CN102579532A

CN102579532A - 一种刺五加组合物，含其制剂及其检测方法

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Publication number: CN102579532A
Application number: CN2012100497551A
Authority: CN
Inventors: 方同华
Original assignee: HAERBIN ZHENBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: HAERBIN ZHENBAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2011-10-17
Filing date: 2012-02-29
Publication date: 2012-07-18
Anticipated expiration: 2032-02-29
Also published as: CN102579532B

Abstract

本发明涉及一种刺五加组合物，含其制剂及其含量检测方法，每克该组合物中含有总黄酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E 4-15毫克。本发明提供的组合物及制剂在降血糖、降血脂、男性不育症方面具有疗效，且效果优于现有技术。

Description

一种刺五加组合物,含其制剂及其检测方法

技术领域

本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种刺五加组合物，含其制剂及其检测方法。

背景技术

刺五加(Radix Acanthopanacis Senticosl)为五加科五加属植物的根、根茎及茎，主要分布在中国东北部、俄罗斯远东地区、日本北海道及朝鲜等地。始见于东汉《神农本草经》，别名为五加参、老虎钌自、刺拐棒(东北)。《本草纲目》记载刺五加能“补力益精，明目下气”，能“补五劳七伤，久服轻身耐老”，具有益气健脾，补肾安神之功效。

刺五加的主要功效成分为酚苷类及其某些苷元类成分，主要包括刺五加总苷和总黄酮等：

刺五加总苷具有7种型式，其主要活性成分为刺五加苷B、刺五加苷E：刺五加苷B又称紫丁香苷(Syringin)，相对含量最多，也是刺五加中的主要药效成分之一，具有抗疲劳、增强免疫力、护肝和释放乙酰胆碱，增加胰岛素分泌，防辐射等作用；刺五加苷E具有缓解压力、抗焦虑、抗应激、抗溃疡和抗疲劳等作用。

刺五加总黄酮是刺五加中重要的天然有效活性成分，具有广泛的药理活性，能扩张血管，增加冠状动脉血流量，降低心肌耗氧量，抗心肌缺血，改善心电图，抗异位心律，降低血压，镇静安神。由于刺五加总黄酮的多种生物活性及良好的临床效果，多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之一。其主要药效成分异嗪皮啶是刺五加苷B1的苷元，具有明显的抗炎和抗菌作用。

现代临床研究表明，刺五加主要用于治疗神经官能症、肾上腺皮质功能低下症、肿瘤患者因放疗化疗引起的白细胞减少、风湿性及类风湿性关节炎、肺心病、低血压和糖尿病等症。

刺五加活性成分的提取研究主要是采用水提、甲醇提、乙醇回流提取和超临界CO₂萃取法等，其中超临界CO₂萃取的选择性高、操作时间短、有效成分得率高，但其缺点是受处理量的限制，产量低，目前工业开发难度较大，因而目前仍以水提、有机溶剂提取为主，且多数仅以单一成分作为衡量提取工艺参数优劣的指标，难以保证刺五加的全部有效成分得到充分的提取分离和利用。

在2010年版中国药典一部中“刺五加浸膏”公开了如下内容，第一是提取方法，分别为水煎煮或醇提，具体为：水煎煮方法，刺五加1000g，粉碎成粗粉，加水煎煮两次，每次3h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏50g(水浸膏)；醇提方法：取刺五加1000g，粉碎成粗粉，加75％乙醇，回流提取12h，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩成浸膏40g(醇浸膏)，即得。

中国专利申请200710117640.0(简称07年专利)公开了水提醇沉的提取方法，1)采用水提醇沉法制备刺五加药物浸膏；2)将浸膏加水稀释，用石灰乳调节pH至10.00-12.00，搅拌均匀后用硫酸调节pH至4.5-6.5，静置，抽取上清液过滤，浓缩，醇沉；3)冷藏静置除杂得刺五加提取液；或浓缩减压干燥得刺五加提取物。该方法存在煎煮时间短，有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出，石灰乳调碱前采用二次醇沉方法除杂，在去除杂质的同时有效成分损失也较大的缺点。

而中国专利申请201010165556.8(下简称为2010年专利)在07年专利的基础上，进一步公开了刺五加的提取方法，包括以下步骤：将刺五加切成碎片，加水煎煮，合并煎液，减压浓缩，加入乙醇至醇含量为70-75％，静置滤过，回收乙醇后加水稀释至生药重量的3-6倍，用石灰乳调pH值至10.0-12.0，静置4小时以上，再用硫酸将pH值调至5.0-6.0，静置过滤，浓缩，加入乙醇至醇含量为80-85％，静置过滤，离心分离杂质，药液回收乙醇后浓缩干燥，即得。该方法同样存在煎煮时间短，有效成分尤其是刺五加苷E成分不能被充分提出的缺点，醇沉次数虽然减少至1次，但有效成分损失仍较大。

07年专利说明书实施例5公开的由提取物制备注射液的制备方法为：取实施例2的提取物，加注射用水使溶解，用40％的NaOH溶液调pH值至5.5，搅拌均匀后加热，加入0.2％的活性炭，煮沸吸附15分钟，冷却至50℃以下用40％的NaOH溶液调pH值至5.7，补加新鲜注射用水至含生药5g/ml。经0.45μm滤膜过滤至澄清，灌装，115℃高压灭菌40分钟。冷冻，缓化后冷藏20天，常温放置3.5个月。0.65μm滤芯过滤，加注射用水至含生药5g/ml，调pH值至5.0，加入活性炭脱色，过滤，调pH值至5.0，补加注射用水至含生药5g/ml，分别经0.45μm、0.22μm滤芯精滤，灌封，115℃30分钟灭菌，即得。该方法第一次高压灭菌易导致溶液pH值下降，使有效成分分解、被破坏掉。而且冷冻步骤使溶液迅速凝固成固体，不利于杂质成分的沉降。冷藏及常温放置的时间较长，不利于大生产。

中国专利申请201010165556.8公开的注射液的制备方法为：取提取物加注射用水稀释，100-120℃热处理，过滤，0-4℃冷藏处理，过滤，调pH值至5.5，活性炭处理，过滤，灭菌，冷藏处理，超滤，灌装，灭菌，即得。该方法在加入活性炭进行脱色处理前后各进行了一次冷热处理，目的是除杂，但由于第一次冷热处理后不能将杂质彻底除去就进行活性炭脱色处理，致使1)脱色处理不完全，溶液颜色较深；2)若增加活性炭用量保证溶液颜色符合要求，则部分有效成分会被活性炭吸附除去，含量损失大。

现有紫丁香苷的含量检测方法为：照高效液相色谱法(2010年版中国药典一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统试用性实验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，按照表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为220nm；柱温30℃。理论板数按照紫丁香苷峰计算应不低于10000；异嗪皮啶峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5。

表1：梯度洗脱表

时间	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-20	10→20	90→80
20-30	20→25	80→75
			30-40	40	60
40-50	10	90

对照品溶液的制备：取紫丁香苷对照品，刺五加苷E对照品、异嗪皮啶对照品适量，精密称定，加甲醇(刺五加苷E对照品先加50％甲醇溶解)制成每1ml含紫丁香苷、刺五加苷E各40μg、异嗪皮啶10μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品约0.2g，精密称定，置小烧杯中，用50％甲醇20ml，分次溶解，转移至25ml量瓶中，超声处理(功率250W，频率50kHz)10分钟，取出，放冷，加50％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

同时药典还规定，本品水浸膏中含紫丁香苷(C₁₇H₂₄O₉)不得低于0.60％、刺五加苷E(C₃₄H₄₆O₁₈)不得少于0.30％、异嗪皮啶(C₁₁H₁₀O₉)不得少于0.10％；醇浸膏含紫丁香苷(C₁₇H₂₄O₉)不得少于0.50％、刺五加苷E(C₃₄H₄₆O₁₈)不得少于0.30％、异嗪皮啶(C₁₁H₁₀O₉)不得少于0.12％。

现有检测方法采用普通高效液相色谱法，检测时间一般为50分钟，时间较长，当日生产批次较多时，检测工作量大幅增加，很难及时向生产部门提供检测数据。

发明内容

本发明的目的是提供一种克服现有技术缺点的刺五加组合物。

本发明的另一目的在于提供一种刺五加组合物的制备方法。

本发明的另一目的还在于提供一种含刺五加组合物的制剂。

本发明的另一目的还在于提供一种含刺五加组合物的制剂的制备方法和检测方法。

本发明提供的一种刺五加组合物，含有总黄酮50-120mg/g、紫丁香苷12.5-30mg/g和刺五加苷E 4-15mg/g。

优选地，本发明提供的刺五加组合物，含有总黄酮60-120mg/g、紫丁香苷15-30mg/g和刺五加苷E 6-15mg/g。

本发明还提供了一种制备刺五加组合物的方法，包括以下步骤：

1)称取刺五加，粉碎，加水浸泡30分钟后煎煮2-3次，每次加入4-8倍量水，煎煮2-3小时，滤过，其中水为饮用水、纯化水或注射用水；

2)待滤液温度降到50℃以下时，用20％石灰乳调节pH值至10.0-12.0，搅拌均匀；再用20％硫酸调节pH值至5.0-6.0，搅拌均匀，静置4小时以上，滤取上清液，浓缩成在80℃测定相对密度为1.10-1.20的浓缩膏；待浓缩膏温度降至50℃以下时，边加入乙醇边搅拌使含醇量达83-85％，充分搅拌，静置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.15-1.20，即得。

上述方法中，所述步骤2)中：

待滤液温度降至50℃以下中50℃以下优选为30-50℃；

静置4小时以上中4小时以上优选为4-8小时；

待浓缩膏温度降至50℃以下中50℃以下优选为30-50℃；

静置12小时以上中12小时以上优选为12-24小时。

本发明还提供了含上述刺五加组合物的制剂，由刺五加组合物组成，或由刺五加组合物和药学上可接受的载体或稀释剂组成。

所述制剂为注射液、冻干粉针剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂或合剂。

所述制剂为注射液，该注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.14-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.06-1.0mg/ml。

优选地，所述注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.16-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.06-1.0mg/ml。

进一步优选地，所述注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.20-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.06-1.0mg/ml。

更进一步优选，所述注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.22-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.10-1.0mg/ml。

优选地，所述注射液中含总黄酮4.5-5.5mg/ml、紫丁香苷0.35-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.17-1.0mg/ml。

优选地，所述注射液中含总黄酮2.7-3.3mg/ml、紫丁香苷0.21-1.6mg/ml和刺五加苷E 0.10-0.8mg/ml。

优选地，所述注射液中含总黄酮1.8-2.2mg/ml、紫丁香苷0.14-1.1mg/ml和刺五加苷E 0.06-0.6mg/ml。

所述注射液的包装材料为安瓿、输液瓶、注射剂瓶、输液袋或预灌封注射器等常用材料。

所述安瓿为中性硼硅玻璃安瓿、硼硅玻璃安瓿或低硼硅玻璃安瓿；

所述输液瓶为钠钙玻璃输液瓶、中性硼硅玻璃输液瓶、低密度聚乙烯输液瓶、聚丙烯输液瓶、钠钙玻璃输液瓶或硼硅玻璃输液瓶；

所述注射剂瓶为高硼硅玻璃管制注射剂瓶、中性硼硅玻璃管制注射剂瓶、中性硼硅玻璃模制注射剂瓶、硼硅玻璃管制注射剂瓶、低硼硅玻璃管制注射剂瓶、钠钙玻璃模制注射剂瓶、硼硅玻璃模制注射剂瓶、低硼硅玻璃模制注射剂瓶或钠钙玻璃管制注射剂瓶；

所述输液袋为三层共挤输液用袋、五层共挤输液用袋或多层共挤输液用袋。

所述药学上可接受的载体或稀释剂是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、润湿剂、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。

所述填充剂选自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素或葡萄糖等；

所述粘合剂选自纤维素衍生物、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮等；

所述崩解剂选自微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素或交联羧甲基纤维素钠；

所述润滑剂选自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸钙、碳酸氢钠、微粉硅胶、滑石粉或硬脂酸镁；

所述助悬剂选自微粉硅胶、蜂蜡、纤维素、固态聚乙二醇；

所述润湿剂选自甘油、吐温-80、乙氧基氢化蓖麻油或卵磷脂；

所述溶剂选自乙醇、液态聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、调和油等；

所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)等；

所述甜味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、柠檬酸或糖精钠。

本发明还提供了上述注射液的制备方法、含量检测方法和指纹图谱检查。

本发明提供的制备方法包括以下步骤：

1)取含有总黄酮50-120mg/g，紫丁香苷12.5-30mg/g，刺五加苷E4-15mg/g的刺五加组合物，加注射用水调整为每1ml含总黄酮10-20mg，用10％盐酸调节pH值至4.0-5.5，搅拌均匀，经115-120℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏24小时以上，滤过，滤液再经115-120℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏24小时以上。

2)取上述溶液，滤过，加入0.2-0.3％的活性炭，煮沸20分钟，冷却至60℃以下，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至5.5-6.5，测定总黄酮的含量，加注射用水至全量，滤过，灌封，116℃灭菌40分钟，即得。

本发明提供的含量检测方法为：

1)总黄酮

以芦丁为对照品，照分光光度法在波长510nm处测定吸收度，计算含量。

2)紫丁香苷和刺五加苷E

采用超高效液相色谱法，应用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)色谱柱，柱温为40℃，流速为每分钟0.3ml，检测波长为220nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于30000，刺五加苷E峰的分离度应达到1.5，梯度洗脱程序如下：0分钟时，流动相为5％的乙腈和95％的体积比为0.1％的磷酸溶液；3.2分钟时，流动相为9.2％的乙腈和90.8％的体积比为0.1％的磷酸溶液；10.0分钟时，流动相为22％的乙腈和78％的体积比为0.1％的磷酸溶液；12.0分钟时，流动相为100％的乙腈；15.0分钟时，流动相为5％的乙腈和95％的体积比为0.1％的磷酸溶液。

本发明提供的指纹图谱检测方法为：

采用高效液相色谱法，应用Agilent的Zorbox Eclipse XDB-C18(250×4.6mm，5μ)色谱柱，柱温为20℃，流速为每分钟0.8ml，检测波长为270nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于6000，且与附图1中11、13号峰的分离度应达到1.5以上，梯度洗脱程序如下：流动相A为0.5％的甲酸溶液，流动相B为乙腈和水，其体积比为30∶70，0分钟时为100％的流动相A；15分钟时为88％的流动相A和12％的流动相B；21分钟时为82％的流动相A和18％的流动相B；60分钟时为31％的流动相A和69％的流动相B；65分钟时为100％的流动相B；70-75分钟时为100％的流动相A。

本发明还提供了上述刺五加组合物或其制剂在制备治疗内分泌系统疾病、心脑血管系统疾病、神经系统疾病、生殖系统疾病的药物中的应用。

所述内分泌系统疾病为更年期综合症或糖尿病，所述心脑血管系统疾病为短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、脑血栓形成、脑栓塞、冠心病、心绞痛或高脂血症，所述神经系统疾病为神经衰弱，所述生殖系统疾病为男性不育症。

本发明提供的刺五加组合物、注射液及其检测方法具有以下优点：

1、提取方法：与专利申请201010165556.8(简称2010年专利)相比，本发明提供的提取物的制备方法具有以下区别：

1)2010年专利中水提后醇沉，然后用石灰乳、硫酸调节pH值，本发明的方法是将刺五加水提后，直接用石灰乳、硫酸调pH值。醇沉虽能去除部分杂质，但在除杂的同时，也包裹了部分有效成分，被一并去除，本发明取消了醇沉步骤，降低了有效成分的损失。

2)煎煮时间不同，2010年专利每次煎煮时间为30-60分钟，本发明的煎煮时间为2-3小时。煎煮时间充足，有效成分尤其是刺五加苷E可充分溶解于水溶液中，提取收率可提高15％左右。

2、组合物：本发明提供的组合物与2010年专利提供的提取物相比，具有有效成分含量高，尤其是刺五加苷E含量高，杂质少的优点。

3、注射液

1)注射液的制备方法：与07年(200710117640.0)、2010年(201010165556.8)专利相比，本发明提供的注射液的制备方法具有以下区别：

①2010年专利提取物用注射用水稀释后直接进行灭菌，而本发明在灭菌前先调pH值至4.0-5.5，避免灭菌过程溶液pH值下降，导致含量下降。

②2010年专利热处理冷藏、活性炭处理、再进行热处理冷藏，本发明连续进行2次热处理冷藏后再进行活性炭处理。热处理冷藏主要是为了去除粘液质等杂质，连续2次热处理冷藏可彻底去除杂质，活性炭处理主要是为了脱色。2010年专利在活性炭处理前仅进行1次热处理冷藏，不能保证粘液质等杂质彻底去除，在加活性炭过程中，容易使有效成分被杂质包裹一同除掉，导致有效成分损失增加。

③溶液灌装后的灭菌温度不同，07年专利及2010年专利均为115℃30分钟，本发明为116℃40分钟，灭菌效果更优，产品质量更稳定。

2)注射液：本发明提供的注射液与2010年专利提供的注射液相比，具有有效成分含量高，尤其是刺五加苷E含量高，杂质少，溶液颜色浅，质量稳定，应用安全等优点。

4、含量检测方法：

本发明提供的紫丁香苷和刺五加苷E含量检测方法为超高效液相色谱法，具有分离度好、速度快、灵敏度高等优点。分离度为普通方法的3倍，检测时间由50分钟缩短为15分钟。

5、在药效方面，本发明提供的组合物及注射液在降血糖、降血脂、男性不育症方面确有疗效，效果优于现有技术。

附图说明

图1：刺五加对照指纹图谱。

图中：共确定14个共有峰，基本上应在60分钟内洗脱完全。其中12号峰为紫丁香苷峰，为本指纹谱的参照峰。2、3、4、6、7、8、9、13、14号峰为刺五加药材的共有峰，5、10号峰为刺五加注射液生产过程中转化而成的物质，5号峰为5-羟甲基糠醛。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：刺五加组合物

1、提取方法：

1)取刺五加2000g，粉碎，加纯化水煎煮2次，第一次加入6倍量纯化水浸泡30分钟后，煮沸3小时，第二次加入6倍量纯化水煮沸2小时，滤过；

2)待滤液温度降到50℃时，用20％石灰乳调节pH值至11.0，充分搅拌；再用20％硫酸调节pH值至5.5，充分搅拌，静置4小时，滤取上清液，浓缩成在80℃测定相对密度为1.14的浓缩膏；

3)待浓缩膏温度降至50℃时，缓缓加入乙醇使含醇量达85％，充分搅拌，静置12小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.15，即得(收率为8.86％)。

2、组合物的含量测定方法及结果：

1)测定方法：

①总黄酮

对照品溶液的制备：精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品20mg，置100ml量瓶中，加60％乙醇适量，置80℃水浴中加热，使溶解，放冷，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含无水芦丁0.1mg)。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分别置10ml量瓶中，加5％亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，再加10％硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，再加氢氧化钠溶液(1mol/L)4ml，用30％乙醇稀释至刻度，放置10分钟，照分光光度法(中国药典2010年版一部附录附录V A)，在510nm波长处测定吸收度，同时作空白，以吸收度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定法：取本品，用30％乙醇制成每1ml约含总黄酮0.3mg的溶液，作为供试品溶液，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加5％亚硝酸钠溶液0.3ml”起，依法测定吸收度，计算，即得。

②紫丁香苷和刺五加苷E

照高效液相色谱法(中国药典2010版附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：在超高效液相色谱(UPLC)上分析；应用ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×100mm，1.7μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液(V/V)为流动相B，按下表(表2)中的规定进行梯度洗脱；柱温为40℃；流速为每分钟0.3ml；检测波长为220nm。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于30000；刺五加苷E峰的分离度应达到1.5。

表2：梯度洗脱

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0-3.2	5→9.2	95→90.8

3.2-10.0	9.2→22	90.8→78
			10.0-12.0	100	0
12.0-15.0	5	95

对照品溶液的制备：取紫丁香苷对照品、刺五加苷E对照品适量，精密称定，分别加50％甲醇制成每1ml各含紫丁香苷40μg、刺五加苷E20μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品适量，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2)检测结果：组合物中含总黄酮120mg/g、紫丁香苷30mg/g和刺五加苷E15mg/g。

3、指纹图谱检查

照高效液相色谱法(2010年版中国药典一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为Agilent的Zorbox EclipseXDB-C18 250×4.6mm 5μ液相色谱柱；流动相A：0.5％甲酸溶液，流动相B：乙腈-水(30∶70)，梯度洗脱，时间程序见下表(表3)；检测波长为270nm；柱温20℃；流速0.8ml/min。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于6000，且与其相邻色谱峰的分离度应达到1.5以上。

表3：梯度洗脱程序

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0	100	0
15	88	12
			21	82	18
60	31	69
			65	0	100
70	100	0
			75	100	0

参照物溶液的制备：取紫丁香苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.0mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：取本品用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得。

测定法：精密吸取供试品溶液、参照物溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，测定。供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，与对照品指纹图谱(即附图1)比较，计算相似度，即得。

指纹图谱检查结果：供试品溶液的色谱图具有刺五加对照指纹图谱(附图1)中的全部14个共有峰，且顺序一致，相似度为0.95。

实施例2：刺五加组合物

1、提取方法：

1)取刺五加2000g，粉碎，加纯化水煎煮2次，第一次加入7倍量纯化水浸泡30分钟后，煮沸3小时，第二次加入5倍量纯化水煮沸2小时，滤过；

2)待滤液温度降到30℃时，用20％石灰乳调节pH值至12.0，充分搅拌；再用20％硫酸调节pH值至5.0，充分搅拌，静置6小时，滤取上清液，浓缩成在80℃测定相对密度为1.10的浓缩膏；

3)待浓缩膏温度降至30℃时，缓缓加入乙醇使含醇量达83％，充分搅拌，静置16小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.20，即得(收率为8.41％)。

2、组合物的含量检测方法及结果：方法同实施例1，结果为：组合物中含总黄酮100mg/g、紫丁香苷20mg/g和刺五加苷E10mg/g。

3、指纹图谱检查：

检查方法同实施例1，结果为供试品溶液的色谱图具有刺五加对照指纹图谱(附图1)中的全部14个共有峰，且顺序一致，相似度为0.93。

实施例3：刺五加组合物

1、提取方法：

1)取刺五加2000g，粉碎，加纯化水煎煮3次，第一次加入5倍量纯化水浸泡30分钟后，煮沸2小时，第二次加入5倍量纯化水煮沸2小时，第三次加入4倍量纯化水煮沸2小时，滤过；

2)待滤液温度降到40℃时，用20％石灰乳调节pH值至10.0，充分搅拌；再用20％硫酸调节pH值至6.0，充分搅拌，静置8小时，滤取上清液，浓缩成在80℃测定相对密度为1.20的浓缩膏；

3)待浓缩膏温度降至40℃时，缓缓加入乙醇使含醇量达84％，充分搅拌，静置14小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.16，即得(收率为8.66％)。

2、组合物的含量检测方法及结果：方法同实施例1，结果为：组合物中含总黄酮80mg/g、紫丁香苷12.5mg/g和刺五加苷E6mg/g。

3、指纹图谱检查：

检查方法同实施例1，结果为供试品溶液的色谱图具有刺五加对照指纹图谱(附图1)中的全部14个共有峰，且顺序一致，相似度为0.90。

实施例4：刺五加组合物

1、提取方法：

1)取刺五加2000g，粉碎，加纯化水煎煮2次，第一次加入8倍量纯化水浸泡30分钟后，煮沸2小时，第二次加入4倍量纯化水煮沸2小时，滤过；

2)待滤液温度降到50℃时，用20％石灰乳调节pH值至11.2，充分搅拌；再用20％硫酸调节pH值至5.6，充分搅拌，静置4小时，滤取上清液，浓缩成在80℃测定相对密度为1.13的浓缩膏；

3)待浓缩膏温度降至50℃时，缓缓加入乙醇使含醇量达85％，充分搅拌，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.18，即得(收率为8.35％)。

2、组合物的含量检测方法及结果：方法同实施例1，结果为：组合物中含总黄酮60mg/g、紫丁香苷15mg/g和刺五加苷E8mg/g。

3、指纹图谱检查：

检查方法同实施例1，结果为供试品溶液的色谱图具有刺五加对照指纹图谱(附图1)中的全部14个共有峰，且顺序一致，相似度为0.92。

实施例5：含刺五加组合物的小容量注射液(规格为：20ml/支)

1、制备方法

1)取实施例1的刺五加组合物，加注射用水溶解并稀释至每1ml含总黄酮20mg，用10％盐酸调节pH值至5.0，充分搅拌，经115℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏24小时，滤过，滤液再经115℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏24小时。

2)取上述溶液，滤过，加入0.2％的活性炭，煮沸20分钟，冷却至60℃以下，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至6.0，测定总黄酮的含量，加注射用水至全量，滤过，每支装20ml，密封，116℃灭菌40分钟，即得。

2、注射液的含量检测方法及结果

方法同实施例1，结果为：注射液中含总黄酮5.4mg/ml、紫丁香苷1.35mg/ml和刺五加苷E0.68mg/ml。

3、指纹图谱检查

检查方法同实施例1，结果为供试品溶液的色谱图具有刺五加对照指纹图谱(附图1)中的全部14个共有峰，且顺序一致，相似度为0.97。

实施例6：含刺五加组合物的小容量注射液(规格为：20ml/支)

1、制备方法

1)取实施例2的刺五加组合物，加注射用水溶解并稀释至每1ml含总黄酮10mg，用10％盐酸调节pH值至5.5，充分搅拌，经120℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏30小时，滤过，滤液再经120℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏24小时。

2)取上述溶液，滤过，加入0.3％的活性炭，煮沸20分钟，冷却至60℃以下，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至6.5，测定总黄酮的含量，加注射用水至全量，滤过，每支装20ml，密封，116℃灭菌40分钟，即得。

2、注射液的含量检测方法及结果：

方法同实施例1，结果为：注射液中含总黄酮5.0mg/ml、紫丁香苷1.08mg/ml和刺五加苷E0.44mg/ml。

3、指纹图谱检查

检查方法同实施例1，结果为供试品溶液的色谱图具有刺五加对照指纹图谱(附图1)中的全部14个共有峰，且顺序一致，相似度为0.95。

实施例7：含刺五加组合物的小容量注射液(规格为：20ml/支)

1、制备方法

1)取实施例3的刺五加组合物，加注射用水溶解并稀释至每1ml含总黄酮20mg，用10％盐酸调节pH值至4.0，充分搅拌，经116℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏28小时，滤过，滤液再经116℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏28小时。

2)取上述溶液，滤过，加入0.2％的活性炭，煮沸20分钟，冷却至60℃以下，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至5.5，测定总黄酮的含量，加注射用水至全量，滤过，每支装20ml，密封，116℃灭菌40分钟，即得。

2、注射液的含量检测方法及结果：

方法同实施例1，结果为：注射液中含总黄酮4.8mg/ml、紫丁香苷0.63mg/ml和刺五加苷E 0.37mg/ml。

3、指纹图谱检查

检查方法同实施例1，结果为供试品溶液的色谱图具有刺五加对照指纹图谱(附图1)中的全部14个共有峰，且顺序一致，相似度为0.96。

实施例8：含刺五加组合物的小容量注射液(规格为：20ml/支)

1、制备方法

1)取实施例4的刺五加组合物，加注射用水溶解并稀释至每1ml含总黄酮10mg，用10％盐酸调节pH值至4.7，充分搅拌，经118℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏26小时，滤过，滤液再经118℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏30小时。

2)取上述溶液，滤过，加入0.3％的活性炭，煮沸20分钟，冷却至60℃以下，滤过，滤液用20％氢氧化钠溶液调节pH值至5.8，测定总黄酮的含量，加注射用水至全量，滤过，每支装20ml，密封，116℃灭菌40分钟，即得。

2、注射液的含量检测方法及结果

方法同实施例1，结果为：注射液中含总黄酮4.5mg/ml、紫丁香苷1.13mg/ml和刺五加苷E 0.60mg/ml。

3、指纹图谱检查

实施例9：含刺五加组合物的大容量注射液(规格为：100ml/瓶)

1、制备方法

取实施例1的刺五加组合物，按实施例5方法制备，灌封时每瓶装100ml，116℃灭菌40分钟，即得。

2、注射液的含量检测方法及结果

方法同实施例1，结果为：注射液中含总黄酮3.0mg/ml、紫丁香苷0.72mg/ml和刺五加苷E 0.26mg/ml。

3、指纹图谱检查

实施例10：含刺五加组合物的大容量注射液(规格为：250ml/瓶)

1、制备方法

取实施例3的刺五加组合物，按实施例7方法制备，灌封时每瓶装250ml，116℃灭菌40分钟，即得。

2、注射液的含量检测方法及结果

方法同实施例1，结果为：注射液中含总黄酮2.0mg/ml、紫丁香苷0.22mg/ml和刺五加苷E 0.10mg/ml。

3、指纹图谱检查

对比例1：参考中国专利申请200710117640.0年专利的实施例5

1、提取方法：取刺五加杆，切成1-3cm的碎片，煎煮2次，第一次加4倍量水煎煮40分钟；第二次加8倍量的水煎煮60分钟，合并煎液，浓缩至相对密度1.08(80℃测)，待温度降低至40℃时，加入乙醇使其含醇量达到75％，搅拌均匀后静置18小时，过滤，残渣加乙醇使含醇量达到85％，静置12小时，过滤，残渣离心过滤，收集滤液，回收乙醇至无醇味，得浓浸膏，补加纯化水至浓浸膏18倍体积，搅拌均匀，待温度将至50℃以下，加10％新鲜石灰乳，调pH值至12.00，搅拌均匀后，再用10％硫酸调节pH值至6.5，继续搅拌10分钟后，冷却至室温，静置6小时，抽取上清液过滤，减压浓缩至相对密度1.17(80℃)，待温度降至40℃以下时，缓慢加入乙醇使含醇量达82％，沉淀36小时，取上清液过滤，残渣离心过滤，回收乙醇至无醇味，并浓缩至相对密度1.08(80℃)，加入注射用水稀释至5g(生药)/ml，115℃灭菌40分钟，与-15℃下冷冻16小时，缓化，冷藏10天，药液经0.45μm滤膜过滤，浓缩减压干燥即得刺五加提取物(收率为6.72％)。

2、注射液制备方法：

取刺五加提取物，加注射用水使溶解，用40％的NaOH溶液调pH值至5.5，搅拌均匀后加热，加入0.2％的活性炭，煮沸吸附15分钟，冷却至50℃以下用40％的NaOH溶液调pH值至5.7，补加新鲜注射用水至含生药5g/ml。经0.45μm滤膜过滤至澄清，灌装，115℃高压灭菌40分钟。冷冻，缓化后冷藏20天，常温放置3.5个月。0.65μm滤芯过滤，加注射用水至含生药5g/ml，调pH值至5.0，加入活性炭脱色，过滤，调pH值至5.0，补加注射用水至含生药5g/ml，分别经0.45μm、0.22μm滤芯精滤，灌封，115℃30分钟灭菌，即得。

3、提取物及注射液的含量测定方法及结果：检测方法同实施例1，结果：

提取物中含总黄酮46.2mg/g、紫丁香苷10.96mg/g和刺五加苷E0.56mg/g；

注射液中含总黄酮4.9mg/ml、紫丁香苷1.28mg/ml和刺五加苷E 0.04mg/ml。

对比例2：中国专利申请201010165556.8的实施例5

1、提取方法：取刺五加杆切成碎片，加水煎煮3次，第一次加5倍量水，煎煮30分钟；第二次加6倍量水，煎煮40分钟，第三次加4倍量的水，煎煮30分钟，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.11(80℃)，加入乙醇至含醇量75％，静置滤过，回收乙醇后加水稀释至生药重量的4倍，用重量百分比为20％的石灰乳调pH值至11.0，再用重量百分比为20％的硫酸将pH值调至5.1，静置过滤，浓缩至80℃时相对密度为1.13，再次加入乙醇使含醇量达84％，静置过滤，离心分离杂质，药液回收乙醇后浓缩干燥，即得刺五加提取物(收率为7.23％)。

2、注射液：取刺五加提取物100g，加入注射用水稀释，100-120℃热处理，过滤，0-4℃冷藏处理，过滤，调节pH值至5.5，活性炭处理，过滤，灭菌，冷藏处理，超滤，灌装，灭菌即得。

3、含量测定：检测方法同实施例1，结果：

提取物中含总黄酮44.5mg/g、紫丁香苷6.02mg/g和刺五加苷E0.46mg/g；

注射液中含总黄酮5.1mg/ml、紫丁香苷0.55mg/ml和刺五加苷E0.03mg/ml。

实验例1：含量的测定

1、对实施例1-4的刺五加组合物，对比例1、2的提取物进行含量测定，方法同实施例1，结果见表4：

表4：含量检测结果

	收率(％)	总黄酮(mg/g)	紫丁香苷(mg/g)	刺五加苷E(mg/g)
					实施例1	8.86	120	30	15
实施例2	8.41	100	20	10
					实施例3	8.66	80	12.5	6
实施例4	8.35	60	15	8
					对比例1	6.72	46.2	10.96	0.56
对比例2	7.23	44.5	6.02	0.46

表4结果显示：与对比例1、2相比，本发明提供的刺五加组合物中的总黄酮、紫丁香苷、刺五加苷E的含量及收率均增加。

2、对实施例5-10的含刺五加组合物的注射液、对比例1、2的注射液进行含量测定，方法同实施例1，结果见表5：

表5：含量检测结果

	总黄酮(mg/ml)	紫丁香苷(mg/ml)	刺五加苷E(mg/ml)
				实施例5	5.4	1.35	0.68
实施例6	5.0	1.08	0.44
				实施例7	4.8	0.63	0.37
实施例8	4.5	1.13	0.60
				实施例9	3.0	0.72	0.26
实施例10	2.0	0.22	0.10
				对比例1	4.9	1.28	0.04
对比例2	5.1	0.55	0.03

表5结果显示：与对比例1、2相比，本发明提供的注射液中刺五加苷E的含量较高。

为了进一步验证本发明的刺五加组合物和制剂的药效，进行了如下药效实验：

实验例2：对四氧嘧啶所致小鼠血糖升高的影响

1、实验动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄各半。

2、实验试剂：四氧嘧啶，购自Sigma公司。

3、实验分组：空白对照组、模型组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、对比例1组、对比例2组。

4、实验方法

4.1模型制备

将四氧嘧啶用生理盐水配成2％水溶液(现用现配)。

取昆明种小鼠，雌雄各半，按四氧嘧啶溶液50mg/kg的剂量，对禁食12小时后的小鼠进行尾静脉注射。连续饲养3天后，禁食12小时，眼眶采血，分离血清，测定空腹血糖，以血糖大于14mmol/l作为糖尿病模型小鼠。

4.2分组给药

取糖尿病模型小鼠70只，雌雄各半，随机分为7组，每组10只，分别为实施例1-4组、对比例1、2组和模型组；另取重量相近正常昆明种小鼠10，雌雄各半，作为空白对照组。实施例1-4组、对比例1、2组分别灌胃给予实施例1-4的刺五加组合物、对比例1、2的提取物，剂量均为1.0g生药量/kg，模型组和空白对照组分别按照15ml/kg体重灌胃给予同体积的生理盐水。连续灌胃15天，每天观察小鼠外貌特征的改变。

试验结束后对试验动物禁食12小时，眼眶静脉丛采血，测定空腹血糖。

5、统计学处理：进行组间t检验。

6、实验结果：

6.1一般观察：在试验结束后，四氧嘧啶模型组动物有明显多饮、多尿、体型消瘦、毛发失去光泽、蜷卧弓背没精神等现象。而空白对照组动物精神状况良好，毛发光泽，生长发育正常。实施例1-4组动物外貌特征得到显著改善，对比例1、2组动物外貌特征有所改善。

6.2血糖值的改变：见表6

表6：对四氧嘧啶所致小鼠血糖升高的影响

组别	血糖值
		空白对照组	6.45±0.64
模型组	20.12±1.28
		实施例1组	13.93±0.95^##※☆
实施例2组	14.22±0.80^##※☆
		实施例3组	14.61±0.69^##※☆
实施例4组	14.09±0.54^##※☆
		对比例1组	17.86±0.73^#
对比例2组	18.01±0.88^#

注：与模型组相比，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与对比例1组相比，^※P＜0.05；与对比例2组相比，^☆P＜0.05。

表6结果显示：实施例1-4组血糖浓度与四氧嘧啶模型组比较有极显著差异(p＜0.01)，对比例1、2组与四氧嘧啶模型组比较有显著差异(p＜0.05)。实施例1-4组血糖浓度与对比例1、2组比较有显著性差异(p＜0.05)。

结果表明，本发明制备的刺五加组合物具有显著的降糖作用，效果优于200710117640.0产品和201010165556.8产品。

实验例3：对高脂血症的影响

1、基本资料

入选患者120例，清晨空腹血脂符合下列标准之一：甘油三酯(TG)≥1.70mmol/L；总胆固醇(TC)≥5.20mmol/L。有严重内分泌、肝肾疾病及家族性纯合子高胆固醇血症，近3个月内发生过心脑血管病，难以控制的高血压患者除外。120例患者中，男59例，女61例，年龄45-77岁，平均年龄58岁。高TC血症20例，高TG血症35例，混合型高脂血症65例。低密度脂蛋白(LDL-C)≥3.60mmol/L者90例，高密度脂蛋白(HDL-C)≤1.00mmol/L者30例。

2、方法

2.1治疗方法：入选病例常规低脂膳食，随机分为3组，观察组40例，男18例，女22例；对照1组40例，男21例，女19例；对照2组40例，男20例，女20例。观察组用实施例6样品，对照1组用对比例1的刺五加注射液，对照2组用对比例2的刺五加注射液，分别取100ml，加入到5％葡萄糖注射液250ml中，静脉滴注，每天1次，连续10天为一个疗程，停药5天后再用下一个疗程，连续使用三个疗程。

2.2血脂测定：试验结束后测定血脂水平。取血前1晚禁止饮酒及高脂饮食，空腹12小时以上取静脉血，及时分离血清。

2.3疗效评定标准：按卫生部1998年颁发的心血管药物临床研究指导原则进行判定。

治疗后与治疗前比较：

显效：TC下降≥20％，TG下降≥20％，HDL-C上升≥0.26mmol/L，TC-HDL-C/HDL-C下降≥20％；

有效：TC下降达10％-20％，TG下降达20％-40％，HDL-C上升达0.18-0.26mmol/L，TC-HDL-C/HDL-C下降10％-20％；

未达到有效标准为无效；

恶化：TC上升≥10％，TG上升≥10％，HDL-C下降0.18mmol/L，TC-HDL-C/HDL-C升高≥10％。

3、统计方法：均采用SPSS11.0统计软件处理。

4、结果：见表7

表7：治疗前后血脂变化情况

注：与治疗前相比，^**P＜0.01；与对照组相比，^☆P＜0.05。

表7结果显示：与治疗前相比，观察组的总胆固醇、低密度脂蛋白、TC-HDL-C/HDL-C的含量显著减少(P＜0.01)，甘油三酯含量明显减少(P＜0.05)，高密度脂蛋白的含量明显增加(P＜0.05)，对照1、2组的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量明显减少(P＜0.05)；与对照1、2组相比，观察组的总胆固醇、低密度脂蛋白和TC-HDL-C/HDL-C的含量明显减少(p＜0.05)。

观察组对TC、TG、HDL-C治疗的总有效率为90.1％，对照1组的总有效率为86.7％，对照2组的总有效率为85.6％。

同样对其他实施例进行实验，结果也与上述结果类似。

说明：本发明的刺五加组合物及其制剂可以明显的降低血脂，效果优于200710117640.0产品和201010165556.8产品。

实验例4：对小鼠睾丸的作用

1、实验动物：昆明种小鼠，体重18-22g，雄性。

2、实验分组：空白对照组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、对比例1组、对比例2组。

3、试验方法：实施例1-4组给予实施例5-8的含刺五加组合物的制剂样品，对比例1、2组分别给予对比例1、2注射液，各组给药剂量均为0.2ml。空白对照组给予等体积的生理盐水。每日腹腔注射一次，连续给药30天，于末次给药次日经颈椎脱臼处死小鼠，称体重，剖取双侧睾丸并称重，随机将每组动物左侧或右侧睾丸作常规石蜡切片，H.E染色后作镜检观察。

4、统计学处理

进行组间t检验。

5、结果

5.1对体重及睾丸重量的影响：见表8。

表8：对体重及睾丸重量的影响

注：实验后与实验前相比，^#P＜0.05；与空白对照组相比，^※P＜0.05，^☆P＜0.01。

表8结果显示，空白对照组小鼠体重实验后比实验前增加了20.4％，实施例1-4组和对比例1、2组小鼠体重实验后比实验前分别平均增加了34.6％和33.6％。对比例1、2组和实施例1-4组与空白对照组比较，体重增加明显，但无显著性差异。

对比例1、2组小鼠睾丸重量平均增加了18.2％，与空白对照组比较有显著性差异(p＜0.05)，实施例1-4组小鼠睾丸重量平均增加了30.7％，与空白对照组比较有极显著性差异(p＜0.01)。

5.2对小鼠睾丸曲细精管直径的影响：见表9。

表9：对小鼠睾丸曲细精管直径的影响

组别

曲细精管直径

空白对照组	88.6±5.4
		实施例1组	110.2±6.3^**
实施例2组	109.8±5.7^**
		实施例3组	110.0±6.5^**
实施例4组	108.5±7.0^**
		对比例1组	104.2±6.1^*
对比例2组	104.5±6.8^*

注：与空白对照组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

表9结果显示，对比例1、2组和实施例1-4组小鼠睾丸曲细精管直径与空白对照组比较，也有明显增加，对比例1、2组平均增加17.6％，具有显著性差异(p＜0.05)，实施例1-4组平均增加23.8％，具有极显著性差异(p＜0.01)。

5.3组织学观察：光镜下观察小鼠睾丸切片，各组曲细精管的组织结构均正常，均有正常精子产生。实施例1-4组的曲细精管比对照组更粗，管壁生精细胞的层数更多。

结果证实：本发明提供的刺五加组合物及其制剂可以治疗男性不育症，效果优于200710117640.0产品和201010165556.8产品。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims

1.一种刺五加组合物，其特征在于，每克该组合物中含有总黄酮50-120毫克、紫丁香苷12.5-30毫克和刺五加苷E 4-15毫克。

2.根据权利要求1所述的刺五加组合物，其特征在于，每克该组合物中含有总黄酮60-120毫克、紫丁香苷15-30毫克和刺五加苷E 6-15毫克。

3.一种制备权利要求1或2所述的刺五加组合物的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)称取刺五加，粉碎，加水浸泡30分钟后煎煮2-3次，每次加入4-8倍量水，煎煮2-3小时，滤过；

2)待滤液温度降到50℃以下时，用20％石灰乳调节pH值至10.0-12.0，搅拌均匀；再用20％硫酸调节pH值至5.0-6.0，搅拌均匀，静置4小时以上，滤取上清液，浓缩成在80℃测定相对密度为1.10-1.20的浓缩膏；

3)待浓缩膏温度降至50℃以下时，边搅拌边加入乙醇使含醇量达83-85％，搅拌均匀，静置12小时以上，滤过，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩至在80℃测定相对密度为1.15-1.20，即得。

4.含权利要求1或2所述的刺五加组合物的制剂，其特征在于，所述制剂由刺五加组合物组成，或由刺五加组合物和药学上可接受的载体或稀释剂组成。

5.根据权利要求4所述的制剂，其特征在于，所述制剂为注射液、冻干粉针剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、糖浆剂或合剂。

6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，所述制剂为注射液，该注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.14-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.06-1.0mg/ml。

7.根据权利要求6所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.16-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.06-1.0mg/ml。

8.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮4.5-5.5mg/ml、紫丁香苷0.35-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.17-1.0mg/ml。

9.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮2.7-3.3mg/ml、紫丁香苷0.21-1.6mg/ml和刺五加苷E 0.10-0.8mg/ml。

10.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮1.8-2.2mg/ml、紫丁香苷0.14-1.1mg/ml和刺五加苷E 0.06-0.6mg/ml。

11.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.20-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.06-1.0mg/ml。

12.根据权利要求7所述的制剂，其特征在于，所述注射液中含总黄酮1.8-6.5mg/ml、紫丁香苷0.22-2.2mg/ml和刺五加苷E 0.10-1.0mg/ml。

13.根据权利要求6-12任一项所述的制剂，其特征在于，所述注射液的包装材料为安瓿、输液瓶、注射剂瓶、输液袋或预灌封注射器。

14.一种制备权利要求6-12任一项所述制剂的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)取刺五加组合物，加注射用水调整为每1ml含总黄酮10-20mg，用10％盐酸调节pH值至4.0-5.5，搅拌均匀，经115-120℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏24小时以上，滤过，滤液再经115-120℃高温热处理40分钟，4℃以下冷藏24小时以上；

15.一种权利要求6-12任一项所述制剂的含量检测方法，包括总黄酮、紫丁香苷和刺五加苷E含量的检测方法，其特征在于，总黄酮含量检测的方法是以芦丁为对照品，照分光光度法在波长510nm处测定吸收度，计算含量。

16.根据权利要求15所述的含量检测方法，其特征在于，紫丁香苷和刺五加苷E含量的检测方法，采用超高效液相色谱法，应用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，柱温为40℃，流速为每分钟0.3ml，检测波长为220nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于30000，刺五加苷E峰的分离度应达到1.5，梯度洗脱程序如下：0分钟时，流动相为5％的乙腈和95％的体积比为0.1％的磷酸溶液；3.2分钟时，流动相为9.2％的乙腈和90.8％的体积比为0.1％的磷酸溶液；10.0分钟时，流动相为22％的乙腈和78％的体积比为0.1％的磷酸溶液；12.0分钟时，流动相为100％的乙腈；15.0分钟时，流动相为5％的乙腈和95％的体积比为0.1％的磷酸溶液。

17.一种权利要求6-12任一项所述的制剂的定性检测方法，还包括指纹图谱的检测方法，其特征在于，该指纹图谱的检测方法采用高效液相色谱法，应用Agilent的Zorbox Eclipse XDB-C18色谱柱，柱温为20℃，流速为每分钟0.8ml，检测波长为270nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于6000，且与其相邻的色谱峰的分离度应达到1.5以上，梯度洗脱程序如下：流动相A为0.5％的甲酸溶液，流动相B为乙腈和水，其体积比为30∶70，0分钟时为100％的流动相A；15分钟时为88％的流动相A和12％的流动相B；21分钟时为82％的流动相A和18％的流动相B；60分钟时为31％的流动相A和69％的流动相B；65分钟时为100％的流动相B；70-75分钟时为100％的流动相A。

18.权利要求1或2所述的刺五加组合物或权利要求4-12任一项所述的制剂在制备治疗内分泌系统疾病、心脑血管系统疾病、神经系统疾病或生殖系统疾病的药物中的应用。

19.根据权利要求18所述的应用，其特征在于，所述内分泌系统疾病为更年期综合症或糖尿病，所述心脑血管系统疾病为短暂性脑缺血发作、脑动脉硬化、脑血栓形成、脑栓塞、冠心病、心绞痛或高脂血症，所述神经系统疾病为神经衰弱，所述生殖系统疾病为男性不育症。