CN104422746B - 门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法 - Google Patents
门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明为门冬氨酸钾原料、门冬氨酸镁原料及其相关制剂如口服制剂、注射剂等的安全性分析方法，可更简便地控制药品质量，尤其针对如门冬氨酸钾注射液、门冬氨酸钾镁注射液、注射用门冬氨酸钾镁等较口服制剂风险较高的注射剂，可更好控制药品非预期的严重不良反应风险。
Description
技术领域
门冬氨酸钾是门冬氨酸的钾盐，门冬氨酸镁是门冬氨酸的镁盐，为电解质补充药。门冬氨酸是体内草酰乙酸的前体，在三羧酸循环中起重要作用，促进能量代谢，是高能磷酸化合物合成分解的催化剂；参与核苷酸生成，是细胞修复和再生的重要物质；可促进胆汁及胆色素的排泄，有排黄、减少肝脂肪、增加肝糖原等作用；促进T淋巴细胞发育分化为成熟T淋巴细胞，有抗病毒和抗肿瘤的作用。同时，门冬氨酸也参加鸟氨酸循环，使NH3与CO2生成尿素达到解毒作用。门冬氨酸与细胞有很强的亲和力，可作为钾离子进入细胞的载体，使钾离子重返细胞内，促进细胞除极化和细胞代谢，维持心肌收缩力，从而改善心肌收缩功能，并降低耗氧量，因而在缺氧状态下，对心脏具有保护作用。镁是重要的阳离子，是多种酶系的成分及激活剂，与钾代谢关系密切。低镁时肾保钾作用降低可加重缺钾。补镁后能激活钠-钾-三磷酸腺苷酶(Na+-K+-ATP酶)，调节钾于钙离子的膜转运，促进钾内流，阻止钾进一步外流，使细胞内钾含量增加，在机体补钾时起到显著的保钾作用。
门冬氨酸钾、门冬氨酸镁制剂国内外有如有门冬氨酸钾注射液、门冬氨酸钾片、门冬氨酸钾镁片、门冬氨酸钾镁注射液等上市，在临床上可应用于补钾。
门冬氨酸钾、门冬氨酸镁的合成多采用门冬氨酸与钾盐或镁盐反应的原理，由于门冬氨酸钾、门冬氨酸镁易溶于水，门冬氨酸与钾盐或镁盐反应后产生的反应液粘稠，结晶性很差且吸湿性强，无法用传统工艺制得合格原料，门冬氨酸钾镁复方制剂多采用门冬氨酸与钾盐(如氢氧化钾)和氧化镁投料的生产工艺，该生产工艺在实际生产中易产生质量问题而产生安全性隐患及影响临床应用效果，如投料不准确，不同批次之间质量不均一、不稳定，引入了较大量杂质等，尤其对于注射剂，直接用门冬氨酸与钾盐(如氢氧化钾)和氧化镁投料的生产工艺将无法去除原料引入的杂质，所增加的临床应用不安全因素可能带来较严重的后果。
虽然ZL200810101612.4和ZL200810101613.9分别提供了一种高质量的门冬氨酸钾和门冬氨酸镁原料的制备方法，但未提供其杂质的具体指标，并且，即使是高质量的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁原料，具体制剂的工艺制备过程中也可能新增加杂质，尤其是涉及的安全性杂质。2012年09月19日国家食品药品监督管理局发布的药品不良反应信息通报(第50期)警惕门冬氨酸钾镁注射剂的严重过敏反应(http://www.sfda.gov.cn/WS01/CL0078/74984.html)，进一步反映了门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂中存在潜在过敏的因素，所述的过敏反应的药物是在药品经检验质量合格的基础上发生的，即药品本身符合相关的药品法定质量标准，排除了如无菌、热原(细菌内毒素)等的影响，而现有国内外相关的药品标准中未涉及有控制的杂质，成为最为可能的潜在因素。
发明内容
药品的安全、有效、质量可控为药品本身的要求，本发明所述的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂有效性已得到证明，质量控制方面，也分别有国家批准的标准用以控制，质量控制方法也有局限性，尤其针对安全性的影响因素，如上述的门冬氨酸钾镁注射剂的严重过敏反应，目前尚缺少可靠的方法予以检测和控制，而动物试验(如豚鼠的过敏试验)繁琐，且周期长，存在个体差异性，不能准确定量区别产品的质量情况。
鉴于上述背景，本发明研究建立了门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性杂质分析方法，以对其进行更好的质量控制，具体的除安全性杂质分析以外的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的质量指标控制方法，在目前可获得国家食品药品监督管理局批准的相关门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的质量标准中有所体现。
发明人经过研究，意外发现其富马酸、马来酸杂质及含量与过敏反应相关，并据此建立了以富马酸、马来酸为安全性杂质质控指标的控制方法，富马酸与马来酸经常作为酸根与很多药物成盐并用作静脉途径给药(如富马酸伊布利特注射液、马来酸桂哌齐特注射液等)，且富马酸是人体内组织的正常成分，本身具有良好的安全性。目前尚无直接的文献证据表明，该杂质为直接引起如上述门冬氨酸钾镁注射剂的严重过敏反应的原因，发明人经过研究，如豚鼠的过敏试验结果表明，较高富马酸、马来酸含量的门冬氨酸钾镁注射液，其致敏性提高，表明该杂质的不同增加程度与过敏反应有相关性，门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂在一定破坏条件下(如热)，其上述杂质含量不同程度增加，药品质量发生变化，即使不是富马酸、马来酸杂质本身直接引起可能的严重过敏反应，而或是质量变化过程中产生的其他未知杂质引起的过敏反应，但富马酸、马来酸作为间接的安全性指标，可以反应该质量变化，从而作为安全性质控指标以反应门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的质量情况，而现有技术的质控标准无法真实反应该质量变化。
药物的杂质不一定都和安全性有关，多是反应药物制备工艺对药物的影响或药物的货架期稳定性，如和制备工艺引入的反应副产物、中间体，多与药物的纯度有关，或和有效性有关，如对应异构体杂质。富马酸、马来酸作为本发明安全性有关的杂质，可以采用现代分析方法检测其含量。
在原料合成过程中，不同的反应、干燥温度，及制剂过程中，不同的制剂工艺，如固体制剂的湿法制粒，干燥，如门冬氨酸钾注射液、门冬氨酸钾镁注射液，均需要终端高温过度灭菌工艺，而注射用门冬氨酸钾镁则采用无菌生产工艺，用冷冻干燥方法制备，无需经过高温处理，即不同的灭菌工艺及处方工艺措施，药物的杂质可能不同，尤其针对终端灭菌工艺制剂，不同的灭菌设备、不同的灭菌温度、不同的灭菌时间，杂质水平明显不同，从而造成临床的安全性隐患，即使同一灭菌工艺，可能会因为操作人员、设备状态、生产地点等情况变化而产品的杂质发生变化。
本发明是这样实现的：
门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，以富马酸、马来酸作为安全性控制指标。
门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性杂质分析方法，以富马酸、马来酸作为安全性杂质指标，采用高效液相色谱法检测，以波长为190～240nm进行检测，包括：
a.取门冬氨酸钾、门冬氨酸镁或其相关制剂，用水或流动相溶解，必要时滤过，配成每1ml中约含0.5～5.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含富马酸1～5μg/ml和马来酸0.2～5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液；
b.取上述溶液适量，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与富马酸、马来酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，即得。
高效液相色谱法中液相色谱柱选自以阳离子交换树脂为填充剂，可以为磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，流动相为酸水溶液，如0.01～0.04mol/L硫酸水溶液，如0.02mol/L硫酸水溶液。
检测波长为210nm，室温～45℃，流速：0.3～1.0ml/min。
方法可以为：取门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含马来酸1μg/ml及富马酸5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液，照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)试验。用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.03mol/L硫酸溶液为流动相，检测波长为210nm，柱温：室温，流速：0.4ml/min，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与马来酸及富马酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，即得。
高效液相色谱法中液相色谱柱可以选自以硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相由无机或有机盐的水溶液与色谱纯有机溶剂组成，无机或有机盐的水溶液与色谱纯有机溶剂体积比为98∶1～30∶70，上述的无机或有机盐选自钾或钠的磷酸盐、枸橼酸盐，色谱纯有机溶剂选自醇类或腈类有机溶剂，硅烷键合硅胶选自C2～C18烷基硅烷键合硅胶、氨基硅烷键合硅胶、氰基硅烷键合硅胶。如：色谱柱为氨基键合硅胶柱，流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液∶乙腈(45∶55)，检测波长200nm，柱温：室温～45℃，流速：0.5～1.3ml/min。
方法可以为：取门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含马来酸1μg/ml及富马酸5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液，照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)试验。用氨基键合硅胶色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液∶乙腈(45∶55)为流动相，检测波长为200nm，柱温：40℃，流速：0.8ml/min，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与马来酸及富马酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，即得。
本发明的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性杂质分析方法经方法学研究，方法专属性强，溶剂、主药成分、辅料不干扰杂质的测定，进行强制破坏性(酸、碱、氧化、热、光)试验，马来酸、富马酸均能达到良好的分离，马来酸浓度在0.1068μg/ml～2.1360μg/ml浓度范围内与峰面积A呈线性关系，富马酸浓度在0.4978μg/ml～9.9559μg/ml浓度范围内与峰面积A呈线性关系，进样精密度马来酸RSD为0.33％；富马酸RSD为0.14％，均符合测定要求；马来酸、富马酸的定量限均为0.08ng，检测限均为0.024ng，准确度(回收率)、重复性、中间精密度、耐用性等试验均符合中国药典2010版二部关于HPLC测定的要求。
本发明的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性杂质分析方法，以富马酸、马来酸作为安全性杂质指标的其他测定方法，也可以为用离子交换色谱柱，采用电导检测器进行检测。
对于本发明而言，结合实施例的豚鼠过敏性试验，及制备工艺可行性，门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性杂质分析控制，其限量可制定为：富马酸限量≤0.2％，马来酸≤0.02％。
具体实施方式
实施例1
同ZL200810101612.4实施例1，同法制备得到门冬氨酸钾原料：在烧瓶中加入1340毫升的纯化水，搅拌下加入56.1克氢氧化钾，全部溶解后，加入133.1克L-门冬氨酸。加毕，回流2小时，用氢氧化钾和门冬氨酸调节溶液pH6.0～8.0，过滤，滤液减压蒸去约80％溶剂(水)，在搅拌下将所得粘稠状物加入1340毫升-40℃的乙醇中，边加边搅拌，大量固体生成，加毕，静置1小时，离心，50℃减压真空干燥，即得L-门冬氨酸钾。
实施例2
同ZL200810101612.4实施例8，同法制备得到门冬氨酸钾原料：在反应釜中加入400升的纯化水，搅拌下加入56.1千克氢氧化钾，全部溶解后，加入133.1千克L-门冬氨酸，加毕，回流3小时，用氢氧化钾和门冬氨酸调节溶液pH6.0～8.0。过滤，滤液蒸去水分，在搅拌下将所得粘稠状物加入400升-10℃的无水乙醇中，边加边搅拌，大量白色固体生成，加毕，静置1小时，离心，粉碎，105℃减压干燥，整粒，即得L-门冬氨酸钾。
实施例3
同ZL200810101612.4实施例13制备方法制备得到门冬氨酸钾注射液：取同实施例1方法制备的门冬氨酸钾1712g(以无水物计)，加入到约7L的注射用水中，加热搅拌使溶解，待全部溶解完全后，调节pH至7.0，加入7.5g针用活性炭，保温搅拌30分钟，粗滤除炭，用少量注射用水洗涤活性炭层，补注射用水至10L，用0.22μm的微孔滤膜滤过，灌装成1000支，熔封，121度灭菌12分钟，即得。
实施例4
除灭菌工艺为121度20分钟外，其他同实施例3同法制备得到门冬氨酸钾注射液。
实施例5
同专利ZL200810101613.9实施例1方法制备门冬氨酸镁：在反应釜中加入1340升的纯化水，搅拌下加入20.1千克氧化镁，全部溶解后，加入133.1千克L-门冬氨酸。加毕，回流2小时，用氧化镁或门冬氨酸调节溶液pH5.5～7.5。过滤，滤液减压蒸去约80％溶剂(水)，在搅拌下将所得粘稠状物加入1340毫升-40℃的乙醇中，边加边搅拌，大量固体生成。加毕，静置1小时，离心，50℃减压真空干燥，得L-门冬氨酸镁。
实施例6
同专利ZL200810101613.9实施例8方法制备门冬氨酸镁：在反应釜中加入400升的纯化水，搅拌下加入20千克氧化镁，全部溶解后，加入133.1千克L-门冬氨酸。加毕，回流3小时，用镁盐和门冬氨酸调节溶液pH5.5～7.5。过滤，滤液蒸去水分，在搅拌下将所得粘稠状物加入400升-10℃的无水乙醇中，边加边搅拌，大量白色固体生成。加毕，静置1小时，离心，粉碎，105℃减压干燥，整粒，得L-门冬氨酸镁。
实施例7
取实施例1门冬氨酸钾5kg和实施例5制备得到的门冬氨酸镁5kg，加入约80L注射用水，搅拌使溶解，用门冬氨酸或氢氧化钾调节pH至5.0～7.0，加入配制量0.1％(g/ml)的针用活性炭，60℃保温搅拌30分钟，过滤脱炭，用少量注射用水洗涤活性炭层，补注射用水至100L，搅拌混匀，用0.22μm的滤芯精滤，以每支10ml灌装于安瓿瓶，熔封，121℃灭菌12分钟，即得门冬氨酸钾镁注射液。
实施例8
除灭菌工艺为121度45分钟外，其他同实施例7同法制备得到门冬氨酸钾镁注射液。
实施例9
取实施例1门冬氨酸钾5kg、实施例5制备得到的门冬氨酸镁5kg和甘露醇7kg，加入约40L注射用水，加热搅拌使溶解，用门冬氨酸或氢氧化钾调节pH至5.0～7.0，加入配制量0.1％(g/ml)的针用活性炭，60℃保温搅拌30分钟，过滤脱炭，用少量注射用水洗涤活性炭层，补注射用水至50L，搅拌混匀，用0.22μm的滤芯精滤，以每支5ml灌装于西林瓶，冷冻干燥，真空压塞，进气出箱，轧铝塑组合盖，即得。
所述的冷冻干燥工艺为：制品入箱，品温至-45℃以下时保温2小时；开启冷凝器制冷，至-50℃以下，开启真空泵，干燥箱抽真空达15pa以下时加热板层，按程序升温：以5℃/小时升温至-20℃，再以4℃/小时升温至-10℃，以2℃/小时升至0℃，4℃/小时升至45℃，待品温升至43℃后保温4-6小时。
实施例10
取实施例7的样品，50度条件下加速稳定性试验6个月，取出，即得。
实施例11
安全性杂质测定。
方法1：取实施例1-实施例10的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含马来酸1μg/ml及富马酸5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液，照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)试验。用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.03mol/L硫酸溶液为流动相，检测波长为210nm，柱温：室温，流速：0.4ml/min，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与马来酸及富马酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，各杂质含量见表1。如图1所示，12.577min为马来酸色谱峰，20.519min为富马酸色谱峰。
表1方法1测定杂质含量结果(％)
备注：-表明未检出
方法2：取实施例1-实施例10的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含马来酸1μg/ml及富马酸5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液，照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)试验。用氨基键合硅胶色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液∶乙腈(45∶55)为流动相，检测波长为200nm，柱温：40℃，流速：0.8ml/min，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与马来酸及富马酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，各杂质含量见表2。如图2所示，5.208min为马来酸色谱峰，22.695min为富马酸色谱峰，而11.800min为门冬氨酸色谱峰。
表2方法2测定杂质含量结果(％)
备注：-表明未检出
由表1、表2可见，方法1、方法2均能检测3种杂质，两种方法检测结果类似，可以区别不同工艺产品质量情况。
方法3：分别以现有药品标准方法门冬氨酸钾镁注射液药品标准(卫生部药品标准二部第五册)、注射用门冬氨酸钾镁药品标准(YBH30412005)方法测定实施例3和实施例4门冬氨酸钾注射液灭菌前后及不同灭菌工艺的门冬氨酸钾、门冬氨酸、钾的含量，结果表明灭菌前后及不同灭菌时间上述含量指标几无变化，两种方法均能很好测定，方法间结果无差异，结果均符合标准规定。
分别以门冬氨酸钾镁注射液药品标准(卫生部药品标准二部第五册)、注射用门冬氨酸钾镁药品标准(YBH30412005)方法测定实施例7、实施例8、实施例9(冻干)、实施例10门冬氨酸钾镁注射液灭菌前后及不同灭菌条件、不同稳定性条件样品的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁、门冬氨酸的含量，结果表明灭菌前后及不同灭菌条件、不同稳定性条件的样品上述含量指标无明显变化，两种方法均能很好测定，方法间结果无差异，结果均符合标准规定。
现有技术标准无法准确反应如方法1、方法2所述的质量变化。
实施例12
取实施例3、实施例4、实施例7、实施例8、实施例9、实施例10样品，按照《化学药物刺激性、过敏性、溶血性研究技术指导原则》进行过敏性试验，结果表明除实施例8、实施例10样品过敏试验出现阳性外，其他样品过敏试验未发生过敏反应。
以门冬氨酸钾镁注射液为例，进行安全性试验描述，取实施例7、实施例8和实施例10的样品，按照国家药品标准(二部)第五册的“门冬氨酸钾镁注射液”标准进行检验，结果均符合规定。
1)试验动物
品种：豚鼠，品系：DH，性别：雌雄各半，动物体重：300-400g，动物来源：北京市昌扬西山养殖场，动物合格证号：SCXK(京)20１１-0010。
所有动物在实验前适应试验室环境至少7天，期间进行检疫。在适应环境及试验期间，动物分笼群养，给予豚鼠颗粒饲料，自由饮水。动物室维持12小时照明，室温18～29℃，相对湿度40～70％。
2)剂量设计
根据门冬氨酸钾镁注射液药品说明书及《化学药物刺激性、过敏性、溶血性研究技术指导原则》进行剂量设计。
根据药品说明书，门冬氨酸钾镁注射液的临床最大剂量为33.3mg/kg，最大浓度为4mg/ml。
试验采用高剂量进行，高剂量为临床2倍剂量即66.7mg/kg致敏，临床4倍剂量133.2mg/kg激发。
试验设立供试品组1(实施例7样品)、供试品组2(实施例8样品)、供试品组3(实施例10样品)、阴性对照和阳性对照组，各组剂量及其与人用临床剂量倍数的关系见表3。
表3各组剂量设计情况
3)实验方法
①溶液制备
供试品溶液：取供试品加5％葡萄糖注射液稀释至33.3mg/ml；阳性药：取人血白蛋白加0.9％氯化钠注射液稀释至1％供注射用；阴性药：0.9％氯化钠注射液原液。
②致敏
致敏途径：腹腔注射致敏。
致敏剂量
供试品组：给予供试品33.3mg/ml溶液，2.0ml/kg；阴性对照组：给予0.9％氯化钠注射液0.5ml/只；阳性对照药：给予1％人血白蛋白0.5ml/只。
致敏频次：试验第0、2、4日各致敏一次，共3次。
③激发
激发途径：静脉注射给药。
激发频次：试验第14日和第21日各取3只动物激发。
激发剂量
供试品组：给予供试品33.3mg/ml溶液，4.0ml/kg；阴性对照组：给予0.9％氯化钠注射液1.0ml/只；阳性对照药：给予1％人血白蛋白1.0ml/只。
4)观察指标
致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。
激发：静脉注射后立刻至30min，按表4症状详细观察每只动物的反应症状，最长可延长观察至3h。
表4过敏反应症状
| 序号 | 症状 | 序号 | 症状 | 序号 | 症状 |
| 0 | 正常 | 7 | 呼吸急促 | 14 | 步态不稳 |
| 1 | 躁动 | 8 | 排尿 | 15 | 跳跃 |
| 2 | 竖毛 | 9 | 排粪 | 16 | 喘息 |
| 3 | 颤抖 | 10 | 流泪 | 17 | 痉挛 |
| 4 | 搔鼻 | 11 | 呼吸困难 | 18 | 旋转 |
| 5 | 喷嚏 | 12 | 哮鸣音 | 19 | 潮式呼吸 |
| 6 | 咳嗽 | 13 | 紫癜 | 20 | 死亡 |
结果评价
可按表5判断过敏反应发生程度。计算过敏反应发生率。根据过敏反应发生率和发生程度进行综合判断。
表5全身致敏性评价标准
| 症状发生数 | 强度 | 结论 |
| 0 | - | 过敏反应阴性 |
| 1-4 | + | 过敏反应弱阳性 |
| 5-10 | ++ | 过敏反应阳性 |
| １１-19 | +++ | 过敏反应强阳性 |
| 20 | ++++ | 过敏反应极强阳性 |
5)结果
表6门冬氨酸钾镁注射液对豚鼠主动全身过敏反应的影响
由表6可见，供试品组1、阴性组于第一次注射后的14日与21日激发，均未发生过敏反应，供试品组2在第14天、第21天有出现弱阳性反应，供试品组3、阳性组给予1.0％人血白蛋白激发后6只动物均呈阳性-极强阳性反应。
供试品1、供试品2、供试品3分别按照“门冬氨酸钾镁注射液”质量标准检验，各项指标均符合标准规定，不同的是供试品2、供试品3中按照本发明的方法，进行杂质检查，其富马酸、马来酸、羟基丁二酸杂质含量较供试品1较高，尤其供试品3显著增加，虽然目前未有文献表明富马酸、马来酸、羟基丁二酸可引起不良反应相关报道，但结合动物过敏试验结果，制剂中富马酸、马来酸、羟基丁二酸杂质较高含量与过敏反应具有相关性。用本发明的方法检测门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂中富马酸、马来酸、羟基丁二酸杂质含量，可以反应门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的质量，从而更好控制和降低临床用药的安全性风险。
附图说明
图1为实施例11门冬氨酸钾镁注射液方法1典型图谱。
图2为实施例11门冬氨酸钾镁注射液方法2典型图谱。
Claims (7)
1.门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，其特征在于以富马酸、马来酸作为安全性指标的分析检测，采用高效液相色谱法检测，液相色谱柱以阳离子交换树脂为填充剂，以0.01～0.04mol/L硫酸水溶液为流动相，以波长为190～240nm进行检测。
2.根据权利要求1所述的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，其特征在于液相色谱柱以磺酸基阳离子交换树脂为填充剂。
3.根据权利要求1或2所述的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，包括以下步骤：
a.取门冬氨酸钾、门冬氨酸镁或其相关制剂，用水或流动相溶解，必要时滤过，配成每1ml中含0.5～5.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含富马酸1～5μg/ml和马来酸0.2～5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液；
b.取上述溶液适量，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与富马酸、马来酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，即得。
4.根据权利要求3所述的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，其特征在于高效液相色谱法中液相色谱柱以磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.02mol/L硫酸水溶液为流动相，检测波长为210nm，流速：0.3～1.0ml/min。
5.根据权利要求4所述的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，其特征在于：取门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含马来酸1μg/ml及富马酸5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液，照中国药典2010年版二部附录VD记载的高效液相色谱法试验，用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.03mol/L硫酸溶液为流动相，检测波长为210nm，柱温：室温，流速：0.4ml/min，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与马来酸及富马酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，即得。
6.门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，其特征在于以富马酸、马来酸作为安全性指标的分析检测，采用高效液相色谱法检测，液相色谱柱选自以硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈＝45：55，检测波长200nm，流速：0.5～1.3ml/min。
7.根据权利要求6所述的门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂的安全性分析方法，其特征在于：取门冬氨酸钾、门冬氨酸镁及其相关制剂适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，作为供试品溶液，另取马来酸及富马酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成含马来酸1μg/ml及富马酸5μg/ml的混合溶液，作为对照品溶液，照中国药典2010年版二部附录VD记载的高效液相色谱法试验，用氨基键合硅胶色谱柱，以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液：乙腈＝45：55为流动相，检测波长为200nm，柱温：40℃，流速：0.8ml/min，精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的色谱图中如有与马来酸及富马酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，即得。
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