CN104391067B - 一种测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法，包括以下步骤：a、取植物源性食品，加入有机溶剂、氯化钠，混匀，离心，静置分层，取上清液；b、a步骤上清液中，加入无水硫酸钠，混匀，静置，取上清液；c、将步骤b上清液，浓缩、定容，加入无水硫酸钠、N-丙基乙二胺和十八烷基硅烷键合硅胶，混匀，离心，取上清液作为待检样品；d、采用GC-MS/MS或GC-MS检测，即可。本发明采用特定的检测条件，具有良好的线性响应，能够准确、快速、方便地测定咪鲜胺或其代谢产物残留；同时，还具有简便、快速、选择性好、灵敏度高、抗基质干扰能力强的优点。

Description

一种测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法

技术领域

本发明涉及一种测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法。

背景技术

咪鲜胺是一种咪唑类广谱杀菌剂，能够防治白粉菌、炭疽菌等病害，具有防腐、保鲜作用，被广泛用于香蕉、柑橘等水果以及谷类、油料作物、观赏植物、蔬菜的采后贮存、运输过程中的防腐保鲜和防治贮藏期病害。咪鲜胺的最终代谢产物为2,4,6-三氯苯酚，其毒性高，生物降解性差，容易造成严重的环境污染，并被疑为强致癌物质。联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)食品法典委员会(CCPR)规定咪鲜胺在作物上的最高残留限量包括咪鲜胺及其代谢物残留量的总和。因此，需要检测和控制咪鲜胺及其代谢产物在水果、作物、蔬菜等中的残留量。

目前，国内外对咪鲜胺残留量的检测方法，主要集中在气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱法(GC-MS)和液相色谱-质谱法(LC-MS)等，气相色谱法一般是在高温条件下，将咪鲜胺转化为2,4,6-三氯苯酚，再通过测定2,4,6-三氯苯酚来间接分析咪鲜胺残留量。采用高效液相色谱(HPLC)，只可检测咪鲜胺的残留量，不能检测其代谢产物2,4,6-三氯苯酚的残留量，且其灵敏度相对气相色谱法低，例如，袁小雅等(固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定香蕉中咪鲜胺2,4,6-三氯苯酚残留量.袁小雅，潘永贵，王美玲，戴华.理化检验-化学分册，2014年第50卷)采用固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定香蕉样品，就只检测到咪鲜胺的残留量，而未能检测到2,4,6-三氯苯酚。张世瑞等(两种热带水果中咪鲜胺残留的气质联用测定.张世瑞，袁宏球，尹桂豪.现代农药，2010年8月，第9卷，第4期)采用气质联用检测水果中咪鲜胺残留，没有同时对2,4,6-三氯苯酚进行检测，且其样品前处理的步骤复杂。

因此，需要发明一种简便快速、选择性好、灵敏度高的测定咪鲜胺或其代谢产物的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法，该方法具有简便、快速、选择性好、灵敏度高、抗基质干扰能力强的优点，在0.01～1mg/kg范围内具有良好的线性响应。

本发明提供了一种测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法，它包括以下步骤：

a、取均质后的植物源性食品，加入有机溶剂、氯化钠，混匀，离心，静置分层，取上清液，残渣按上述步骤重复提取，合并上清液；

所述的样品、有机溶剂、氯化钠的重量体积比为0.8～1.2g：0.8～1.2ml：0.2～0.3g；优选地，所述的样品、有机溶剂、氯化钠的重量体积比为1g：1ml：0.3g；所述有机溶剂为乙腈、丙酮、二氯甲烷或乙酸乙酯；

b、a步骤上清液中，加入无水硫酸钠，无水硫酸钠的用量为样品的1/2，混匀，静置，取上清液；

c、将步骤b上清液，浓缩、定容，加入无水硫酸钠、N-丙基乙二胺和十八烷基硅烷键合硅胶，混匀，离心，取上清液作为待检样品；

所述的样品、无水硫酸钠、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶的质量比为1:0.05：0～0.015：0～0.015；

d、采用GC-MS/MS或GC-MS检测植物源性食品中的咪鲜胺或其代谢产物残留；

d步骤所述的GC-MS/MS的检测条件为：

气相色谱条件：

色谱柱：TR-PESTICIDE；

进样方式：程序升温不分流进样；

程序升温气化进样口：起始温度60℃，以8℃/min升至280℃；

载气：He，99.999％，流速：1.3mL/min；

色谱柱采用程序升温：初始温度60℃，保持2min，以30℃/min升至160℃，以5℃/min升至300℃，再以20℃/min升至310℃，保持1.5min；

柱流量1.3mL/min；

进样量：1μL；

串联质谱条件：

离子源温度：240℃；

电离模式：电子轰击电离；

质谱传输线温度：280℃；

溶剂延迟时间：4.5min；

碰撞气压力：氩气，1.5mTorr；

分析模式：定时选择性反应监测模式。

其中，所述咪鲜胺或其代谢产物为咪鲜胺、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺、2,4,6-三氯苯酚中的任意一种或多种。

其中，步骤a中，所述植物源性食品包括水果、蔬菜、粮食、油籽油料类、坚果、籽仁类、茶叶、可可咖啡原料类、植物源性调料、植物源性中药材。

进一步的，所述的蔬菜为食用菌；所述的粮食为豆类。其中，步骤c中，所述的样品、无水硫酸钠、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶的质量比为1:0.05：0.01：0.01。

其中，步骤a和c中，离心的转速为4000r/min。

其中，所述的色谱柱的规格为30m×0.25mm×0.25μm。

其中，检测咪鲜胺的气相色谱-串联质谱联用检测条件为：

保留时间为7.09min；检测离子对：308→70，310→70；碰撞能量为10V，10V；或

检测2,4,6-三氯苯酚的气相色谱-串联质谱联用检测条件为：

保留时间为26.81min；检测离子对：132→97，196→132；碰撞能量为10V，15V。

其中，所述方法采用峰面积内标法定量，以环氧七氯作为内标物。

其中，d步骤所述的GC-MS检测条件为：

气相色谱(GC)条件为：

色谱柱：HP-5MS，30m×0.25mm×0.25μm；进样方式：不分流进样，进样口温度：280℃；载气：He，99.999％，柱流量1.0mL/min；柱温采用程序升温：初始温度60℃，保持1min，以10℃/min升至150℃，保持1min，再以20℃/min升至300℃，保持5min；进样量：1μL；

质谱(MS)条件为：

离子源温度：250℃；电离模式：电子轰击电离(EI)；质谱传输线温度280℃；溶剂延迟时间4.5min；碰撞气压力：氩气，1.5mTorr；分析模式：定时选择性反应监测模式(timed-SRM)；

定量方法：内标法，以环氧七氯作为内标物，或外标法定量。

本发明测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法，具有下述有益效果：

(1)本发明制备待检样品时，采用乙腈、丙酮、二氯甲烷或乙酸乙酯等有机溶剂作为提取植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的溶剂，特别是采用乙腈作为溶剂时，加标回收试验的回收率高；

选择加入合适的吸附剂(N-丙基乙二胺和十八烷基硅烷键合硅胶)以及适当的用量，加标回收试验的回收率高；

(2)本发明，采用特定的气相色谱条件以及串联质谱条件，能够同时准确、快速、方便地测定待检样品中的咪鲜胺及其代谢产物；

(3)本发明方法，在0.01～1mg/kg范围内具有良好的线性响应，且在0.01mg/kg、0.02mg/kg和0.1mg/kg三种添加水平下的加标回收试验均具有较高的回收率；

(4)本发明同时研究采用了内标法和外标法对待测物质进行准确的定性定量分析；内标法以环氧七氯作为内标物，具有简便、快速、特异性强、选择性好、灵敏度高、抗基质干扰能力强的优点。

本发明采用特定的气相色谱条件以及串联质谱条件，在0.01μg/mL～2.00μg/mL范围内具有良好的线性响应，能够准确、快速、方便地测定植物源性食品中的咪鲜胺或其代谢产物残留，加标回收试验均具有较高的回收率；同时，本发明还具有简便、快速、选择性好、灵敏度高、抗基质干扰能力强的优点，适用于植物源性食品中咪鲜胺或其代谢物残留的定性和定量分析。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1本发明GC-MS/MS法咪鲜胺的基质加标工作曲线

图2本发明GC-MS/MS法2,4,6-三氯苯酚的基质加标工作曲线

图3本发明GC-MS/MS法N-丙基-2-(2，4，6-三氯苯氧基)乙胺的基质加标工作曲线

图4GC-MS法咪鲜胺的基质加标工作曲线

图5GC-MS法N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺的基质加标工作曲线

图6GC-MS法2,4,6-三氯苯酚的基质加标工作曲线

图7GC-MS法检测咪鲜胺的离子流色谱图

图8GC-MS法检测N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺的离子流色谱图

图9GC-MS法检测2,4,6-三氯苯酚的离子流色谱图

图10本发明GC-MS/MS法0.05μg/mL基质加标工作液的总离子流(TIC)色谱图

图11本发明GC-MS/MS法检测阳性样品番石榴3的总离子流色谱图

图12本发明GC-MS/MS法检测阳性样品荔枝3的总离子流色谱图

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

仪器与试剂：

TSQQuantumXLS系列三重四极杆质谱仪及其工作站(美国赛默飞世尔公司)；SIGMA2-16K台式离心机(德国sartoriussigma公司)；EYELAMMV-1000W振荡器(日本东京理化)；IKA涡旋混合器；TruboVapII全自动浓缩仪。

乙腈(色谱纯)；PSA(N-丙基乙二胺)、C18(十八烷基硅烷键合硅胶)(天津博纳艾杰尔科技有限公司)；无水硫酸钠、氯化钠(分析纯，广州化学试剂厂)，使用前在650℃的马弗炉内灼烧4h；水为去离子水；咪鲜胺标准品(DR,纯度均99.0％)、2,4,6-三氯苯酚标准品(美国AccuStandard，纯度为100％)、环氧七氯购于德国Dr.Ehrenstorfer公司。

实施例1本发明GC-MS/MS检测咪鲜胺或其代谢产物残留

1、标准储备液的配制

分别准确称取咪鲜胺、2,4,6-三氯苯酚和N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准品10mg(精确至0.01mg)于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，分别配制成质量浓度为100μg/mL的咪鲜胺标准储备液、2,4,6-三氯苯酚标准储备液和N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准储备液，储存于-18℃冰箱中，备用。

2、标准工作液的配制

分别精密量取1.0mL咪鲜胺标准储备液、2,4,6-三氯苯酚标准储备液和N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准储备液于50mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，分别配制成质量浓度为2μg/mL的咪鲜胺标准工作液、2,4,6-三氯苯酚标准工作液和N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准工作液，储存于-18℃冰箱中，备用。

3、绘制基质加标工作曲线

称取10g(精确到0.01g)待测水果的空白样品(去核、均质)，按“4、样品提取与净化”步骤对样品进行前处理，氮吹浓缩至近干时，依次加入10μL、25μL、50μL、100μL、250μL、500μL、1000μL标准工作液，用乙腈定容至1.0mL，得到咪鲜胺、2,4,6-三氯苯酚和N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准浓度分别为0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL的基质加标工作曲线，如图1～3所示。

4、样品提取与净化

a、准确称取经去核、均质制备的水果样品10.0g于50mL的离心管中，加入10.0mL乙腈,漩涡混匀器混匀30s，加入3gNaCl，振荡混匀10min，4000r/min离心5min，静置1min分层，取上清液于另一50mL的离心管中，残渣按上述步骤重复提取，合并上清液；

b、a步骤上清液中，加入5g无水硫酸钠，混匀30s，静置1min，取上清液；

c、准确吸取10mL步骤b上清液，上全自动浓缩仪(水浴温度调节到40℃)，氮吹浓缩至约2mL，定容至2.0mL；再放入0.5g无水硫酸钠、100mgPSA和100mgC18，振荡，置漩涡混匀器上混和匀1min，4000r/min离心5min，，取上清液用GC-MS/MS检测。

5、GC-MS/MS检测

采用气相色谱-串联质谱联用(GC-MS/MS)对上清液进行检测：

气相色谱(GC)条件为：

色谱柱：TR-PESTICIDE(30m×0.25mm×0.25μm)；进样方式：程序升温不分流进样；程序升温气化(PTV)进样口：起始温度60℃，以8℃/min升至280℃；载气：He，99.999％，流速：1.3mL/min；柱温采用程序升温：初始温度60℃，保持2min，以30℃/min升至160℃，以5℃/min升至300℃，再以20℃/min升至310℃，保持1.5min；柱流量1.3mL/min；进样量：1μL。

串联质谱(MS/MS)条件为：

离子源温度：240℃；电离模式：电子轰击电离(EI)；质谱传输线温度280℃；溶剂延迟时间4.5min；碰撞气压力：1.5mTorr(Ar)；分析模式：定时选择性反应监测模式(timed-SRM)；定量方法：峰面积内标法定量，以环氧七氯作为内标物。

实施例2本发明GC-MS检测咪鲜胺或其代谢产物残留

本发明还采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)对植物源性食品中咪鲜胺或其代谢物进行了检测，具体内容如下所述：

仪器与试剂

气质联用仪(ThermoTrace1310ISQ)；SIGMA2-16K台式离心机(德国sartoriussigma公司)；EYELAMMV-1000W振荡器(日本东京理化)；IKA涡旋混合器；TruboVapII全自动浓缩仪。

乙腈(色谱纯)；PSA(N-丙基乙二胺)、C18(十八烷基硅烷键合硅胶)(天津博纳艾杰尔科技有限公司)；无水硫酸钠、氯化钠(分析纯，广州化学试剂厂)，使用前在650℃的马弗炉内灼烧4h；水为去离子水；咪鲜胺标准品(DR,纯度为99.0％)、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准品由上海书亚医药科技有限公司合成(纯度为95.0％)、2,4,6-三氯苯酚标准品(美国AccuStandard，纯度为100％)、环氧七氯购于德国Dr.Ehrenstorfer公司。

1、标准储备液的配制

分别准确称取咪鲜胺、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺和2,4,6-三氯苯酚标准品10.0mg(精确至0.01mg)于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，分别配制成质量浓度为100μg/mL的咪鲜胺标准储备液、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准储备液和2,4,6-三氯苯酚标准储备液，储存于-18℃冰箱中，备用。

2、标准工作液的配制

分别精密量取1.0mL咪鲜胺标准储备液、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准储备液和2,4,6-三氯苯酚标准储备液于50mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，分别配制成质量浓度为2μg/mL的咪鲜胺标准工作液、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺标准工作液和2,4,6-三氯苯酚标准工作液，储存于-18℃冰箱中，备用。

3、绘制基质加标工作曲线

称取10g(精确到0.01g)待测水果的空白样品(去核、均质)，按“4、样品提取与净化”步骤对样品进行前处理，氮吹浓缩至近干时，依次加入10μL、25μL、50μL、100μL、250μL、500μL标准工作液，用乙腈定容至1.0mL，得到咪鲜胺、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺和2,4,6-三氯苯酚标准浓度分别为0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL的基质加标工作曲线，如图4～6所示。

4、样品提取与净化

a、准确称取经去核、均质制备的水果样品10.0g于50mL的离心管中，加入10.0mL乙腈,漩涡混匀器混匀30s，加入3gNaCl，振荡混匀10min，4000r/min离心5min，静置1min分层，取上清液于另一50mL的离心管中，残渣按上述步骤重复提取，合并上清液；

b、a步骤上清液中，加入5g无水硫酸钠，混匀30s，静置1min，取上清液；

c、准确吸取10mL步骤b上清液，上全自动浓缩仪(水浴温度调节到40℃)，氮吹浓缩至约2mL，定容至2.0mL；再放入0.5g无水硫酸钠、100mgPSA和100mgC18，振荡，置漩涡混匀器上混和匀1min，4000r/min离心5min，，取上清液用GC-MS检测。

5、GC-MS检测

采用气相色谱-串联质谱联用(GC-MS/MS)对上清液进行检测：

气相色谱(GC)条件为：

色谱柱：HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；进样方式：不分流进样，进样口温度：280℃；载气：He，99.999％，柱流量1.0mL/min；柱温采用程序升温：初始温度60℃，保持1min，以10℃/min升至150℃，保持1min，再以20℃/min升至300℃，保持5min；进样量：1μL。

质谱(MS)条件为：

离子源温度：250℃；电离模式：电子轰击电离(EI)；质谱传输线温度280℃；溶剂延迟时间4.5min；碰撞气压力：1.5mTorr(Ar)；分析模式：定时选择性反应监测模式(timed-SRM)；定量方法：内标法，以环氧七氯作为内标物，或外标法定量。

试样待测液和标准品的选择离子色谱峰在相同保留时间处(±0.5％)出现，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准品一致，其丰度比与标准品相比应符合：

相对丰度＞50％时，允许±10％偏差；相对丰度20％～50％时，允许±15％偏差；相对丰度10％～20％时，允许±20％偏差；相对丰度≤10％时，允许±50％偏差；此时可确证目标分析物。咪鲜胺及其代谢物的保留时间、定性离子和定量离子，如表1、图7～9所示。

表1咪鲜胺及其代谢物的保留时间与定性、定量离子

6、GC-MS检测市购样品中的咪鲜胺或其代谢产物残留

在市场上购买番石榴、荔枝、龙眼、苹果样品各3份，按照上述方法进行GC-MS检测。

结果在部分市购番石榴、荔枝和苹果样品中检出了咪鲜胺、N-丙基-2-(2,4,6-三氯笨氧基)乙胺和2,4,6-三氯苯酚，其具体残留量见表2。

表2市购样品中咪鲜胺及其代谢产物的残留量检测结果

试验结果说明，该方法可以准确、快速、方便地检测出市购水果产品中咪鲜胺和2,4,6-三氯苯酚的残留量。

7、GC-MS检测的回收率与精密度试验

分别对苹果、荔枝、龙眼、番石榴等水果进行加标回收试验，考察该方法的回收率与精密度，按照上述方法进行GC-MS检测，试验结果见表3和表4。

表3不同水果中2,4,6-三氯苯酚的加标回收试验结果

表4不同水果中咪鲜胺的加标回收试验结果

试验结果说明，该方法加标回收试验的回收率高，精密度好。

综上所述，该方法采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)对植物源性食品中咪鲜胺或其代谢物进行检测，与GC-ECD法相比，该方法具有简便、快速、选择性好、灵敏度高、抗基质干扰能力强的特点；该方法采用环氧七氯作为内标物是为了方便进行多农药残留的检测，对于咪鲜胺或其代谢物的检测来说，外标法的线性、加标回收等均能满足要求，也可以用外标法进行定量。

为了说明本发明的有益效果，本发明提供以下试验例：

试验例1本发明检测方法条件优化筛选试验

1、提取溶剂的筛选试验

采用本发明GC-MS/MS方法，选用乙腈、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯4种有机溶剂分别作为提取溶剂进行比较，以苹果作为样品进行加标回收试验，其结果见表5。

表5不同提取溶剂的加标回收试验结果

由表5可知，本发明以乙腈、丙酮、二氯甲烷或乙酸乙酯作为提取溶剂，加标回收试验的回收率高；特别是，以乙腈作为提取溶剂时，加标回收试验的效果最好。

2、吸附剂的筛选试验

分散固相萃取的净化吸附剂有很多种，本发明对两种离子交换吸附剂(PSA、SCX)和两种惰性吸附剂(C18、Pesticab)进行筛选。

本发明研究发现：(1)SCX吸附剂以硅胶为基质，键合有苯磺酸官能团，易吸附阳离子，Pesticab吸附剂能去除食品基质中的色素和甾醇的影响，两者对咪鲜胺和2,4,6-三氯苯酚的吸附作用较大，加标回收率较低(50％～80％)；(2)本发明适合选用吸附剂PSA和C18进行净化处理。

本发明考察了PSA用量和C18用量对净化效果的影响，分别对苹果样品进行加标回收试验，试验结果见表6和表7。

表6PSA用量对加标回收试验的影响

表7C18用量对加标回收试验的影响

试验结果表明：

(1)PSA用量和C18用量对加标回收试验的回收率有明显影响，与不加PSA和C18相比，加入PSA和C18后其回收率有了明显的提高；

(2)加入100mgPSA和100mgC18，可以获得最佳的回收率；加入PSA过少或过量，回收率都会有所降低；加入C18大于100mg时，回收率无明显改变。

3、GC-MS/MS的筛选试验

为了获得最佳的质谱条件以保证定性定量的准确性，本发明对各项质谱参数进行了优化。首先，以全扫描(FullScan)方式测定其保留时间和选择碎片离子，确定母离子，再采用产物离子扫描方式(ProductScan)通过优化碰撞能量获得丰度比较高的产物离子，确定2对离子对；最后采用定时选择性反应监测模式(timed-SRM)对待检样品进行定性定量分析。

通过筛选，本发明优化选择的GC-MS/MS条件见表8，在此条件下消除了基质和样品假阳性的干扰，大大提高了检测灵敏度，且2对离子对的特征选择确保了样品检测的准确定性。在优化条件下，0.05μg/mL基质加标工作液的总离子流(TIC)色谱图，如图10所示。

表8优化后的多反应监测模式下的GC-MS/MS条件

试验例2本发明GC-MS/MS的回收率与精密度试验

本发明分别对苹果、番石榴、荔枝、龙眼等水果进行加标回收试验，考察该方法的回收率与精密度，试验结果见表9和表10。

表9不同水果中咪鲜胺的加标回收试验结果

表10不同水果中2,4,6-三氯苯酚的加标回收试验结果

试验结果说明，本发明GC-MS/MS检测咪鲜胺或其代谢产物，加标回收试验的回收率高，精密度好。

试验例3本发明GC-MS/MS检测市购样品中的咪鲜胺或其代谢产物残留

在市场上购买番石榴、荔枝、龙眼、苹果样品各3份，在本发明优化的试验条件下进行GC-MS/MS检测。

结果在部分市购番石榴、荔枝和苹果样品中检出了咪鲜胺和2,4,6-三氯苯酚，如图11和图12所示，其具体残留量见表11。

表11市购样品中咪鲜胺和2,4,6-三氯苯酚的残留量检测结果

试验结果说明，本发明采用GC-MS/MS方法，可以准确、快速、方便地检测出市购水果产品中咪鲜胺和2,4,6-三氯苯酚的残留量。

本发明GC-MS/MS方法，采用特定的气相色谱条件以及串联质谱条件，在0.01μg/mL～2.00μg/mL范围内具有良好的线性响应，能够准确、快速、方便地测定植物源性食品中的咪鲜胺或其代谢产物残留，加标回收试验均具有较高的回收率；同时，本发明还具有简便、快速、选择性好、灵敏度高、抗基质干扰能力强的优点，适用于植物源性食品中咪鲜胺或其代谢物残留的定性和定量分析。

此外，本发明采用内标前处理方法补偿了预测组分在样品前处理过程中(如样品提取液与标准溶液定容体积的一致性)、进样量的变化、色谱条件的微小变化等各种原因造成的损失，进一步提高了方法的准确度和精密度，GC-MS/MS解决了基质效应导致咪鲜胺或其代谢物误检、漏检，定性、定量不准确等问题。

Claims (10)

1.一种测定植物源性食品中咪鲜胺或其代谢产物的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

a、取均质后的植物源性食品，加入有机溶剂、氯化钠，混匀，离心，静置分层，取上清液，残渣按上述步骤重复提取，合并上清液；

所述植物源性食品、有机溶剂、氯化钠的重量体积比为0.8～1.2g：0.8～1.2ml：0.2～0.3g；所述有机溶剂为乙腈、丙酮、二氯甲烷或乙酸乙酯；

b、a步骤上清液中，加入无水硫酸钠，无水硫酸钠的用量为植物源性食品的1/2，混匀，静置，取上清液；

c、将步骤b上清液，浓缩、定容，加入无水硫酸钠、N-丙基乙二胺和十八烷基硅烷键合硅胶，混匀，离心，取上清液作为待检样品；

所述植物源性食品、无水硫酸钠、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶的质量比为1：0.05：0～0.015：0～0.015；

d、采用GC-MS/MS或GC-MS检测植物源性食品中的咪鲜胺或其代谢产物残留；

d步骤所述的GC-MS/MS的检测条件为：

气相色谱条件：

色谱柱：TR-PESTICIDE；

进样方式：程序升温不分流进样；

程序升温气化进样口：起始温度60℃，以8℃/min升至280℃；

载气：He，99.999％，流速：1.3mL/min；

色谱柱采用程序升温：初始温度60℃，保持2min，以30℃/min升至160℃，以5℃/min升至300℃，再以20℃/min升至310℃，保持1.5min；

柱流量1.3mL/min；

进样量：1μL；

串联质谱条件：

离子源温度：240℃；

电离模式：电子轰击电离；

质谱传输线温度：280℃；

溶剂延迟时间：4.5min；

碰撞气压力：氩气，1.5mTorr；

分析模式：定时选择性反应监测模式；

所述咪鲜胺或其代谢产物为咪鲜胺、N-丙基-2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙胺、2,4,6-三氯苯酚中的任意一种或多种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述植物源性食品包括水果、蔬菜、粮食、油籽油料类、坚果、籽仁类、茶叶、可可咖啡原料类、植物源性调料、植物源性中药材。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述的蔬菜为食用菌；所述的粮食为豆类。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述植物源性食品、有机溶剂、氯化钠的重量体积比为1g：1ml：0.3g。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述植物源性食品、无水硫酸钠、N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶的质量比为1:0.05：0.01：0.01。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a和c中，离心的转速为4000r/min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的色谱柱的规格为30m×0.25mm×0.25μm。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：检测咪鲜胺的气相色谱-串联质谱联用检测条件为：

保留时间为7.09min；检测离子对：308→70，310→70；碰撞能量为10V，10V；或

检测2,4,6-三氯苯酚的气相色谱-串联质谱联用检测条件为：

保留时间为26.81min；检测离子对：132→97，196→132；碰撞能量为10V，15V。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法采用峰面积内标法定量，以环氧七氯作为内标物。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：d步骤所述的GC-MS检测条件为：

气相色谱条件为：

色谱柱：HP-5MS，30m×0.25mm×0.25μm；进样方式：不分流进样，进样口温度：280℃；载气：He，99.999％，柱流量1.0mL/min；柱温采用程序升温：初始温度60℃，保持1min，以10℃/min升至150℃，保持1min，再以20℃/min升至300℃，保持5min；进样量：1μL；

质谱条件为：

离子源温度：250℃；电离模式：电子轰击电离；质谱传输线温度280℃；溶剂延迟时间4.5min；碰撞气压力：氩气，1.5mTorr；分析模式：定时选择性反应监测模式；

定量方法：内标法，以环氧七氯作为内标物，或外标法定量。