CN110237110B - 一种刺五加提取液及其提取方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药用植物提取技术领域，具体涉及一种刺五加提取液及其提取方法和应用。所述刺五加提取液包括以下重量份的组分：总酚1.5‑18.0份，总糖4.0‑65.0份，总木脂素1.5‑25.0份。该发明具有工艺简单、成本低、治疗脑梗塞效果好的优点。

Description

一种刺五加提取液及其提取方法和应用

技术领域

本发明涉及药用植物提取技术领域，具体涉及一种刺五加提取液及其提取方法和应用。

背景技术

刺五加(拉丁学名：Acanthopanax senticosus(Rupr.Maxim.)Harms)，别名：坎拐棒子、老虎潦、一百针，为五加科五加属多年生落叶灌木。据我国第一部药学专著《神农本草经》记载，刺五加具有“坚筋骨、强意志、久服轻身”的作用，将其列为补气上品。

刺五加的根、茎、叶、皮、果实均可入药，干燥根和根茎或茎，具有益气健脾，补肾安神的功效。根商品名为五加参，是我国医药珍品，有益智安神、健脾补肾等功效；树皮药品名为五加皮，有祛风除湿、壮筋骨等功效。其性辛、微苦，温。刺五加注射液为刺五加经提取加工制成的灭菌水溶液，功效为平补肝肾，益精壮骨，用于治疗肝肾不足所致的短暂性脑缺血发作，脑动脉硬化，脑血栓形成，脑栓塞等，亦用于治疗冠心病，心绞痛合并神经衰弱和更年期综合症等。

刺五加的主要化学成分有酚类、多糖类、木脂素类等。刺五加酚类化合物具有抗应激，抗缺氧、抗高温、抗低温和抗毒害的作用，提高机体对环境的适应力。刺五加酚类有很强的抗肿瘤作用，对药物诱发瘤、动物移植瘤等均有明显的抑制作用，还能减轻某些抗癌药物的毒性。刺五加多糖可促诱生干扰素，对体液免疫、细胞免疫均有调节作用，刺五加多糖还有抗辐射、抗菌、抗病毒等功效。刺五加木脂素类化合物具有抗辐射、具有免疫增强、免疫刺激、免疫调节、降低血糖、抗氧化、抗炎及抗疲劳等作用，还具有降低胆固醇、抗癌、免疫调节及肝保护作用。

脑梗死旧称脑梗塞，又称缺血性脑卒中(cerebral ischemic stroke)，是指因脑部血液供应障碍，缺血、缺氧所导致的局限性脑组织的缺血性坏死或软化，是一种严峻的具有发病率高、复发率高、病残率高、死亡率高、并发症多的慢性缺血性脑血管疾病。脑梗死的临床常见类型有脑血栓形成、腔隙性梗死和脑栓塞等，脑梗死占全部脑卒中的80％。与其关系密切的疾病有：糖尿病、肥胖、高血压、风湿性心脏病、心律失常、各种原因的脱水、各种动脉炎、休克、血压下降过快过大等。临床表现以猝然昏倒、不省人事、半身不遂、言语障碍、智力障碍为主要特征。脑梗死不仅给人类健康和生命造成极大威胁，而且给患者、家庭及社会带来极大的痛苦和沉重的负担。

刺五加作为一种中药用作口服、外用已有许多年，但这些使用方法使得有效物质进入心血管病的比例甚少，因而大大减弱了它在心血管治疗方面的效用。包括刺五加注射液在内的中药注射剂，作为现代科学技术发展而产生的中药新剂型，克服了传统中药生物利用度低、起效慢等缺点，逐渐受到广大患者的青睐。

中国专利申请CN201811368632.8公开了一种刺五加注射用粉针剂生产方法，包括以下步骤：a将刺五加茎、叶、根，加3-6倍量水煎煮2-5次，每次2小时；b减压浓缩至1:1.5-3；c加95％乙醇使含醇量达75％以上；d将液体减压蒸馏至无醇味，得原生药；e加新鲜无热源注射水，到与原生药1:1；f在110-120℃，热压灭菌30-50分钟；g在0-4℃冷藏20-30小时； h用大孔吸附树脂吸附脱色；i将吸附物用乙醇洗脱，再蒸去乙醇；j将蒸余物加水溶解；k 用乙酸乙酯萃取，蒸干；l将蒸余物加水溶解，并入脱色液，得刺五加提取物；m浓缩；h喷粉。该专利中刺五加注射用粉针剂降低了保藏条件，用作输液治疗，使缺血性心脑血管疾病有效率达94％以上，但是刺五加提取物的提取工艺比较复杂，成本较高，刺五加注射用粉针剂用于治疗心血管疾病的效果有待进一步提高。

中国专利申请CN200710117640.0公开了一种制备刺五加提取液/物的方法，其包括以下步骤：1)采用水提醇沉法制备剌五加药物浸膏；2)将浸膏加水稀释，用石灰乳调节pH至 10.00-12.00，搅拌均匀后用硫酸调节pH至4.5-6.5，静置，抽取上清液过滤，浓缩，醇沉；3) 冷藏静置除杂得刺五加提取液；或浓缩减压干燥得剌五加提取物。中国专利申请CN201010165556.8提供了一种刺五加提取物及其药物组合物，该刺五加提取物是将刺五加经水提醇沉、石灰乳调pH至10.0-12.0，静置4小时以上、硫酸调pH至5.0-6.0、再次醇沉后获得。两项专利均有较好的除杂效果，但是两项专利均多次采用醇提，工艺复杂，成本较高，制得的注射液的治疗效果也有待进一步提高。

因此，开发一种能解决上述技术问题的刺五加提取液及其提取方法，并将刺五加注射液应用于治疗脑梗提高治疗效果是非常必要的。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种工艺简单、成本低、治疗脑梗塞效果好的刺五加提取液及其提取方法和应用。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种刺五加提取液，所述提取液包括以下重量份的组分：总酚1.5-18.0份，总糖4.0-65.0 份，总木脂素1.5-25.0份。

优选地，所述提取液包括以下重量份的组分：总酚1.8-15.0份，总糖5.0-45.0份，总木脂素2.0-15.0份。

本发明还涉及上述刺五加提取液的提取方法，包括如下步骤：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎，加水煎煮，超声和微波联合辅助提取，过滤，得滤液A；

(2)调节滤液A的pH值至碱性，搅拌，继续调节滤液A的pH值至酸性，搅拌，静置，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩，加入乙醇溶液，静置，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。

优选地，所述提取方法步骤(1)中，取刺五加的根和茎，粉碎至10-16目。

优选地，所述提取方法步骤(1)中，加6-10倍量的水煎煮，煎煮温度为98-100℃，煎煮时间为2-4h，超声和微波联合辅助提取，超声功率100-300w，微波功率200-400w，过滤，得滤液A。

优选地，所述提取方法步骤(2)中，调节滤液A的pH值至10-12。

更优选地，用石灰乳调节滤液A的pH值至10-12。

优选地，所述提取方法步骤(2)中，搅拌转速为40-60r/min，时间为3-6min。

优选地，所述提取方法步骤(2)中，继续调节滤液A的pH值至5-6。

更优选地，用硫酸调节滤液A的pH值至5-6。

优选地，所述提取方法步骤(2)中，搅拌转速为40-60r/min，时间为8-15min。

优选地，所述提取方法步骤(2)中，室温下静置1-2h，取上层清液，得溶液B。

优选地，所述提取方法步骤(3)中，将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.10-1.25。

优选地，所述提取方法步骤(3)中，加入体积分数为85-95％的乙醇溶液至含醇量83-85％。

优选地，所述提取方法步骤(3)中，室温下静置1-2h，过滤，得滤液C。

更优选地，所述提取方法包括如下步骤：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎至10-16目，加6-10倍量的水煎煮，煎煮温度为98-100℃，煎煮时间为2-4h，超声和微波联合辅助提取，超声功率100-300w，微波功率200-400w，过滤，得滤液A；

(2)调节滤液A的pH值至10-12，搅拌，转速为40-60r/min，时间为3-6min，继续调节滤液A的pH值至5-6，搅拌，转速为40-60r/min，时间为8-15min，室温下静置1-2h，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.10-1.25，加入体积分数为85-95％的乙醇溶液至含醇量83-85％，室温下静置1-2h，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。

本发明还涉及一种刺五加注射液，所述注射液由上述刺五加提取液和注射用水制成。

本发明还涉及一种刺五加注射液，所述注射液由上述提取方法提取得到的刺五加提取液和注射用水制成。

优选地，所述刺五加提取液和注射用水体积比为2:5-2:6。

优选地，所述注射液中各组分浓度为：总酚1.5-18.0mg/mL，总糖4.0-65.0mg/mL，总木脂素1.5-25.0mg/mL。

更优选地，所述注射液中各组分浓度为：总酚1.8-15.0mg/mL，总糖5.0-45.0mg/mL，总木脂素2.0-15.0mg/mL。

本发明还涉及上述刺五加注射液的制备方法，包括如下步骤：

S1.将刺五加提取液和注射用水混合，调节pH，加热，冷藏，过滤，得滤液1；

S2.在滤液1中加入氯化钠，搅拌，过滤，得滤液2；

S3.调节滤液2的pH值，过滤，得滤液3；

S4.将滤液3灌封、灭菌，即得。

优选地，所述步骤S1中调节pH至5.5-6.5。

优选地，所述步骤S1中加热温度98-100℃，加热时间30-60min。

优选地，所述步骤S1中冷藏温度2-10℃，冷藏时间40-60h。

优选地，所述步骤S2中氯化钠与滤液1的质量体积比为0.5-0.8g/mL。

优选地，所述步骤S2中搅拌转速为40-60r/min，时间为20-40min。

优选地，所述步骤S2中滤液2由以下步骤得到：在滤液1中加入活性炭，煮沸，室温冷却，过滤得到滤液2。

更优选地，所述步骤S2中滤液2由以下步骤得到：在滤液1中加入0.2-0.4g/mL活性炭，煮沸20-40min，室温冷却，过滤得到滤液2。

优选地，所述步骤S3中调节滤液2的pH值至4.5-6.0。

本发明还涉及上述刺五加提取液或上述提取方法提取得到的刺五加提取液的应用，所述刺五加提取液用于制备治疗脑梗塞的药物中。

本发明还涉及上述刺五加注射液或上述制备方法制备得到的刺五加注射液的应用，所述刺五加注射液用于制备治疗脑梗塞的药物中。

本发明的有益效果是：

本发明利用石灰乳调碱，使总酚类与之形成鳌合物，而刺五加中的一些有害杂质，比如绿原酸被完全水解掉，再加硫酸调酸，使总酚类成分溶于溶液中，而杂质成分沉淀，此法增加了总酚类的溶出，且能更有效地去除杂质。同时，石灰乳与硫酸的用量也降低至目前常用量的四分之一至五分之一，减少了杂质的带入，尤其是钙离子的引入。

本发明通过限定醇沉次数，水提过程中采用超声和微波联合辅助提取，以及提取过程中的含醇量和pH值，最终刺五加提取液中总酚、总糖、总木脂素类的化合物含量高，杂质少，工艺简单，成本低，污染小。

本发明水提之后没有进行醇沉，醇沉次数较少，工艺简单。

本发明利用刺五加提取液配制注射液的过程中，严格控制注射液的pH，刺五加提取液在此pH范围内可以更好地发挥作用，疗效更高。

本发明中的提取液和注射液用于治疗脑梗塞，疗效有明显提高。

附图说明

图1表示实施例4大鼠治疗前、治疗第二天和治疗第三天(从上到下)脑梗塞图片。

图2表示模型对照组治疗前、治疗第二天和治疗第三天(从上到下)脑梗塞图片。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1

刺五加提取液的制备：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎至10目，加6倍量的水煎煮，煎煮温度为98℃，煎煮时间为2h，超声和微波联合辅助提取，超声功率100w，微波功率200w，过滤，得滤液A；

(2)用石灰乳调节滤液A的pH值至10，搅拌，转速为40r/min，时间为3min，用质量分数为20％的硫酸继续调节滤液A的pH值至5，搅拌，转速为40r/min，时间为8min，室温下静置1h，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.10，加入体积分数为85％的乙醇溶液至含醇量 83％，室温下静置1-2h，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。

刺五加注射液的制备：

S1.将制备得到的刺五加提取液和注射用水混合，两者体积比为2:5，调节pH至5.5，加热温度98℃，加热时间30min，冷藏温度2℃，冷藏时间40h，过滤，得滤液1；

S2.在滤液1中加入氯化钠，氯化钠与滤液1的质量体积比为0.5g/mL，搅拌，转速为40r/min，时间为20min，过滤，得滤液2；

S3.调节滤液2的pH值至4.5，过滤，得滤液3；

S4.将滤液3灌封、灭菌，即得。

实施例2

刺五加提取液的制备：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎至16目，加10倍量的水煎煮，煎煮温度为100℃，煎煮时间为4h，超声和微波联合辅助提取，超声功率300w，微波功率400w，过滤，得滤液A；

(2)用石灰乳调节滤液A的pH值至12，搅拌，转速为60r/min，时间为6min，用质量分数为20％的硫酸继续调节滤液A的pH值至6，搅拌，转速为60r/min，时间为15min，室温下静置2h，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.25，加入体积分数为95％的乙醇溶液至含醇量 85％，室温下静置2h，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。。

刺五加注射液的制备：

S1.将制备得到的刺五加提取液和注射用水混合，两者体积比为2:6，调节pH至6.5，加热温度100℃，加热时间60min，冷藏温度10℃，冷藏时间60h，过滤，得滤液1；

S2.在滤液1中加入0.3g/mL活性炭，煮沸30min，室温冷却，过滤得到滤液2；

S3.调节滤液2的pH值至6.0，过滤，得滤液3；

S4.将滤液3灌封、灭菌，即得。

实施例3

刺五加提取液的制备：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎至12目，加8倍量的水煎煮，煎煮温度为99℃，煎煮时间为3h，超声和微波联合辅助提取，超声功率200w，微波功率300w，过滤，得滤液A；

(2)用石灰乳调节滤液A的pH值至11，搅拌，转速为50r/min，时间为4min，用质量分数为20％的硫酸继续调节滤液A的pH值至5.5，搅拌，转速为50r/min，时间为11min，室温下静置1.5h，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.18，加入体积分数为90％的乙醇溶液至含醇量 84％，室温下静置1.5h，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。

刺五加注射液的制备：

S1.将制备得到的刺五加提取液和注射用水混合，两者体积比为2:6，调节pH至6，加热温度99℃，加热时间45min，冷藏温度6℃，冷藏时间50h，过滤，得滤液1；

S2.在滤液1中加入氯化钠，氯化钠与滤液1的质量体积比为0.8g/mL，搅拌，转速为60r/min，时间为40min，过滤，得滤液2；

S3.调节滤液2的pH值至5.5，过滤，得滤液3；

S4.将滤液3灌封、灭菌，即得。

实施例4

刺五加提取液的制备：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎至14目，加8倍量的水煎煮，煎煮温度为100℃，煎煮时间为3h，超声和微波联合辅助提取，超声功率300w，微波功率200w，过滤，得滤液A；

(2)用石灰乳调节滤液A的pH值至10，搅拌，转速为50r/min，时间为5min，用质量分数为20％的硫酸继续调节滤液A的pH值至5，搅拌，转速为50r/min，时间为10min，室温下静置1.5h，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.20，加入体积分数为90％的乙醇溶液至含醇量 85％，室温下静置2h，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。

刺五加注射液的制备：

S1.将制备得到的刺五加提取液和注射用水混合，两者体积比为2:5，调节pH至6.0，加热温度98℃，加热时间40min，冷藏温度8℃，冷藏时间48h，过滤，得滤液1；

S2.在滤液1中加入氯化钠，氯化钠与滤液1的质量体积比为0.58g/mL，搅拌，转速为 50r/min，时间为30min，过滤，得滤液2；

S3.调节滤液2的pH值至5.0，过滤，得滤液3；

S4.将滤液3灌封、灭菌，即得。

测试例1

测试实施例1-4刺五加注射液中的有效成分含量。测试方法为紫外法，具体测试条件为：

总糖

对照品溶液的制备：取葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1mL中含葡萄糖0.2mg 的对照品储备溶液。精密量取对照品储备溶液1mL、2mL、3mL、4mL、4.5mL与5mL，分别置于10mL量瓶中，各加水至刻度，摇匀，即得系列浓度对照品溶液。

标准曲线的制备：各精密量取系列浓度对照品溶液1mL，分别置于10mL具塞试管中，各加6％苯酚溶液1mL，摇匀，再加入5mL的98％浓硫酸，摇匀，置沸水浴中放置20分钟，取出，置冰水浴中放置15分钟，取出，放至室温。以相应的试剂为空白(即不添加对照品溶液，其余处理步骤与上述相同)，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2015年版四部通则0401)，在485nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定方法：精密量取刺五加注射液0.5mL，加在已处理好的固相萃取柱上(以1gYMC*GEL ODS-A-HG、12nm S-50μm为填充剂的固相萃取柱，规格：6mL，内径13mm)，加6mL水冲洗，收集洗脱液至25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，得溶液①；再精密量取溶液①2mL，置于10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，得溶液②；精密量取溶液②1mL，置于 10mL具塞试管中，按照标准曲线制备项下的方法，自“各加6％苯酚溶液1mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出刺五加注射液中含葡萄糖的重量(mg)，计算刺五加注射液中总糖(以葡萄糖计)的含量(mg/mL)，即得。

总木脂素

对照品溶液的制备：取刺五加苷E对照品适量，精密称定，加水稀释制成每1mL中含刺五加苷E 0.8mg的对照品溶液，即得对照品储备液，精密量取对照品储备液0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL与3mL，分别置于10mL量瓶中，各加水至刻度，摇匀，即得系列浓度对照品溶液。

标准曲线的制备：分别精密量取系列浓度对照品溶液1mL，分别置20mL具塞试管中，各加10％变色酸溶液1mL，摇匀，再加入8mL的98％浓硫酸，摇匀，置沸水浴中放置60分钟，取出，置冰水浴中放置15分钟，取出，放至室温。以相应的试剂为空白(即不添加对照品溶液，其余处理步骤与上述相同)，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2015年版四部通则0401)，在575nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定方法：精密量取刺五加注射液0.5mL，加在已处理好的固相萃取柱(以1gYMC*GEL ODS-A-HG、12nm S-50μm为填充剂的固相萃取柱，规格：6mL，内径13mm)上，加6mL 水冲洗，弃去水洗脱液，再加甲醇8mL洗脱，收集甲醇洗脱液于10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得溶液①；精密量取溶液①1mL，置20mL具塞试管中，水浴蒸干，残渣加水1mL，照标准曲线制备项下的方法，自“加10％变色酸溶液1mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出刺五加注射液中刺五加苷E的重量(mg)，计算刺五加注射液中总木脂素(以刺五加苷E计)的含量(mg/mL)，即得。

总酚

对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加水制成每1mL 中含绿原酸0.8mg的对照品储备溶液。取对照品储备溶液适量，置棕色量瓶中，加水制成每 1mL中含绿原酸0.08mg的对照品溶液，即得。

标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.5mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分别置25mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1mL，再分别加水11.5mL、11mL、10mL、9mL、 8mL、7mL，摇匀，用29％的碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，避光放置30min，以相应试剂为空白(即不添加对照品溶液，其余处理步骤与上述相同)，照紫外-可见分光光度法(《中国药典》2015年版四部通则0401)，在760nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

测定方法：精密量取刺五加注射液0.5mL于10mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，得溶液①；精密量取2mL溶液①置25mL棕色量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液1mL”起，加水10mL，依法测定吸光度，从标准曲线上读出刺五加注射液中绿原酸的重量(mg)，计算刺五加注射液中总酚(以绿原酸计)的含量(mg/mL)，即得。

表1测试刺五加注射液有效成分含量

	总酚(mg/mL)	总糖(mg/mL)	总木脂素(mg/mL)
				实施例1	1.7	4.7	2.5
实施例2	8.2	22.6	12.9
				实施例3	12.4	43.1	18.0
实施例4	17.8	63.8	23.6

注：实施例1-4为不同批刺五加药材。

测试例2

测试实施例1-4刺五加注射液治疗脑梗塞的效果。

取SD大鼠100只，SPF级，雄性，298±12.0g，禁食过夜，自由饮水。实验当天用异氟烷气体麻醉并维持。仰卧位固定，沿颈正中线切开皮肤，暴露右侧颈总动脉，小心分离颈总动脉分叉至颅底部的血管周围的神经及筋膜，分离颈外动脉分支枕动脉、甲状腺上动脉、舌动脉和上颚上颌动脉，结扎，剪断。从颈外动脉游离端插入直径0.260mm丝线，从颈外动脉远心端将尼龙线导入到颈内动脉，插至Willis环大脑中动脉处，以有效阻断大脑中动脉，插入的尼龙线长度距颈总动脉分叉处18～20mm。然后将颈外动脉游离端连同腔内尼龙线一并结扎，以防出血。逐层缝合皮下筋膜和皮肤，肌肉注射青霉素防止感染。2h后小心抽出颈内动脉血管腔内的尼龙线使颈内动脉再灌注，10min后进行神经缺陷评分，有明显神经功能缺陷者(>8分)为造型成功。表2为大鼠神经功能缺陷评分标准，用于评价神经功能损害程度，总分为16分，分数越高，表明动物神经功能损害程度越严重。

表2大鼠神经功能缺陷评分标准

选取造型成功的动物75只，采用随机数字表法随机分为5组，每组15只。其中4组分别给予实施例1-4制备得到的刺五加注射液，另设1组作为模型对照组给予生理盐水。另外，取SD大鼠10只，SPF级，雄性，298±12.0g，禁食过夜，自由饮水，经过一定处理作为假手术组，处理过程如下：实验当天用异氟烷气体麻醉并维持。仰卧位固定，沿颈正中线切开皮肤，暴露右侧颈总动脉，小心分离颈总动脉分叉至颅底部的血管周围的神经及筋膜，分离颈外动脉分支枕动脉、甲状腺上动脉、舌动脉和上颚上颌动脉，逐层缝合皮下筋膜和皮肤，肌肉注射青霉素防止感染。假手术组给予生理盐水。

上述6组均采用尾静脉注射的方式，按最大给药体积给药，即2.25mL/100g体重。每天一次，连续3天，给药时间相同。

根据表2的大鼠神经功能缺陷评分标准评价治疗前、后的大鼠神经功能，每组取平均值，结果如表3所示。

在实验结束后取脑沿冠状面切成2mm厚的切片，间隔取上述一半脑片放入2％TTC染液中，避光37℃温孵10min进行染色，采用COOLPIX955数码相机成像系统将数字影象存储于计算机中，并用图像分析系统v 4.0软件测量梗死区和全脑面积，计算脑梗死范围(梗死区面积占全脑面积百分比)，每组取平均值，结果如表3所示。实施例4、模型对照组的治疗前、治疗第二天和治疗第三天(每张图依次从上到下)的影像分别如图1-2所示。

表3治疗前、后大鼠的神经功能评分和脑梗死范围

与假手术组比较：^△Δ△P<0.001；与模型对照组比较：^**P<0.01。

本发明方案所公开的技术手段不仅限于上述技术手段所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种刺五加提取液，其特征在于，所述提取液包括以下重量份的组分：总酚17.8份，总糖63.8份，总木脂素23.6份；

其中，所述刺五加提取液的提取方法，包括如下步骤：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎至14目，加8倍量的水煎煮，煎煮温度为100℃，煎煮时间为3h，超声和微波联合辅助提取，超声功率300w，微波功率200w，过滤，得滤液A；

(2)用石灰乳调节滤液A的pH值至10，搅拌，转速为50r/min，时间为5min，用质量分数为20％的硫酸继续调节滤液A的pH值至5，搅拌，转速为50r/min，时间为10min，室温下静置1.5h，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.20，加入体积分数为90％的乙醇溶液至含醇量85％，室温下静置2h，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。

2.一种权利要求1所述刺五加提取液的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取刺五加的根和茎，粉碎至14目，加8倍量的水煎煮，煎煮温度为100℃，煎煮时间为3h，超声和微波联合辅助提取，超声功率300w，微波功率200w，过滤，得滤液A；

(2)用石灰乳调节滤液A的pH值至10，搅拌，转速为50r/min，时间为5min，用质量分数为20％的硫酸继续调节滤液A的pH值至5，搅拌，转速为50r/min，时间为10min，室温下静置1.5h，取上层清液，得溶液B；

(3)将溶液B浓缩至80℃时相对密度1.20，加入体积分数为90％的乙醇溶液至含醇量85％，室温下静置2h，过滤，得滤液C；

(4)回收滤液C中的乙醇，即得。

3.一种刺五加注射液，其特征在于，所述注射液由权利要求1所述刺五加提取液或权利要求2所述提取方法提取得到的刺五加提取液和注射用水制成。

4.根据权利要求3所述注射液，其特征在于，所述注射液中各组分浓度为：总酚17.8mg/mL，总糖63.8mg/mL，总木脂素23.6mg/mL。

5.一种权利要求3或4所述刺五加注射液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.将刺五加提取液和注射用水混合，调节pH，加热，冷藏，过滤，得滤液1；

S2.在滤液1中加入氯化钠，搅拌，过滤，得滤液2；

S3.调节滤液2的pH值，过滤，得滤液3；

S4.将滤液3灌封、灭菌，即得。

6.根据权利要求5所述的刺五加注射液的制备方法，其特征在于，所述S1中调节pH至5.5-6.5，加热温度98-100℃，加热时间30-60min，冷藏温度2-10℃，冷藏时间40-60h；步骤S2中氯化钠与滤液1的质量体积比为0.5-0.8g/mL，搅拌转速为40-60r/min，时间为20-40min；步骤S3中调节滤液2的pH值至4.5-6.0。

7.根据权利要求5所述的刺五加注射液的制备方法，其特征在于，所述S2中滤液2由以下步骤得到：在滤液1中加入活性炭，煮沸，室温冷却，过滤得到滤液2。

8.一种权利要求1所述刺五加提取液或权利要求2所述刺五加提取液的提取方法提取得到的刺五加提取液或权利要求3-4任一项所述刺五加注射液或权利要求5-7任一项所述的刺五加注射液的制备方法制备得到的刺五加注射液的应用，其特征在于，所述刺五加提取液或所述刺五加注射液用于制备治疗脑梗塞的药物中。

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