CN104422664A - 一种检验五加芪粉质量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检验五加芪粉质量的方法，包括对五加芪粉进行定性分析和定量检测。与灵芪加口服液质量检验方法相比，该方法使用了高效液相色谱法测定五加芪粉中的黄芪甲苷含量，并增加了总糖含量的测定方法，同时采用薄层色谱法分别检测五加芪粉中的黄芪甲苷和异嗪皮啶。该方法专属性、重复性、准确性良好，可用于对五加芪粉的质量进行综合评价，从而有效控制该产品的质量，保证其临床使用安全、有效、稳定。

Description

一种检验五加芪粉质量的方法

技术领域

本发明属于中药检测技术领域，涉及一种检验五加芪粉质量的方法，该方法可用于对五加芪粉的质量进行综合评价。

背景技术

随着养殖业向集约化和工厂化发展，畜禽对病原微生物的易感性不断增加，病害频繁发生，为了防治疾病，传统做法是大量使用抗生素类药物，结果使耐药菌株不断增多，导致畜禽免疫功能急剧下降、生长受阻，抗生素的滥用还导致疫苗接种反应增强，副作用加大或使免疫接种失败，给养殖业造成很大的经济损失。

免疫增强剂是一类单独或与抗原同时使用增强动物机体非特异性和特异性免疫的物质，目前使用的免疫增强剂种类很多，包括生物性免疫增强剂，如干扰素；化学性免疫增强剂，如左旋咪唑等，其存在着高剂量产生免疫抑制或对机体有害等缺点，研制开发无毒害、作用强的新型中药免疫增强剂已成为迫切需要。

五加芪粉由黄芪和刺五加两味中药组成，处方来源于《国家中成药标准》中的灵芪加口服液，灵芪加口服液由灵芝、黄芪和刺五加三味中药组成，从节约养殖成本上考虑去除价格昂贵的灵芝，并通过小鼠脾脏淋巴细胞增殖试验筛选出黄芪与刺五加的最佳比例。本处方具有补中益气、扶正祛邪的功能，临床用于提高机体免疫力，配合疫苗使用提高疫苗免疫效果。临床试验结果表明，五加芪粉以每升水0.2g混饮，连用7日，具有提高鸡非特异性免疫能力，提高鸡新城疫、禽流感（H9）抗体水平，同时可提高鸡的生产性能。

五加芪粉是根据传统中医理论开发的中药免疫增强剂，尚无质量标准，不利于控制其质量，为保证临床使用安全、有效、稳定，有必要建立一个完善的质量标准及其检验方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术的不足，提供一种检验五加芪粉质量的方法，通过建立其检验方法，可增强该药的有效性、质量可控性和稳定性。

为此，本发明提供了一种检验五加芪粉质量的方法，包括对五加芪粉进行定性分析和定量检测，其中，对五加芪粉进行定量检测包括检测五加芪粉中黄芪甲苷的含量以及五加芪粉中总糖的含量。

根据本发明，所述五加芪粉由刺五加和黄芪组成。

本发明中，所述五加芪粉中总糖为五加芪粉中的刺五加所含糖类成分和黄芪所含糖类成分的总和。

一方面，由于刺五加和黄芪都含有多糖和寡糖等糖类成分，现代药理学研究表明这些多糖类和寡糖类成分均有增强免疫功能的作用。因此，检测五加芪粉中的刺五加和黄芪的总含糖量可以用于评价五加芪粉的质量。

根据本发明，采用苯酚-硫酸法检测五加芪粉中总糖含量，包括以无水葡萄糖为对照样品，采用紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定经苯酚-硫酸处理后的对照样品和五加芪粉待测样品的吸光度，并按外标法以吸光度值计算待测样品中的总糖含量。

在本发明的一个具体实施例中，采用苯酚-硫酸法检测五加芪粉中总糖含量，包括以下步骤：

（1）制备对照样品溶液

取无水葡萄糖适量，精密称定，加水制成每1ml含无水葡萄糖0.6mg的溶液，即得。

（2）制备待测样品溶液

取待测样品约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

（3）测量待测样品中总糖含量

精密量取对照样品溶液与待测样品溶液各2ml，置于25ml量瓶中，精密加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，摇匀，置于水浴中保温15min，取出，置于冰水浴中冷却3min，加水稀释至近刻度，再置冰水浴中冷却3min，取出，加水至刻度，摇匀；另外量取水2.0ml，同上平行操作作为空白对照，用紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定上述经苯酚-硫酸处理后的对照样品和五加芪粉待测样品的吸光度，并按外标法以吸光度值计算待测样品中的总糖含量。

另一方面，由于黄芪为该配方中的君药，黄芪甲苷是其特征有效成分，药理研究表明黄芪甲苷具有增强机体免疫力的作用。因此，检测五加芪粉中黄芪甲苷的含量可以用于评价五加芪粉的质量。

在本发明的一个具体实施方式中，采用液相色谱法对五加芪粉中黄芪甲苷含量进行检测，包括以下步骤：

（1）进行色谱条件选择和系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（体积比为35:65）为流动相，采用蒸发光散射检测器进行检测，理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

（2）制备对照样品溶液

取黄芪甲苷对照样品适量，精密称定，加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液，即得。

（3）制备待测样品溶液

取待测样品2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入50ml甲醇超声提取30分钟，抽滤，将滤渣连同滤纸放回锥形瓶中，再加50ml甲醇超声提取30分钟，抽滤，用30ml甲醇洗涤滤渣和滤纸，合并滤液，减压回收溶剂并浓缩至干，所获得的产物加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次约40ml，弃去氨液，将正丁醇溶液中的溶剂蒸干，所获得的产物加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

（4）采用液相色谱法检测待测样品中的黄芪甲苷含量

分别精密吸取对照样品溶液5μl、15μl，待测样品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得到样品中的黄芪甲苷含量。

根据本发明，对五加芪粉进行定性分析包括对五加芪粉中黄芪进行鉴定，以及对五加芪粉中刺五加进行鉴定。

第三方面，由于异嗪皮啶是刺五加的特征化学成分。因此，在本发明中，对五加芪粉中刺五加进行鉴定主要是鉴定其中的异嗪皮啶。

本发明中，对五加芪粉中刺五加进行鉴定是采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的异嗪皮啶。

在本发明的一个实施方式中，采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的异嗪皮啶，包括以异嗪皮啶为对照样品，以甲醇为溶剂，以三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将对照样品溶液和五加芪粉待测样品提取物溶液在同一硅胶G薄层板上点样展开，并置于紫外光灯下进行检视。如果检视的结果为待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同的蓝色荧光斑点，则说明五加芪粉待测样品中含有异嗪皮啶。

在本发明的一个具体实施例中，在采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的异嗪皮啶的过程中，所述展开剂三氯甲烷-甲醇-水的体积比为19:1:0.1。

与现有技术在薄层色谱分析过程中采用三氯甲烷-甲醇组成的展开剂相比，上述实施例中的这种组成的展开剂及其配比可以在薄层色谱分析过程中使主斑点分离度更好。

本发明中所用术语“主斑点”是指异嗪皮啶斑点，亦即在待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同的蓝色荧光的斑点。与待测样品中其他杂质斑点相比，该斑点是最强的斑点。

在本发明的一个具体实施例中，对五加芪粉中刺五加进行鉴定是采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的异嗪皮啶，包括以下步骤：

（1）从待测样品中提取异嗪皮啶

取待测样品10g，加入甲醇50ml，加热回流1小时，过滤，将滤液中的溶剂蒸干，并将所获得的产物加水10ml溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10ml，合并三氯甲烷溶液，将三氯甲烷溶液中的溶剂蒸干，并将所获得的提取物加甲醇1ml溶解，制成五加芪粉待测样品提取物溶液。

（2）制备对照样品溶液

取异嗪皮啶对照样品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的对照样品溶液。

（3）采用薄层色谱法检测五加芪粉中的刺五加

吸取上述步骤（1）和（2）中的两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（体积比为19:1:0.1）为展开剂展开，取出，晾干，置于紫外光灯（365nm）下检视。如果待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同的蓝色荧光斑点，即说明待测样品中含有异嗪皮啶。

第四方面，由于黄芪甲苷是黄芪的特征化学成分。因此，在本发明中，对五加芪粉中黄芪进行鉴定主要是鉴定其中的黄芪甲苷。

本发明中，对五加芪粉中黄芪进行鉴定是采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的黄芪甲苷，包括以黄芪甲苷作对照样品，以三氯甲烷-甲醇-水（体积比为13:7:2）的下层溶液为展开剂，将对照样品溶液和五加芪粉待测样品提取物溶液在同一硅胶G薄层板上点样展开，并喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。如果待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同颜色的斑点，即说明待测样品中含有黄芪甲苷，亦即含有黄芪。

在本发明的一个具体实施例中，对五加芪粉中黄芪进行鉴定是采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的黄芪甲苷，其包括以下步骤：

（1）从待测样品中提取黄芪甲苷

取待测样品1g，加入甲醇20ml，加热回流1小时，过滤，将滤液加于中性氧化铝柱（100～120目，5g，内径10～15mm）上，用40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干溶剂，所获得的产物加水30ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，将正丁醇溶液中的溶剂蒸干，所获得的产物加入甲醇1ml溶解，作为待测样品溶液。

（2）制备对照样品溶液

取黄芪甲苷对照样品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照样品溶液。

（3）采用薄层色谱法检测五加芪粉中的黄芪

吸取上述步骤（1）和（2）中的两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（体积比为13:7:2）的下层溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%（v/v）硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。如果待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同颜色的斑点，即说明待测样品中含有黄芪甲苷，亦即含有黄芪。

本发明提供了一种检验五加芪粉质量的方法，包括对五加芪粉进行定性分析和定量检测。与灵芪加口服液质量检验方法相比，该方法使用了高效液相色谱法测定五加芪粉中的黄芪甲苷含量，并增加了总糖含量的测定方法，同时采用薄层色谱法分别检测五加芪粉中的黄芪甲苷和异嗪皮啶。该方法专属性、重复性、准确性良好，可用于对五加芪粉的质量进行综合评价，从而有效控制该产品的质量，保证其临床使用安全、有效、稳定。

附图说明

下面结合附图来对本发明作进一步详细说明：

图1是实施例2中黄芪鉴定薄层色谱图；

图中附图标记如下：1黄芪甲苷；2～4待测样品；5阴性对照。

图2是实施例2中刺五加鉴定薄层色谱图；

图中附图标记如下：1异嗪皮啶；2～4待测样品；5阴性对照。

图3是实施例3中采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷含量的专属性试验色谱图；

图中附图标记如下：1黄芪甲苷对照样品色谱图；2待测样品色谱图；3阴性对照色谱图。

具体实施方式

下面将结合实施例和附图来详细说明本发明，这些实施例和附图仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围。各实施例中的材料均为分析试验用品。

实例1：制备五加芪粉

五加芪粉：处方：黄芪800g，刺五加200g。

制法：以上2味中药粉碎成最粗粉，加8倍量水，浸泡1小时，煎煮回流提取2h，滤过，滤渣再加水提取2次，每次加8倍量水并回流提取2h，分次过滤，合并滤液，趁热（50～60℃）离心，上清液减压浓缩至相对密度约1.2（≤70℃），喷雾干燥，得成品300g。

实例2：五加芪粉鉴别方法专属性考察

（1）试剂与样品

对照样品：黄芪甲苷，批号：110781-200613，购自中国食品药品检定研究院；异嗪皮啶，批号：110837-200304，购自中国食品药品检定研究院。

五加芪粉：实施例1制备。

阴性对照样品：按照实施例1方法制备各鉴别项阴性对照样品。

（2）黄芪的鉴别

取实施例1制备的样品1g，加甲醇20mL，加热回流1小时，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100～120目，5g，内径10～15mm）上，用40%甲醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为待测样品溶液；另取黄芪甲苷对照样品，加甲醇制成每1mL含0.5mg溶液，作为对照样品溶液；按处方配比称取刺五加并按实施例1制备工艺制备样品作为阴性对照样品，取阴性对照样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（体积比为13:7:2）的下层溶液作为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，结果见图1。从图1的结果可以看出，在与对照样品色谱相应的位置上，待测样品显相同颜色的斑点，阴性对照不显示斑点，表明方法专属性良好。

（3）刺五加的鉴别

取实施例1制备的样品10g，加甲醇50mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL使溶解，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为待测样品溶液；另取异嗪皮啶对照样品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照样品溶液；按处方配比称取黄芪并按实施例1制备工艺制备样品作为阴性对照样品，取阴性对照样品同法操作制备阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（体积比为19:1:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果见图2。从图2的结果可以看出，在与对照样品色谱相应的位置上，待测样品显相同的蓝色荧光斑点，阴性对照无干扰，表明方法专属性良好。

实例3：黄芪甲苷含量测定方法学考察

（1）仪器与试剂、样品

仪器：高效液相色谱仪，e2695型，美国沃特世公司

蒸发光散射检测器，2424型，美国沃特世公司

电子分析天平，AB135-S型，梅特勒托利多公司

试剂：乙腈为色谱纯；水为二次重蒸水；其他试剂均为分析纯。

对照样品：黄芪甲苷，批号：110781-200613，购自中国食品药品检定研究院。

五加芪粉：实施例1制备。

（2）色谱条件

色谱柱为Kromasil100-5C18柱(150×4.6mm，5μm)；流动相为乙腈-水（35:65）；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度为60℃，喷雾器温度为36℃；柱温为30℃；流速为1.0ml/min。

（3）溶液的制备

对照样品溶液的制备：精密称取黄芪甲苷对照样品25.4mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得。

待测样品溶液的制备：取实施例1制备的样品1.9896g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50ml甲醇超声提取30分钟，抽滤，滤渣连同滤纸放回锥形瓶中，再加50ml甲醇超声提取30分钟，抽滤，用30ml甲醇洗涤滤渣和滤纸，合并滤液，减压回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次约40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

阴性对照溶液的制备：按照实施例1的制备方法制备缺黄芪的阴性对照样品，取阴性对照样品，再按照待测样品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，即得。

（4）专属性试验

分别精密吸取对照样品溶液15μL、待测样品溶液10μL、阴性对照溶液10μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件进行试验，记录色谱图，结果表明：待测样品色谱中黄芪甲苷的保留时间与对照样品一致，而阴性对照在对照样品、待测样品色谱峰相应的位置上无干扰，方法专属性良好，色谱图见图3。

（5）线性范围考察

精密称取黄芪甲苷对照样品25.4mg，加甲醇制成0.508mg/mL的溶液，按上述色谱条件分别进样3μL、5μL、10μL、15μL、20μL测定。以峰面积对数（y）为纵坐标，以进样量对数（x）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=1.4828x+5.312，r=0.9991，结果表明，在1.524μg～10.16μg范围内，黄芪甲苷峰面积对数与进样量对数有良好的线性关系，数据见表1。

表1线性关系试验结果

（6）重复性试验

取实施例1制备的同一批样品，按照（3）中待测样品溶液的制备方法制备待测样品溶液，平行制备6份，精密吸取6份待测样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积并计算含量，结果测得黄芪甲苷含量的RSD%为1.6，表明该方法精密度良好，数据见表2。

表2重复性试验结果

（7）回收率试验

取已知含量的五加芪粉1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，平行称取6份，各精密加入0.538mg/mL的黄芪甲苷对照样品甲醇溶液5mL，按上述样品制备方法制备待测样品溶液，按含量测定方法测定峰面积并计算回收率，结果平均回收率为99.5%，RSD为4.6%，表明该方法准确度良好，数据见表3。

表3回收率试验结果

（8）三批样品含量测定

取按照实施例1制备的3批五加芪粉（批号分别为：20120201、20120202、20120203），按照本发明建立的含量测定方法测定黄芪甲苷的含量，其结果分别为2.7mg/g、2.6mg/g、2.6mg/g。

实施例4：总糖含量测定方法学考察

（1）仪器与试剂、样品

仪器：

紫外-可见分光光度计，UV-2100型，北京瑞利分析仪器公司。

电子分析天平，AB135-S型，梅特勒托利多公司。

试剂：水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

对照样品：D-无水葡萄糖，批号：110833-200904，购自中国食品药品检定研究院。

五加芪粉：实施例1制备。

（2）测定方法

对照样品溶液的制备：取无水葡萄糖对照样品适量，精密称定，加水制成每1ml含无水葡萄糖0.6mg的溶液，即得。

待测样品溶液的制备：取待测样品约50mg，精密称定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：精密量取对照样品溶液与待测样品溶液各2ml，置25ml量瓶中，精密加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速精密加入硫酸5ml，摇匀，置水浴中保温15min，取出，置冰水浴中冷却3min，加水稀释至近刻度，再置冰水浴中冷却3min，取出，加水至刻度，摇匀；另量取水2.0ml，同上平行操作作为空白对照，照紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定吸光度，按外标法以吸光度值计算待测样品的含量。

（3）线性范围考察

称取无水葡萄糖对照样品5份，分别为17.1mg、21.9mg、31.9mg、41.7mg、51.7mg，分别置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5个不同浓度的对照样品溶液各2mL，分别置25mL量瓶中，各精密加入5%苯酚溶液1mL，硫酸5mL，摇匀，置于水浴中加热15分钟，冰水浴冷却3min，加水至近刻度处再冰水冷却3min，取出用水稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度计法，在490nm波长处测定吸收度，以吸光度（y）为纵坐标，以无水葡萄糖对照样品溶液浓度（x）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=0.7933x-0.0289，r=0.9994，结果表明，在0.342mg/ml～1.034mg/ml范围内，吸光度与浓度有良好的线性关系，数据见表4。

表4线性关系试验结果

（4）重复性试验

取实施例1制备的同一批样品，按照（2）测定方法测定吸光度并计算含量，平行操作6份，结果测得总糖含量的RSD%为1.2，表明方法重复性良好，数据见表5。

表5重复性试验结果

（5）回收率试验

称取已知含量的五加芪粉6份，每份约25mg，精密称定，置50mL量瓶中，分别向其中精密加入无水葡萄糖对照样品15mg，加水溶解并定容至刻度，摇匀后，按（2）测定方法测定吸光度，计算回收率，结果平均回收率为98.5%，RSD%为3.3，表明方法准确度良好，数据见表6。

表6总糖回收率试验测定结果

（6）三批样品含量测定

取按照实施例1制备的3批五加芪粉（批号分别为：20120201、20120202、20120203），按照本发明建立的含量测定方法测定总糖含量，其结果分别为623mg/g、613mg/g、618mg/g。

通过上述实施例可以看出，本发明方法专属性、重复性、准确性良好，可用于对五加芪粉的质量进行综合评价，从而有效控制该产品的质量，保证其临床使用安全、有效、稳定。

以上所述仅为本发明的较佳实施方式，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种检验五加芪粉质量的方法，包括对五加芪粉进行定性分析和定量检测，其中，对五加芪粉进行定量检测包括检测五加芪粉中黄芪甲苷的含量以及五加芪粉中总糖的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述五加芪粉中总糖为五加芪粉中的刺五加所含糖类成分和黄芪所含糖类成分的总和。

3.根据权利要求1或2中任意一项所述的方法，其特征在于，采用苯酚-硫酸法检测五加芪粉中总糖含量，包括以无水葡萄糖为对照样品，采用紫外-可见分光光度法，在490nm波长处测定经苯酚-硫酸处理后的对照样品和五加芪粉待测样品的吸光度，并按外标法以吸光度值计算待测样品中的总糖含量。

4.根据权利要求1到3中任意一项所述的方法，其特征在于，对五加芪粉进行定性分析包括对五加芪粉中黄芪进行鉴定，以及对五加芪粉中刺五加进行鉴定。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，对五加芪粉中刺五加进行鉴定是采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的异嗪皮啶。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的异嗪皮啶，包括以异嗪皮啶为对照样品，以甲醇为溶剂，以三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，将对照样品溶液和五加芪粉待测样品提取物溶液在同一硅胶G薄层板上点样展开，并置于紫外光灯下进行检视。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，如果检视的结果为待测样品色谱中，在与对照样品色谱相应的位置上，显示与对照样品相同的蓝色荧光斑点，则说明五加芪粉待测样品中含有异嗪皮啶。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，在采用薄层色谱法鉴定五加芪粉中的异嗪皮啶的过程中，所述展开剂三氯甲烷-甲醇-水的体积比为19:1:0.1。

9.根据权利要求1到8中任意一项所述的方法，其特征在于，所述五加芪粉由刺五加和黄芪组成。