菌素，阿利维甲酸，六甲密胺，氨基喋呤，氨基乙酰丙酸，氨柔比星，安吖啶，阿那格雷，三氧化二砷，天冬酰胺酶，阿曲生坦，贝洛替康，蓓萨罗丁，苯达莫司汀，博莱霉素，硼替佐米，白消安，喜树碱，卡培他滨，卡铂，卡巴醌，卡莫氟，卡莫司汀，塞来昔布，苯丁酸氮芥，氮芥，顺铂，克拉屈滨，氯法拉滨，克立他酶，环磷酰胺，阿糖胞苷，氮烯咪胺，更生霉素，柔红霉素，地西他滨，地美可辛，多烯紫衫醇，阿霉素，乙丙昔罗，伊利司莫，依沙芦星，依诺他滨，表柔比星，雌氮芥，乙环氧啶，依托泊苷，氟尿苷，氟达拉滨，氟尿嘧啶(5FU)，福莫司汀，吉西他滨，格立得(Gliadel)植入剂，羟基尿素，羟基脲，伊达比星，异环磷酰胺，依立替康，伊罗夫文，伊沙匹隆，拉洛他赛，甲酰四氢叶酸，脂质体阿霉素，脂质体柔红霉素，氯尼达明，洛莫司汀，鲁坎松，甘露舒凡，马索丙考，美法仑，巯基嘌呤，美司钠，氨甲喋呤，氨基乙酰丙酸甲酯，二溴甘露醇，丙脒腙，米托坦，丝裂霉素，米托蒽醌，奈达铂，尼莫司汀，奥利默森，高三尖杉酯碱，脱氢雌马酚，奥沙利铂，紫杉醇，培加帕酶，培美曲塞，喷司他丁，吡柔比星，匹衫琼，光神霉素，卟吩姆钠，泼尼莫司汀，丙卡巴肼，雷替曲塞，雷莫司汀，卢比替康，沙帕他滨，司莫司汀，腺病毒载体定位码基因，斯唑他铂(Strataplatin)，链佐星，他拉泊芬，替加氟尿嘧啶，替莫泊芬，替莫唑胺，替尼泊苷，替司他赛(Tesetaxel)，睾内酯，四硝酸酯，噻替派，噻唑呋林，硫鸟嘌呤，替吡法尼，拓扑替康，他比特定，三亚胺醌，三亚乙基蜜胺，三核铂，维甲酸，曲奥舒凡，曲洛磷胺，乌拉莫司汀，戊柔比星，维替泊芬，长春花碱，长春新碱，长春地辛，长春氟宁，长春瑞滨，伏立诺他，佐柔比星，和本文中描述的其他细胞抑制剂或细胞毒素剂。
因为一些药物在一起比单独的效果更好，经常同时给予两种或更多种药物。经常两种或更多种化疗剂用作联合化疗。在一些实施方式中，所述化疗剂(包括联合化疗)可联合本文中描述的化合物使用。
靶向治疗
靶向治疗包括使用对下调癌细胞蛋白质特异性的药剂。小分子靶向治疗药通常是癌细胞内突变、过表达或其他方面的关键蛋白质上酶结构域的抑制剂。突出的例子是酪氨酸激酶抑制剂，例如阿西替尼、博舒替尼、西地尼布、达沙替尼、厄洛替尼、伊马替尼、吉非替尼、拉帕替尼、来他替尼、尼洛替尼、司吗沙尼、索拉非尼、舒尼替尼和凡德他尼，以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂例如Alvocidib和塞利西利。单克隆抗体治疗是另一种策略，其中治疗剂是特异性结合癌细胞表面上的蛋白的抗体。例子包括通常用于乳腺癌的抗-HER2/neu抗体曲妥珠单抗，以及通常用于各种B-细胞恶性肿瘤的抗CD20抗体利妥昔单抗和托西莫单抗。其他示例性的抗体包括西妥昔单抗、帕尼单抗、曲妥珠单抗、阿仑单抗、贝伐单抗、依决洛单抗和吉姆单抗。示例性的融合蛋白包括阿柏西普和地尼白介素-毒素连接物。在一些实施方式中，所述靶向治疗可与本文中描述的化合物例如格列卫联合使用(Vignari和Wang 2001)。
靶向治疗还可以包括作为“导归器(homing devices)”的小肽，所述小肽可与细胞表面受体或肿瘤周围受影响的细胞外基质结合。如果与这些肽相连的放射性核素(例如RGD)在癌细胞附近衰减的话，所述核素最终杀死所述癌细胞。这样的治疗的例子包括
血管生成
本文中描述的化合物和方法可以用于治疗或预防与血管生成有关的疾病或病症。与血管生成有关的疾病包括癌症、心血管病和黄斑变性。
血管生成是涉及从现有血管生长出新血管的生理过程。血管生成是生长发育以及创伤愈合和肉芽组织中正常和至关重要的过程。然而，它也是肿瘤从休眠状态转变到恶性状态的基本步骤。血管生成可以是抵抗特征在于血管化差或脉管系统异常的疾病的靶标。
应用可以抑制或引起体内新血管产生的特异性化合物可以帮助抵抗这样的疾病。在应该没有血管的地方存在血管可影响组织的机械性质，增加破坏的可能性。在修复或以其它方式代谢活性的组织中不存在血管可以抑制修复或其他必要功能。几种疾病，例如缺血性慢性创伤，是血管形成失败或不充分的结果，并可以通过局部扩增血管、从而向所述位置带去新的营养促进修复来治疗。其他疾病，例如年龄相关的黄斑变性，可以由血管的局部扩张、干扰正常生理过程而产生。
血管内皮生长因子(VEGF)已经证明是血管生成的主要促成者，其增加了给定网络中的毛细血管数量。VEGF上调是对行动(exercise)的生理响应的主要部分，并且怀疑它在血管生成中的作用是血管损伤可能的治疗。体外研究清楚地证明了VEGF是血管生成的强效刺激物，因为在这种生长因子存在下，平板接种的内皮细胞将增殖和迁移，最终形成类似毛细血管的管结构。
肿瘤通过分泌各种生长因子(例如VEGF)引起血管生长(血管生成)。生长因子例如bFGF和VEGF可诱导毛细血管生长到肿瘤中，一些研究人员怀疑这供应了需要的营养，让肿瘤扩增。
血管生成代表了心血管病治疗的极好的治疗靶标。它是支撑天然方式的强效生理过程，其中我们的身体对向生命器官的供血减少作出反应，即产生新的侧支血管来克服所述缺血性损伤。
VEGF的过表达除了刺激血管生成之外，还引起血管渗透性提高。在湿性黄斑变性中，VEGF引起毛细血管增生到视网膜中。因为所述血管生成增加还引起水肿，血和其他视网膜流体渗漏到视网膜中，导致视觉损失。
抗血管生成治疗可包括靶向血管内皮细胞生长因子(VEGF)的激酶抑制剂例如舒尼替尼、索拉非尼，或针对VEGF或VEGF受体的单克隆抗体或受体“诱杀剂(decoy)”包括贝伐单抗或VEGF-Trap，或沙利度胺或它的类似物(来拉度胺，泊马度胺)，或靶向非VEGF血管生成靶标例如成纤维细胞生长因子(FGF)、血管生成素或者血管抑素或内皮抑素。
表观遗传学
本文中描述的化合物和方法可以用于治疗或预防与表观遗传学有关的疾病或病症。表观遗传学是表型或基因表达中由除基于DNA序列的改变以外的机制引起的可遗传性改变的研究。真核生物生物学中表观遗传改变的一个例子是细胞分化过程。在形态发生期间，干细胞变成胚胎的各种细胞系，所述细胞系又变成完全分化的细胞。换句话说，单个受精卵细胞随着它连续分裂，改变成许多细胞类型，包括神经元、肌细胞、上皮、血管等。它通过激活一些基因同时抑制其他基因来实现该分化。
当细胞分裂时，表观遗传改变被保留。大多数表观遗传改变只发生在一个个体生物的寿命期内，但是，如果在发生受精的精子或卵细胞中已经造成DNA中的突变，那么一些表观遗传改变从一代遗传到下一代。具体的表观遗传方法包括副突变、标记、印记、基因沉默、X染色体失活、位置效应、重新编程、转染(transvection)、母体效应、致癌作用的发展、致畸剂的许多效应、调节组蛋白修饰和异染色质、以及影响单性生殖和克隆的技术限制。
与表观遗传学有关的示例性疾病包括ATR综合征、脆性X染色体综合征、ICF综合征、Angelman氏综合征、Prader-Wills综合征、BWS、Rett综合征、α-地中海贫血、癌症、白血病、Rubinstein-Taybi综合征和Coffin-Lowry综合征。
与表观遗传学有关系的第一种人类疾病是癌症。研究人员发现，结肠直肠癌患者的患病组织具有的DNA甲基化低于同一患者的正常组织。因为甲基化基因通常被关掉，丧失DNA甲基化可通过改变染色质的排列而引起异常高的基因活化。另一方面，太多的甲基化可取消保护性肿瘤抑制基因的工作。
DNA甲基化发生在CpG部位，哺乳动物中大部分CpG胞嘧啶是甲基化的。然而，在启动子区域附近的DNA段具有较高浓度的CpG部位(称为CpG岛)，它们在正常细胞中没有甲基化。这些CpG岛在癌细胞中变得过度甲基化，从而导致不应该沉默的基因被关闭。这种异常是肿瘤中发生的标志性表观遗传改变并且在癌症发展早期发生。CpG岛的超甲基化可通过关闭肿瘤抑制基因而引起肿瘤。事实上，这些类型的改变在人类癌症中可能比DNA序列突变更常见。
此外，虽然表观遗传改变没有改变DNA的序列，但它们可引起突变。造成家族或遗传的癌症形式的大约一半基因通过甲基化而被关闭。这些基因中的大多数正常抑制肿瘤形成和帮助修复DNA，包括O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、MLH1细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、和RASSF1A。例如，MGMT的启动子的超甲基化引起G→A突变的数量增加。
超甲基化还可以导致微卫星的不稳定性，微卫星是重复的DNA序列。微卫星是正常个体中常见的，并且它们通常由二核苷酸CA的重复单元组成。DNA修复基因MLH1的启动子的过多甲基化可致使微卫星不稳定并延长或缩短它。微卫星不稳定性与许多癌症有关系，包括结肠直肠、子宫内膜、卵巢、和胃癌。
脆性X染色体综合征是最经常遗传的心智残障，特别是在男性中。两种性别都可受到这种状况的影响，但是因为男性只有一条X染色体，一条脆性X将更严重地影响他们。的确，脆性X染色体综合征发生在大约1/4,000的男性中和1/8,000的女性中。患这种综合征的人具有严重的智障、语言发展延迟和“孤独症样”行为。
脆性X染色体综合征的名字取自于包含所述基因异常的X染色体部分在显微镜下看上去的样子；它通常呈现为好像它是被线吊起来的并且可容易地弄碎。所述综合征是由FMR1(脆性X染色体智力障碍1)基因中的异常造成的。未患脆性X染色体综合征的人在他们的FMR1基因中具有6至50个重复的三核甙酸CGG。然而，具有超过200个重复单元的个体具有全突变，并且他们通常显示出所述综合征的症状。太多CGG导致FMR1基因启动子区的CpG岛变得甲基化；正常情况下，它们不是。这种甲基化将所述基因关闭，停止FMR1基因产生被称为脆性X染色体智力障碍蛋白的重要蛋白质。失去这种特殊蛋白质引起脆性X染色体综合征。虽然对于所述CGG扩增突变作为脆性X染色体的原因已经给予了许多关注，但与FMR1甲基化有关的表观遗传改变才是真正的综合征起因。
脆性X染色体综合征不是唯一与涉及表观遗传改变的智力障碍有关的病症。其他这样的病状包括鲁宾斯坦-泰比综合征
(Rubenstein-Taybi)、考费因-劳里综合征(Coffin-Lowry)、普瑞德-威利氏综合征(Prader-Willi)、天使人综合征(Angelman)、伯-韦综合征(Beckwith-Wiedemann)、ATR-X、和Rett综合症。
表观遗传治疗包括控制表观遗传修饰的酶、特别是DNA甲基转移酶和组蛋白脱乙酰基酶的抑制剂，它们已经对一些恶性肿瘤显示出有希望的抗肿瘤发生效应，以及反义寡核苷酸和siRNA。
免疫治疗
在一些实施方式中，本文中描述的化合物与免疫治疗一起施用。癌症免疫治疗是指设计成诱导患者自身免疫系统抵抗肿瘤的治疗策略的多样组合。产生对抗肿瘤的免疫应答的当代方法包括表浅性膀胱癌的囊泡内BCG免疫治疗、前列腺癌疫苗Provenge、以及在肾细胞癌和黑素瘤患者中利用干扰素和其他细胞因子诱导免疫应答。
同种异基因造血干细胞移植可被视为免疫治疗的一种形式，因为供体的免疫细胞将经常在移植物抗肿瘤效应中攻击肿瘤。在一些实施方式中，所述免疫治疗剂可与本文中描述的化合物联合使用。
激素治疗
在一些实施方式中，本文中描述的化合物与激素治疗一起施用。通过提供或阻断某些激素可抑制有些癌症的生长。激素敏感性肿瘤的常见例子包括某些类型的乳腺和前列腺癌，以及对某些类视黄醇/视黄酸作出响应的某些白血病类型。除去或阻断雌激素或睾酮经常是重要的附加处理。在某些癌症中，施用激素激动剂、例如孕激素可以在治疗上有益。在一些实施方式中，所述激素治疗剂可与本文中描述的化合物联合使用。
激素治疗剂包括施用激素激动剂或激素拮抗剂，并包括类视黄醇/视黄酸，它们是抑制雌激素或睾酮的化合物，以及施用孕激素。
炎症和自身免疫性疾病
本文中描述的化合物和方法可以用于治疗或预防与炎症有关的疾病或病症，特别是在人类和其他哺乳动物中。本文中描述的化合物可以在炎症发作之前、开始时、或开始后施用。当预防性使用时，所述化合物优选在任何炎性响应或症状之前提供。施用所述化合物可预防或减弱炎性反应或症状。示例性的炎性病症包括，例如，多发性硬化症，类风湿性关节炎，牛皮癣关节炎，退行性关节病，脊柱关节病，其他血清阴性的炎性关节炎，风湿性多肌痛，各种脉管炎(例如巨细胞性动脉炎，ANCA+脉管炎)，痛风性关节炎，系统性红斑狼疮，幼年型关节炎，幼年型类风湿性关节炎，骨关节炎，骨质疏松症，糖尿病(例如，胰岛素依赖型糖尿病或青少年型糖尿病)，经期痉挛，囊性纤维化，炎症肠病，肠道易激综合征，克罗恩氏病，粘液性结肠炎，溃疡性结肠炎，胃炎，食道炎，胰腺炎，腹膜炎，阿尔茨海默氏病，休克，强直性脊柱炎，胃炎，结膜炎，胰腺炎(急性或慢性)，多器官损伤综合征(例如败血病或创伤继发的)，心肌梗塞，动脉粥样硬化，中风，再灌注损伤(例如，由于心肺旁路或肾透析)，急性肾小球肾炎，热损伤(即晒伤)，坏死性小肠结肠炎，粒细胞输血相关综合征，和/或Sjogren氏综合征。示例性的皮肤炎性病症包括，例如，湿疹，异位性皮炎，接触性皮炎，荨麻疹，硬皮病，牛皮癣，和具有急性炎性成分的皮肤病。
在另一种实施方式中，本文中描述的化合物或方法可以用于治疗或预防过敏症和呼吸病症，包括哮喘、支气管炎、肺纤维化、过敏性鼻炎、氧毒症、肺气肿、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征、和任何慢性阻塞性肺病(COPD)。所述化合物可以用于治疗慢性肝炎感染，包括乙型肝炎和丙型肝炎。
另外，本文中描述的化合物或方法可以用于治疗自身免疫性疾病和/或与自身免疫性疾病有关的炎症，例如器官-组织自身免疫性疾病(例如，雷诺(Raynaud)氏综合征)、硬皮病、重症肌无力、移植排斥、内毒素休克、败血症、牛皮癣、湿疹、皮炎、多发性硬化症、自身免疫性甲状腺炎、葡萄膜炎、系统性红斑狼疮、Addison氏病、自身免疫性多腺体病(亦称自身免疫性多腺体综合征)、和Grave氏病。
在具体的实施方式中，本文中描述的化合物可用于治疗多发性硬化症。在特定的方面，用于治疗多发性硬化症的化合物是化合物1：(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-1-(3,3-二氟氮杂环丁烷-1-基)丙-2-烯-1-酮)。
联合治疗
在某些实施方式中，本文中描述的化合物可以单独或与可用于治疗或预防炎症的其他化合物联合施用。示例性的抗炎剂包括，例如，类固醇(例如，氢化可的松，可的松，氟氢化可的松，强的松，6[α]-甲基强的松，去炎松，培他米松或地塞米松)，非甾体类抗炎药(NSAIDS(例如，阿司匹林，对乙酰氨基酚，托美汀，布洛芬，甲芬那酸，吡罗昔康，萘丁美酮，罗非昔布，塞来昔布，依托度酸或尼美舒利)。在另一种实施方式中，所述其他治疗剂是抗生素(例如，万古霉素，青霉素，羟氨苄青霉素，氨苄青霉素，头孢氨噻肟，头孢曲松，头孢克肟，利福平，甲硝哒唑，多西环素或链霉素)。在另一种实施方式中，所述其他治疗剂是PDE4抑制剂(例如，罗氟司特或咯利普兰)。在另一种实施方式中，所述其他治疗剂是抗组胺剂(例如，赛克利嗪，羟嗪，异丙嗪或苯海拉明)。在另一种实施方式中，所述其他治疗剂是抗疟药(例如，青蒿素，蒿甲醚，青蒿琥酯，磷酸氯喹，盐酸甲氟喹，盐酸多西环素，盐酸氯胍，阿托伐醌或卤泛群)。在一种实施方式中，所述其他化合物是屈曲可净α(drotrecogin alfa)。
抗炎剂的其它例子包括，例如，醋氯芬酸，阿西美辛，e-乙酰胺基己酸，对乙酰氨基酚，醋氨沙罗，乙酰苯胺，乙酰水杨酸，S-腺苷甲硫氨酸，阿氯芬酸，阿氯米松，阿芬太尼，阿尔孕酮，烯丙罗定，阿明洛芬，阿洛泼林，阿法罗定，双(乙酰水杨酸)铝，安西缩松，氨芬酸，氨氯西诺嗪，3-氨基-4-羟基丁酸，2-氨基-4-皮考啉，氨丙吡酮，氨基比林，阿米曲林，水杨酸铵，吡罗昔康，呱氨托美丁，阿尼利定，安替比林，安拉非宁，阿扎丙宗，倍氯米松，苄达酸，贝诺酯，苯恶洛芬，苄哌立隆，苄达明，苄基吗啡，柏莫洛芬，培他米松，培他米松-17-戊酸酯，苯腈米特，[α]-红没药醇，溴芬酸，对-溴乙酰苯胺，5-溴水杨酸乙酸酯，溴水杨醇，布西丁，布氯酸，布科洛，布地缩松，丁苯羟酸，布马地宗，丁丙诺啡，布他西丁，布替布芬，布托啡诺，酰胺咪嗪，卡必芬，卡洛芬(caiprofen)，卡沙兰，氯丁醇，氯强的松，氯西诺嗪，水杨酸胆碱，辛可芬，桂美辛，西拉马朵，环氯茚酸，氯倍他索，氯可托龙，氯美辛，氯尼他秦，氯尼辛，氯吡酸，氯泼尼醇，丁香，可待因，溴甲烷可待因，磷酸可待因，硫酸可待因，可的松，可的伐唑，克罗丙胺，克罗乙胺，环佐辛，地夫可特，去氢睾酮，二氢脱氧吗啡，地奈德，去羟米松，地塞米松，地塞米松-21-异烟酸酯，右奥沙屈，右旋吗酰胺，右旋丙氧吩，去氧皮质酮，地佐辛，地恩丙胺，二醋吗啡(diamorphone)，双氯芬酸，二苯米唑，联苯吡胺，二氟拉松，二氟可龙，双氟尼酸，二氟泼尼酯，二氢可待因，二氢可待因酮烯醇乙酸酯，二氢吗啡，乙酰水杨酸二羟铝，地美沙多，地美庚醇，二甲噻丁，吗苯丁酯，地匹哌酮，diprocetyl，安乃近，双苯唑醇，屈恶昔康，依莫法宗，因法来酸，甘草次酸，甲嘧啶唑，依他佐辛，依特柳酯，乙柳酰胺，乙庚嗪，依托沙秦，乙甲噻丁，乙基吗啡，依托度酸，依托芬那酯，依托尼秦，丁香油酚，联苯乙酸，芬布芬，芬克洛酸，芬度柳，非诺洛芬，芬太尼，芬替酸，非普地醇，非泼拉酮，夫洛非宁，氟扎可特，氟氯奈德，氟灭酸，氟美松，氟尼缩松，氟尼辛，氟诺洛芬，丙酮化氟新龙，氟轻松醋酸酯，丙酮化氟新龙，氟考丁酯，氟考龙(fluocoitolone)，氟苯乙砜，氟甲松龙，氟培龙，氟吡丁，氟泼尼定，氟泼尼松龙，氟丙喹宗，氟氢缩松，氟比洛芬，氟替卡松，福莫可他，磷柳酸，龙胆酸，格拉非宁，葡美辛，乙二醇水杨酸酯，愈创蓝油烃，哈西奈德，哈西缩松，卤贝他索，卤米松，卤泼尼松(haloprednone)，海洛因，氢可酮，氢可松氨酯，氢化可的松，醋酸氢化可的松，琥珀酸氢化可的松，半琥珀酸氢化可的松，21-赖氨酸氢化可的松，环戊丙酸氢化可的松，氢化吗啡酮，羟哌替啶，异丁芬酸，布洛芬，异丁普生，水杨酸咪唑，吲哚美辛，吲哚洛芬，三苯唑酸，异氟泼尼龙，醋酸异氟泼尼龙，isoladol，异美沙酮，异尼辛，伊索克酸，异恶噻酰胺，凯托米酮，酮洛芬，酮咯酸，对-乳酰乙氧苯胺，利非他明，莱瓦洛芬，羟甲左吗喃，左芬吗烷，洛芬太尼，氯那唑酸，氯诺昔康，洛索洛芬，赖氨酸乙酰水杨酸，马泼尼酮，甲氯灭酸，甲羟松，甲芬那酸，美洛昔康，哌替啶，泼尼松，美普他酚，美沙拉嗪，美他佐辛，美沙酮，左美丙嗪，甲基泼尼松龙，醋酸甲基泼尼松龙，甲基泼尼松龙琥珀酸酯钠，甲基泼尼松龙suleptnate，甲嗪酸，甲氧夫啉，美托酮，莫非保松，莫非佐酸，莫米松，吗拉宗，吗啡，盐酸吗啡，硫酸吗啡，水杨酸吗啉，麦罗啡，萘丁美酮，纳布啡，纳洛芬，1-萘基水杨酸酯，萘普生，罂粟碱，奈福泮，尼可吗啡，尼芬那宗，尼氟灭酸，尼美舒利，5'-硝基-2'-丙氧基乙酰苯胺，去甲左啡诺，去甲美沙酮，去甲吗啡，诺匹哌酮，奥沙拉嗪，阿片，奥沙西罗，奥沙美辛，奥沙普秦，氧可酮，氧吗啡酮，羟基保泰松，阿片全碱，泼拉米松，瑞尼托林，帕沙米特，戊唑星，哌立索唑，非那西汀，苯吗庚酮，非那佐辛，盐酸非那吡啶，非诺可，苯哌利定，非诺吡酮，非诺吗烷，乙酰水杨酸苯酯，苯基丁氮酮，水杨酸苯酯，非尼拉朵，吡酮洛芬，匹米诺定，哌布宗，哌立酮，吡拉唑酸，哌腈米特，吡罗昔康，吡丙芬，普拉洛芬，泼尼卡酯，泼尼松龙，泼尼松，泼尼松龙戊酸酯，泼尼立定，丙谷美辛，普罗庚嗪，普罗麦多，丙哌利定，丙吡胺，丙氧吩，异丙安替比林，普罗喹宗，丙替嗪酸，普罗沙唑，雷米那酮，瑞芬太尼，甲硫利马唑，醋水杨胺，水杨苷，水杨酰胺，水杨酰胺-O-乙酸，水杨酸，水杨基硫酸，双水杨酸，沙维林，西美曲特，舒芬太尼，柳氮磺胺吡啶，舒林酸，过氧化物歧化酶，舒洛芬，琥保松，他尼氟酯，替尼达普，替诺昔康，特罗芬那酯，粉防乙碱，噻唑丁炎酮，噻洛芬酸，噻拉米特，替利定，替诺立定，替可的松，托芬那酸，托美汀，曲马多，曲安西龙，丙酮化曲安西龙，托培辛(tropesin)，维米醇，联苯丁酸，希莫洛芬，扎托布洛芬和佐美酸。
在一种实施方式中，本文中描述的化合物可以与选择性COX-2抑制剂一起施用以治疗或预防炎症。示例性的选择性COX-2抑制剂包括，例如，地拉昔布、帕瑞昔布、塞来昔布、伐地考昔、罗非昔布、依托考昔和罗美昔布。
在一些实施方式中，提供的化合物与具有蒽环或拓扑II抑制剂联合施用。在某些实施方式中，提供的化合物与阿霉素(Dox)联合施用。在某些实施方式中，提供的化合物与硼替佐米(和更广泛地包括卡非佐米)联合施用。令人惊讶地发现，提供的化合物与Dox或硼替佐米联合产生协同效应(即，超过相加)。
病毒感染
本文中描述的化合物和方法可以用于治疗或预防与病毒感染有关的疾病或病症，特别是在人类和其他哺乳动物中。本文中描述的化合物可以在病毒感染发作之前、开始时、或开始后施用。当预防性使用时，所述化合物优选在任何病毒感染或其症状之前提供。
示例性的病毒病包括急性发热性咽炎，咽结膜热，流行性角膜结膜炎，婴儿胃肠炎，柯萨奇病毒感染，传染性单核细胞增多症，Burkitt淋巴瘤，急性肝炎，慢性肝炎，肝硬化，肝细胞癌，原发性HSV-1感染(例如，儿童龈口炎，成人扁桃腺炎和咽炎，角膜结膜炎)，潜伏HSV-1感染(例如，口唇疱疹和感冒疮)，原发性HSV-2感染，潜伏HSV-2感染，无菌性脑膜炎，传染性单核细胞增多症，巨细胞包涵体病，卡波西氏肉瘤，多中心型巨淋巴结增生症，原发性渗出性淋巴瘤，AIDS，流行性感冒，Reye综合征，麻疹，感染后脑脊髓炎，腮腺炎，增生性上皮病变(例如，寻常、扁平、跖和生殖器疣，喉乳头状瘤，疣状表皮发育不良)，宫颈癌，鳞状细胞癌，义膜性喉炎，肺炎，细支气管炎，感冒，小儿麻痹症，狂犬病，流行性感冒样综合征，严重的细支气管炎伴肺炎，风疹，先天性风疹，水痘，和带状疱疹。
示例性的病毒病原体包括腺病毒，柯萨奇病毒，登革病毒，脑炎病毒，Epstein-Barr病毒，甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒，1型单纯疱疹病毒，2型单纯疱疹病毒，巨细胞病毒，8型人类疱疹病毒，人类免疫缺陷病毒，流感病毒，麻疹病毒，腮腺炎病毒，人乳头瘤病毒，副流感病毒，脊髓灰质炎病毒，狂犬病病毒，呼吸道合胞病毒，风疹病毒，带状疱疹病毒，西尼罗河病毒，登革病毒(Dungee)，和黄热病毒。病毒病原体还可以包括导致抗性病毒感染的病毒。
抗病毒药物是专门用于治疗病毒感染的一类药物。抗病毒作用通常落入三种机制之一：干扰病毒透入靶细胞的能力(例如，金刚烷胺，金刚烷乙胺和普利康那利)，抑制病毒合成(例如核苷类似物，如阿昔洛韦和叠氮胸苷(AZT)，和抑制病毒释放(例如，扎那米韦和奥司他韦)。
眼科
本文中描述的化合物和方法可用于治疗和预防眼科病症。示例性的眼科病症包括，黄斑水肿(糖尿病性和非糖尿病性黄斑水肿)，湿性和干性形式的年龄相关黄斑变性，老年性黄斑盘状变性，囊样黄斑水肿，眼睑水肿，视网膜水肿，糖尿病性视网膜病，脉络膜视网膜病，新生血管性黄斑病，新生血管性青光眼，葡萄膜炎，虹膜炎，视网膜血管炎，眼内炎，全眼球炎，转移性眼炎，脉络膜炎，视网膜色素上皮炎，结膜炎，睫状体炎，巩膜炎，巩膜外层炎，视神经炎，脑桥后视神经炎，角膜炎，睑缘炎，渗出性视网膜脱离，角膜溃疡，结膜溃疡，慢性钱币状角膜炎，与缺氧或缺血有关的眼病，早产儿视网膜病变，增生型糖尿病性视网膜病变，息肉状脉络膜血管病变，视网膜血管瘤样增生，视网膜动脉阻塞，视网膜静脉阻塞，Coats氏病，家族性渗出性玻璃体视网膜病变，无脉病(Takayasu氏病)，Eales病，抗磷脂抗体综合征，白血病性视网膜病变，血液高粘滞性综合征，巨球蛋白血症，干扰素相关的视网膜病变，高血压性视网膜病变，辐射视网膜病变，角膜上皮干细胞缺乏和白内障。
其他可使用本文中描述的化合物和方法治疗的眼科病症包括增殖性玻璃体视网膜病变和慢性视网膜脱离。
炎性眼病也可使用本文中描述的化合物和方法治疗。
神经退行性疾病
神经退行性是神经元的结构或功能逐渐丧失、包括神经元死亡的涵盖性术语。包括帕金森氏、阿尔茨海默氏和亨廷顿氏病的许多神经退行性疾病由于神经变性过程而发生。随着研究进展，许多相似性表明这些疾病彼此在亚细胞水平上相关。发现这些相似性提供了可同时改善许多疾病的治疗进步的希望。在包含异常的蛋白质装配以及诱导细胞死亡的不同的神经退行性病症之间有许多相似之处。
阿尔茨海默氏病的特征在于大脑皮质和某些皮质下区域中神经元和突触损失。这种损失导致患部的整体萎缩，包括颞叶和顶叶、和部分额皮质和扣带回的退化。
亨廷顿氏病引起星形胶质细胞增生和中型多棘神经元损失。大脑的区域根据它们的结构和它们包含的神经元类型而受影响，随着它们累积地失去细胞而大小缩小。影响的区域主要在纹状体中，还有额和颞皮质。纹状体丘脑下部核将控制信号送到苍白球，苍白球启动和调节运动。丘脑下部核发出的信号减弱，从而造成动作的启动和调节降低，导致所述病症的特征性动作。用于亨廷顿氏病的示例性的治疗包括四苯嗪、神经安定药、苯二氮卓类、金刚烷胺、瑞马西胺、丙戊酸、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)、米氮平和抗精神病药。
帕金森氏病中脑细胞损失的机制可以由与泛素结合的蛋白质α-突触核蛋白在损伤细胞中的异常蓄积构成。α-突触核蛋白-泛素复合物不能被引导到蛋白体。这种蛋白质蓄积形成蛋白质的胞浆包涵体，称为路易体(Lewy bodies)。对疾病发病机理的最新研究已经显示，多巴胺能神经元通过α-突触核蛋白的死亡是由于在两个主要的细胞器——内质网(ER)和高尔基体之间运送蛋白的机制中的缺陷所致。某些蛋白质如Rab1可以在动物模型中逆转由α-突触核蛋白引起的这种缺陷。示例性的帕金森氏病的治疗包括左旋多巴，多巴胺激动剂例如包括溴麦角环肽、培高利特、普拉克索、罗匹尼罗、吡贝地尔、卡麦角林、阿朴吗啡和麦角乙脲，多巴脱羧基抑制剂，MAO-B抑制剂例如司来吉兰(selegilene)和雷沙吉兰(rasagilene)，抗胆碱能药和金刚烷胺。
肌萎缩侧索硬化症(ALS/Lou Gehrig氏病)是其中运动神经元选择性地定向退化的疾病。示例性的ALS治疗包括力如太、巴氯芬、地西泮、三己芬迪和阿米替林。
其他示例性的神经变性治疗剂包括反义寡核苷酸和干细胞。
创伤愈合
创伤是以细胞或组织损伤为特征的病症类型。创伤愈合是最佳地引起组织完整性和功能恢复的动态途径。创伤愈合过程由三个重叠阶段组成。第一阶段是炎性阶段，其以体内稳态、血小板聚集和脱颗粒为特征。血小板作为第一响应，释放多种生长因子以征集免疫细胞、上皮细胞和内皮细胞。所述炎性阶段通常出现在第0-5天内。创伤愈合的第二阶段是增生期，在此期间巨噬细胞和粒细胞侵入所述创伤。浸润性成纤维细胞开始产生胶原蛋白。这个阶段的本质特性是上皮化、血管生成、肉芽组织形成和胶原蛋白产生。所述增生期通常出现在第3-14天。第三阶段是出现基质形成的重塑期。成纤维细胞、上皮细胞和内皮细胞继续产生胶原蛋白和胶原酶以及基质金属蛋白酶(MMP)用于重塑。发生胶原蛋白交联并且创伤经历收缩。所述重塑期通常出现在第7天至一年。
本文中描述的化合物和组合物可用于促进创伤愈合(例如，促进或加快创伤封闭和/或创伤愈合，减轻创伤和/或创伤周围组织的瘢痕纤维变性，抑制包围或最接近创伤的细胞的凋亡)。因此，在某些实施方式中，本发明提供了在受试者中促进创伤愈合的方法，所述方法包括向所述受试者施用化合物(例如CRM1抑制剂)、或其药学上可接受的盐或组合物。所述方法不需要实现创伤的完全愈合或封闭；所述方法促进任何程度的创伤封闭就足够了。在这方面，所述方法可单独或作为用于愈合受伤组织的其他方法的辅助而使用。
本文中描述的化合物和组合物可用于在炎性(或早期)阶段期间、在增生性(或中期)创伤愈合阶段期间、和/或在重塑性(或晚期)创伤愈合阶段期间治疗创伤。
在一些实施方式中，需要创伤愈合的受试者是人类或动物，例如，马、猪、或啮齿动物例如小鼠。
在一些实施方式中，可用于创伤愈合的本文中描述的化合物和组合物局部施用，例如最接近创伤部位，或全身施用。
更具体地说，本文中描述的化合物或组合物可通过涂布创伤或应用以本文中描述的化合物或组合物涂布或处理的绷带、填充材料、缝合线等而施用(任选联合其他药剂)到创伤部位。因此，可配制本文中描述的化合物和组合物供局部施用以治疗表面创伤。局部制剂包括通过口(颊)传递和传递到皮肤致使皮层(即表皮、真皮和/或皮下层)与本文中描述的化合物或组合物接触的那些制剂。局部传递系统可以用于施用本文中描述的化合物和组合物的局部制剂。
或者，本文中描述的化合物和组合物可通过例如注射溶液、注射缓释制剂、或引入包含本文中描述的化合物或组合物的可生物降解植入物，从而施用在创伤部位或其附近。
本文中描述的化合物和组合物可用于治疗急性创伤或慢性创伤。慢性创伤当正常修复过程被打断时发生。慢性创伤可由急性损伤由于未被识别的持续感染或初步处理不当而发展起来。然而，在大多数情况下，慢性病变是由于静脉、动脉或代谢血管病、褥疮、辐射损伤或肿瘤引起的进行性组织破坏的终末阶段。
在慢性创伤中，因种种原因没有发生愈合，所述原因包括糖尿病溃疡中的不当循环、显著坏死例如在烧伤中、和感染。在这些慢性创伤中，生存力或恢复期经常是限速步骤。细胞不再有生存力并因此初始恢复期因不利的创面环境而被延长。
慢性创伤包括但是不限于下列：慢性缺血性皮肤病变；硬皮病溃疡；动脉性溃疡；糖尿病足溃疡；褥疮；静脉曲张性溃疡；非愈合性下肢创伤；由于炎性病症的溃疡；和/或长期存在的创伤。
在具体的实施方式中，本文中描述的化合物和组合物可用于受试者中糖尿病创伤愈合或者促进糖尿病或缺血继发的腿脚溃疡的愈合。
在一种实施方式中，所述创伤是表面创伤。在另一种实施方式中，所述创伤是手术创伤(例如，腹部或胃肠道的手术创伤)。在又一种实施方式中，所述创伤是烧伤。在再一种实施方式中，所述创伤是辐射暴露的结果。
本文中描述的化合物和组合物还可以用于糖尿病创伤愈合、胃肠道创伤愈合、或由于例如手术所致的粘连的愈合。
本文中描述的化合物和组合物还可以用于愈合另一种疾病继发的创伤。例如，在炎性皮肤病、例如牛皮癣和皮炎中，存在继发于所述疾病并且由皮肤的深度开裂或皮肤抓挠引起的许多皮肤病变事件。本文中描述的化合物和组合物可用于愈合这些疾病例如炎性皮肤病如牛皮癣和皮炎继发的创伤。
在另一种实施方式中，所述创伤是内部创伤。在具体的方面，所述内部创伤是慢性创伤。在另一个具体的方面，所述创伤是血管创伤。在又一个具体的方面，所述内部创伤是溃疡。
创伤的例子包括但不限于，擦伤、撕裂、充气伤(即开放性气胸)、烧伤、挫伤、射击伤、切割伤、开放性创伤、贯通伤、穿透伤、刺伤、串线创伤(séton wound)、戳伤、手术创伤、皮下创伤、糖尿病病变、或切线伤。可通过本文中描述的化合物和组合物治疗的其他创伤例子包括急性状况或创伤，例如热灼伤、化学烧伤、放射烧伤、过度暴露于紫外线引起的烧伤(例如晒伤)；身体组织损伤，例如由于生产和分娩导致的会阴损伤；在医疗程序期间遭受损伤，例如外阴切开术；外伤引起的损伤，包括切、割、擦伤；因事故遭受的损伤；手术后损伤，以及慢性病况，例如压疮、褥疮、与糖尿病和循环差相关的病况、以及所有类型的痤疮。另外，所述创伤可包括皮炎，例如脓疱病、擦烂、滤泡炎和湿疹，口腔外科之后的创伤；牙周病；外伤之后的创伤；和肿瘤有关的创伤。创伤的另外的其它例子包括动物咬伤、动脉疾病、昆虫螫咬、骨感染、受损的皮肤/肌肉移植物、坏疽、皮肤撕开或撕裂、皮肤老化、手术切割包括慢性或不愈合的手术创伤、脑内出血、动脉瘤、皮肤脆弱、和手术后感染。
在优选实施方式中，创伤选自烧伤、切割伤、开放性创伤、手术或手术后创伤、糖尿病病变、热灼伤、化学烧伤、放射烧伤、压疮、褥疮、与糖尿病或循环差相关的状况。
本公开还涉及减少受试者在创伤愈合期间的瘢痕形成的方法和组合物。本文中描述的化合物和组合物可以以有效减少创伤中和/或周围瘢痕形成的量直接施用于创伤或最接近所述创伤的细胞。
创伤可包括受试者身体的任何部分的任何损伤。根据实施方式，提供了改善、减少或降低遭受烧伤的受试者的瘢痕形成的方法。根据优选的实施方式，提供了在遭受急性或慢性创伤或损伤的受试者中治疗肥厚性瘢痕、减少肥厚性瘢痕的出现、或降低肥厚性瘢痕发生概率的方法。
其他病症
本文中描述的化合物和组合物还可用于治疗异常组织生长和纤维变性的病症，包括扩张性心肌病、肥厚性心肌病、限制性心肌病、肺纤维化、肝脏纤维变性、肾小球肾炎、和其他肾病。
联合放射治疗
本文中描述的化合物和组合物用作放射致敏剂。因此，本文中描述的化合物和组合物可与放射治疗联合施用。放射治疗是医学利用高能辐射(例如，x射线，γ射线，带电荷粒子)来缩小肿瘤和杀死恶性细胞，并通常用作癌症治疗的一部分。放射治疗通过破坏恶性细胞的DNA来杀死它们。
放射治疗可用几种方式传递给患者。例如，辐射可从外源、例如患者身体外部的机器作为外照射放射治疗来传递。治疗癌症的外照射放射治疗利用在患者外部的辐射源，通常是放射性同位素例如60Co、137Cs，或高能X-射线源例如直线加速器。所述外部源产生准直射束引入患者中到达肿瘤部位。外源放射治疗避免了内源放射治疗的一些问题，但是它在辐射束的路径中不理想地和必然地与肿瘤性组织一起照射显著体积的非肿瘤性或健康组织。
通过将所述外部辐射束以各种“机架(gantry)”角度投射到患者内并且所述射束会聚在肿瘤部位上，可降低照射健康组织的不良影响，同时在肿瘤性组织中保持给定的辐射剂量。沿着辐射束路径的健康组织的具体体积单元改变，减少了整个治疗期间给每个这样的健康组织单元的总剂量。
还可通过将辐射束紧密对准垂直于所述辐射束的轴所取的肿瘤的总横截面，来降低健康组织的辐射。现有许多系统用于产生这样的周边对准，其中有一些利用多个滑动遮挡板，它们可逐片产生任意轮廓的不透辐射的屏蔽。
对于施用外照射辐射，所述量可以是对治疗区至少约1戈瑞(Gy)份，至少每隔一天一次。在具体的实施方式中，所述辐射以至少每天一次至少约2戈瑞(Gy)的份量施用于治疗区。在另一种具体的实施方式中，所述辐射以至少每天一次至少约2戈瑞(Gy)的份量施用于治疗区，每周连续五天。在另一种具体的实施方式中，辐射每隔一天、每周三次以10Gy份量施用于治疗区。在另一种具体的实施方式中，向有需要的患者施用总共至少约20Gy。在另一种具体实施方式中，向有需要的患者施用至少约30Gy。在另一种具体实施方式中，向有需要的患者施用至少约40Gy。
通常，患者一周四或五次接受外照射治疗。整个治疗过程通常根据癌症的类型和治疗目标而持续一至七周。例如，患者可在30天内接受2Gy/d的剂量。
内照射治疗是局部定位的放射治疗，是指辐射源放在肿瘤或患区的部位。内照射治疗可通过在需要治疗的区域内或其旁边放置辐射源来传递。内照射治疗也称为近距离治疗。近距离治疗包括腔内(intercavitary)治疗和间质内治疗。在腔内治疗中，容纳放射源的容器放在肿瘤中或附近。所述源放入体腔中。在间质内治疗中，仅放射源放入肿瘤中。这些放射源可长久停留在患者内。通常，放射源在几天之后从患者取出。所述放射源位于容器中。
有许多方法用于施用放射性药剂。例如，放射性药剂可通过靶向传递或通过全身性传递靶向放射性接合物例如放射性标记的抗体、放射性标记的肽和脂质体传递系统来施用。在靶向传递的一种具体实施方式中，所述放射性标记药剂可以是放射性标记抗体。参见，例如，BallangrudA.M.等，Cancer Res.，2001；61:2008-2014，和Goldenber，D.M.J.Nucl.Med.，2002；43(5):693-713，其内容通过引用并入本文中。
在靶向传递的另一种具体实施方式中，所述放射性药剂可以用脂质体传递系统例如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡的形式施用。脂质体可以由各种各样的磷脂例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成。参见，例如，Emfietzoglou D，Kostarelos K，Sgouros GAn analytical dosimetrystudy for the use of radionuclide-liposome conjugates in internalradiotherapyJ Nucl Med 2001；42:499-504，其内容通过引用并入本文中。
在靶向传递的又一种具体实施方式中，所述放射性标记药剂可以是放射性标记肽。参见，例如，Weiner RE，Thakur ML.Radiolabeledpeptides in the diagnosis and therapy of oncological diseasesAppl RadiatIsot 2002Nov；57(5):749-63，其内容通过引用并入本文中。
除了靶向传递之外，近距离治疗还可用于向靶点传递所述放射性药剂。近距离治疗是将辐射源放得尽可能靠近肿瘤部位的技术。所述源直接插入肿瘤中。放射源可以是丝、粒子或棒的形式。通常使用铯、铱或碘。
全身性放射治疗是另一种类型的放射治疗并且包括在血液中使用放射性物质。全身性放射治疗是靶向治疗的一种形式。在全身性放射治疗中，患者通常摄取或接受注射的放射性物质，例如放射性碘或与单克隆抗体结合的放射活性物质。
“放射性药剂”，在本文中定义时，是指包含至少一种发出辐射的放射性同位素的药剂。放射性药剂常规用于核医学中以诊断和/或治疗各种疾病。放射性标记药剂，例如，放射性标记抗体，包含作为辐射源的放射性同位素(RI)。如本文中预期，术语“放射性同位素”包括金属和非金属放射性同位素。放射性同位素基于放射性标记药剂的医疗应用来选择。当放射性同位素是金属放射性同位素时，通常使用螯合剂将所述金属放射性同位素与所述分子的其余部分结合起来。当放射性同位素是非金属放射性同位素时，所述非金属放射性同位素通常与分子的其余部分直接连接，或通过连接物连接。
在本文中使用时，“金属放射性同位素”是可用于体内或体外治疗或诊断程序的任何合适的金属放射性同位素。合适的金属放射性同位素包括但不限于：锕-225，锑-124，锑-125，砷-74，钡-103，钡-140，铍-7，铋-206，铋-207，铋212，铋213，镉-109，镉-115m，钙-45，铈-139，铈-141，铈-144，铯-137，铬-51，钴-55，钴-56，钴-57，钴-58，钴-60，钴-64，铜-60，铜-62，铜-64，铜-67，铒-169，铕-152，镓-64，镓-67，镓-68，钆153，钆-157，金-195，金-199，铪-175，铪-175-181，钬-166，铟-110，铟-111，铱-192，铁55，铁-59，氪85，铅-203，铅-210，镥-177，锰-54，汞-197，汞203，钼-99，钕-147，镎-237，镍-63，铌95，锇-185+191，钯-103，钯-109，铂-195m，镨-143，钷-147，钷-149，镤-233，镭-226，铼-186，铼-188，铷-86，钌-97，钌-103，钌-105，钌-106，钐-153，钪-44，钪-46，钪-47，硒-75，银-110m，银-111，钠-22，锶-85，锶-89，锶-90，硫-35，钽-182，锝-99m，碲-125，碲-132，铊-204，钍-228，钍-232，铊-170，锡-113，锡-114锡-117m，钛-44，钨-185，钒-48，钒-49，镱-169，钇-86，钇-88，钇-90，钇-91，锌-65，锆-89，和锆-95。
在本文中使用时，“非金属放射性同位素”是可用于体内或体外治疗或诊断程序的任何合适的非金属放射性同位素。合适的非金属放射性同位素包括但不限于：碘-131，碘-125，碘-123，磷-32，砹-211，氟-18，碳-11，氧-15，溴-76，和氮-13。
确定放疗最适合的同位素需要权衡各种因素。这些包括所述放射性同位素的肿瘤摄取和保留、血液清除率、辐射传递速率、半衰期和比活度，以及以经济的方式大规模生产所述放射性同位素的可行性。治疗用放射性药物的关键点是向肿瘤细胞传递必要的辐射量并达到细胞毒或杀肿瘤效应，同时不引起难以控制的副作用。
优选所述治疗用放射性同位素的物理半衰期与所述放射性药物在肿瘤部位的生物半衰期相似。例如，如果所述放射性同位素的半衰期过短，那么在放射性药物已经达到最大的靶/本底比值之前将已经发生大量衰减。另一方面，半衰期太长可导致向正常组织的不必要的辐射剂量。理想地，所述放射性同位素应该具有足够长的半衰期以达到最低剂量率并在细胞周期的辐射最敏感阶段期间照射所有所述细胞。另外，放射性同位素的半衰期必须足够长以允许足够的时间来制备、释放和运输。
在肿瘤治疗中选择用于给定应用的放射性同位素的其他实际考虑是可利用性和质量。纯度必须足够并且可再现，因为痕量的杂质可影响放射性药物的放射性标记和放射化学纯度。
肿瘤中的靶受体部位通常数量有限。因此，优选所述放射性同位素具有高比活度。比活度主要取决于制备方法。痕量金属污染物必须最小化，因为它们经常与放射性同位素竞争螯合剂并且它们的金属络合物与所述放射性标记的螯合剂竞争受体结合。
适合用于本发明方法的辐射类型可以变化。例如，辐射可以本质上是电磁辐射或微粒辐射。可用于实践本发明的电磁辐射包括但不限于x-射线和γ射线。可用于实践本发明的微粒辐射包括但不限于电子束(β粒子)、质子束、中子束、α粒子和负π介子。所述辐射可利用常规放射性治疗仪器和方法、以及通过手术期间和立体定向方法传递。关于适合用于本发明实践中的辐射治疗的其他讨论可在整个Steven A.Leibel等.，Textbook of Radiation Oncology(1998)(W.B.Saunders Company出版)中找到，特别是在13和14章中。辐射也可以通过其他方法传递，例如靶向传递，例如通过放射性“粒子”，或通过全身性传递靶向放射性接合物。J.Padawer等.，Combined Treatment with Radioestradiollucanthone in Mouse C3HBA Mammary Adenocarcinoma and with Estradiollucanthone in an Estrogen Bioassay，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.7:347-357(1981)。其他辐射传递方法可用于本发明的实践中。
为了肿瘤治疗，α和β-粒子发射体二者都已被研究。α粒子是特别好的细胞毒性剂，因为它们在一或两个细胞直径内消散大量能量。β-粒子发射体根据能量水平具有比较长的穿透范围(在组织中2-12mm)。所述长程穿透对于具有不均匀的血流量和/或受体表达的实体瘤尤为重要。β-粒子发射体产生更均匀的剂量分布，即使当它们在靶组织内不均匀分布的时候。
在具体的实施方式中，治疗有效量的本文中描述的化合物和组合物与治疗有效量的放射治疗联合施用来治疗癌症(例如肺癌，例如非小细胞肺癌)。必要的辐射量可由本领域技术人员基于用于具体癌症类型的已知剂量来确定。参见，例如，Cancer Medicine，第5版，由R.C.Bast等编著，2000年7月，BC Decker.
以上公开内容一般性描述了本发明。更彻底的理解可参考以下具体实施例得到。描述这些实施例只为了说明，并且不打算限制本发明的范围。形式上的改变和等效替换是在事件可能暗示或提供便利时预期得到的。虽然本文中使用了专用术语，但这样的术语旨在描述性含义并不是为了限制的目的。
示例
缩写
aq.    水溶液
Boc    叔丁氧羰基
CH2Cl2  二氯甲烷
DABCO   1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷
DIPEA   N,N-二异丙基乙胺
DMF     N,N-二甲基甲酰胺
DMSO    二甲基亚砜
eq.   当量
EtOAc    乙酸乙酯
EtOH     乙醇
h     小时
HPLC     高效液相色谱
LCMS     液相色谱质谱
LiOH     氢氧化锂
NMR      核磁共振
RT    室温或保留时间
T3P   丙基膦酸酐
TFA      三氟乙酸
THF      四氢呋喃
在这样的方法的整个以下描述中，应该理解，在适当的情况下，将以有机合成领域中的技术人员容易理解的方式向各种反应物和中间体添加合适的保护基并随后从所述反应物和中间体除去所述保护基。使用这样的保护基的常规程序以及合适的保护基的例子描述在，例如，“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Green，P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience，New York(1999)中。还应该理解，基团或取代基通过化学操作转化成另一种基团或取代基可在向着最终产物的合成路径上的任何中间体或最终产物上进行，其中可能的转化类型只受到所述分子携带的其他官能团在该阶段与所述转化中运用的条件或试剂的固有不相容性的限制。这种固有不相容性，和通过以合适的次序进行适当的转化和合成步骤来规避它们的方式，将是有机合成领域的技术人员容易理解的。转化实施例在下面给出，并且应理解，所描述的转化不仅限于为了举例说明所述转化的通用基团或取代基。对其他合适的转化的参考和说明在“Comprehensive Organic Transformations–A Guide toFunctional Group Preparations”R.C.Larock，VHC Publishers，Inc.(1989)中给出。其他合适的反应的参考和说明在有机化学教科书中描述，例如，“Advanced Organic Chemistry”，March，第四版，McGraw Hill(1992)，或“Organic Synthesis”，Smith，McGraw Hill，(1994)。纯化中间体和最终产物的技术包括例如，在柱或转板上的直接和反相色谱法、重结晶、蒸馏和液-液或固-液萃取，这将是本领域技术人员容易理解的。取代基和基团的定义除了定义不同之处外，与式I中相同。除非另作说明，术语“室温”和“环境温度”应该是指16至25℃之间的温度。除非另有说明，术语“回流”应该是指所使用的溶剂的温度在所述溶剂的沸点处或更高。
实施例1 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-新戊酰丙烯酰肼(化合物1)的合成。化合物1根据以下方案合成：
3,5-双(三氟甲基)硫代苯甲酰胺(步骤1)。2L的3-颈圆底烧瓶装入3,5-双(三氟甲基)苯甲腈(200g)在DMF(1L)中的溶液。所述溶液然后用NaSH(123.7g，2.0eq.)和MgCl2(186.7g，1.0eq.)处理并且所述反应混合物在RT下搅拌3h。所述混合物倒入冰-水浆(10L)中并用EtOAc(3x1L)萃取所述化合物。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤(3x100mL)，经过无水Na2SO4干燥，过滤，和减压浓缩，提供205g的目标粗制3,5-双(三氟甲基)硫代苯甲酰胺(收率：90％)，其没有进一步纯化就用于后面的步骤中。
3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑(步骤2)。5L 3-颈圆底烧瓶装入3,5-双(三氟甲基)硫代苯甲酰胺(205.65g)在DMF(1.03L)中的溶液。逐滴添加水合肼(73.2mL，2.0eq.)并将反应混合物在RT搅拌1h。逐滴添加HCOOH(1.03L)并将反应混合物在90℃回流3h。使其冷却到RT之后，所述反应混合物倒入饱和的碳酸氢钠水溶液(7L)中并用EtOAc萃取(3x1L)。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤(3x500mL)，经过无水Na2SO4干燥，过滤，和减压浓缩(35℃，20mmHg)，提供180g的所述粗产物。所述粗材料与石油醚(3x500mL)一起搅拌，过滤，并干燥，得到160g的目标3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑，作为浅黄色固体得到(收率：75％)。
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸异丙酯(步骤3)。2L 3-颈圆底烧瓶装入3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑(160g)在DMF(960mL)中的溶液。所述溶液用DABCO(127.74g，2eq.)处理并搅拌30min，然后逐滴添加(Z)-3-碘代丙烯酸异丙酯(150.32g，1.1eq.)。1h之后，所述反应混合物倒入冰-水浆(5L)中并用EtOAc(3x1L)萃取。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤(3x100mL)，经过无水Na2SO4干燥，过滤，和减压浓缩(35℃，20mmHg)，提供250g的粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用乙酸乙酯/正己烷梯度纯化(所述柱以己烷填充并且目标化合物从2％EtOAc/正己烷开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分，以提供(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸异丙酯(138g，收率：61％)。
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(步骤4)。在5L的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸异丙酯(130g，1.0eq.)溶解在THF(1.3L)中。LiOH(69.3g，5.0eq.)在水(1.3L)中的溶液逐滴添加到所述溶液中，并且所述反应混合物在RT下搅拌4h，然后用400mL冰-水浆骤冷并用稀的HCl水溶液制成酸性的(pH＝2-3)。所述混合物用EtOAc萃取(3x1L)，并且合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤，经过无水Na2SO4干燥，和减压浓缩以提供110g的(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(收率：94％)，(通过LCMS，顺式含量＝90.0％，反式含量＝8.2％)。
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-新戊酰丙烯酰肼(化合物1)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(0.2g，1.0eq.)溶解在EtOAc(20mL)中并冷却到-60℃，在其中逐滴引入新戊酰肼(0.08g，1.2eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(0.4mL，4eq.)，然后是DIPEA(0.4mL，4eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-新戊酰丙烯酰肼(0.11g，收率：43％)。
实施例2 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-吗啉乙酰基)丙烯酰肼(化合物2)的合成。
2-吗啉乙酰肼。在25mL的3-颈圆底烧瓶中，将2-吗啉乙酸甲酯(0.25g，1.0eq.)在RT下溶解在乙醇(5mL)中。水合肼(0.087g，1.1eq.)在RT下逐滴引入并且所述反应混合物在95℃回流20h。反应混合物减压浓缩(40℃，20mm Hg)以提供粗制2-吗啉乙酰肼(0.23g)，其没有进一步纯化就用于后面的步骤中。
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-吗啉乙酰基)丙烯酰肼(化合物2)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(实施例1，步骤4；0.5g，1.0eq.)溶解在CH2Cl2：EtOAc(20mL，2:1)中并冷却到-60℃，在其中逐滴引入2-吗啉乙酰肼(0.23g，1.0eq.)。逐滴添加T3P(50％在EtOAc中)(1.27mL，1.5eq.)，然后是DIPEA(0.96mL，2eq.)并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-吗啉乙酰基)丙烯酰肼(0.1g，收率：14％)。
实施例3 (Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)5-甲基-1H-吡唑-4-羰基肼(化合物3)的合成
5-甲基-1H-吡唑-4-羰基肼。在25mL密封管中，5-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(0.25g，1.0eq.)在RT下溶解在乙醇(5mL)中。水合肼(1mL，5eq.)在RT下逐滴引入并且所述反应混合物在120℃加热20h。反应混合物减压浓缩(40℃，20mm Hg)以提供粗制5-甲基-1H-吡唑-4-羰基肼(0.24g)，其没有进一步纯化就用于后面的步骤中。
(Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)5-甲基-1H-吡唑-4-羰基肼(化合物3)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(实施例1，步骤4；0.5g，1.0eq.)溶解于EtOAc:EtOH(15mL，2:1)中并冷却到-60℃，此时逐滴引入5-甲基-1H-吡唑-4-羰基肼(0.24g，1.0eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(1.69mL，1.5eq.)，然后是DIPEA(2mL，8eq.)并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)5-甲基-1H-吡唑-4-羰基肼(0.2g，收率：42％)。
实施例4 (Z)-2-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)N-环丙基硫代甲酰胺肼(化合物4)的合成
在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(实施例1，步骤4；0.5g，1.0eq.)溶解于EtOAc:EtOH(15mL，2:1)并冷却到-60℃，此时逐滴引入N-环丙基肼硫代甲酰胺(0.22g，1.2eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(1.69mL，2eq.)，然后是DIPEA(1mL，4eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mmHg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-2-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)N-环丙基硫代甲酰胺肼(0.06g，收率：9％)。
实施例5 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-甲基-N'-(2-吗啉乙酰基)丙烯酰肼(化合物5)的合成
N-甲基-2-吗啉乙酰肼。在25mL密封管中，2-吗啉乙酸甲酯(0.5g，1.0eq.)在RT下溶解于乙醇(5mL)中。在RT下逐滴引入甲基肼(0.16g，1.1eq.)并且反应混合物在95℃回流48h。反应混合物减压浓缩(40℃，20mm Hg)以提供粗制N-甲基-2-吗啉乙酰肼(0.27g)，其没有进一步纯化就用于后面的步骤中。
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-甲基-N'-(2-吗啉乙酰基)丙烯酰肼(化合物5)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(实施例1，步骤4；0.3g，1.0eq.)溶解于THF：EtOAc(15mL，2:1)并冷却到-60℃，此时逐滴引入N-甲基-2-吗啉乙酰肼(0.23g，1.5eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(1.27mL，2.5eq.)，然后是DIPEA(0.45mL，3eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-甲基-N'-(2-吗啉乙酰基)丙烯酰肼(0.052g，收率：12％)。
实施例6 (Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)哌啶-3-羰基肼(化合物6)的合成
哌啶-3-羰基肼。在30mL密封管中，哌啶-3-羧酸乙甲酯(1g，1.0eq.)在RT下溶解于乙醇(5mL)中。水合肼(1.05g，3eq.)在RT下逐滴引入并且所述反应混合物在120℃加热20h。反应混合物减压浓缩(40℃，20mm Hg)以提供粗制哌啶-3-羰基肼(0.8g)，其没有进一步纯化就用于后面的步骤中。
(Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)哌啶-3-羰基肼(化合物6)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(实施例1，步骤4；0.25g，1.0eq.)溶解于THF：EtOAc(15mL，2:1)并冷却到-60℃，此时逐滴引入哌啶-3-羰基肼(0.113g，1.1eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(1.69mL，4eq.)，然后是DIPEA(0.25mL，2eq.)并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)哌啶-3-羰基肼(0.01g，收率：2.4％)。
实施例7 (S,Z)-2-氨基-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-3-甲基丁酰肼2,2,2-三氟乙酸盐(化合物7)的合成
化合物7通过以下图式合成：
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰肼(步骤1)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(实施例1，步骤4；0.5g，1.0eq.)溶解于THF(10mL)并冷却到-10℃，此时添加NMP(0.3g，2.1eq.)并且所述反应混合物搅拌5min。然后添加氯甲酸异丁酯(0.465g，2.4eq.)并且反应混合物搅拌1h。形成的固体通过过滤除去。滤液冷却到0℃并引入叔丁氧羰基肼(0.21g，1.1eq.)。让反应混合物温热到RT，此时搅拌它1h。所述反应混合物倒入冰-水浆中并用EtOAc(3X50mL)萃取。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，经过无水Na2SO4干燥，过滤，和减压浓缩(25℃，20mmHg)以提供0.5g的粗产物。所述粗产物然后溶解在THF(10mL)中并在RT下逐滴添加TFA(2mL)，并将反应混合物搅拌2h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mmHg)并用戊烷研磨所形成的固体以提供(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰肼(0.25g，收率：48.5％)。
(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸。在25mL的3-颈圆底烧瓶中，(S)-2-氨基-3-甲基丁酸(0.8g，1.0eq.)溶解在水(4mL)中。添加碳酸氢钠(0.63g，1.1eq.)，然后是二碳酸二叔丁酯(2.97g，2.0eq.)，并将反应混合物在RT下搅拌2h。反应混合物用EtOAc(3X10mL)萃取。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，经过无水Na2SO4干燥，过滤，和减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供1.2g粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(0.7g，收率：47.3％).
(S,Z)-2-氨基-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-3-甲基丁酰肼2,2,2-三氟乙酸盐(化合物7)。在10mL圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰肼(0.25g，1.0eq.)溶解在THF(5mL)中并冷却到-60℃，此时逐滴引入(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(0.19g，1.3eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(0.81mL，2eq.)，然后是DIPEA(0.48mL，4eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(S,Z)-(1-(2-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)肼基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.07g，收率：18％)。在10mL圆底烧瓶中，(S,Z)-(1-(2-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)肼基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯然后溶解在二氯甲烷(2mL)中。添加TFA(0.05mL)并且反应混合物在RT搅拌5h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物(0.01g)，所述粗产物用石油醚研磨并减压干燥以产生(S,Z)-2-氨基-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-3-甲基丁酰肼2,2,2-三氟乙酸盐(0.006g，收率：2％)。
实施例8 (Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)吡嗪-2-羰基肼(化合物8)的合成
在25mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(实施例1，步骤4；0.5g，1.0eq.)溶解在二氯甲烷(5mL)中并冷却到-60℃，此时引入吡嗪-2-羰基肼(0.216g，1.1eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(3.39mL，4eq.)，然后是DIPEA(0.5mL，2eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)吡嗪-2-羰基肼(0.13g，收率：19.4％)。
实施例9 (Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)1-甲基哌啶-4-羰基肼(化合物9)的合成
1-甲基哌啶-4-羰基肼。在25mL密封管中，1-甲基哌啶-4-羧酸甲酯(0.2g，1.0eq.)在RT下溶解在乙醇(5mL)中。在RT下逐滴引入(0.127g，2eq.)水合肼并且所述反应混合物在120℃加热20h。反应混合物减压浓缩(40℃，20mm Hg)以提供粗制1-甲基哌啶-4-羰基肼(0.145g)，所述粗产物没有进一步纯化就用在后面的步骤中。
(Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-1-甲基哌啶-4-羰基肼(化合物9)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(0.25g，1.0eq.)溶解于EtOAc:THF(15mL；2:1)并冷却到-60℃，此时引入1-甲基哌啶-4-羰基肼(0.123g，1.1eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(0.85mL，2eq.)，然后是DIPEA(0.31mL，2.5eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(35℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-1-甲基哌啶-4-羰基肼(0.016g，收率：4.5％)。
实施例10 (R,Z)-2-氨基-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-3-甲基丁酰肼2,2,2-三氟乙酸盐(化合物10)的合成
(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸。在25mL的3-颈圆底烧瓶中，(R)-2-氨基-3-甲基丁酸(0.8g，1.0eq.)溶解于水(4mL)中。添加碳酸氢钠(0.394g，1.1eq.)，然后是二碳酸二叔丁酯(1.86g，2.0eq.)，并将反应混合物在RT下搅拌2h。反应混合物用EtOAc(3X10mL)萃取。合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤，经过无水Na2SO4干燥，过滤，和减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供0.75g粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(0.44g，收率：47.3％)。
(R,Z)-2-氨基-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-3-甲基丁酰肼2,2,2-三氟乙酸盐(化合物10)。在10mL圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰肼(0.05g，1.0eq.)溶解于THF(5mL)并冷却到-60℃，此时逐滴引入(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲基丁酸(0.038g，1.3eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(0.16mL，2eq.)，然后是DIPEA(0.095mL，4eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(R,Z)-(1-(2-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)肼基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.017g，收率：26％)。在10mL圆底烧瓶中，(R,Z)-(1-(2-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)肼基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯然后溶解在二氯甲烷(2mL)中。添加TFA(0.2mL)并且反应混合物在RT搅拌5h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物(0.02g)，所述粗产物用石油醚研磨并减压干燥以产生(R,Z)-2-氨基-N'-(3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酰基)-3-甲基丁酰肼2,2,2-三氟乙酸盐(0.007g，收率：35％)。
实施例11 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(吡嗪-2-基)乙酰基)丙烯酰肼(化合物11)的合成
2-(吡嗪-2-基)乙酰肼。在25mL密封管中，2-(吡嗪-2-基)乙酸甲酯(0.25g，1.0eq.)在RT下溶解在乙醇(5mL)中。在RT下逐滴引入水合肼(0.33g，4eq.)并且所述反应混合物在120℃加热20h。反应混合物减压浓缩(40℃，20mm Hg)以提供粗制2-(吡嗪-2-基)乙酰肼(0.2g)，所述粗产物没有进一步纯化就用在后面的步骤中。
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(吡嗪-2-基)乙酰基)丙烯酰肼(化合物11)。在50mL的3-颈圆底烧瓶中，(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(0.3g，1.0eq.)溶解于EtOAc:THF(15mL；2:1)中并冷却到-60℃，此时引入2-(吡嗪-2-基)乙酰肼(0.129g，1.1eq.)。逐滴添加T3P(在EtOAc中50％)(1.01mL，2eq.)，然后是DIPEA(0.35mL，2.5eq.)，并且所述反应混合物在-60℃搅拌1h。反应混合物减压浓缩(25℃，20mm Hg)以提供粗产物，所述粗产物通过柱色谱(60/120硅胶)利用甲醇/二氯甲烷梯度纯化(所述柱以二氯甲烷填充并且所述目标化合物从3％甲醇/二氯甲烷起开始洗脱)。合并含有所述目标化合物的级分以提供(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(吡嗪-2-基)乙酰基)丙烯酰肼(0.025g，收率：5％)。
实施例12 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-吗啉基-2-氧代乙酰基)丙烯酰肼(化合物12)的合成
合成2-吗啉基-2-氧代乙酸乙酯：
2-氯-2-氧代乙酸乙酯(1.25g，9.18mmol)在二乙醚(5mL)中的溶液在0℃逐滴添加到吗啉(1.0g，11.48mmol)在二乙醚(20mL)和三乙胺(1.16g，11.48mmol)中的溶液。让反应混合物温热到室温并搅拌2h。所述反应混合物过滤并减压浓缩滤液。黄色油转移到25mL冰水中并用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以产生1g粗产物，所述粗产物无需任何纯化就进一步使用。粗产物收率47％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.33-4.38(q，2H)，3.72-3.76(m，4H)，3.65-3.68(m，2H)，3.47-3.50(m，2H)，1.37-1.40(t，3H)。LCMS m/z 187.93[M+H]+，tR＝0.525min。
合成2-吗啉基-2-氧代乙酰肼：
2-吗啉基-2-氧代乙酸乙酯(1.0g，5.34mmol)溶解在乙醇(7mL)中并在0℃逐滴添加水合肼(0.267g，5.34mmol)。反应混合物在室温下搅拌1.5h。反应混合物减压浓缩以产生0.9g粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用在后面的步骤中。粗产物收率90％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.79(s，1H)，4.43-4.48(m，2H)，3.56-3.61(m，4H)，3.40-3.48(m，4H)。LCMS m/z 174.16[M+H]+，tR＝2.031min。
合成(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-吗啉基-2-氧代乙酰基)丙烯酰肼：
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(0.2g，0.569mmol)和2-吗啉基-2-氧代乙酰肼(0.02g，0.175mmol)在THF(3mL)中的溶液冷却到-60℃。逐滴添加T3P(0.098g，0.569mmol)(0.50mL)，然后是DIPEA(0.11g，0.854mmol)并在-60℃搅拌1h。反应混合物转移到25mL冰水中并用乙酸乙酯(2x 25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以产生0.3g粗产物，其通过色谱(0-4％MeOH/CH2Cl2)纯化，产生0.15g的(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-吗啉基-2-氧代乙酰基)丙烯酰肼(收率50％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.70-10.88(m，2H)，9.56(s，1H)，8.57(s，2H)，8.29(s，1H)，7.52-7.55(d，J＝10.4Hz，1H)，6.0-6.03(d，J＝10.4Hz，1H)，3.51-3.64(m，8H)。LCMS m/z 507.25[M+H]+，tR＝2.012min。
实施例13 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3,5-二甲基吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼(化合物13)的合成
合成2,2'-氮烷二基二丙-1-醇：
2-氨基丙-1-醇(5g，66.57mmol)和1-羟基丙-2-酮(5.77g，77.89mmol)溶解在乙醇(115mL)中并添加50mg的PtO2。反应混合物在室温下于50psi H2压力下搅拌24h。所述反应混合物过滤并减压浓缩滤液以产生粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用在后面的步骤中。粗产物收率：79％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ4.45(bs，2H)，3.42-3.43(m，1H)，3.16-3.22(m，4H)，2.65-2.69(m，2H)0.87-0.91(m，6H)：LCMS m/z 133.99[M+H]+，tR：4.077min。
合成3,5-二甲基吗啉：
2,2'-氮烷二基二丙-1-醇(7g，52mmol)在室温下悬浮在浓H2SO4(5.3mL，99.8mmol)并在180℃加热8h。反应混合物在0℃冷却并逐滴添加KOH(11.79g，21.02mmol)在60mL水中的溶液。反应混合物在室温下搅拌12h。过滤所述反应混合物并用CHCl3:MeOH(85:15；5X50mL)萃取滤液。合并的有机层经过无水硫酸钠干燥并减压浓缩，产生3.5g粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用在后面的步骤中(粗产物收率：58％)。
合成2-(3,5-二甲基吗啉基)乙酸乙酯：
碳酸钾(0.311g，2.25mmol)和溴乙酸乙酯(0.319g，1.91mmol)在室温下添加到3,5-二甲基吗啉(0.2g，1.73mmol)在乙腈(4mL)中的溶液。所述反应混合物在60℃搅拌12h。反应混合物转移到冰水中并用乙酸乙酯(20mLx3)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水Na2SO4干燥并减压浓缩，产生粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用于下一步(粗产物收率：54％)。
合成乙基2-(3,5-二甲基吗啉基)乙酰肼：
2-(3,5-二甲基吗啉基)乙酸乙酯(0.19g，0.944mmol)溶解在乙醇(4mL)中并逐滴添加水合肼(0.047g，0.944mmol)。反应混合物在80℃搅拌20h并减压浓缩所述反应混合物以产生粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用于随后的步骤中。(粗产物收率：97％).。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.95(s，2H)，8.84(s，1H)，3.60-3.63(m，2H)，3.25-3.29(m，2H)，3.14(s，2H)，3.05(s，2H)，0.86-0.88(m，6H)：LCMS m/z 188.12[M+H]+，tR 4.716min。
合成(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3,5-二甲基吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼：
在-60℃向(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(0.2g，0.569mmol)和2-(3,5-二甲基吗啉基)乙酰肼(0.106g，0.569mmol)在THF(10mL)中的溶液添加T3P(0.543g，0.854mmol)，然后是DIPEA(0.110g，0.854mmol)，并搅拌2h。反应混合物转移到25mL冰水中并用乙酸乙酯(2x25mL)萃取，合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩以提供粗产物，所述粗产物通过色谱(0-3％MeOH/CH2Cl2)纯化，产生0.02g的(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3,5-二甲基吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼(收率：7％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.58(s，1H)，9.83(s，1H)，9.56(s，1H)，8.54-8.56(m，2H)，8.25-8.30(m，1H)，7.49-7.51(d，J＝10.4Hz，1H))，6.01-6.04(d，J＝10.4Hz，1H)，3.44-3.57(m，2H)，3.28-3.34(m，2H)，3.21(s，1H)，3.15(s，1H)，2.84-2.88(m，2H)，0.93-1.04(m，6H)：LCMS m/z521.18[M+H]+，tR 1.898min。
实施例14 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3-氧代吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼(化合物14)的合成.
合成2-(3-氧代吗啉基)乙酸乙酯：
吗啉-3-酮(3g，29.67mmol)溶解在DMF(15mL，29.67mmol)中并在0℃添加NaH(1.78g，44.51mmol)。反应混合物在室温下搅拌30min并逐滴添加溴乙酸乙酯(3.76mL，32.64mmol)。所述反应混合物在室温下进一步搅拌3h并转移到50mL水中并用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水溶液(2x50mL)洗涤，经过无水硫酸钠干燥并减压浓缩，产生粗产物，所述粗产物通过色谱(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，产生600mg的2-(3-氧代吗啉基)乙酸乙酯(收率：10％)。LCMS m/z 187[M+H]+，tR 2.505min。
合成2-(3-氧代吗啉基)乙酰肼：
2-(3-氧代吗啉基)乙酸乙酯(600mg，3.21mmol)溶解在乙醇(3mL)中并在室温下添加水合肼(160.46mg，3.21mmol)。反应混合物在80℃加热1h。反应混合物转移到50mL水中并用EtOAc(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩产生粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用于随后的步骤中。(粗产物收率：54％)。LCMS m/z 174.05[M+H]+tR 2.489min。
合成(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3-氧代吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼：
(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(0.400g，1.14mmol)溶解在THF(4mL)中并添加2-(3-氧代吗啉基)乙酰肼(0.295g，1.71mmol)。在-60℃逐滴添加T3P(1.09g，1.71mmol)，然后是DIPEA(220.80mg，1.71mmol)，并且所述反应混合物搅拌1h。反应混合物转移到25mL冰水中并用EtOAc(2x25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩产生粗产物，所述粗产物通过色谱(0-4％MeOH/CH2Cl2)纯化，产生0.05g的(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3-氧代吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼(收率：8％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.33(bs，2H)，9.63(s，1H)，8.57(s，2H)，8.30(s，1H)，7.50-7.52(d，J＝8Hz，1H))，6.01-6.03(d，J＝8Hz，1H)，4.08-4.12(m，4H)，3.85-3.87(m，2H)，3.41-3.44(m，2H)。LCMS m/z 507.13[M+H]+，tR 1.950min。
实施例15 (Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3,3-二甲基吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼(化合物15)的合成
合成2-(3,3-二甲基吗啉基)乙酸乙酯：
3,3-二甲基吗啉(1g，8.68mmol)溶解在乙腈(5mL)中并添加碳酸钾(1.8g，13mmol)。反应混合物在室温下搅拌30min并添加溴乙酸乙酯(1.1mL，9.55mmol)。反应混合物在60℃加热1h。然后反应混合物转移到50mL水中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩产生粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用于下一步(粗产物收率：91％)。LCMS m/z202.9[M+H]+，tR 2.33min。
合成2-(3,3-二甲基吗啉基)乙酰肼：
在室温下向2-(3-氧代吗啉基)乙酸乙酯(600mg，2.98mmol)在乙醇(3mL)中的溶液添加水合肼(0.20mL，2.98mmol)。反应混合物在80℃加热1h，使其冷却到室温，转移到50mL水中，并用乙酸乙酯(3x25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩产生粗产物，所述粗产物没有进一步纯化就用于后面的步骤(粗产物收率：28％)。LCMS m/z 188[M+H]+tR：188min。
合成(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3,3-二甲基吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼：
在-60℃向(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)丙烯酸(0.250g，0.7mmol)和2-(3,3-二甲基吗啉基)乙酰肼(0.160g，0.85mmol)在THF(2.5mL)中的溶液逐滴添加T3P(0.63mL，1.06mmol)，然后是DIPEA(0.18mL，1.06mmol)。反应混合物搅拌1h，转移到25mL冰水中，并用乙酸乙酯(2x25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，经过无水硫酸钠干燥，并减压浓缩产生粗产物，所述粗产物通过色谱(0-4％MeOH:CH2Cl2)纯化，产生0.05g的(Z)-3-(3-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-1H-1,2,4-三唑-1-基)-N'-(2-(3,3-二甲基吗啉基)乙酰基)丙烯酰肼(收率：13％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.55(s，1H)，9.81(s，1H)，9.62(s，1H)，8.56(s，2H)，8.29(s，1H)，7.49-7.51(d，J＝10.4Hz，1H))，6.01-6.03(d，J＝10.4Hz，1H)，3.65-3.67(m，2H)，3.30-3.34(m，2H)，3.08(bs，2H)，2.55-2.58(m，2H)，0.96(s，6H)。LCMS m/z 521.18[M+H]+，tR 1.937min。
实施例16.检测。本发明的某些化合物，以及化合物X-1、X-2和X-3(下面显示)一起在各种检测法中测试。
抑制核输出
测定本发明的化合物抑制CRM1介导的核输出。结果显示在表2中。化合物对CRM1蛋白的抑制活性在RevGFP检测中测定。本发明的化合物在Rev-GFP检测中IC50<10μM是活性的，最优选的化合物具有IC50值为1μM的活性。
试验方案：Rev是来自1型人类免疫缺陷性病毒(HIV-1)的蛋白并在它的C-端结构域包含核输出信号(NES)和在它的N-端结构域包含核定位信号(NLS)。Rev蛋白的核输出依赖于经典的NES/CRM1途径(Neville等，1997，Kau等，2003)。在用CRM1的特异性抑制剂例如LMB处理的细胞中，观察到Rev的核蓄积(Kau等，2003)。在这个检测中，U2OS-RevGFP细胞在试验前一天接种到底部透明的黑色384孔板上。化合物在单独的384孔板中从40μM开始用DMEM以1:2系列稀释，然后转移到细胞上。细胞与化合物一起培育～1hr，然后用3.7％甲醛固定并用Hoechst 33258核染色。测量GFP在细胞核中的量并确定化合物的IC50(Kau等，2003)。
MTT细胞增殖检测
对MM1.S、Jurkat和HCT-116细胞利用CellTiterAQueous One溶液细胞增殖检测(Promega)来研究化合物的细胞毒和细胞抑制性质。所述检测基于在电子-耦合试剂PES(吩嗪乙基硫酸盐)存在下四唑鎓盐MTS的裂解。所述MTS四唑鎓化合物通过细胞生物还原成为可溶于组织培养基的有色甲臢产物。这种转化可能是通过由代谢活性细胞中的脱氢酶产生的NADPH或NADH完成的。通过向培养孔直接添加少量所述CellTiterAQueous One溶液试剂，培育1–4小时，然后用96-孔读板器记录490nm下的吸光度，来进行检测。所述吸光度揭示了与细胞数量和它们的代谢活性的直接关联。所述细胞以5x103至1.5x104个细胞(取决于细胞类型)在100μL新鲜培养基中接种在96-孔板的每个孔中，并让粘附细胞粘附过夜。化合物的储液在细胞培养基中稀释，以得到每个药物的八种浓度，范围从1nM到30μM，小于1％v/v的DMSO用作阴性对照。处理72h之后，20μl的CellTiterAQueous试剂添加到所述96-孔检测板的每个孔中并且所述板在37℃的潮湿、5％CO2气氛中培育1–4小时。然后使用96-孔读板器记录每个孔在490nm下的吸光度。在大多数情况下，所述检测一式三份进行，并且结果如下所述按半数最大抑制浓度(IC50)提供。光密度相对于化合物浓度进行作图，并利用非线性回归方程(Excel拟合)进行分析，计算每个化合物的IC50。结果显示在表2中。
测定药代动力学(PK)和脑:血比从小鼠(N＝3)收集血液，以产生总共10个时点(给药前，给药后5min、15min、30min、1小时、2小时、4小时、8小时、12小时和24小时)。小鼠在旋转基座上放血，每个小鼠贡献3个时点的血液收集。在指定的时点，动物以异氟烷麻醉，通过眼窝后穿刺收集每时点大约110L血液到预先冷却的K2EDTA(抗凝)管中。血样放在湿冰(wet ice)上并在样品收集的30分钟内离心(2000g，5min，4℃)以得到血浆。所有样品在大约-80℃冷冻储存直至分析。在分析之前，样品与内标(地塞米松)在乙腈中混合，涡旋，离心，上清液注入供分析。化合物在血浆中的浓度使用LC-MS-MS测量仪器(API 4000，具有电喷射离子化的三相四极矩式；Acuity超高效液相色谱柱C18，甲醇和甲酸作为有机溶剂)来测定。利用WinNonlinProfessional 6.2软件包，非房室药代动力学模型NCA 200，计算PK参数，包括但不限于Tmax、Cmax、t1/2、AUClast、AUCinf。
脑血比(B:P)。单独的小鼠组(N＝3)给药(10mg/kg，PO，除非另外指出)，然后在血浆浓度最大的的时候(估计Tmax在给药后2小时)处死，收集肢体血浆(terminal plasma)和脑。脑组织在收集之后用冷生理盐水清洗，在滤纸上干燥，称重并放在干冰上急冻。所有样品在大约-80℃冷冻储存直至分析。在分析的时候，脑组织被匀浆(匀浆溶液PBS，pH 7.4)，与内标(地塞米松)在乙腈中混合，涡旋，离心，利用LC-MS-MS方法(API 4000，具有电喷射离子化的三相四极矩式；Acuity超高效液相色谱柱C18，甲醇和甲酸作为有机溶剂)，注入上清液供分析化合物浓度。血浆样品用相同的方法(除了匀浆步骤之外)处理，并基于所产生的标准曲线计算在任一基质中的化合物浓度。结果显示在表2中。
表2.式I化合物及其比较化合物的检测结果
*在小鼠中以10mg/kg po给药
**来自US 2009/0275607的化合物26
***来自US 2009/0275607的化合物44
****在小鼠中以5mg/kg po给药
在小鼠中以10mg/kg po给药的化合物X-1的AUCInf值低于定量限。报告的是5mg/kg iv的数据。
在大鼠中以10mg/kg po给药
NT＝未测试
N/A＝低于可定量限
当在小鼠中以10mg/kg po给药时，化合物X-1的AUCInf低于检测限。当以5mg/kg iv给药时，化合物X-1显示出最小的暴露，如209hr·ng/mL的低AUCInf指示。由于化合物X-1当口服给药时它在脑中的水平可以忽略(低于定量限)，所以它的脑血比没有测定。
当在大鼠中以10mg/kg po给药时，计算得到化合物X-2的AUCInf为68.3hr·ng/mL。这样的暴露水平当与化合物X-3和本发明的式I化合物相比时，是极低的。然而，化合物X-2表现出中等的脑血比。所述低AUCInf与不可忽略的脑血比结合，提示化合物X-2虽然暴露水平低，但可跨过BBB。申请人相信，如果化合物X-2的AUCInf增大的话，它将具有明显更高的脑血比。
当在大鼠中以10mg/kg po给药时，计算得到化合物X-3的AUCInf为12300hr·ng/mL，表明暴露良好。然而，X-3表现出5.0的高B:P比。
式I的化合物，全部显示出高AUCInf(>3500hr·ng/mL)和比较低的B:P(<2.5)。通常，治疗剂的暴露水平较高往往增加脑穿透的可能性。因此式I的化合物表现出高AUCInf水平同时脑血比比较低，是令人惊讶的和意想不到的。
实施例17.模型
在SCID小鼠中作为异种移植物生长的Z-138淋巴瘤细胞系中评价化合物2对肿瘤生长的作用
Z-138(ATCC#CRL-3001)套细胞淋巴瘤细胞得自ATCC。这些细胞在补充有10％马血清、1％青霉素和链霉素、和2mM的L-谷氨酰胺的IMEM培养基中生长。细胞通过以1:5至1:10的比率稀释进行传代培养。使用二十四只(24)雌性CB-17SCID小鼠(Charles River Labs种系代号236)，5至6周龄。所述SCID小鼠在左肋接种体积为0.2mL的Z-138细胞，相当于4x107细胞/小鼠。
当肿瘤达到84.3mm3的平均体积时，开始处理。小鼠在处理开始之前根据肿瘤体积分配到四个8只的组中，使得每组的平均肿瘤体积在77至92mm3的范围内。小鼠用介质、标准治疗药/阳性对照药(环磷酰胺)或化合物2处理，如表3所示。
表3.初始研究组
组 动物数 实验品 剂量 给药途径 时间安排
1 8 介质 10ml/kg PO 周一三五
2 8 环磷酰胺 80mg/kg IP 1、3、5天
3 8 化合物2 15mg/kg PO 周一三五
4 8 化合物2 7.5mg/kg PO 周一三五
动物用5001啮齿动物饲料和无菌水不限量地饲养。肿瘤每隔一天用千分卡尺测量一次，并且按(长度x宽度x宽度)/2计算肿瘤体积。所有动物每天称重以评价处理组中动物重量可能的差异，作为处理产生的可能毒性的指标。重量损失超过它们初重的20％的动物被安乐死。重量损失超过它们初重的15％的小鼠不再次处理，直至重量损失恢复到小于它们初重的5％。肿瘤体积超过1500mm3的任何动物被安乐死。
给药溶液在每个给药日新鲜制备。化合物2作为含有69.61％化合物2并且余量由Pluronic F-68和PVP K29/32构成的冻干粉供应。其通过将所述冻干粉溶解在无菌水中而制备。环磷酰胺以8mg/mL溶解在无菌注射用水中。所有试验品以10mL/kg体重的体积施用。
处理组之间的统计学差异利用Whitney Mann秩和检验或ANOVA检验确定，临界值为0.05。
图1显示了当通过利用ANOVA检验比较肿瘤体积和肿瘤体积百分比二者的生长曲线下面积进行评价时，所有处理组相对于介质都显示出肿瘤生长的统计学显著性降低。这些处理组以p<0.0001显示出显著的肿瘤生长降低。在用化合物2以15mg/kg处理的组中观察到一些重量损失，并且虽然统计学上具有显著性，但当与介质对照相比时，严重的重量损失限于少数动物。
口服施用的化合物2以剂量依赖性方式在7.5mg/kg和15mg/kg两个剂量下都具有抗肿瘤效应。
化合物2在A549小细胞肺癌模型中的抗肿瘤活性
A549细胞系源自于来自58岁的高加索男性的肺泡癌组织的外植体培养物。所述细胞在具有10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的Ham’sF12-K组织培养基中生长。细胞被常规胰蛋白酶化并以1:10传代。使用三十二(32)只雌性CB-17SCID小鼠(Charles River Labs种系代号236)，5至6周龄，处理前平均体重为16.3克。小鼠在开始处理之前根据肿瘤体积分成四个(4)八(8)只组。在植入日，细胞在PBS中洗涤、胰蛋白酶化和重悬浮在完全培养基中达2x107细胞/mL的密度，然后与等体积的基质胶混合。这种混合物然后使用23G针以0.1mL的体积皮下接种到小鼠中。
小鼠用介质、标准治疗药/阳性对照药(顺铂)或化合物2处理，如表4所示。每天记录动物重量和状态，在星期一、星期三和星期五用千分卡尺测量肿瘤，肿瘤体积按(长度x宽度x宽度)/2计算。
表4.初始研究组
组 动物数 实验品 剂量 给药途径 时间安排
1 8 介质 10ml/kg PO 周一三五
2 8 顺铂 5mg/kg IP 1、15天
3 8 化合物2 10mg/kg PO 周一三五
4 8 化合物2 5mg/kg PO 周一三五
重量损失超过它们初重的20％的动物被安乐死。重量损失超过它们初重的15％的小鼠不再次处理，直至重量损失恢复到小于它们初重的5％。肿瘤体积超过1500mm3的任何动物被安乐死。
给药溶液在每个给药日新鲜制备。化合物2作为含有69.61％化合物2并且余量由Pluronic F-68和PVP K29/32构成的冻干粉供应。其通过将所述冻干粉溶解在无菌水中而制备。顺铂以5mg/mL溶解在DMSO中并在无菌注射用水中以1:10稀释。所有试验品以0.1mL/10g体重的体积施用。
处理组之间的统计学差异利用Mann-Whitney秩和检验或ANOVA试验确定，临界值为0.05。
图2显示了研究期间肿瘤体积变化的数据。介质对照组的平均肿瘤体积从第1天的95mm3增加到第29天的1669mm3。用顺铂处理的组在第1天具有104mm3的平均肿瘤体积，在第29天增加到1136mm3。用化合物2以10mg/kg PO处理的小鼠(第3组)在第1天具有101mm3的平均肿瘤体积，其在第29天增加到686mm3。用化合物2以5mg/kg PO处理的小鼠(第6组)在第1天具有101mm3的平均肿瘤体积，其在第29天增加到1231mm3。
肿瘤体积数据的其他分析通过计算每个肿瘤的平均曲线下面积(AUC)并利用单向ANOVA检验比较所述组来进行。这种分析表明，在介质对照组和用10mg/kg化合物2处理的组之间具有统计学显著性差异(p＝0.0005)。应该注意，在阳性对照组(顺铂)中，肿瘤生长在统计学上没有显著降低。
口服施用的化合物2以剂量依赖性方式在5mg/kg和10mg/kg两个剂量下都具有抗肿瘤效应。然而，只有10mg/kg组当与介质处理组相比时显示出统计学显著性差异。
在抗胶原蛋白抗体诱导的类风湿性关节炎小鼠模型(CAIA)中评价化合物2
使用二十四(24)只6至8周龄的雄性Balb/c小鼠。动物在处理开始时的重量差异不超过平均重量的±20％。动物随机分派到将接受介质、地塞米松或化合物2的3组中。在第0研究日(研究开始)，所有小鼠进行2mg ArthritoMAbTM抗体组合(MD Biosciences#S1203001)的静脉注射，然后在第3研究日进行LPS的腹膜内注射(100μg/小鼠)。研究动物用7.5mg/kg化合物2或4mg/kg化合物2口服、1mg/kg地塞米松腹膜内、或介质口服处理。除了适用给药假期的情况，所有组都在第4、6、8和10日每天一次进行处理。如果动物重量下降到低于它第0日初重的87％，所述动物不给药，直到它增重等于第0日重量的90％或更高。
在第0、3-8、10和12研究日监测所有小鼠的关节炎发展、临床症状和体重。观察包括皮肤、皮毛、眼睛、粘膜、出现分泌和排泄(例如腹泻)以及自主神经系统活性(例如，流泪，流涎，立毛，瞳孔大小，异常呼吸模式)。在诱导关节炎之前以及在试验品或对照品施用的第0研究日和后续的第3-8、10和12(研究结束)研究日检查每个动物的全部爪(前左和右，以及后左和右)的关节炎反应症状。根据以如下表5所示的严重度递增顺序的0-4级评分和记录关节炎反应。还使用带表卡尺(Kroeplin，德国慕尼黑)测量爪厚度。
表5.关节炎临床评分
施用剂量根据假定动物平均体重20g来计算。在100％乙醇中制备地塞米松的储液并在使用之前在PBS中稀释到适当的浓度。用于介质对照组的介质通过在100mL去离子蒸馏水中溶解0.6g Pluronic和0.6gPVP而制备。MAb储液(10mg/mL)由Morwell Diagnostics GmbH的分公司MD Biosciences供应。LPS用PBS稀释以达到适合的浓度。在临注射之前需要彻底的涡旋。化合物2作为含有70.71％化合物2并且余量由Pluronic F-68和PVP K29/32构成的冻干药物粉供应。每个小鼠施用200μL的固定体积。
评价主要基于关节炎评分和爪厚度测量的平均值。在适当的情况下，通过ANOVA和Tukey事后分析的数据分析用于确定处理效应的显著性。
图3A和3B显示了CAIA小鼠模型试验的结果。在第3日的LPS加强之后，所有组都产生了与施用LPS有关的临床症状。与介质处理小鼠相比，用7.5mg/kg或4mg/kg化合物2处理的小鼠分别在第5-12和6-12日具有明显降低的总关节炎评分。地塞米松处理与介质组相比在第6-12日明显降低总关节炎评分。与介质处理小鼠相比，用7.5mg/kg或4mg/kg化合物2处理的小鼠在第5-12日具有明显降低的后爪关节炎评分。地塞米松处理与介质组相比在第5和12日明显降低后爪关节炎评分。介质处理组和试验品处理组之间体重没有显著差异。
鉴于本研究中的发现，口服给药的7.5mg/kg或4mg/kg的化合物2在抗胶原蛋白抗体诱导的类风湿性关节炎模型中表现出显著的抗关节炎活性，持续降低平均关节炎评分和降低爪厚度。
化合物2在Lewis大鼠的胶原蛋白诱导关节炎(CIA)中的功效研究
四十(40)只6至8周龄的雌性Lewis大鼠(BK)，处理前体重范围180到200g，随机分层四(4)组(组A-D)，每组十只(10)大鼠。B组至D组的大鼠在第0日用在IFA中的牛CII在尾根附近的三个部位处和在背上用500μL的所述乳液皮内免疫(每个部位200μL、200μL、100μL)。在第7日，B-D组中的大鼠用相同的乳液量在以前注射部位附近皮内加强注射。在治疗性处理模型(C和D组)中，用CIA的大鼠在关节炎发作之后口服地塞米松或化合物2，如表6中所示。大鼠每天称重并且当重量损失大于13％时给予药物假期。
表6.初始研究组
通过肉眼观察评分和测量爪肿胀来评价CIA发展。这在致敏(第7日)之后的第一个5天中用表7显示的每个爪的临床评分系统每天评价，然后剩余时间每周两次(星期一和星期四)。
表7.关节炎临床评分
关节炎评分 等级
没有红斑和肿胀的症状 0
红斑和肿胀限于足中部(跗骨)或踝关节 1
红斑和轻度肿胀从踝延伸至足中部 2
红斑和中度肿胀从踝延伸至跖骨 3
红斑和严重的肿胀包围踝、足和趾 4
足体积在整个研究期在关节炎测量的同一天通过器官充满度测量法测量。每个后爪的体积和肿胀率利用以下方程式测量：
肿胀率＝(CN-C0)/C0×100％.
图4A是关节肿胀相对于时间的图形，并显示了在未处理大鼠和根据所述模型用阳性对照或用化合物2处理的大鼠中按0-4等级测量的关节肿胀。
4mg/mL的牛CII(在10mM乙酸中)用等体积的IFA乳化。
每个动物的临床评分求和，每组中所有动物的总平均值表示为平均关节炎评分。图4B是随时间变化的临床评分图形，并显示了未处理大鼠和根据所述模型处理的大鼠、用阳性对照或用化合物2处理的大鼠的临床关节炎评分。
在研究的第28日，每个处理组的三个代表被安乐死并获取后爪和保存在4％中性缓冲的福尔马林中。制备的后爪部分进行苏木精和伊红(H&E)染色。
对照动物的组织病理学分析显示与疾病过程一致的软骨侵蚀和关节翳形成。然而，在化合物2处理的大鼠中，在关节表面发现相对完好的软骨并且关节翳形成最小。图5显示了组织学分析的结果。
临床评分、关节肿胀和组织学检查数据显示出相关性。所述结果还显示了4mg/kg的化合物2(MPK)的治疗效能，如它对临床评分、关节肿胀和组织学检查的效果所示。Lewis大鼠CIA模型的结果在图4A与4B、和图5中描绘。
化合物2在雌性BALB/C小鼠的佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)诱导的牛皮癣中的抗牛皮癣活性
使用二十四(24)只6至8周龄的雌性BALB/c小鼠，体重在22和30g之间。所述小鼠随机分成四(4)组，每组八只(8)小鼠。动物的分组如下：I组(未处理；乙醇)，II组(PMA；乙醇)，III组(PMA；化合物210μM)和IV组(PMA；培他米松)。二十(20)μL的PMA(4μg/20μL丙酮)局部施用在II组到IV组的所有动物的耳廓上表面上。从第1天到第9天，PMA每天施用在左耳上和隔天(M-W-F)施用在右耳上。在施用用PMA之后的三十(30)分钟，介质或标准化合物(培他米松)或化合物2局部施用到不同组的动物的耳朵上。要注意的是，从第1天到第12天，介质、标准化合物和化合物2每天施用到不同动物的两个耳朵上。
每天观察动物的任何处理相关症状，为期12天。使用数字千分尺在T0时间(第1天)记录所有动物的基础耳厚度(在施用PMA之前)。在整个研究时程中，施用介质、标准化合物或化合物2之后4小时，每天使用数字千分尺测量耳朵的厚度并记录红斑、脱皮和起皱的评分。耳廓损伤的严重度通过表8显示的评分系统评价。
表8.牛皮癣评分
在整个试验期，动物不限量地供应营养平衡的热压灭菌颗粒饲料(Nutrivet Life Sciences，Pune(印度))并且可以得到正常饮用水。
可商购的100％DMSO(LR级)和乙醇(LR级)用来制备所述制剂。PMA通过在50.0mL丙酮中溶解10mg PMA而制备。化合物2通过在300μL的100％DMSO中溶解1.47mg的化合物2而制备。
实验结果在图6A-6D中表达为平均值±SEM。所有处理组的体重、食物和水消耗量之间没有显著差异。PMA施用显示，(i)左和右耳的厚度增加(II组对比未处理)和(II)左和右耳的疾病活动指数(DAI)增加(II组对比未处理)。重要的是，局部施用化合物2在(i)左和右耳厚度和(ii)左和右耳DAI中引起了PMA-诱导增加的显著降低。这种效应在研究的第6-8天显著，此时用化合物2处理的更多动物具有降低的左/右耳厚度(与II组的动物相比)和DAI(与II组的动物相比)。应注意，化合物2-介导的PMA诱导的左/右耳厚度和DAI增加的降低随着研究进行而削弱(第10天及以上)。
在PMA诱导的小鼠牛皮癣模型中，化合物2显示出统计学上显著的抗牛皮癣活性。
化合物2在咪喹莫特(IMQ)诱导的皮炎/牛皮癣模型中的抗牛皮癣活性(研究1)
使用四十(40)只6至8周龄的雄性BALB/c小鼠，处理前体重为22至30g。所述BALB/c小鼠随机分成四(4)组，每组10只小鼠。所有动物背部的小面积(约2×2cm2)皮肤被干净地剃毛。I组动物作为未处理动物。在II至IV组中[II组(IMQ；介质)，III组(IMQ；化合物2(1μM))和IV组(IMQ；环磷酰胺(10mg/kg)]通过从第1天至第13天每天在动物的背上局部施用31.25mg的IMQ乳膏来诱导牛皮癣。从第1天到第13天每天在施用IMQ之后四小时，向适当的组施用介质或标准化合物(环磷酰胺)或化合物2(局部-30μL；口服-根据体重)。施用介质或标准化合物或化合物2之后两小时，记录皮肤的红斑、脱皮、起皱和增厚以确定疾病活动指数(DAI)。
每天观察动物的任何处理相关症状，为期13天。每天的观察包括体重、摄食量、皮肤增厚、脱皮、起皱、红斑、鼻涕、运动、呼吸、毛发、腹部膨胀、皮肤状态、皮毛、粘膜、存在或不存在分泌、眼睛状态、竖尾、活动度、姿势和步态。背部皮肤损伤的严重度通过根据皮肤的外部观察，按照表9中的注释对红斑、脱皮、起皱和皮肤增厚评分定值，进行评价。
表9.牛皮癣评分
可商购的100％DMSO(LR级)、乙醇(LR级)、环磷酰胺(CMC)、PVP和Pluronic用来制备所述制剂。化合物2通过在300μL的100％DMSO中溶解1.47mg的化合物2而制备。环磷酰胺通过在100mL蒸馏水中溶解500mg的CMC而制备。
图7A和7B中显示的试验结果表示为平均值±SEM。
在研究时段期间，处理组的体重、食物消耗量和水摄入量当与对照组相比时，没有显著差异。化合物2削弱IMQ-诱导的疾病表征。
化合物2显示了抗牛皮癣活性，通过与介质处理组相比，疾病活动指数的降低而证明。此外，化合物2在没有不利影响体重、饲料和水摄入量下引起这种效应。
化合物2在咪喹莫特(IMQ)诱导的皮炎/牛皮癣模型中的抗牛皮癣活性(研究2)
四十(40)只雄性BALB/c小鼠(Biological E Limited，Hyderabad(CPCSEA登记号码：36/99/CPCSEA))被分成四(4)组，每组由十(10)只小鼠组成。动物根据它们的体重随机分组。所述组被命名为I组(未处理)，II组(IMQ；介质(PEG 400和HPBCD))，III组(IMQ；化合物2(2.5mg/kg))和IX组(IMQ；环磷酰胺(10mg/kg))。
每个小鼠背上的小面积被剃毛，确保这些面积具有相等的大小/面积。II至IV组通过从第1天至第6天每天在所述动物的背上局部施用50mg的IMQ乳膏来诱导牛皮癣。在研究的第1天和第2天，局部施用IMQ之后四小时，向相应组的动物施用化合物2或阳性对照(环磷酰胺)或介质。应注意，II组和III组的动物进行皮下注射，而IV组的动物接受口服。化合物2、介质和环磷酰胺处理在第2天结束。这些动物组保持每天IMQ处理，直到第6天。在第7天，牛皮癣诱导动物根据累计疾病活动指数(CDAI)再随机分成3组，每组由10只物组成。从第7天到第9天，动物接受介质或阳性对照或化合物2。应注意，动物在这些天不用IMQ处理。从第10天到14天，动物用IMQ(第10、12和14天)、或介质、阳性对照或化合物2(第11、13天)交替处理。
所有动物每天观察总体观察、体重、以及饲料和水摄入量，为期16天。在第1和2天，在施用介质/阳性对照/试验化合物之后2小时记录皮肤红斑、脱皮、起皱和增厚的评分，在第3到14天在IMQ施用、或施用阳性对照、介质或化合物2之后4小时记录评分。如表10所示对动物背上的诱导严重度进行评价和评分。
介质通过在70.0mL蒸馏水中溶解40mg的HPBCD而制备。化合物2通过将3.59mg溶解在0.5％PVP和0.5％Pluronic中而制备。环磷酰胺通过在100mL蒸馏水中溶解500mg的CMC而制备。
表10显示的试验结果表示为平均值±SEM。数据利用单向ANOVA评价，事后分析利用Dunnett’s检验进行。
表10.疾病活动指数(DAI)降低率
观察到用化合物2处理的动物中疾病活动指数的降低率明显大于在用介质处理在的动物中观察到的。在研究时段期间，处理组的体重、食物消耗量和水摄入量当与对照组相比时，没有显著差异。
得到的结果表明，用化合物2处理减弱了IMQ诱导的疾病表征，但没有严重影响食物或水的消耗量，因此没有显示出对所述处理组中动物体重的任何影响。
化合物2在Zucker大鼠中的效应
二十一(21)只7月龄的雄性Zucker大鼠根据相等的体重和食物摄入量分配成3组，N＝7。包括另一组N＝7的年龄相仿的Zucker瘦型对照作为对照。体重和食物与水摄入量在每天大致相同的时间(14:30-15:30h)测量。在处理日，在14:30-15:30h给药(在关灯之前大约2小时)。
Zucker肥胖和瘦型对照每工作日用介质(10mL/kg剂量体积；0.5％Pluronic F68和0.5％PVP K29/32水溶液)口服处理。两个化合物2的组(1.5mg/kg和3mg/kg)每工作日口服处理(10mL/kg剂量体积；0.5％Pluronic F68和0.5％PVP K29/32水溶液)。在处理期之前，收集4天基线数据。处理期是16天并且还包括6天的清除期。
图8A与8B和图9显示了化合物2对Zucker大鼠的效应。在基线时，3个Zucker肥胖组之间的体重和每日摄食量没有显著差异。然而，所有组与Zucker瘦型组都显著差异。
化合物2(1.5-3mg/kg口服)在16天处理期中与Zucker对照组相比产生剂量相关的每日摄食量和体重的降低。化合物2处理还显著增加了在同一时期测量的水摄入量。体重增加在3mg/kg化合物2的组和Zucker介质组之间有显著差异。体重增加在1.5mg/kg化合物2处理组和Zucker介质组之间没有显著差异。
化合物2显示了每天食物效应的剂量依赖性降低，较高剂量(3mg/kg)比1.5mg/kg剂量更有效。此外，3mg/kg的化合物2的组与Zucker对照组相比显示出较低的体重增加。
化合物2在膳食诱导的肥胖模型中的效应
2月龄的雄性Sprague-Dawley大鼠置于高脂膳食(Research DietsInc.，产品代码D12492，60％kcal％脂肪)下3个月。年龄相仿的大鼠组喂饲正常实验室饲料(LabDiet 5001，～13％kcal％脂肪)，这些动物作为DIO组的对照。
在4月龄时，其中2月龄时进入高脂膳食环境，所有大鼠根据相等的体重和摄食量分成3组，N＝7。每天大致同时测量体重和食物与水摄入量。在处理日，在关灯之前大约2小时给药。
DIO对照组每工作日用介质(口服，10mL/kg剂量体积；0.5％Pluronic F68和0.5％PVP K29/32水溶液)处理。1.5mg/kg化合物2的组在整个处理期每工作日口服处理(剂量10mL/kg剂量体积；0.5％Pluronic F68和0.5％PVP K29/32水溶液)。3mg/kg化合物2的组开始在第1周每工作日每天一次、然后在第2周每周两次(星期一，星期三)口服处理(10mL/kg剂量体积；0.5％Pluronic F68和0.5％PVP K29/32水溶液)。在第3和4周处理期间，3mg/kg化合物2的处理继续每周两次，只是在星期一和星期四给药。
在处理期之前，收集3天基线数据。处理期为期4周。还包括10天的清除期。
化合物2以粉末形式供应。试验化合物的活性百分比为65.89％。活性百分比利用1.437的BEW调节并通过溶解到0.5％w/v Pluronic F-68和0.5％w/v PVP K-29-32介质溶液中而制备。介质溶液每周制备，而化合物2每2天新鲜制备并储存在+4℃。动物以10mL/kg的体积给药。个体剂量根据最近的体重计算以提供适当的mg/kg/天剂量。
图10A和10B和图11显示了化合物2在膳食诱导的肥胖模型中的效应。在基线时，3个DIO组之间的体重和每日食物与水摄入量没有显著差异。然而，所有DIO组与普通膳食组有显著差异。具体地，以普通膳食饲养的动物相对于高脂膳食饲养的大鼠，体重明显较低。相反，高脂膳食饲养的大鼠相对于普通膳食饲养的大鼠，每天消耗的食物与水明显较少。
化合物2(1.5-3mg/kg口服)在28天处理期中与DIO对照组相比产生每日摄食量和体重的剂量相关性降低。化合物2处理还显著增加了在同一时期测量的水摄入量(F3,27＝11.2，P<0.01)。
在对体重增加的处理效应方面，这在形式上作为从第3研究日起的体重变化百分比来测量。在第7处理日(研究日10)和14(研究日17)，与DIO对照相比，两个化合物2的组的增重明显减少。
在清除期内每天测量体重、食物/水摄入量。化合物2的组的食物摄入量类似于DIO对照。化合物2的组的体重保持低于DIO对照。
化合物2以剂量依赖性方式降低每日摄食量。化合物2还在1.5和3mg/kg两个剂量下影响体重增加。
Nrf2抗炎通路的化合物1诱导
THP-1细胞(人类急性单核细胞性白血病细胞)用于评价化合物1在炎症环境中对Nrf2通路的效应。核因子(红细胞衍生2)-样2(Nrf2)因子是抗炎性转录因子。在正常状态下，Nrf2通过Kelch样-ECH相关蛋白1(KEAP1)保持在细胞质中，所述KEAP1通过泛素化降解Nrf2。Nrf2还可以作为CRM1货物蛋白移动到细胞核中和返回到细胞质中。在当前研究中，Nrf2通过用siRNA抑制(knock down)KEAP1而防止降解。然后，KEAP1-缺失细胞用TNFα处理以诱导炎症，并测试化合物1通过上调Nrf2通路来逆转炎症的能力。为了证明所述Nrf2通路的活化，通过定量PCR来定量它下游的两个基因NAD(P)H脱氢酶[醌]1(NQO1)和环氧水解酶1(EPHX1)的表达。
THP-1(急性单核细胞性白血病)细胞在两个10cm培养皿中用RPMI-1640培养基(Lonza)平板接种(6*106细胞/皿)，所述培养基补充有10％热灭活的胎牛血清(Invitrogen)和最终浓度为0.05mM的2-巯基乙醇。一个皿中的细胞利用Lipofectamine RNAiMax(Invitrogen)以50nM的KEAP1siRNA(Life Technologies，Silencer Select，siRNA ID#s18982)转染，而另一个皿中的细胞用50nM的对照siRNA——Block-iT(Invitrogen)转染。转染的细胞放置72h并且用定量PCR利用针对KEAP1的探针计算扣留KEAP1抑制效率。
接着，每个所述皿的细胞在不同的6-孔板中等分到4个孔中。每个板的一个孔用1μM的化合物1预处理1h，然后用20ng/mL的TNFα预处理24h。其他孔用1μM化合物1或20ng/mL的TNFα任一种或两种都不用来处理24h。所述处理之后，使用RNA提取试剂盒(Qiagen)从所述细胞提取RNA。每个处理组的RNA样品进行反转录，并在相应的cDNA序列上利用针对Nrf2和两个它的下游基因NQO1与EPHX1的探针进行实时PCR。THP-1细胞用KEAP1siRNA转染。达到了40％抑制效率。所述KEAP1抑制细胞用1μM的化合物1或20ng/mL的TNFα或二者一起处理24h。
图12A显示了当与未处理的细胞相比时，在用TNFα和化合物1联合处理的细胞中Nrf2表达增加了2.5倍。但是，在用化合物1和TNFα处理而没有KEAP1抑制的细胞中也发现了类似的Nrf2mRNA水平增加(高达3倍)。化合物1或TNFα单独对具有或者没有KEAP抑制的Nrf2表达不具有任何显著效应。
图12B显示了NAD(P)H脱氢酶[醌]1或NQO1在具有或者没有KEAP1抑制的细胞中的表达。图12B显示KEAP1抑制对NQO1表达存在影响。即使没有任何处理的样品在KEAP1抑制后也显示出它的mRNA水平的2倍增加。化合物1和TNFα的组合导致KEAP1抑制样品的NQO1表达4倍增加，相比之下，在没有KEAP1抑制的细胞中用相同的组合看到2倍增加。
图12C显示了用化合物1和/或TNFα处理之后，在具有或者没有KEAP1抑制的细胞中环氧水解酶1或EPHX1的mRNA水平。图12C显示了化合物1在存在或不存在TNFα时上调EPHX1的表达。KEAP1抑制增加了化合物1的效应，因为在具有化合物1和KEAP1抑制的样品中观察到高达2.5倍的诱导。
在20ng/mL TNFα存在下用1μM化合物1处理24hr来上调Nrf2信号。KEAP1抑制增强了这种效应，这通过相对于没有KEAP1抑制时NQO1和EPHX1的表达水平，较高的NQO1(4-倍对比2-倍)和EPHX1(2.5-倍对比1.5-倍)诱导倍数而看出。所述结果显示，CRM1抑制可在炎症期间活化Nrf2通路，并提示化合物1与KEAP1抑制剂联合处理可以比单独用化合物1处理更有效。
化合物1、2和12对NF-κB转录活性的效应
TNFα可诱导NF-κB的转录活性。这种转录活性当与NFκB结合并抑制其活性的IκB降解时启动。然后，NF-κB蛋白的II类家族的成员，RelA或p65，其与I类家族成员p50形成异二聚体，移入细胞核中。P65亚基在它的C端具有反式激活结构域，其激活炎症相关基因的转录。如同NF-κB，IκB也可移入细胞核中。IκB的核蓄积保护所述蛋白免于降解，因为降解主要发生在细胞质中。CRM1负责IκB的核输出。因此，通过抑制CRM1阻断IκB的核输出将NF-κB活性最小化，因为核IκB结合NF-κB并阻止NF-κB与DNA序列结合。
所述化合物在HeLa(恶性腺瘤)细胞上测试以定量它们抑制NF-κB转录活性的能力。在HeLa细胞中通过TNFα诱导NF-κB活性，然后添加所述化合物以抑制诱导的NF-κB活性。几种化合物即化合物1、化合物2和化合物12的半数最大抑制浓度(IC50)通过量效研究确定。
HeLa细胞在12-孔板(200,000细胞/孔)中平板接种并在出自Lonza的Eagle’s最低必需培养基(EMEM)中培养，所述培养基补充有10％热灭活胎牛血清(Invitrogen)和50μg/mL青霉素/链霉素(Invitrogen)，并放置过夜以粘附。细胞用系列稀释的(开始30μM；1:3稀释)化合物预处理1h，然后在无血清培养基中暴露于20ng/mL TNFα(Peprotech)4h。所述处理之后，细胞用PBS(Invitrogen)洗涤，并用RIPA缓冲液(Themo Scientific)裂解。所述细胞中NF-κB的转录活性通过化学发光转录因子检测试剂盒(Thermo Scientific，目录号89859)，按照制造商的说明书测量。简要地说，每种处理的1.5mg/mL RIPA裂解的全细胞提取物在96孔板中与NF-κB生物素化的共有序列结合。与所述共有序列结合的活性NF-κB转录因子与NF-κB p65第一抗体一起、然后与HRP-共轭第二抗体一起培育。向所述孔添加化学发光底物并使用光度计检测所生成的信号。IC50曲线的每个浓度分析三个单独的试验。XLFit模型205用于计算IC50曲线。
通过连续稀释化合物1、化合物2和化合物12，在化合物预处理1h之后继之以4h的20ng/mL TNFα暴露来测量NF-κB转录活性的抑制。评价每个浓度的三个独立实验，在此提供的是平均值。化合物1的IC50值为1.59μM，化合物2的IC50值为1.22μM，和化合物12的IC50值为1.46μM。
化合物1对体外生长的HeLa细胞中促炎蛋白COX-2表达的效应评价
HeLa细胞用补充有的10％热灭活的胎牛血清(Invitrogen)的EMEM培养基(Lonza)在6-孔培养皿中平板接种(2.5x105细胞/孔)。所述板的两个孔用10μM化合物1预处理30分钟，此时一个孔暴露于20ng/ml TNFα(Preprotech)1小时。其他孔用20ng/mL TNFα或什么都不用处理1小时。所述处理之后，使用RNA提取试剂盒(Qiagen)从所述细胞提取RNA。每个处理组的RNA样品反转录，并在相应的cDNA序列上利用针对COX-2的探针(Life Technologies)进行定量实时(qRT)PCR。
HeLa细胞用补充有的10％热灭活胎牛血清(Invitrogen)的EMEM培养基(Lonza)在6-孔培养皿中平板接种(5x105细胞/孔)。所述板的两个孔用1μM化合物1预处理30分钟，此时一个孔暴露于20ng/mlTNFα(Preprotech)24小时。其他孔用20ng/mL TNFα或什么都不用处理24小时。所述处理之后，所述细胞通过用补充有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液(Roche)裂解而产生全细胞裂解液。使用抗COX-2抗体(Cayman)进行COX-2蛋白的免疫印迹检测。每个样品的COX-2蛋白的信号强度相对于β-肌动蛋白(Santa Cruz)的信号强度归一化，并以任意强度单位绘图。
图13A中显示了通过qRT-PCR进行mRNA分析的数据。1小时的处理之后，TNFα诱导了COX-2mRNA的表达与对照相比大约增加8倍，而单独的化合物1对COX-2表达水平没有影响。化合物1不是COX-2mRNA表达增加的原因。
图13B显示了通过免疫印迹进行蛋白质分析的数据。HeLa细胞未处理、用20ng/ml TNFα或1μM化合物1、或用20ng/ml TNFα和1μM化合物1处理24小时，然后通过免疫印迹检测评价COX-2蛋白的存在量。与未处理的对照和化合物1处理细胞相比，TNFα-刺激细胞中COX-2蛋白在24小时中增加，而化合物1在TNFα存在下降低COX-2蛋白的量。每个样品的COX-2蛋白的免疫印迹信号强度相对于β-肌动蛋白的强度归一化并图形表示。
化合物1不影响TNFα诱导的COX-2表达，而是降低TNFα诱导的COX-2蛋白表达的量。
化合物1将炎症相关的CRM1货物蛋白定位在细胞核中
HeLa和THP-1(人类急性单核细胞性白血病)细胞用炎症诱导因子TNFα单独或与1-10μM的化合物1组合处理4-24h，然后通过免疫荧光(IF)分析炎症-相关CRM1货物蛋白的核定位，所述货物蛋白是：IKB，Nrf2，HMGB1，FoxP3，FOXO1a，RxRα，PPARγ和NFκB(p65亚基)。
为了检测IkB、Nrf2、RxRα和PPARγ定位，细胞用10μM化合物1预培育30分钟，然后用20ng/mL TNFα在无血清培养基中培育4小时。为了检测HMGB1、FoxP3和Foxo1A，细胞用1μM化合物1预培育2h，然后用20ng/mL TNFα培育24小时。为了检测NFκB，细胞用1μM化合物1预培育2h，然后用20ng/mL TNFα培育24小时。细胞用100％冰冷的甲醇(MeOH)固定并用0.1％吐温20、0.3M甘氨酸和1％BSA的PBS溶液透化/封闭，或用PFA(3％多聚甲醛和2％蔗糖的PBS溶液)固定和用0.1％Triton-X 100和1％BSA的PBS溶液透化/封闭。IKB通过Abcam的兔单克隆(E130)第一抗体(ab32518)检测；Nrf2通过Santa Cruz的兔多克隆第一抗体(sc722)检测；RXRα通过Santa Cruz的兔多克隆第一抗体(sc553)检测；PPARγ通过Cell Signaling的兔单克隆(E130)第一抗体(#2443)检测；Foxo1A通过Cell Signaling的兔单克隆(C29H4)第一抗体(#2880)检测；HMGB1通过Abcam的兔多克隆第一抗体(ab18256)检测；FoxP3通过Abcam的兔多克隆第一抗体(ab10563)检测；NFκB-p65通过Cell Signaling的兔单克隆(C22B4)第一抗体(#4764)检测。兔第二抗体Alexa Fluor 488(Invitrogen，A11008)用于所有染色。图像在20X放大倍数下拍摄。
在细胞核中锁定炎症相关CRM1货物蛋白对炎症具有不良影响，因此，IF检测可作为CRMI抑制剂抗炎效应的生物标志物。
IKB是引起促炎途径表达的NFκB的抑制剂。因为大部分IKB降解发生在细胞质中，它的核定位保护IKB免于降解并使它能够与核NFκB结合，阻断NFκB的促炎活性。Nrf2是在细胞核中引起抗炎活性表达的亮氨酸拉链转录因子。HMGB1是高迁移率族蛋白1因子，并通常与染色质紧密结合。在从损伤细胞主动分泌或被动释放时，HMGB1起到细胞因子的功能并引起促炎反应。HMGB1锁定在细胞核中阻止了它的促炎效应。FoxP3，叉头框蛋白P3，在具有免疫抑制活性的调节性T细胞的发展和功能中起到主转录因子的功能。FOXO1a是能够诱导抗炎基因例如血管生成素-2的转录因子。因此，核定位保护FOXO1a免于磷酸化、核驱逐和随后的降解。RXRα是类视黄醇核受体，其调节趋化因子例如Ccl6和Ccl9在巨噬细胞中的表达。RXRα是向炎症部位补充白血球必不可少的。RxRα的核截留导致原本用来结合促炎转录因子例如NFκB的转录共活化剂的更新和耗尽。PPARγ是配位体活化的转录因子，属于核受体超家族，并调节抗炎基因的表达。
图14A和14B中显示的结果证明了上述货物蛋白的核定位，即使在已知诱导炎症的TNFα存在下。所述结果表明了化合物1诱导抗炎途径以克服炎症的能力。
在大鼠BCCI损伤之后化合物1对认知缺陷的效应的评价
通过皮质撞伤器件诱导雄性Sprague Dawley大鼠的前内侧皮质(MFC)双侧控制性皮质撞击(BCCI)损伤。在CCI之后，控制任何皮质表面出血，缝合筋膜和头皮。假手术大鼠被麻醉，固定在立体定位器中，并进行颅骨切开术。
孕酮16mg/mL溶解在22.5％2-羟丙基β-环糊精中并在损伤之后1h腹膜内给予初始注射(16mg/kg)。其余的注射(全部16mg/kg)在损伤后6h和在损伤之后连续5日皮下给予。孕酮注射液制成1mL/kg的浓度。孕酮用作对照。
0.2、0.4和0.6mg/mL化合物1悬浮在介质(0.6％w/vF-68和0.6％w/v PVP K-29/32的水溶液)中并在损伤之前16h和损伤之后2h以10mL/kg的浓度口服，并继续施用4天。对照大鼠在相同的时点接受化合物1的等量介质注射液。处理组概括在表11中。
表11.处理组
Morris水迷宫(MWM)试验是测量啮齿动物利用视觉线索学习和记忆的空间航行任务。受试者经过数天过程学习发现隐藏的平台。MWM试验在损伤之后进行两周。让雄性Sprague Dawley大鼠在水池中游泳，直到它们到达位于槽的西南象限的平台，或直到过去90秒。通过挂在水池上方的摄影机跟踪行为并利用图像跟踪软件(ANY-maze)记录和分析。
图15A显示了化合物1和孕酮对MWM试验的习得的影响。双向重复测量ANOVA发现显著的处理效应。与假损伤大鼠相比，BCCI损害的大鼠显示出显著的空间学习缺陷，这通过在5-天学习期期间发现隐藏平台的潜伏期显著增加来表明(图15A)。与介质处理的BCCI损伤大鼠相比，化合物1(2、4和6mg/kg)显示发现隐藏平台的潜伏期剂量依赖性降低，6mg/kg对损伤后17和18天有显著效应，4mg/kg对18天有显著效应。所述数据提示化合物1具有神经保护效应。
图15C是接受假损伤(假性)、CCI+介质(对照)、或CCI+化合物1(6mg/kg)的动物的全脑照片，并显示了在振动切片机切片之前定性目测检查全脑的结果。所述检查指出假性动物都没有(4个中的0个)呈现对背内侧皮层组织的损伤。完全相反，全部四个CCI对照呈现出局限于该皮层区域的严重双侧损伤。接受化合物1的CCI动物显示出从中等到最小的损伤。应注意，在化合物1的组中表现出最严重损伤的大脑比CCI对照组中的所有大脑的严重性都低。
测量从每个处理组大鼠采集的血浆中几种细胞因子的表达水平。样品冷冻收集并储存在-80℃。在试验当日，融化样品，稀释四倍，并在Luminex平台上分析细胞因子表达。使用Millipore制造的multipliex试剂盒分析样品的细胞因子GRO/KC、IFNy、IL-1B、IL-6、IL-10、IL-12p70和TNFa。如图15B所示，在样品之间的表达水平中观察到相同的模式。最大的变化在IL-10中。6mg/kg化合物1与介质处理对照组相比降低IL-10。
在许多情况下，外伤性损伤引起继发损伤反应。在大多数情况下，结果将是炎症。所述炎性反应由细胞因子和趋化因子驱动并部分通过损伤组织衍生产物而扩大(损伤相关分子模式)。
多器官功能障碍综合征(MODS)是了解甚少的器官功能相继和逐渐丧失的综合征，是损伤后晚期死亡的最经常原因，造成显著的发病率和死亡率。MODS被认为部分是由于炎性途径的过度或适应不良地活化所致。
从来自前囟之前大约2-3mm的抗-NeuN免疫标记切片收集定量的细胞密度测量。在CCI处理动物中在邻近于损伤部位的皮质区域中IV-VI层周围(试验条件不知)或在假性动物的相等区(背侧皮质)中提取目的区域(ROI)。还在同一切片的腹侧皮质区域中评价类似区域的ROI。使用Keyence BZ-II Analyzer软件的细胞计数模块进行细胞鉴定。测定每个ROI的细胞与灰质(CG)面积系数。假性动物在背侧和腹侧两个区域内呈现出均匀的致密标记。正如所料，CCI对照动物相比于假性动物，在背侧(与假性动物相比-45％)和腹侧(与假性动物相比-30％)两个皮质区显示CG系数降低(图15D)。通过在腹侧皮质中用化合物1处理，减轻了CCI诱导的CG系数降低(与假性动物相比-3％；p＝0.09)。虽然在腹侧皮质中化合物1对比介质处理的效应不是统计学显著性的，但预期在较大的研究中这种效应将突破统计学显著性。在紧邻损伤部位的背侧皮质区没有检测到化合物1的效应(与假性动物相比-32％)。观察到的化合物1对腹侧区对比背侧区的效应差异可能是与损伤程度相关的阈效应，其与距离损伤部位的距离逆相关。因此，在这些情况下，对背侧皮质区的损害可能太严重而不能由化合物1挽救。
进行免疫荧光以评价TBI对几种免疫应答途径的影响，并确定化合物1是否可以通过那些途径的一种或多种来介导它的神经保护效应。继发损伤反应的半定量测量利用免疫荧光标记检查抗大鼠IgG(血脑屏障(BBB)渗透性的指标)和TNFα(神经炎症的指标)。在那些用于NeuN标记评价的300μM内的相邻切片中，在损伤部位周围的皮质区中以20X放大倍数成像全部标志物。对于每种标记，在邻近于损伤部位(或假性动物的相等背侧皮质区)的IV-VI层内画出目标ROI的轮廓，并从腹侧皮质中相同层收集参照ROI。在两种ROI的每一种中评价归一化荧光强度。对于所有标记，测出所述腹侧皮质参照部位在组之间没有差异(p>0.5)；因此，确定目标比参照值(IF)的百分比。
在损伤组织的神经元中表达抗大鼠IgG(图15E中箭头指示)。图15E显示了抗大鼠IgG分布在皮质组织的损伤部分的中性粒细胞内。在假性动物组织中不存在抗大鼠IgG。TNFα免疫阳性细胞(在图15E中箭头指示)在对照动物的损伤部位周围的损伤组织中清晰可见。这些成分在化合物1-处理动物和假性动物中基本不存在。图15E显示，化合物1在暴露于脑损伤的大鼠中降低继发损伤反应。
胶原蛋白诱导的关节炎(CIA)2号研究
为了进一步研究本文中描述的化合物对炎症生物标志物的效应，开始第二CIA模型。在这个模型中，组命名为A组(未处理)、B组(模型；介质处理)，C组(5mg/kg化合物2，QoD)。B和C组中的大鼠用在IFA中的牛II型胶原蛋白在第0日皮内免疫，并在第7天给予加强注射。具有CIA的大鼠在关节炎发作(第11天)之后口服化合物2。通过肉眼观察评分和测量爪肿胀来评价CIA发展。这在致敏(第7天)之后的第一个5天中利用上面表7描述的临床评分系统每天评价，然后每周两次(星期一和星期四)直到第28天。另外，在化合物处理之后4天(研究第15天)和10天(研究第21天–疾病的峰值)和研究最后(第28天)，对所有组的动物进行CD45、CRP、CCL2/MCP-1、TNF-α、IL1-β、IL-6、IL-17的ELISA，以及测量组织蛋白酶K和弹性蛋白酶。另外，在研究的最后一天(第28天)，每组的一些代表性动物进行跟骨的三维微观体层密度测量法，并定量爪中的骨侵蚀。
图16A和16B显示，用5mg/kg化合物2处理的大鼠与介质处理大鼠相比具有显著降低的关节肿胀(图16B)和临床评分(图16A)。
图17A和17B显示，用5mg/kg化合物2处理的大鼠与介质处理大鼠相比具有显著降低的后爪中骨侵蚀。用化合物2处理的动物中关节的状态与未处理动物相当。相反，介质处理动物在它们的后爪中表现出统计学上显著增加的骨侵蚀。
利用A检测和ELISA测量化合物2对促炎细胞因子和炎症标志物水平的效应。在第一次免疫之后的第21天从模型组中的2只大鼠和化合物2处理组中的2只大鼠、以及在研究结束时从未处理组中的2只大鼠、模型组中的3只大鼠和化合物2处理组中的3只大鼠收集滑液。
图17C-17F显示，与模型组相比，化合物2对滑液样品中的促炎细胞因子和炎症标志物的产生显示抑制作用。降低的细胞因子包括IL-1β、IL-6和MCP-1，炎症标志物是C-反应蛋白(CRP)。
检测还用于测量血清中促炎细胞因子的水平。在化合物处理之后4天(第15天)、化合物处理之后10天(通常在疾病峰值–第21天)和在研究结束时(第27天)收集血清样品(1mL血液/大鼠)。
图17G显示了与模型组相比，化合物2显示出对血清样品中IL-1β产生的抑制作用。
试验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型
EAE模型是研究人类CNS脱髓鞘疾病例如多发性硬化症的公认模型。化合物1的效应在C57B1/6J雌性小鼠的EAE鼠模型中以MOG诱导进行研究。动物被分成3组，命名为I组(介质对照)、II组(地塞米松阳性对照)和III组(7.5mg/kg化合物1)。生理盐水、地塞米松和化合物1按照图18A显示的时间表施用。生理盐水和地塞米松从第0天开始每天腹膜内施用。7.5mg/kg化合物1从第11天(疾病发作)开始连续3周在星期一、星期三和星期五口服。所述疾病通过在研究第0天单次皮内注射在弗氏(Freund’s)完全佐剂(CFA)中乳化的MOG、继之以用百日咳毒素(PT)在研究第0天腹膜内补充免疫刺激和在48小时后于研究第2天再次补充免疫刺激而诱导。
如图18B中所示，所述疾病的第一个征象在MOG免疫之后7-9天出现并且疾病峰值在研究第17天发生。当与介质对照(I组)相比时，从第0天开始用地塞米松以1mg/kg剂量IP处理显著降低了研究第8-37天(II组)的临床评分。从第11天开始用化合物1以7.5mg/kg的剂量(III组)处理显著降低疾病评分和严重度。这些结果显示在图18B中。
鉴于在本研究的条件下得到的发现，在研究第11天开始用化合物1以7.5mg/kg的剂量p.o.处理导致疾病评分和严重度降低。
实施例18.创伤愈合模型
材料
小鼠-C57BL/6J小鼠，雄性，6-8周龄，SPF，从HarlanLaboratories LTD.得到。小鼠关在无菌独立通风笼具(IVC)中，食物和水可不限量地得到，12h/12h明暗周期，控制温度为19-21℃，控制湿度在40–60％，动物室内正气压，每3个月对选择的哨点进行健康报告控制。
猪-家猪(sus scrofa domestica)(主要Landrace X大白猪)，雌性，大约60Kg，4-5月大，以色列Kibbutz Lahav的Lahav Institute ofAnimal Research。猪关在清洁的非SPF环境中，自来水直接来自公共来源，不限量，食物按照兽医指导的标准生长表的推荐。
吸入用ISOFLURANE 99.9％，批号6027962，Abbot LaboratoriesLtd，英国
水-注射用水，批号11481012，B.Braun Melsungen AG，德国
生理盐水–0.9％氯化钠注射液，批号12224012，B.BraunMelsungen AG，德国
DMSO–二甲亚砜，D2650，Sigma-Aldrich Inc.，U.S.
F-68
PVP K-29/32
全身施用和局部施用化合物1对C57BL小鼠皮肤创伤的效应评价
在小鼠纵向全厚度皮肤切口创伤模型中研究化合物1对皮肤创伤愈合的效应。在到达时，动物通过耳标识别，称重并在开始试验之前适应新环境数日。在创伤当天，小鼠称重并根据重量差异分层随机化分成6个试验组，每组6个动物。在手术程序之前，小鼠用异氟烷麻醉并修剪动物的背部。使用标准解剖刀片在动物背部(平行于脊骨)进行20mm的全厚度纵向切口。创伤后三小时，由于动物的皮肤弹性和活度，切口呈现椭圆形。在该阶段，测量最宽的创伤面积以建立基线伤口宽度。通过测量所述创伤的最宽面积进行创伤愈合评价。处理组由经口饲组或局部组组成。在试验期间，伤口被拍照记录并进行形态分析。在试验结束时，创伤后8天，小鼠被处死，测量伤口宽度和收集创伤区域的活检组织并进行分析。
表12.初始研究组
给药溶液在每个给药日新鲜制备。用于经口饲的化合物1作为冻干粉供应并在0.6％w/vF-68和0.6％w/v PVP K-29/32水溶液中重构以制成0.75mg/mL储用悬液，其用0.6％w/vF-68和0.6％w/v PVP K-29/32水溶液连续稀释以制备7.5mg/kg和4mg/kg的工作溶液。用于局部施用的化合物1作为冻干粉供应并悬浮在水中至浓度为10mM，其用水进一步稀释以达到局部施用的最终工作浓度。
作为每天形态学评价的一部分，使用数字照相机FinePix S700进行拍照记录。图19是创伤后第5天每个试验组的代表性伤口照片。黑色比例条代表1cm。在33只小鼠中制成总共33个伤口。形态学评价证明用化合物1口服或局部处理的积极效果。所有的处理都引起比对照优越的创伤愈合。处理伤口尺寸较小并且痂较轻、较薄和均匀且没有开裂，表示创伤愈合的后期。当与处理组同一天评价时，对照组的伤口显得尺寸较大并覆盖着厚而开裂的痂，在伤口的边缘和中间暴露了未愈合的创伤区域(作为发红和粉红色区域观察到)。
形态分析是在动物的临床前研究和在人类创伤的临床治疗中用于创伤愈合评价的主要参数。根据形态分析，化合物1表现出疗效，并对创伤愈合具有积极的影响。应注意，化合物1的局部施用和全身施用二者都导致更好的创伤愈合，这通过伤口大小减小和更好的结痂性质来度量。
在猪皮肤创伤上局部施用试验化合物的效应评价
试验化合物对皮肤创伤愈合的效应可在猪纵向全厚度皮肤切口创伤模型中研究。在到达时，动物通过耳标识别，称重并在开始试验之前适应新环境数日。在手术之前三天，猪转移到住院设施中适应环境。在所述程序之前的十二小时禁食。手术当天，猪用氯胺酮、甲苄噻嗪、地西泮和异氟烷麻醉。胸部和腹部背面的毛使用剪毛器(刀片号30)仔细剪切，并分两排标记4cm2的20个独立区域(每排10个区域)。使用11号解剖刀片制作十对2.5cm全厚度纵向皮肤切口，距背面中线任一侧4cm。
手术程序之后，伤口被分成试验组并通过在创伤区域和伤口边缘上局部施用来每天处理。处理区域由离伤口中心直至2cm距离的皮肤表面组成。给药溶液逐渐利用移液管施用在每个伤口上，直到全部处理体积(例如，1mL生理盐水或试验化合物)被组织吸收。
创伤后数小时，由于动物的皮肤弹性和活度，切口呈现椭圆形。在这个阶段，测量创伤的最宽区域以建立基线创伤宽度。通过测量所述创伤的最宽区域进行创伤愈合评价。在试验期间，创伤被拍照记录并进行形态分析。
试验结束时(例如，创伤之后12天)，猪通过施用麻药和KCl处死。评价伤口形态，测量伤口宽度并获取创伤区域的活检组织和使用4％多聚甲醛固定供进一步分析。固定之后，伤口活检组织使用高分辨率数字照相机例如FinePix S700拍照记录，创伤区域的活检组织进行组织病理学分析。以配对方式进行创伤愈合评价，其中用试验化合物处理的每个伤口与背面中线另一侧相同解剖位置的对照伤口直接比较。因为与猪背部不同区域的皮肤中血管化和血液循环程度有关的变异性，这种配对的愈合评价在客观评价和客观比较处理伤口与非处理伤口方面是关键的。位于脖子附近前面区域的伤口显示出比位于后背部的伤口好得多的愈合性质
表13.初始研究组
组 伤口数 实验品 剂量 给药途径 时间安排
1 右侧5个前面伤口 对照生理盐水 1mL 局部 每天
2 右侧5个后面伤口 对照生理盐水 1mL 局部 每天
3 左侧5个前面伤口 试验化合物 3μM 局部 每天
4 左侧5个后面伤口 试验化合物 1μM 局部 每天
给药溶液在每个给药日新鲜制备。试验化合物作为冻干粉末供应并在0.9％氯化钠注射液中进一步重构以制成3mg/mL储用悬液。所述储用悬液用0.9％氯化钠注射液进一步稀释到3μM和1μM的最终浓度供局部施用。
均匀、薄而均一组织化的痂表面，没有伤口的渗出、流血或分泌事件，表明创伤愈合。高度不均匀、开裂和深色的痂表明在创伤愈合过程期间许多渗出、分泌和流血事件。
局部施用试验化合物对猪的创伤愈合早期过程的效应评价
试验化合物对早期创伤愈合的效应可在猪纵向全厚度皮肤切口创伤模型中研究。在麻醉猪的背部的前面部分，距背中线任一侧4cm，使用11号解剖刀片进行五对2.5cm纵向全厚度切口。术后数小时内，所述纵切口变成椭圆形伤口。
伤口被分成试验组并通过在创伤区域(包括伤口边缘和伤口附近的皮肤区域)通过局部施用每天处理。处理期在创伤之后24小时开始。给药溶液利用移液管逐渐施用在每个伤口上，直到全部处理体积被组织吸收(例如，1mL生理盐水或试验化合物)。
在第5天，根据以下参数：流血，渗出，肿胀，炎症，脓液分泌物和结痂，来评价创伤愈合状态和形态。以配对方式进行评价，其中用试验化合物处理的每个伤口与背面中线另一侧相同解剖位置的对照伤口直接比较。
表14.初始研究组
组 伤口数 实验品 剂量 给药途径 时间安排
1 5 对照生理盐水 1mL 局部 每天
2 5 试验化合物 3μM 局部 每天
给药溶液在每个给药日新鲜制备。试验化合物作为冻干粉末供应并在0.9％氯化钠中重构以制成3mg/mL储用悬液。该储用悬液用0.9％氯化钠进一步稀释以制备最终3μM的局部溶液。
在处理第5天进行创伤愈合形态评价。检查肿胀，根据每个伤口的严重度评分并记录为轻度、中度或重度。出现中度和重度肿胀的伤口以试验组中总伤口的百分比提供。检查分泌并以二元方式评分：呈现最少分泌的伤口被认为该参数是正的，没有任何可看出的分泌的伤口被认为是负的。出现分泌(该参数为正)的伤口以试验组中总伤口的百分比提供。当形成覆盖整个创伤区域的硬、干、发红、暗黄或褐色连续层并强烈附着于创面并因此在外界环境和创伤组织之间提供连续而坚固的屏障时，被认为完全结痂。检查结痂并以二元方式评分：呈现出干而坚固的完全结痂的伤口被认为这个参数是正的，而在早期没有痂或有多个痂的伤口被认为是负的。完全结痂的伤口以每组总伤口的百分比提供。
还评价了肿胀、分泌和结痂。肿胀和分泌是过度炎性反应的一部分，其可以延迟组织修复和引起难看的瘢痕形成。
局部施用试验化合物对猪皮肤的早期创伤愈合以及对与损伤或创伤皮肤有关的刺激和抓挠的效应的评价
试验化合物对皮肤创伤愈合的效应可在猪纵向全厚度皮肤切口创伤模型中研究。在手术之前三天，猪转移到住院设施中适应环境。在所述手术程序之前的十二小时禁食。手术当天，猪用氯胺酮、甲苄噻嗪、地西泮和异氟烷麻醉。胸部和腹部背面的毛使用剪毛器(30号刀片)剪切。每部分标记十对4cm2的，并使用11号解剖刀片在背中线两侧上制作2.5cm全厚度纵向皮肤切口。
手术程序之后，伤口被分成试验组并通过在创伤区域(包括伤口边缘和伤口附近在所有方向上距伤口直至2cm距离的皮肤区域)局部施用来每天处理。给药溶液利用移液管逐渐施用在每个伤口上，直到全部处理体积被组织吸收(例如，1mL介质或试验化合物)。
术后数小时内，所述纵切口由于动物的皮肤弹性和活度变成椭圆形伤口。在试验期间，伤口被拍照记录并进行形态分析。以配对方式进行创伤愈合评价，其中用试验化合物处理的每个伤口与背部中线另一侧相同解剖位置的对照伤口直接比较。在创伤后前5天期间，记录伤口形态和动物行为。
表15.初始研究组
给药溶液在每个给药日新鲜制备。试验化合物作为冻干粉末供应并溶解在100％DMSO中至15mM的储用浓度。在注射用水中进行进一步稀释以达到3μM和1μM的最终浓度供局部施用。
作为每天形态学评价的一部分，使用例如数字高分辨率照相机FinePix S700进行伤口的拍照记录。除了伤口状态之外，还观察刺激和抓挠的皮肤区域。通常，抓挠不对伤口造成损伤或妨碍创伤愈合过程，因为在背部上的背部中线附近造成伤口，使得动物难以和几乎不可能达到所述伤口。
在PVP/F-68中的化合物1和在水中的化合物1对小鼠与皮肤愈合有关的抓挠的效应评价
在本文中描述的小鼠皮肤创伤研究中，还观察了动物的行为，并量化试图除去痂、不适症状、创伤区域的抓挠。分析在小鼠中进行的所有研究的抓挠异常行为和异常表现以及疼痛征象。在这些研究中，使用在PVP/F-68中的化合物1和在水中的化合物1、以及相应的介质对照进行处理。
在小鼠的所有创伤愈合试验期间，进行对伤口附近区域和处理的皮肤区域处与创伤愈合、皮肤刺激征象和其他皮肤状况有关的愈合参数的监测。另外，在所有皮肤愈合模型的处理期期间，特别关注动物的行为，例如不适和疼痛的征象；以及抓挠和乱动伤口和皮肤的征象。所述处理化合物的抚慰和镇静效应与对照动物相比高度显而易见，后者倾向于乱动它们的伤口。
在小鼠中，用在PVP/F-68中的化合物1或在水中的化合物1处理与介质处理的小鼠(含DMSO的水、生理盐水、PVP/pluronic或水)相比降低了乱动伤口的发生率。
在小鼠中，乱动伤口通常导致除去痂和流血或损害创面上紧附于痂上的新形成组织。大多数这样的事件发生在介质处理组中(所有试验中约20–30％)。
根据皮肤状况和动物行为的总结，可得出结论，用在PVP/F-68中的化合物1或在水中的化合物1处理伤口，可能由于所述处理化合物对创伤和刺激皮肤的一些抚慰和镇静效应，而防止了小鼠乱动伤口。
试验化合物对小鼠皮肤创伤愈合的剂量反应
试验化合物对皮肤创伤愈合的效应可在小鼠纵向全厚度皮肤切口创伤模型中研究。在到达时，动物通过耳标识别，称重并在开始试验之前适应环境数日。在创伤当天，小鼠被称重并按照重量差异分层随机化分成7个试验组(N＝6或N＝7)。介质组接受0.1％DMSO水溶液，而阳性对照组用0.6％w/vF-68和0.6％w/v PVP K-29/32水溶液处理。在手术程序之前，小鼠用异氟烷麻醉并修剪动物背上的毛。使用标准解剖刀片在动物背上(平行于脊骨)进行20mm的全厚度纵向切口。创伤后三小时，由于动物的皮肤弹性和活度，切口呈现椭圆形。在这个阶段，测量创伤的最宽区域以建立基线伤口宽度。通过测量所述创伤的最宽区域进行伤口愈合评价。伤口的处理通过直接在伤口上局部施用(每天)给药溶液(例如0.2mL)进行。
表16.初始研究组
给药溶液在每个给药日新鲜制备。试验化合物作为冻干粉末供应并在0.1％DMSO水溶液中重构以制成3mg/mL储用悬液。所述储用悬液用0.1％DMSO水溶液进一步稀释以制备最终的局部用溶液。对照组的伤口用0.1％DMSO水溶液、或0.6％w/vF-68和0.6％w/vPVP K-29/32水溶液局部处理。
在试验结束时，创伤后8天，小鼠通过吸入CO2处死，测量伤口宽度和收集创伤区域的活检组织并进行组织学分析。所述活检组织使用4％多聚甲醛固定。整个创伤区域固定之后，进行伤口最宽区域的5mm剖分并且这些试样进行石蜡包埋。利用组织的逐步脱水和石蜡包埋标准程序制备石蜡块。然后，制备组织切片并用苏木精和伊红(H&E)染色进行组织染色。检查H&E染色的载玻片并进行创伤愈合疗效评价。
在第8天通过检查伊红染色的健康皮肤和在创口处新形成的皮肤边缘，评价晚期(advanced)皮肤闭合。在显微镜(BX41Olympus或Axiovert 25，Zeiss)的100x放大倍数视野中观察到具有两个皮肤边缘的伤口被认为所述晚期皮肤闭合愈合参数为正。具有晚期皮肤闭合的伤口数量以试验组中总伤口的百分比提供。
在第8天使用H&E染色通过分析在伤口的最宽区域处的组织切片来评价晚期表皮闭合。伤口呈现存在覆盖整个创口的连续表皮层和在400x放大倍数的显微镜视野下观察到表皮边缘的最向前的移行，被认为是晚期表皮闭合参数为正。结果以每试验组的总数的百分比提供。
在第8天使用H&E染色通过分析在两个伤口边缘处致密的苏木精染色的新形成表皮，来评价表皮移行(migration)。当新形成的表皮边缘覆盖约20-30％的创口时，所述表皮边缘被认为是移行性(migratory)的。组中移行性的表皮边缘按表皮边缘总数(组中伤口数量的两倍)的百分比计数和提供。两个表皮边缘在呈现完全或晚期表皮闭合的伤口中被认为是移行性的。在62只小鼠中总共制作62个伤口。
用试验化合物处理伤口防止创伤愈合并发症，例如表皮增生和粘连
试验化合物对皮肤创伤愈合的效应可在小鼠纵向全厚度皮肤切口创伤模型中研究。在手术程序之前，小鼠用异氟烷麻醉并剃去动物背上的毛。使用解剖刀片在动物背上(平行于脊骨)进行20mm的全厚度纵向切口。创伤后三小时，由于动物的皮肤弹性和活度，切口呈现椭圆形。通过测量所述伤口的最宽区域进行伤口的愈合评价。伤口的处理通过直接在伤口上每天局部施用例如0.2mL试验化合物进行。伤口护理过程部分在潮湿的环境中——每天处理之后，伤口湿润一段时间。在试验结束时，创伤后8天，小鼠被处死，测量伤口宽度和收集创伤区域的活检组织并进行组织学分析。
表17.初始研究组
给药溶液在每个给药日新鲜制备。试验化合物作为冻干粉末供应并在0.1％DMSO水溶液中重构为3mg/mL的储用浓度，其用0.1％DMSO水溶液连续稀释以达到供局部施用的工作浓度。对照组的伤口用0.1％DMSO水溶液、或0.6％w/vF-68和0.6％w/v PVPK-29/32水溶液局部处理。
在处理期结束时，创伤后第8天，小鼠通过吸入CO2处死并获取创伤区域的活检组织。使用4％多聚甲醛进行创伤组织的固定。整个创伤区域固定之后，进行伤口最宽区域的5mm剖分并且这些试样进行石蜡包埋。石蜡块使用逐渐脱水的标准程序制备。然后，制备组织切片并用苏木精和伊红(H&E)进行组织染色。评价创伤愈合参数并制图。
表皮增生在第8天评价。组中非移行性以及增生性的表皮边缘按表皮边缘总数(组中伤口数量的两倍)的百分比计数和提供。增生性表皮边缘使用H&E染色通过分析致密的苏木精染色的表皮区域来评价。当表皮边缘显得比健康皮肤区域中的正常表皮更厚时并且当这样的表皮边缘不呈现向着密封所述创口的移行时，它被认为是增生性的和非移行性的
创口的粘连在第8天评价。粘连通过分析创口处的细胞和组织结构来评价。伤口粘连以轻度、重度或重度等级评分。当在创口处存在凝块或正常肉芽组织被其他组织例如骨骼肌或彻底的淋巴组织替代时，认为是负评分。若干粘连或异常肉芽形成占创口面积的超过40％被认为是重度。当粘连不明显和不妨碍正常皮肤组织更新时，被认为是轻度。重度粘连的伤口按每个试验组总伤口的百分比计算并如所示制图。在32只小鼠中总共制成32个伤口(64个表皮边缘)。
最重要的创伤愈合并发症之一是表皮增生。作为对与创伤有关的应激信号的响应，发生表皮基底层中细胞的增生以弥补皮肤损失。正常情况下，在不平整的伤口愈合中，表皮细胞在增生以后不久开始向着密封创口的移行。当移行不发生或减慢时，例如，在由糖尿病伤口中高血糖症引起的皮肤并发症中，表皮增生变得突出，并可在创伤愈合中引起甚至更多的并发症。在急性开放性伤口中，如本试验中使用的模型中，或在急性缝合伤口、例如手术后伤口中，与表皮边缘的增生有关表皮愈合衰退增加了污染和其他创伤愈合并发症例如伤口裂开、从伤口流出体液或组织从伤口突出的风险。
在有效的创伤愈合过程中，初始血凝块经历逐渐改变以在创口处形成肉芽组织，肉芽组织在重塑之后最终变成功能完全恢复的新形成的皮肤组织。当在创口中出现非皮肤相关组织的粘连时，肉芽组织不适当地形成并因此限制了最终的组织重塑。这可对愈合皮肤的功能造成进一步限制。
用在生理盐水基制剂中的试验化合物处理伤口改善创伤愈合并防止严重的粘连
试验化合物对皮肤创伤愈合的效应在小鼠纵向全厚度皮肤切口创伤模型中进行研究。手术程序在用异氟烷麻醉的7-8周龄C57BL雄性小鼠上进行。在手术程序之前，小鼠用异氟烷麻醉并剪毛。使用标准解剖刀片进行20mm的全厚度纵向切口。创伤后三小时，由于动物的皮肤弹性和活度，切口呈现椭圆形。在这个阶段，测量伤口的最宽区域以建立基线伤口宽度。通过测量所述伤口的最宽区域进行伤口的愈合评价。通过在伤口上每天直接局部施用0.2mL溶液进行伤口处理。伤口护理过程部分在潮湿环境中进行，因为在每天处理之后，伤口一段时间中(3-5小时)是润湿的。在试验结束时，创伤后8天，小鼠被处死，测量伤口宽度和收集创伤区域的活检组织并进行组织学分析。
表18.初始研究组
组 小鼠数 实验品 剂量 给药途径 时间安排
1 5 生理盐水 0.2mL 局部 每天
2 7 在生理盐水中的试验化合物 3uM 局部 每天
给药溶液在每个给药日新鲜制备。试验化合物作为冻干粉末供应并在生理盐水中重构以制成3mg/mL的储用浓度，其用生理盐水连续稀释以达到供局部施用的3μM工作浓度。对照组的伤口用生理盐水局部处理。
在处理期结束时，创伤后8天，小鼠通过吸入CO2处死并获取创伤区域的活检组织。使用4％多聚甲醛进行创伤组织的固定。整个创伤区域固定之后，进行伤口最宽区域的5mm剖分并且剖分的区域进行石蜡包埋。石蜡块使用逐渐脱水的标准程序制备。然后，制备组织切片并用苏木精和伊红(H&E)进行组织染色。评价创伤愈合参数并制图。
表皮闭合利用H&E染色通过分析最宽的伤口区域处的组织切片来评价。伤口呈现存在覆盖整个创口的连续表皮层、和当在400x放大倍数的显微镜视野下观察时伤口具有表皮边缘的最晚期的移行，被认为是晚期表皮闭合参数为正。结果以每试验组的总数的百分比提供。
皮肤愈合通过检查伊红染色的健康皮肤和创口处新形成的皮肤边缘来评价。在显微镜(BX41Olympus或Axiovert 25，Zeiss)的100x放大倍数视野中观察到具有两个皮肤边缘的伤口被认为所述晚期皮肤闭合愈合参数为正。具有晚期皮肤闭合的伤口数量以试验组中总伤口的百分比提供。
肉芽组织利用H&E染色评价。当初级纤维蛋白凝块被含脂肪细胞的纤维结缔组织、新毛细血管和含淋巴样细胞、巨噬细胞与浆细胞的浸润物代替时，肉芽组织被认为是早期的。早期肉芽组织被具有高度丰富的成纤维细胞和胶原纤维的组织代替被认为是晚期的。总的说来，创口处的晚期肉芽组织面积按总创口面积的百分比记录。表现出晚期肉芽组织形成覆盖所述创口的40％的创口被认为该参数为正。结果按每组总伤口的百分比计算。
粘连通过分析创口处的细胞和组织结构来评价。伤口粘连以轻度、重度或重度等级评价。当创口处存在凝块或正常肉芽组织被其他组织例如骨骼肌或大量的淋巴组织替代时，认为是负评分。若干粘连或异常肉芽占创口面积的超过40％被认为是重度。当粘连不明显和不妨碍正常皮肤组织更新时，被认为是轻度。重度粘连的伤口按每个试验组总伤口的百分比计算。在19只小鼠中制成十九个伤口(38个表皮边缘)。
局部施用试验化合物对猪皮肤创伤愈合后期中愈合过程和瘢痕形成的效应评价
试验化合物对皮肤创伤愈合后期的效应在猪纵向全厚度切口创伤模型中研究。手术当天，猪用氯胺酮、甲苄噻嗪、地西泮和异氟烷麻醉。剪去胸部和腹部背面的毛，并使用11号解剖刀片进行十对2.5cm全厚度纵向皮肤切口，距背面中线的两侧4cm。手术程序之后，伤口被分成试验组并通过在创伤区域和伤口边缘上每天局部施用处理，包括处理在所有方向上距所述伤口直至2cm距离的创伤区域附近的皮肤。给药溶液利用移液管逐渐施用在每个伤口上，直到全部处理体积(例如，1mL介质或试验化合物)被组织吸收。伤口附近的皮肤用浸泡在试验化合物或介质溶液中的纱布处理。
在试验期间，伤口被拍照记录并进行形态分析。处理期结束时(创伤后19天)，猪通过给予麻药和KCl处死。检查伤口的形态，伤口被拍照记录并获取创伤区域的活检组织用于固定和进一步的形态学与组织学分析。
表19.初始研究组
给药溶液在每个给药日新鲜制备。试验化合物作为冻干粉末供应并溶解在100％DMSO中以制备15mM的储液。随后，在注射用水中进行稀释以达到3μM和1μM的最终浓度供局部施用。
处理期结束时(创伤后19天)，进行创伤愈合评价。完全愈合的伤口以每组总伤口的百分比报告。还报告完全愈合并呈现完全脱痂的伤口的平均疤痕宽度。测量疤痕(mm)并计算疤痕的平均宽度和标准差。总共进行20个伤口。
处理期结束时(创伤后19天)，猪通过过量的麻药和KCl处死并获取创伤区域的活检组织。使用4％多聚甲醛进行创伤活检组织的固定。固定之后，伤口活检组织使用例如数字照相机FinePix S700以最高分辨率拍照记录。
参考文献
Cronshaw JM和Matunis MJ.2004.The nuclear pore complex：diseaseassociations and functional correlations TRENDS Endocrin Metab.15:34-39.
Falini B等.2006.Both carboxy-terminus NES motif and mutatedtryptophan(S)are crucial for aberrant nuclear export of nucleophosminleukemic mutants in NPMc+AML Blood.107:4514-4523.
Cai X和Liu X.2008.Inhibition of Thr-55phosphorylation restoresp53nuclear localization and sensitizes cancer cells to DNA damage.PNAS.105:16958-16963.
Daelemans D，Afonina E，Nilsson J 2002A synthetic HIV-1Revinhibitor interfering with the CRM1-mediated nuclear export.Proc NatlAcad Sci U S A 99(22):14440-5.98052-2517.
Davis JR等.2007.Controlling protein compartmentalization toovercome disease Pharmaceut Res.24:17-27.
Freundt E，Yu L，Park E，et al 2009Molecular determinants forsubcellular localization of the severe acute respiratory syndrome coronavirusopen reading frame 3b protein.J Virol 83(13):6631-40.
Ghildyal R，Ho A，Dias M，et al 2009The respiratory syncytialvirus matrix protein possesses a Crm1-mediated nuclear export mechanism.JVirol 83(11):5353-62.
Ghosh CC等2008Analysis of nucleocytoplasmic shuttling of NFkappa B proteins in human leukocytes.Methods Mol Biol.457:279-92.
Gupta N等2008Retinal tau pathology in human glaucomasCan JOphthalmol.2008Feb；43(1):53-60.
HoshinoL等.2008.Combined effects of p53gene therapy andleptomycin B in human esophageal squamous cell carcinomaOncology.75:113-119.
Lain S等.1999a An inhibitor of nuclear export activates the p53response and induces the localization of HDM2and p53to U1A-positivenuclear bodies associated with the PODs Exp Cell Res.248:457-472.
Lain S等.1999b.Accumulating active p53in the nucleus by inhibitionof nuclear export：a novel strategy to promote the p53tumor suppressorfunction Exp Cell Res.253:315.
Muller PA等.2009Nuclear-cytosolic transport of COMMD1regulates NF-kappaB and HIF-1activityTraffic 10(5):514-27.
Mutka S 2007Nuclear Export Inhibitors(NEIs)as novel cancertherapies AACR Annual Meeting.Poster 5609.
Mutka S，Yang W，Dong S等2009.Identification of nuclear exportinhibitors with potent anticancer activity in vivo.Cancer Res.69：510-7.
Nakahara J等.2009.Abnormal expression of TIP30and arrestednucleocytoplasmic transport within oligodendrocyte precursor cells inmultiple sclerosis J Clin Invest.119:169-181.
Noske A等.2008.Expression of the nuclear export proteinchromosomal region maintenance/exportin 1/Xpo1is a prognostic factor inhuman ovarian cancerCancer.112:1733-1743.
Pollard V&Malim M.1998The HIV-1Rev protein Annu RevMicrobiol 52:491-532.
Rawlinson S，Pryor M，Wright P，Jans D 2009CRM1-mediatednuclear export of dengue virus RNA polymerase NS5modulatesinterleukin-8induction and virus production.J Biol Chem 284(23):15589-97.
Sanchez V，Mahr J，Orazio N，et al 2007Nuclear export of thehuman cytomegalovirus tegument protein pp65requires cyclin-dependentkinase activity and the Crm1exporterJ Virol 81(21):11730-6..
Sorokin AV等.2007.Nucleocytoplasmic transport of proteins.Biochemistry 72:1439-1457.
Terry LJ等.2007.Crossing the nuclear envelope：hierarchicalregulation of nucleocytoplasmic transportScience 318:1412-1416.
Van der Watt PJ等.2008.The Karyopherin proteins，Crm1andKaryopherin beta1，are overexpressed in cervical cancer and are critical forcancer cell survival and proliferationInt J Canc.124:1829-1840.
Walsh MD等.2008Exportin 1inhibition attenuates nuclearfactor-kappaB-dependent gene expression.Shock 29:160-166.
Williams P，Verhagen J，Elliott G 2008Characterization of aCRM1-dependent nuclear export signal in the C terminus of herpes simplexvirus type 1tegument protein UL47.J Virol 82(21):10946-52.
Yang W 2007Anti-tumor activity of novel nuclear export inhibitors(NEIs)in multiple murine leukemia modelsAACR Annual Meeting.Poster 5597.
Yao Y等.2009.The expression of CRM1is associated with prognosisin human osteosarcomaOncol Rep.21:229-35.
Zimmerman TL等2006Nuclear export of retinoid X receptor alphain response to interleukin-1beta-mediated cell signaling：roles for JNK andSER260J Biol Chem281:15434-15440.
本文中引用的所有专利、公布的申请和参考文献的教导通过引用以其整体并入。
虽然本发明已经参考其示例性实施方式进行了具体的显示和描述，但本领域技术人员应该理解，可以在其中做出形式和细节上的各种改变而不背离所附权利要求包涵的本发明范围。

Claims (31)

1.式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自氢和C1-C4烷基；
R2选自O和S；和
R3选自-N(R4)-(C3-C6环烷基)、-C1-C6烷基、-(C0-C4亚烷基)-杂环基、和-(C0-C4亚烷基)-杂芳基，其中R3的任何烷基、亚烷基、杂环基和杂芳基部分任选地和独立地被取代；并且
R4选自氢和C1-C4烷基。
2.权利要求1的化合物，其中R1选自氢和甲基。
3.权利要求2的化合物，其中R1是氢。
4.权利要求1-3任一项的化合物，其中R2是O。
5.权利要求1-4任一项的化合物，其中R4是氢。
6.权利要求1-5任一项的化合物，其中R3选自-N(R4)-(C3-C6环烷基)、-C3-C6烷基、-(C0-C1亚烷基)-杂环基、和-(C0-C4亚烷基)-杂芳基，其中：
R3的任何烷基或亚烷基部分任选地和独立地被选自氧代和-N(R5)2的一个或多个取代基取代，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基；
R3的任何杂环基部分在环中包含至少一个氮原子，并且任选被选自C1-C4烷基和氧代的一个或多个取代基取代；和
R3的任何杂芳基部分在环中包含至少一个氮原子，并且任选被一个或多个C1-C4烷基取代。
7.权利要求6的化合物，其中R3是-(C0-C1亚烷基)-杂环基。
8.权利要求7的化合物，其中R3是-(C1亚烷基)-杂环基。
9.权利要求7或权利要求8的化合物，其中所述杂环基选自吡嗪基、哌啶基、吗啉基和吡唑基。
10.权利要求9的化合物，其中所述杂环基是吗啉基，R3选自-C(CH3)3、-NH-环丙基、-CH2-吡嗪-2-基、-吡嗪-2-基、-CH2-吗啉-4-基、和5-甲基-1-H-吡唑-4-基。
11.权利要求1-5任一项的化合物，其中R3的任何烷基、亚烷基、杂环基和杂芳基部分任选地和独立地被选自-OH、-SH、硝基、卤素、氨基、氰基、C1-C12烷基、C2-C12烯基或C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12卤代烷基、C1-C12卤代烷氧基和C1-C12烷硫基中的一个或多个取代基取代。
12.权利要求1-5任一项的化合物，其中R3的任何烷基、亚烷基、杂环基和杂芳基部分任选地和独立地被具有式-N(R5)2的氨基取代，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基。
13.权利要求1-5任一项的化合物，其中：
R3的任何杂芳基部分任选地和独立地被选自-OH、-SH、硝基、卤素、氨基、氰基、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12卤代烷基、C1-C12卤代烷氧基和C1-C12烷硫基中的一个或多个取代基取代；和
R3的任何烷基、亚烷基或杂环基部分任选地和独立地被选自氧代、-OH、-SH、硝基、卤素、氨基、氰基、C1-C12烷基、C2-C12烯基、C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、C1-C12卤代烷基、C1-C12卤代烷氧基和C1-C12烷硫基中的一个或多个取代基取代。
14.权利要求1-5任一项的化合物，其中R3选自-N(R4)-(C3-C6环烷基)、-C3-C6烷基、-(C0-C1亚烷基)-杂环基、和-(C0-C1亚烷基)-杂芳基，其中：
R3的任何烷基或亚烷基部分任选被-N(R5)2取代，其中每个R5独立地选自氢和C1-C4烷基；
R3的任何杂环基和杂芳基部分在环中包含至少一个氮原子；和
R3的任何杂环基和杂芳基部分任选被C1-C4烷基取代。
15.权利要求14的化合物，其中R3选自-C(CH3)3、-CH(NH2)-CH(CH3)2、-NH-环丙基、-(CH2)0-1-吡嗪基、哌啶基、羟基哌啶基、N-甲基哌啶基、-CH2-吗啉-4-基、和甲基吡唑基。
16.权利要求15的化合物，其中R3选自-C(CH3)3、-CH(NH2)-CH(CH3)2、-NH-环丙基、-(CH2)0-1-吡嗪-2-基、哌啶-3-基、-CH2-吗啉-4-基、和5-甲基-1-H-吡唑-4-基。
17.权利要求16的化合物，其中R3选自-C(CH3)3、-NH-环丙基、-CH2-吡嗪-2-基、-吡嗪-2-基、-CH2-吗啉-4-基、和5-甲基-1-H-吡唑-4-基。
18.通过下面列举的任何一种结构式表示的化合物：
或其药学上可接受的盐。
19.权利要求18的化合物，其选自化合物1、2、3、4、8、11、12和13中的任何一种。
20.药物组合物，其包含权利要求1-19任一项的化合物，或其药学上可接受的盐、和药学上可接受的载体。
21.用于治疗与CRM1活性相关的病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求20的药物组合物。
22.权利要求21所述的方法，其中所述病症选自增生性病症、炎性病症、自身免疫病症、病毒感染、眼科病症、神经变性病症、异常组织生长病症、与摄食相关的病症、过敏症和呼吸病症。
23.权利要求22所述的方法，其中所述病症是癌症。
24.权利要求23所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤。
25.权利要求23或权利要求24所述的方法，其中所述组合物与可用于治疗癌症的第二治疗一起施用。
26.权利要求21所述的方法，其中所述病症是关节炎。
27.权利要求21所述的方法，其中所述病症是牛皮癣。
28.权利要求21所述的方法，其中所述病症是肥胖症。
29.在有需要的受试者中促进创伤愈合的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的权利要求20的药物组合物。
30.权利要求29的方法，其中所述创伤是表面伤、手术伤、内伤、慢性创伤、溃疡、烧伤、或辐射暴露的结果。
31.权利要求29的方法，其中所述创伤选自烧伤、切割伤、开放性创伤、手术或手术后创伤、糖尿病病变、热灼伤、化学烧伤、放射烧伤、压疮、褥疮、与糖尿病或循环差相关的病况。
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WO (1) WO2013170068A2 (zh)
ZA (1) ZA202004892B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109928939A (zh) * 2019-02-27 2019-06-25 上海卡洛化学有限公司 一种2,2,6,6-四甲基吗啉的制备方法
CN112566902A (zh) * 2018-06-06 2021-03-26 凯瑞康宁生物工程（武汉）有限公司 作为核转运调节剂的化合物及其用途

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2542089B1 (en) 2010-03-05 2017-01-18 Karyopharm Therapeutics, Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
EP2665362B1 (en) 2011-01-17 2016-03-30 Karyopharm Therapeutics, Inc. Olefin containing nuclear transport modulators and uses thereof
BR112014001933A2 (pt) 2011-07-29 2017-02-21 Karyopharm Therapeutics Inc moduladores de transporte nuclear e usos dos mesmos
KR102022716B1 (ko) 2011-07-29 2019-09-18 카리오팜 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 하이드라지드 함유 핵 수송 조절인자 및 이의 용도
SI3404027T1 (sl) 2012-05-09 2020-08-31 Biogen Ma Inc. Modulatorji jedrnega transporta in njihova uporaba
TWI568722B (zh) 2012-06-15 2017-02-01 葛蘭馬克製藥公司 作爲ｍＰＧＥＳ－１抑制劑之三唑酮化合物
WO2014110574A1 (en) 2013-01-14 2014-07-17 Incyte Corporation Bicyclic aromatic carboxamide compounds useful as pim kinase inhibitors
ME03780B (me) 2013-01-15 2021-04-20 Incyte Holdings Corp Jedinjenja tiazolkarboksamida i piridinkarboksamida korisna kao inhibitori pim kinaze
WO2014144772A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-18 Karyopharm Therapeutics Inc. Methods of promoting wound healing using crm1 inhibitors
WO2014205393A1 (en) * 2013-06-21 2014-12-24 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
DK3492455T3 (da) 2013-06-21 2023-08-14 Karyopharm Therapeutics Inc 1,2,4-triazoler som nukleare transportmodulatorer og anvendelse til behandling af specifikke former for cancer
CN105658653A (zh) 2013-08-23 2016-06-08 因赛特公司 可用作pim激酶抑制剂的呋喃并-和噻吩并-吡啶甲酰胺化合物
EP3143627B1 (en) * 2014-05-13 2018-07-11 QSA Global Inc. Device and method for enhanced iridium gamma radiation sources
US9580418B2 (en) 2014-07-14 2017-02-28 Incyte Corporation Bicyclic aromatic carboxamide compounds useful as Pim kinase inhibitors
US9822124B2 (en) 2014-07-14 2017-11-21 Incyte Corporation Bicyclic heteroaromatic carboxamide compounds useful as Pim kinase inhibitors
SG10201808624VA (en) 2014-08-15 2018-11-29 Karyopharm Therapeutics Inc Polymorphs of selinexor
KR101734529B1 (ko) 2015-05-08 2017-05-11 건국대학교 산학협력단 패혈증 치료제의 스크리닝 방법 및 패혈증 치료용 약학 조성물
US9540347B2 (en) 2015-05-29 2017-01-10 Incyte Corporation Pyridineamine compounds useful as Pim kinase inhibitors
US20200216906A1 (en) * 2015-08-25 2020-07-09 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions relating to the diagnosis and treatment of cancer
AR105967A1 (es) 2015-09-09 2017-11-29 Incyte Corp Sales de un inhibidor de pim quinasa
WO2017059251A1 (en) 2015-10-02 2017-04-06 Incyte Corporation Heterocyclic compounds useful as pim kinase inhibitors
EP3397633A1 (en) 2015-12-31 2018-11-07 Karyopharm Therapeutics, Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
WO2017117535A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
EP3423468A4 (en) * 2016-02-29 2019-10-23 Ohio State Innovation Foundation AZE-PEPTIDE ALDEHYDES AND KETONES
EP3429690A4 (en) 2016-03-16 2019-10-23 Ionis Pharmaceuticals, Inc. METHOD FOR MODULATING KEAP1
EP3448234A4 (en) 2016-04-30 2019-05-01 Envision Diagnostics, Inc. MEDICAL DEVICES, SYSTEMS AND METHODS FOR OPERATING OCULAR EXAMINATIONS AND OCULOMETRY
US11602530B2 (en) 2016-11-28 2023-03-14 Biogen Ma Inc. CRM1 inhibitors for treating epilepsy
US10596161B2 (en) 2017-12-08 2020-03-24 Incyte Corporation Low dose combination therapy for treatment of myeloproliferative neoplasms
KR20230110828A (ko) 2018-01-10 2023-07-25 엑스더블유파마 리미티드 케타민의 전구약물, 및 이의 조성물 및 용도
WO2020092965A1 (en) * 2018-11-01 2020-05-07 Karyopharm Therapeutics Inc. E2f1 as a biomarker for treatments using xpo1 inhibitors
US20220034907A1 (en) 2018-12-06 2022-02-03 Biogen Ma Inc. Neurofilament protein for guiding therapeutic intervention in amyotrophic lateral sclerosis
CN111606890A (zh) * 2019-02-26 2020-09-01 微境生物医药科技(上海)有限公司 含丙烯酰基的核转运调节剂及其用途
MA55808A (fr) * 2019-05-01 2022-03-09 Karyopharm Therapeutics Inc Procédé de préparation d'inhibiteurs de xpo1 et intermédiaires destinés à être utilisés dans la préparation d'inhibiteurs de xpo1
CN111145135B (zh) * 2019-12-30 2021-08-10 腾讯科技（深圳）有限公司 一种图像去扰处理方法、装置、设备及存储介质
JPWO2022209477A1 (zh) 2021-04-01 2022-10-06
US11690811B2 (en) 2021-08-13 2023-07-04 XWPharma Ltd. Pharmaceutical compositions and oral dosage forms of ketamine derivatives
WO2023172855A2 (en) * 2022-03-07 2023-09-14 Kaohsiung Medical University Methods for treating hepatitis b virus infection

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103002742A (zh) * 2010-03-05 2013-03-27 卡尔约药物治疗公司 核转运调节剂及其应用

Family Cites Families (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1017398A (en) 1911-01-16 1912-02-13 John E Folsom Telegraph-key.
CS229934B2 (en) 1981-07-07 1984-07-16 Pfizer Production method subst.indolylacryte acid derivative
KR840000529A (ko) 1981-07-07 1984-02-25 콘스탄틴 루이스 클레멘트 인돌 유도체의 제조방법
US4778796A (en) 1985-07-19 1988-10-18 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. ω-(3-pyridyl)alkenamide derivatives and anti-allergenic pharmaceutical compositions containing same
IL97249A (en) 1990-02-23 1995-01-24 Takeda Chemical Industries Ltd Compounds of 7,6,5,4-tetrahydrothiazole] B-5,4 [pyridine and compounds of 5,6-dihydro-H4-pyrrolo] D-3,2 [thiazole, their manufacture, and pharmaceutical compositions including or
JP3111321B2 (ja) 1990-02-23 2000-11-20 武田薬品工業株式会社 縮合チアゾール化合物
US5541213A (en) 1993-06-24 1996-07-30 Eisai Co., Ltd. Propenoic acid derivatives diazole propenoic acid compounds which have useful pharmaceutical utility
US5468353A (en) 1994-05-05 1995-11-21 Minnesota Mining And Manufacturing Company Mist suppressant for solvent extraction metal electrowinning
CN1088062C (zh) 1994-11-23 2002-07-24 纽罗根公司 某些4－氨基甲基－2－取代的咪唑衍生物2－氨基甲基－4－取代的咪唑衍生物新的一族多巴胺受体亚型特异性配体
US20030018025A1 (en) 1995-06-07 2003-01-23 Neurogen Corporation, Corporation Of The State Of Delaware Certain 4-aminomethyl-2-substituted imidazole derivatives and 2-aminomethyl-4-substituted imidazole derivatives: new classes of dopamine receptor subtype specific ligands
WO1997015567A1 (de) 1995-10-20 1997-05-01 Dr. Karl Thomae Gmbh 5-gliedrige heterocyclen, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung sowie verfahren zu ihrer herstellung
DE69736775T2 (de) 1996-04-04 2007-08-23 Shionogi & Co., Ltd. Cephemverbindungen und medikamente die diese verbindungen enthalten
JP4054992B2 (ja) 1996-04-25 2008-03-05 日産化学工業株式会社 エチレン誘導体および有害生物防除剤
CN1227229C (zh) 1996-04-25 2005-11-16 日产化学工业株式会社 乙烯衍生物和含有该衍生物的杀有害生物剂
DE19624659A1 (de) * 1996-06-20 1998-01-08 Klinge Co Chem Pharm Fab Neue Pyridylalken- und Pyridylalkinsäureamide
US5994398A (en) 1996-12-11 1999-11-30 Elan Pharmaceuticals, Inc. Arylsulfonamides as phospholipase A2 inhibitors
JP4416198B2 (ja) 1997-12-19 2010-02-17 武田薬品工業株式会社 アニリド誘導体、その製造法および用途
AU2960599A (en) 1998-03-30 1999-10-18 Akira Karasawa Quinazoline derivatives
CO5271680A1 (es) 2000-02-21 2003-04-30 Smithkline Beecham Corp Compuestos
EP1335898B1 (en) 2000-09-29 2005-11-23 TopoTarget UK Limited Carbamic acid compounds comprising an amide linkage as hdac inhibitors
JP3608050B2 (ja) 2001-07-24 2005-01-05 トヨタ自動車株式会社 ロールオーバ判別装置
MXPA04002397A (es) 2001-09-14 2004-12-02 Methylgene Inc Inhibidores de histona deacetilasa.
WO2004037248A2 (en) 2002-10-24 2004-05-06 Carex Sa Modulation of peroxisome proliferator activated receptors activity
DE10250743A1 (de) 2002-10-31 2004-05-19 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Neue Amid-Verbindungen mit MCH-antagonistischer Wirkung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel
RU2337682C2 (ru) 2002-11-01 2008-11-10 Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед Средство для профилактики или лечения невропатии
JP4145230B2 (ja) 2002-11-01 2008-09-03 武田薬品工業株式会社 神経障害の予防・治療剤
ATE552253T1 (de) 2002-11-08 2012-04-15 Novartis Int Pharm Ltd 3-substituierte-6-aryl- pyridin derivate als liganden für c5a-rezeptoren
EP1599447A1 (en) 2003-02-28 2005-11-30 Galderma Research & Development, S.N.C. Ligands that modulate lxr-type receptors
WO2005115990A1 (ja) 2004-05-26 2005-12-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. シンナミド化合物
EP1780210A4 (en) 2004-08-11 2009-06-10 Kyorin Seiyaku Kk NEW CYCLIC AMINOBENOIC ACID DERIVATIVE
WO2006019020A1 (ja) 2004-08-16 2006-02-23 Sankyo Company, Limited 置換されたウレア化合物
US7514463B2 (en) * 2004-08-20 2009-04-07 University Of Kansas Lonidamine analogues and their use in male contraception and cancer treatment
JPWO2006088246A1 (ja) 2005-02-18 2008-07-10 武田薬品工業株式会社 Ｇｐｒ３４受容体機能調節剤
KR101439557B1 (ko) 2005-11-15 2014-09-11 오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤 옥사졸 화합물 및 제약 조성물
JP2007210929A (ja) 2006-02-09 2007-08-23 Sankyo Co Ltd ウレア化合物を含有する医薬
EA016464B1 (ru) 2006-03-09 2012-05-30 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Полициклические производные арилимидазола
EP2007720B1 (en) 2006-04-07 2013-12-25 MethylGene Inc. Benzamide derivatives as inhibitors of histone deacetylase
PL2014652T3 (pl) 2006-04-18 2015-02-27 Nippon Chemiphar Co Czynnik aktywujący receptor aktywowany przez proliferatory peroksysomów
WO2007147336A1 (en) 2006-06-13 2007-12-27 Shanghai Institue Of Materia Medica, Chinese Academy Of Sciences Heterocyclic non-nucleoside compounds, their peparation, pharmaceutical composition and their use as antiviral agents
CN100503571C (zh) 2006-07-12 2009-06-24 中国药科大学 四氢异喹啉类衍生物、其制备方法及其医药用途
AR063211A1 (es) 2006-07-27 2009-01-14 Amorepacific Corp Derivados de 3-(piridin-3-il)acrilamida y 3-(piridin-3-il)propionamida, un metodo para su preparacion, una composicion farmaceutica que los comprende y su uso en la fabricacion de medicamentos para el tratamiento de enfermedades asociadas con el receptor vaniloide.
KR101404360B1 (ko) 2006-09-05 2014-06-09 교와 핫꼬 기린 가부시키가이샤 이미다졸 유도체
EP1939180A1 (en) 2006-12-20 2008-07-02 sanofi-aventis Heteroarylacrylamides and their use as pharmaceuticals for the stimulation of the expression of endothelial NO synthase
EP1942104A1 (en) 2006-12-20 2008-07-09 sanofi-aventis Heteroarylcyclopropanecarboxamides and their use as pharmaceuticals
US7795457B2 (en) 2007-02-26 2010-09-14 Kosan Biosciences Incorporated Carbamate compounds
EP2003118A1 (de) 2007-06-13 2008-12-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Zimtsäurederivate als Modulatoren des EP2-Rezeptors
EP2176228A1 (en) * 2007-07-04 2010-04-21 NeuroSearch A/S Novel pyrazole derivatives useful as potassium channel modulators
MX2012000434A (es) 2009-07-09 2012-04-11 Crescendo Therapeutics Llc Metodo de sanacion de herida y modulacion de cicatriz.
WO2011069039A1 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hydrazone and diacyl hydrazine compounds and methods of use
EP2665362B1 (en) 2011-01-17 2016-03-30 Karyopharm Therapeutics, Inc. Olefin containing nuclear transport modulators and uses thereof
BR112014001933A2 (pt) 2011-07-29 2017-02-21 Karyopharm Therapeutics Inc moduladores de transporte nuclear e usos dos mesmos
KR102022716B1 (ko) 2011-07-29 2019-09-18 카리오팜 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 하이드라지드 함유 핵 수송 조절인자 및 이의 용도
WO2013020024A2 (en) 2011-08-03 2013-02-07 Karyopharm Therapeutics, Inc. Maleimide compounds and methods of treatment
SI3404027T1 (sl) 2012-05-09 2020-08-31 Biogen Ma Inc. Modulatorji jedrnega transporta in njihova uporaba
WO2014144772A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Karyopharm Therapeutics Inc. Methods of promoting wound healing using crm1 inhibitors
WO2014152263A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Karyopharm Therapeutics Inc. Exo olefin-containing nuclear transport modulators and uses thereof
WO2014205393A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
DK3492455T3 (da) 2013-06-21 2023-08-14 Karyopharm Therapeutics Inc 1,2,4-triazoler som nukleare transportmodulatorer og anvendelse til behandling af specifikke former for cancer
WO2015073908A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Method for selecting cancer treatment regimen
CN105294682B (zh) 2014-07-26 2017-07-07 广东东阳光药业有限公司 Cdk类小分子抑制剂的化合物及其用途
SG10201808624VA (en) 2014-08-15 2018-11-29 Karyopharm Therapeutics Inc Polymorphs of selinexor
WO2017117535A1 (en) 2015-12-31 2017-07-06 Karyopharm Therapeutics Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
EP3397633A1 (en) 2015-12-31 2018-11-07 Karyopharm Therapeutics, Inc. Nuclear transport modulators and uses thereof
US11034675B2 (en) 2016-01-08 2021-06-15 Dr. Reddy's Laboratories Limited Solid forms of Selinexor and process for their preparation
US11602530B2 (en) 2016-11-28 2023-03-14 Biogen Ma Inc. CRM1 inhibitors for treating epilepsy
WO2018129227A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Watson Laboratories Inc. Novel crystalline forms of selinexor and process for their preparation

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103002742A (zh) * 2010-03-05 2013-03-27 卡尔约药物治疗公司 核转运调节剂及其应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112566902A (zh) * 2018-06-06 2021-03-26 凯瑞康宁生物工程（武汉）有限公司 作为核转运调节剂的化合物及其用途
CN112566902B (zh) * 2018-06-06 2022-06-17 凯瑞康宁生物工程（武汉）有限公司 作为核转运调节剂的化合物及其用途
CN109928939A (zh) * 2019-02-27 2019-06-25 上海卡洛化学有限公司 一种2,2,6,6-四甲基吗啉的制备方法

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Publication number Publication date
EP3404027B1 (en) 2020-03-04
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