CN104388179B - 一种从藻类中提取dha藻油及藻类蛋白的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，包括如下步骤：(1)将藻类发酵液经离心后，取沉淀，制得菌液；然后向菌液中加入无水乙醇，进行高压均质破壁，制得破碎菌液；(2)将破碎菌液经有机溶剂多级萃取，制得萃取液和菌渣；(3)将萃取液经低温真空浓缩后，制得DHA粗藻油；然后经碱炼、脱胶、脱色，制得DHA藻油；(4)将菌渣经离心、水洗、干燥后制得藻类蛋白。本发明所述方法在高压匀浆破壁前，先将藻类用无水乙醇浸泡，从而大大提高了萃取率；DHA藻油的提取率可达95％以上，远高于现有传统提取方法。

Description

一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法
技术领域
本发明涉及一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，属于保健品制备技术领域。
背景技术
DHA(化学名称为全顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸)对人体具有重要的生理功能。它是人脑和视网膜的主要组成物质之一，对婴儿的神经发育起了重要的作用。另外，DHA还具有降血脂、减少血栓形成、抗动脉粥样硬化、延缓衰老、防止癌症等重要的作用。
传统的DHA生产工艺主要是从鱼油中提取，但由于鱼油的来源不稳定且具有腥味等缺点，目前，越来越多的研究人员及企业已开展微生物发酵生产DHA的研究和规模化生产。在众多产DHA的微生物(包括裂殖壶菌、破囊壶菌、隐甲藻等)中，裂殖壶菌不仅生长速度快，而且其油脂可占自身干重的70％以上，DHA最高可占总油脂的90％，是发酵法生产DHA的理想微生物之一。
目前，国内外提取DHA藻油的方法主要为压榨法、有机溶剂萃取法及CO2超临界萃取法等。压榨法在提取前需对得到的菌体烘干方可破碎，能耗太大超临界提取法的设备投资大，成本高，不利于微生物油脂提取的扩大化生产。常规的有机溶剂萃取法有冻融法、超声波法、酸热法和酶水解法等。冻融法的耗时太长，油脂得率过低。酸热法的破壁效果较好，油脂得率也较高，但在破壁过程中会产生大量的废酸水，污染较为严重。超声波法的油脂得率略低于酸热法，且处理量较小，不能进行扩大再生产。相对于上述方法，酶水解法具有多方面的优势，现有的酶水解法一般采用纤维素酶、溶菌酶、蜗牛酶、蛋白酶等进行水解，其破碎条件比较温和、能耗低、处理量大，但现阶段酶制剂的价格较高，不利于工业化推广。因此，本发明在总结每个提取工艺优缺点的基础上，提供了一种新的适宜工业化生产的DHA提取生产工艺。
中国专利文献CN101817738A(申请号200910225296.6)公开了一种从藻类和真菌细胞中破壁提取DHA方法，涉及一种从微生物中提取有效组分的方法，提供一种无需任何有机溶剂和化学药物的辅助，采用物理方法将藻类和真菌细胞破壁并提取胞内油脂产物DHA(二十二碳六烯酸)，适合于低成本的大规模生产。将发酵结束后的微藻或真菌发酵液通过分离系统分离收集细胞，用酸调节菌泥pH2.0～4.0，然后控制菌泥温度在10～20℃，在菌泥中加入抗氧化剂后通过高压均质机进行高压均质破壁；将破壁后的菌泥加入水，搅拌后将料液通过三相分离机分离得到DHA油脂。
中国专利文献CN102965182A(申请号201210491610.7)公开了一种从裂殖壶藻中提取油脂的方法，所述方法包括如下步骤：(1)调节裂殖壶藻发酵液的pH至酸性，加入有机溶剂，搅拌，实现裂殖壶藻细胞的破壁和微藻油脂的提取；(2)向步骤(1)得到的发酵液中加入絮凝剂絮凝处理后，采用有机溶剂萃取得到藻毛油；(3)藻毛油经脱胶，脱色，脱酸/脱臭，得到富含DHA的微藻油脂。该专利中提到有机溶剂可为正己烷。
中国专利文献CN101168501A(申请号200710025079.3)公开了一种从隐甲藻中提取并精制富含DHA脂肪酸的工艺。该工艺先将隐甲藻Crypthecodinium cohnii发酵液絮凝处理再进行固液分离，通过碱破壁后再将细胞机械破碎，然后对破碎的菌体采用有机溶剂萃取，获得DHA粗油；DHA粗油经过脱胶、碱炼、脱色、脱臭后得到DHA精油。该专利中提到机械破碎可以为高压匀质破碎。
但上述提取工艺受现有破壁工艺条件的技术限制，DHA藻油及其藻类蛋白提取率依然较低。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法。本发明将机械破壁与有机溶剂萃取相结合，DHA藻油的提取率可高达95％以上，具有较好的工业化应用前景。
为了实现上述发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，包括如下步骤：
(1)将藻类发酵液经离心后，取沉淀，制得菌液；然后向菌液中加入无水乙醇，菌液与无水乙醇的重量体积比为(0.5～2):1，单位kg/L，静置25～40min，然后在20～40℃的温度，80～120Mpa的压力条件下，进行高压均质破壁，循环破壁2～4次，制得破碎菌液；
(2)将步骤(1)制得的破碎菌液经有机溶剂多级萃取，制得萃取液和菌渣；
(3)将步骤(2)制得的萃取液经低温真空浓缩后，制得DHA粗藻油；然后经碱炼、脱胶、脱色，制得DHA藻油；
(4)将步骤(2)制得的菌渣经离心、水洗、干燥后制得藻类蛋白。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中的藻类发酵液，制备步骤如下：
I、取藻类接种于活化培养基中，在28～32℃下活化培养20～28h，制得活化菌种；
II、将步骤I制得的活化菌种按重量百分比5～10％接种于发酵培养基中，在28～32℃的条件下发酵培养50～65h，然后流加浓度450～600g/L的葡萄糖溶液，使发酵液中的葡萄糖浓度为10g/L～15g/L，继续发酵20～30h，制得藻类发酵液。
进一步优选的，所述的活化培养基组分如下，均为重量份：
葡萄糖20g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸粉10g/L、海水晶20g/L，水定容至1L，pH5.0。
进一步优选的，所述的发酵培养基，组分如下：
葡萄糖40g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸粉10g/L、海水晶20g/L，水定容至1L，pH5.0；
根据本发明优选的，所述步骤(1)中，离心采用碟式离心机，离心条件为3000rpm，3m3/h。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中，菌液与无水乙醇的重量体积比为1：1。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中，高压均质破壁的压力为90Mpa，循环破壁次数为3次。
根据本发明优选的，所述步骤(1)中，所述的藻类为裂殖壶菌。
根据本发明优选的，所述步骤(2)中，有机溶剂多级萃取，包括如下步骤：
a、将破碎菌液与2～3倍体积的有机溶剂混合后，在40～50℃的温度条件下以40～50rpm的转速搅拌5～15min；静置30～40min进行一级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得一级萃取液；
b、将步骤a去除的水相和菌渣经离心后，取菌渣与2～3倍体积的有机溶剂混合后，在40～50℃的温度条件下以40～50rpm的转速搅拌5～15min；静置30～40min进行二级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得二级萃取液；
c、合并步骤a制得的一级萃取液和步骤b制得的二级萃取液，制得萃取液。
根据本发明进一步优选的，所述步骤a中，还包括在加入有机溶剂后按体积百分比为5％的比例加入质量浓度为95％的乙醇溶液的步骤。该步骤可降低搅拌过程中乳化现象的发生。
根据本发明优选的，所述步骤(3)中，低温真空浓缩为经压力-0.08Mpa、温度40～50℃的条件进行低温真空浓缩。
根据本发明进一步优选的，所述步骤c低温真空浓缩后还包括回收有机溶剂循环回用于步骤a的步骤。
根据本发明进一步优选的，所属步骤b和步骤c中：温度为45℃、搅拌速度为45rpm、搅拌时间为10min。
根据本发明优选的，所述步骤(2)的有机溶剂为正己烷。
上述工艺步骤，如无特殊说明，均可采用本领域常规技术条件。
有益效果
1、本发明所述方法在高压匀浆破壁前，先将藻类用无水乙醇浸泡，从而使细胞壁上的蛋白质变性，有助于细胞壁的破除；并且避免了高压匀浆机破壁的过程中，前期释放的油脂将菌体细胞包裹保护起来，发生乳化，导致高压匀浆不能彻底破除细胞壁的问题；可以提高萃取率；
2、本发明所述方法破壁成本较低，适宜工业化推广：本发明采用超高压匀浆机对菌体细胞进行破壁，相比于酶法破壁，可节省大约1/3的成本；另外，超高压匀浆机可实现对菌体细胞的连续破壁，适宜工业化推广；
3、本发明所述方法条件温和，采用的低温真空浓缩的工艺方法由于是在相对较低的温度环境下进行的，避免对易发生氧化的有效成分DHA的破坏；
4、本发明所述方法，DHA藻油的提取率可达95％以上，远高于现有传统提取方法。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明所保护范围不限于此。
裂殖壶菌来源于山东广博生物技术服务有限公司。
培养基
活化培养基组分如下，均为重量份：
葡萄糖20g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸粉10g/L、海水晶20g/L，水定容至1L，pH5.0。
发酵培养基，组分如下：
葡萄糖40g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸粉10g/L、海水晶20g/L，水定容至1L，pH5.0；
实施例1
一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，包括如下步骤：
(1)将藻类发酵液经碟式离心机进行离心，离心条件为3000rpm、3m3/h，取沉淀，制得菌液；然后向菌液中加入无水乙醇，菌液与无水乙醇的重量体积比为1:1，单位kg/L，静置30min，然后在30℃的温度，90Mpa的压力条件下，进行高压均质破壁，循环破壁3次，制得破碎菌液；
所述藻类发酵液，制备步骤如下：
I、取藻类接种于活化培养基中，在30℃下活化培养24h，制得活化菌种；
II、将步骤I制得的活化菌种按重量百分比10％接种于发酵培养基中，在30℃的条件下发酵培养55h，然后流加浓度500g/L的葡萄糖溶液，使发酵液中的葡萄糖浓度为12g/L，继续发酵25h，制得藻类发酵液。
所述的藻类为裂殖壶菌；
(2)将步骤(1)制得的破碎菌液经有机溶剂多级萃取，制得萃取液和菌渣；
所述有机溶剂多级萃取，包括如下步骤：
a、将破碎菌液与2倍体积的正己烷混合后，按体积百分比为5％的比例加入质量浓度为95％的乙醇溶液，在45℃的温度条件下以45rpm的转速搅拌10min；静置30min进行一级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得一级萃取液；
b、将步骤a去除的水相和菌渣经6500rpm离心后，取菌渣与3倍体积的正己烷混合后，在45℃的温度条件下以45rpm的转速搅拌10min；静置30min进行二级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得二级萃取液；
c、合并步骤a制得的一级萃取液和步骤b制得的二级萃取液，制得萃取液；
(3)将步骤(2)制得的萃取液经压力-0.08Mpa、温度50℃的条件进行低温真空浓缩后，回收正己烷回用于步骤a中，制得DHA粗藻油；然后经碱炼、脱胶、脱色，制得DHA藻油；
(4)将步骤(2)制得的菌渣经离心、水洗、干燥后制得藻类蛋白。
上述碱炼、脱胶、脱色及离心、水洗、干燥均为本领域常规技术。
实施例2
一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，包括如下步骤：
(1)将藻类发酵液经碟式离心机进行离心，离心条件为3000rpm、3m3/h，取沉淀，制得菌液；然后向菌液中加入无水乙醇，菌液与无水乙醇的重量体积比为0.5:1，单位kg/L，静置30min，然后在然后在20℃的温度，80Mpa的压力条件下，进行高压均质破壁，循环破壁4次，制得破碎菌液；
所述藻类发酵液，制备步骤如下：
I、取藻类接种于活化培养基中，在28℃下活化培养28h，制得活化菌种；
II、将步骤I制得的活化菌种按重量百分比5％接种于发酵培养基中，在28℃的条件下发酵培养65h，然后流加浓度450g/L的葡萄糖溶液，使发酵液中的葡萄糖浓度为10g/L，继续发酵20h，制得藻类发酵液。
所述的藻类为裂殖壶菌；
(2)将步骤(1)制得的破碎菌液经有机溶剂多级萃取，制得萃取液和菌渣；
所述有机溶剂多级萃取，包括如下步骤：
a、将破碎菌液与3倍体积的正己烷混合后，按体积百分比为5％的比例加入质量浓度为95％的乙醇溶液，在50℃的温度条件下以40rpm的转速搅拌10min；静置30min进行一级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得一级萃取液；
b、将步骤a去除的水相和菌渣经6500rpm离心后，取菌渣与3倍体积的正己烷混合后，在50℃的温度条件下以40rpm的转速搅拌10min；静置30min进行二级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得二级萃取液；
c、合并步骤a制得的一级萃取液和步骤b制得的二级萃取液，制得萃取液；
(3)将步骤(2)制得的萃取液经压力-0.08Mpa、温度50℃的条件进行低温真空浓缩后，回收正己烷回用于步骤a中，制得DHA粗藻油；然后经碱炼、脱胶、脱色，制得DHA藻油；
(4)将步骤(2)制得的菌渣经离心、水洗、干燥后制得藻类蛋白。
上述碱炼、脱胶、脱色及离心、水洗、干燥均为本领域常规技术。
实施例3
一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，包括如下步骤：
(1)将藻类发酵液经碟式离心机进行离心，离心条件为3000rpm、3m3/h，取沉淀，制得菌液；然后向菌液中加入无水乙醇，菌液与无水乙醇的重量体积比为2:1，单位kg/L，静置30min，然后在40℃的温度，120Mpa的压力条件下，进行高压均质破壁，循环破壁2次，制得破碎菌液；
所述藻类发酵液，制备步骤如下：
I、取藻类接种于活化培养基中，在32℃下活化培养20h，制得活化菌种；
II、将步骤I制得的活化菌种按重量百分比7％接种于发酵培养基中，在32℃的条件下发酵培养50h，然后流加浓度600g/L的葡萄糖溶液，使发酵液中的葡萄糖浓度为15g/L，继续发酵30h，制得藻类发酵液。
所述的藻类为裂殖壶菌；
(2)将步骤(1)制得的破碎菌液经有机溶剂多级萃取，制得萃取液和菌渣；
所述有机溶剂多级萃取，包括如下步骤：
a、将破碎菌液与2.5倍体积的正己烷混合后，按体积百分比为5％的比例加入质量浓度为95％的乙醇溶液，在45℃的温度条件下以45rpm的转速搅拌10min；静置30min进行一级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得一级萃取液；
b、将步骤a去除的水相和菌渣经6000rpm离心后，取菌渣与2.5倍体积的正己烷混合后，在45℃的温度条件下以45rpm的转速搅拌10min；静置30min进行二级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得二级萃取液；
c、合并步骤a制得的一级萃取液和步骤b制得的二级萃取液，制得萃取液；
(3)将步骤(2)制得的萃取液经压力-0.08Mpa、温度50℃的条件进行低温真空浓缩后，回收正己烷回用于步骤a中，制得DHA粗藻油；然后经碱炼、脱胶、脱色，制得DHA藻油；
(4)将步骤(2)制得的菌渣经离心、水洗、干燥后制得藻类蛋白。
上述碱炼、脱胶、脱色及离心、水洗、干燥均为本领域常规技术。
对比例
一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，包括如下步骤：
(1)将藻类发酵液经碟式离心机进行离心，离心条件为3000rpm、3m3/h，取沉淀，制得菌液；然后向菌液中加入软化水，菌液与软化水的重量体积比为1:1，单位kg/L，静置30min，然后在30℃的温度，90Mpa的压力条件下，进行高压均质破壁，循环破壁3次，制得破碎菌液；
所述藻类发酵液，制备步骤如下：
I、取藻类接种于活化培养基中，在30℃下活化培养24h，制得活化菌种；
II、将步骤I制得的活化菌种按重量百分比10％接种于发酵培养基中，在30℃的条件下发酵培养55h，然后流加浓度500g/L的葡萄糖溶液，使发酵液中的葡萄糖浓度为12g/L，继续发酵25h，制得藻类发酵液。
所述的藻类为裂殖壶菌；
(2)将步骤(1)制得的破碎菌液经有机溶剂多级萃取，制得萃取液和菌渣；
所述有机溶剂多级萃取，包括如下步骤：
a、将破碎菌液与2倍体积的正己烷混合后，按体积百分比为5％的比例加入质量浓度为95％的乙醇溶液，在45℃的温度条件下以45rpm的转速搅拌10min；静置30min进行一级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得一级萃取液；
b、将步骤a去除的水相和菌渣经6500rpm离心后，取菌渣与3倍体积的正己烷混合后，在45℃的温度条件下以45rpm的转速搅拌10min；静置30min进行二级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得二级萃取液；
c、合并步骤a制得的一级萃取液和步骤b制得的二级萃取液，制得萃取液；
(3)将步骤(2)制得的萃取液经压力-0.08Mpa、温度50℃的条件进行低温真空浓缩后，回收正己烷回用于步骤a中，制得DHA粗藻油；然后经碱炼、脱胶、脱色，制得DHA藻油；
(4)将步骤(2)制得的菌渣经离心、水洗、干燥后制得藻类蛋白。
上述碱炼、脱胶、脱色及离心、水洗、干燥均为本领域常规技术。
试验例1
将实施例1、2、3及对比例发酵所得的菌液各取10ml。
使用真空抽滤装置(-0.1Mpa)将上述菌液抽滤于定量滤纸上，100～105℃烘至恒重，称量菌体干重(单位为g)，按如下公式计算菌液的生物量：
生物量(g/L)＝10ml菌液的菌体干重(g)/菌液体积(L)。
试验例2
(1)将实施例1、2、3及对比例发酵所得的发酵液，3500rpm，离心5min后，进行冷冻干燥以制备裂殖壶菌粉。
(2)取5g菌粉于250ml三角瓶中，加入50ml蒸馏水，混匀后再加入40ml盐酸。
(3)将三角瓶加塞后65℃水浴加热40～50min至菌体完全消化。
(4)取出三角瓶冷却，加入一定量的的氯仿：甲醇(2：1，体积比)，加塞充分摇匀，随后倒入分液漏斗中，静置5min，小心吸出下层清晰氯仿层。反复萃取，直至下层氯仿层无色。
(5)回收氯仿，将其置于旋转蒸发仪中，于真空度0.07～0.09MPa、45～50℃的旋转蒸发仪中真空脱溶干燥3～4h，称重计算(在旋蒸的最后，需反复称重，直至旋蒸瓶的重量不再变化)。
(6)按如下公式计算菌体的含油率：
含油率(％)＝氯仿提取物质量(g)*100/干菌体质量(g)。
(7)按照国家标准GB26400-2011所述的方法测定实施例1、2、3及对比例所得藻油中DHA的含量，结果如表1所示。
(8)分别称量实施例1、2、3及对比例所得藻油及藻类蛋白的质量。
(9)按如下公式计算藻油的萃取率、提取率，结果如表1所示：
萃取率(％)＝藻油质量(g)/(生物量(g/L)*发酵液体积(L))；
提取率(％)＝萃取率/菌体含油率；
经计算，结果如表1所示。
表1
结果分析
由表1可以看出，实施例1与对比例的区别仅在于高压均质破壁前向菌液中加入不同溶剂，从而导致二者的萃取率和提取率差异明显，主要原因是在高压匀浆破壁前，先将藻类用无水乙醇浸泡，从而使细胞壁上的蛋白质变性，有助于细胞壁的破除；并且避免了高压匀浆机破壁的过程中，前期释放的油脂将菌体细胞包裹保护起来，发生乳化，导致高压匀浆不能彻底破除细胞壁的问题。

Claims (14)

1.一种从藻类中提取DHA藻油及藻类蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将藻类发酵液经离心后，取沉淀，制得菌液；然后向菌液中加入无水乙醇，菌液与无水乙醇的重量体积比为（0.5～2）:1，单位kg/L，静置25～40min，然后在20～40℃的温度，80～120Mpa的压力条件下，进行高压均质破壁，循环破壁2～4次，制得破碎菌液；
（2）将步骤（1）制得的破碎菌液经有机溶剂多级萃取，制得萃取液和菌渣；
（3）将步骤（2）制得的萃取液经低温真空浓缩后，制得DHA粗藻油；然后经碱炼、脱胶、脱色，制得DHA藻油；
（4）将步骤（2）制得的菌渣经离心、水洗、干燥后制得藻类蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的藻类发酵液，制备步骤如下：
I、取藻类接种于活化培养基中，在28～32℃下活化培养20～28h，制得活化菌种；
II、将步骤I制得的活化菌种按重量百分比5～10%接种于发酵培养基中，在28～32℃的条件下发酵培养50～65h，然后流加浓度450～600g/L的葡萄糖溶液，使发酵液中的葡萄糖浓度为10g/L～15g/L，继续发酵20～30h，制得藻类发酵液。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的活化培养基组分如下，均为重量份：
葡萄糖20g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸粉10g/L、海水晶20g/L，水定容至1L，pH5.0。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养基，组分如下：
葡萄糖40g/L、蛋白胨5g/L、酵母浸粉10g/L、海水晶20g/L，水定容至1L，pH5.0。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，离心采用碟式离心机，离心条件为3000rpm，3m3/h。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，菌液与无水乙醇的重量体积比为1：1。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，高压均质破壁的压力为90Mpa，循环破壁次数为3次。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中，所述的藻类为裂殖壶菌。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中，有机溶剂多级萃取，包括如下步骤：
a、将破碎菌液与2～3倍体积的有机溶剂混合后，在40～50℃的温度条件下以40～50rpm的转速搅拌5～15min；静置30～40min进行一级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得一级萃取液；
b、将步骤a去除的水相和菌渣经离心后，取菌渣与2～3倍体积的有机溶剂混合后，在40～50℃的温度条件下以40～50rpm的转速搅拌5～15min；静置30～40min进行二级萃取后，去除下层的水相和中间层的菌渣，取上层有机相，制得二级萃取液；
c、合并步骤a制得的一级萃取液和步骤b制得的二级萃取液，制得萃取液。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）的有机溶剂为正己烷。
11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤a中，还包括在加入有机溶剂后按体积百分比为5%的比例加入质量浓度为95%的乙醇溶液的步骤。
12.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤c低温真空浓缩后还包括回收有机溶剂循环回用于步骤a的步骤。
13.如权利要求9所述的方法，所属步骤b和步骤c中：温度为45℃、搅拌速度为45rpm、搅拌时间为10min。
14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，低温真空浓缩为经压力-0.08Mpa、温度40～50℃的条件进行低温真空浓缩。
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CN111763698A (zh) * 2020-06-19 2020-10-13 山东天智绿业生物科技有限公司 一种用于制备生产epa的小球藻发酵方法及epa的提取方法
CN115074400A (zh) * 2022-03-22 2022-09-20 青岛海智源生命科技有限公司 一种富含Sn-2位DHA的DHA藻油的生产方法
CN115109647B (zh) * 2022-06-09 2024-04-19 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种油脂提取方法及得到的油脂

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101168501B (zh) * 2007-07-11 2010-04-07 南京工业大学 一种从隐甲藻中提取并精制富含dha脂肪酸的工艺
CN101638361A (zh) * 2009-05-06 2010-02-03 厦门金达威集团股份有限公司 一种从裂殖壶菌提取并精制富含二十二碳六烯酸的方法
CN102295983A (zh) * 2011-07-21 2011-12-28 上海辰浩生物技术有限公司 一种综合利用含油微藻的生产方法
CN103421595A (zh) * 2012-05-25 2013-12-04 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 一种提取微生物油脂的方法
US20140243540A1 (en) * 2013-02-28 2014-08-28 Kiran L. Kadam Algae extraction process
CN103224835B (zh) * 2013-04-17 2014-12-17 北京航空航天大学 含油微藻提取不饱和脂肪酸并制备航空燃料的方法
CN103820215A (zh) * 2014-03-12 2014-05-28 韶关学院 一种油脂的加工方法

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