CN111763698A - 一种用于制备生产epa的小球藻发酵方法及epa的提取方法 - Google Patents
一种用于制备生产epa的小球藻发酵方法及epa的提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111763698A CN111763698A CN202010567785.6A CN202010567785A CN111763698A CN 111763698 A CN111763698 A CN 111763698A CN 202010567785 A CN202010567785 A CN 202010567785A CN 111763698 A CN111763698 A CN 111763698A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- epa
- tank
- chlorella
- transferring
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 80
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 80
- 241000195649 Chlorella <Chlorellales> Species 0.000 title claims abstract description 36
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 29
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims abstract description 10
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims abstract description 4
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 claims description 19
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 12
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 9
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 6
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 6
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 6
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 6
- 239000006188 syrup Substances 0.000 claims description 6
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 6
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 6
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 6
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 6
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 4
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 4
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 claims description 3
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 claims description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract 1
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 48
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 2
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 240000009108 Chlorella vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000007089 Chlorella vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000001651 autotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940012843 omega-3 fatty acid Drugs 0.000 description 1
- 239000006014 omega-3 oil Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
- C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C51/47—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
- C07C51/42—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C51/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by liquid-liquid treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于EPA制备技术领域,公开了一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法,其中所述发酵方法包括:S1.种子罐培养:将培养成熟的小球藻种子液按1%接种于种子罐中,获得菌体湿重达到100‑150g/L时转种;S2.发酵罐培养:将所述种子罐培养的小球藻种子液按15%转种于发酵罐中,获得菌体湿重达到300‑350g/L,EPA在干菌体的含量达到20‑25%;所述提取方法包括:发酵液的预处理、预冷、高压均质、溶媒萃取,浓缩、脱酸脱水和脱色;其中,所述发酵液为所述发酵方法中所发酵的小球藻种子液的发酵液;综上,使得本发明具有发酵及提取工艺简单,产量高,成品质量好等优点。
Description
技术领域
本发明属于EPA制备技术领域,具体涉及一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法。
背景技术
EPA,又称二十碳五烯酸,是人体常用Ω-3脂肪酸之一,具有促进儿童大脑发育、抗炎、调节免疫力等功效。虽然人体可以通过亚麻酸转化为EPA,但其反应速度较慢且转化量较少,很难满足人体需求,因此仍需补充食物来源的EPA。
目前,食用的EPA主要来源于深海鱼类如野生鲑鱼,由于鱼类资源的减少及大量捕捞对生态平衡造成的影响,人们开始研究从其他途径获取EPA,生物发酵便是最佳的选择。能产生EPA的微生物主要为小球藻、拟球藻和高山背孢霉,其中高山背孢霉可实现异养发酵,但产量较低,毛油杂质含量高;而小球藻和拟球藻多以自养培育为主,占地面积较大,培养周期长且培养条件不易控制受季节影响较大,目前,在国内尚无关于EPA工业化生产的相关报道及产品。
发明内容
鉴于此,本发明的目的在于提供一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法及EPA的提取方法,通过对高产EPA小球藻的菌种选育及培养基的开发,实现了小球藻的异养发酵,并提取得到满足市场要求的EPA产品。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法,包括如下步骤:
S1.种子罐培养:将培养成熟的小球藻种子液按1%接种于种子罐中;其中:
种子罐培养基为:葡萄糖15g/L,低温豆粕粉3g/L,酵母蛋白胨20g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁0.5g/L,维生素溶液1ml/L,人工海盐10g/L;
种子罐培养条件为:23-26℃,200-400rpm,通气量为0.5-0.8vvm,ph 值自然,培养42-48hr;
菌体湿重达到100-150g/L时转种;
S2.发酵罐培养:将所述种子罐培养的小球藻种子液按15%转种于发酵罐中;其中:
发酵罐培养基为:葡萄糖80g/L,麦芽糖浆20g/L,低温豆粕粉12g/L,酵母蛋白胨4g/L,磷酸二氢钾3g/L,尿素1g/L,硫酸镁0.6g/L,维生素溶液2ml/L,人工海盐15g/L;
发酵罐培养条件为:23-26℃,100-150rpm,通气量为0.3-0.5vvm,以氨水控制ph=6.5-6.8,培养至60hr流加麦芽糖浆50g/L,培养周期6-7d;
获得菌体湿重达到300-350g/L,EPA在干菌体的含量达到20-25%。
一种EPA的提取方法,包括如下步骤:
S1.发酵液的预处理:将放罐后的发酵液以微滤膜进行过滤,过滤过程中分批次加发酵液体积为2BV的纯化水,洗去料液中的水溶性杂质,水洗结束后浓缩至原发酵液体积1/2时结束过滤;其中,所述发酵液为上述公开的一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法中发酵形成的小球藻种子液的发酵液;
S2.预冷:将过滤后的浓缩发酵液转移至储罐中,以冷盐水降温至2-5℃;
S3.高压均质:将经预冷的发酵液转移至30MPa的高压均质机罐中,使小球藻菌体中的脂肪酸破壁分离;
S4.溶媒萃取:将破壁后的发酵液转移至萃取罐中,分别按发酵液体积的 2BV、2BV、1BV加入正己烷萃取三次,合并有机相;
S5.浓缩:将萃取后的正己烷转移至浓缩罐,浓缩至无正己烷馏出,得EPA 毛油;
S6.脱酸、脱水:将EPA毛油以10%氢氧化钠溶液调ph=10±0.5,缓慢升温至60℃,保温2hr,然后静置沉降皂化粒;将弃去皂化粒的毛油加入10%的软化水洗涤三次,静置分层后弃去水相;水洗后的毛油在真空加热状态下浓缩出毛油残留的水分;
S7.脱色:将脱水后的毛油按3%加入食品级椰壳活性炭,升温至85℃脱色30min,以板框压滤机除去活性炭,降温至室温得成品EPA。
本发明与现有技术相比,具有以下有益效果:
在本发明中,经特定条件对小球藻的种子液进行培养,以促使小球藻的种子液能优化提高EPA的生产量,然后采用预处理、预冷、高压均质、溶媒萃取,浓缩、脱酸脱水和脱色等步骤进行EPA的提取,使得本发明具有发酵及提取工艺简单,产量高,成品质量好等优点。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
在本发明中,提供一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法,具体包括如下步骤:
S1.种子罐培养:将培养成熟的小球藻种子液按1%接种于种子罐中;其中:
种子罐培养基为:葡萄糖15g/L,低温豆粕粉3g/L,酵母蛋白胨20g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁0.5g/L,维生素溶液1ml/L,人工海盐10g/L;
种子罐培养条件为:23-26℃,200-400rpm,通气量为0.5-0.8vvm,ph 值自然,培养42-48hr;
菌体湿重达到100-150g/L时转种;
S2.发酵罐培养:将所述种子罐培养的小球藻种子液按15%转种于发酵罐中;其中:
发酵罐培养基为:葡萄糖80g/L,麦芽糖浆20g/L,低温豆粕粉12g/L,酵母蛋白胨4g/L,磷酸二氢钾3g/L,尿素1g/L,硫酸镁0.6g/L,维生素溶液2ml/L,人工海盐15g/L;
发酵罐培养条件为:23-26℃,100-150rpm,通气量为0.3-0.5vvm,以氨水控制ph=6.5-6.8,培养至60hr流加麦芽糖浆50g/L,培养周期6-7d;
获得菌体湿重达到300-350g/L,EPA在干菌体的含量达到20-25%。
基于上述一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法中所获得的小球藻种子液的发酵液,本发明还提供一种EPA的提取方法,具体包括如下步骤:
S1.发酵液的预处理:将放罐后的发酵液以微滤膜进行过滤,过滤过程中分批次加发酵液体积为2BV的纯化水,洗去料液中的水溶性杂质,水洗结束后浓缩至原发酵液体积1/2时结束过滤;此处,放罐后的发酵液的发酵液及上述一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法中所获得的小球藻种子液的发酵液;
S2.预冷:将过滤后的浓缩发酵液转移至储罐中,以冷盐水降温至2-5℃;
S3.高压均质:将经预冷的发酵液转移至30MPa的高压均质机罐中,使小球藻菌体中的脂肪酸破壁分离;
S4.溶媒萃取:将破壁后的发酵液转移至萃取罐中,分别按发酵液体积的 2BV、2BV、1BV加入正己烷萃取三次,合并有机相;
S5.浓缩:将萃取后的正己烷转移至浓缩罐,浓缩至无正己烷馏出,得EPA 毛油;
S6.脱酸、脱水:将EPA毛油以10%氢氧化钠溶液调ph=10±0.5,缓慢升温至60℃,保温2hr,然后静置沉降皂化粒;将弃去皂化粒的毛油加入10%的软化水洗涤三次,静置分层后弃去水相;水洗后的毛油在真空加热状态下浓缩出毛油残留的水分;
S7.脱色:将脱水后的毛油按3%加入食品级椰壳活性炭,升温至85℃脱色30min,以板框压滤机除去活性炭,降温至室温得成品EPA。
针对上述公开的一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法和一种EPA的提取方法,对应提供如下实施例进行对比:
实施例1
在本实施例中,发酵培养周期为148hr,获取发酵后的菌体湿重为341g/L,菌体干重为74g/L;
基于此,在提取后,获取的EPA含量为23.5%;
综上,本实施例的EPA提取获得率为82.8%。
实施例2
在本实施例中,发酵培养周期为148hr,获取发酵后的菌体湿重为332g/L,菌体干重为68g/L;
基于此,在提取后,获取的EPA含量为24.8%;
综上,本实施例的EPA提取获得率为83.1%。
实施例3
在本实施例中,发酵培养周期为144hr,获取发酵后的菌体湿重为336g/L,菌体干重为71g/L;
基于此,在提取后,获取的EPA含量为23.9%;
综上,本实施例的EPA提取获得率为82.6%。
实施例4
在本实施例中,发酵培养周期为152hr,获取发酵后的菌体湿重为347g/L,菌体干重为75g/L;
基于此,在提取后,获取的EPA含量为23.7%;
综上,本实施例的EPA提取获得率为84.0%。
实施例5
在本实施例中,发酵培养周期为146hr,获取发酵后的菌体湿重为321g/L,菌体干重为64g/L;
基于此,在提取后,获取的EPA含量为23.6%;
综上,本实施例的EPA提取获得率为82.5%。
综上可知,基于本发明所提供的发酵方法和提取方法,使得从而小球藻中提取获得EPA的获得率可达到80%以上。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (2)
1.一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1.种子罐培养:将培养成熟的小球藻种子液按1%接种于种子罐中;其中:
种子罐培养基为:葡萄糖15g/L,低温豆粕粉3g/L,酵母蛋白胨20g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁0.5g/L,维生素溶液1ml/L,人工海盐10g/L;
种子罐培养条件为:23-26℃,200-400rpm,通气量为0.5-0.8vvm,ph值自然,培养42-48hr;
菌体湿重达到100-150g/L时转种;
S2.发酵罐培养:将所述种子罐培养的小球藻种子液按15%转种于发酵罐中;其中:
发酵罐培养基为:葡萄糖80g/L,麦芽糖浆20g/L,低温豆粕粉12g/L,酵母蛋白胨4g/L,磷酸二氢钾3g/L,尿素1g/L,硫酸镁0.6g/L,维生素溶液2ml/L,人工海盐15g/L;
发酵罐培养条件为:23-26℃,100-150rpm,通气量为0.3-0.5vvm,以氨水控制ph=6.5-6.8,培养至60hr流加麦芽糖浆50g/L,培养周期6-7d;
获得菌体湿重达到300-350g/L,EPA在干菌体的含量达到20-25%。
2.一种EPA的提取方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1.发酵液的预处理:将放罐后的发酵液以微滤膜进行过滤,过滤过程中分批次加发酵液体积为2BV的纯化水,洗去料液中的水溶性杂质,水洗结束后浓缩至原发酵液体积1/2时结束过滤;其中,所述发酵液为如权利要求1所述的一种用于制备生产EPA的小球藻发酵方法中发酵形成的小球藻种子液的发酵液;
S2.预冷:将过滤后的浓缩发酵液转移至储罐中,以冷盐水降温至2-5℃;
S3.高压均质:将经预冷的发酵液转移至30MPa的高压均质机罐中,使小球藻菌体中的脂肪酸破壁分离;
S4.溶媒萃取:将破壁后的发酵液转移至萃取罐中,分别按发酵液体积的2BV、2BV、1BV加入正己烷萃取三次,合并有机相;
S5.浓缩:将萃取后的正己烷转移至浓缩罐,浓缩至无正己烷馏出,得EPA毛油;
S6.脱酸、脱水:将EPA毛油以10%氢氧化钠溶液调ph=10±0.5,缓慢升温至60℃,保温2hr,然后静置沉降皂化粒;将弃去皂化粒的毛油加入10%的软化水洗涤三次,静置分层后弃去水相;水洗后的毛油在真空加热状态下浓缩出毛油残留的水分;
S7.脱色:将脱水后的毛油按3%加入食品级椰壳活性炭,升温至85℃脱色30min,以板框压滤机除去活性炭,降温至室温得成品EPA。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010567785.6A CN111763698A (zh) | 2020-06-19 | 2020-06-19 | 一种用于制备生产epa的小球藻发酵方法及epa的提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010567785.6A CN111763698A (zh) | 2020-06-19 | 2020-06-19 | 一种用于制备生产epa的小球藻发酵方法及epa的提取方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111763698A true CN111763698A (zh) | 2020-10-13 |
Family
ID=72721206
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010567785.6A Pending CN111763698A (zh) | 2020-06-19 | 2020-06-19 | 一种用于制备生产epa的小球藻发酵方法及epa的提取方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN111763698A (zh) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101230364A (zh) * | 2008-02-25 | 2008-07-30 | 清华大学 | 一种利用异养小球藻高密度发酵生产生物柴油的方法 |
CN102433215A (zh) * | 2011-09-22 | 2012-05-02 | 厦门汇盛生物有限公司 | 一种从真菌或藻类中物理破壁提取油脂的方法 |
CN104388179A (zh) * | 2014-10-27 | 2015-03-04 | 山东广博生物技术服务有限公司 | 一种从藻类中提取dha藻油及藻类蛋白的方法 |
-
2020
- 2020-06-19 CN CN202010567785.6A patent/CN111763698A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101230364A (zh) * | 2008-02-25 | 2008-07-30 | 清华大学 | 一种利用异养小球藻高密度发酵生产生物柴油的方法 |
CN102433215A (zh) * | 2011-09-22 | 2012-05-02 | 厦门汇盛生物有限公司 | 一种从真菌或藻类中物理破壁提取油脂的方法 |
CN104388179A (zh) * | 2014-10-27 | 2015-03-04 | 山东广博生物技术服务有限公司 | 一种从藻类中提取dha藻油及藻类蛋白的方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
庄军莲等: "《海洋药物产业发展现状与前景研究》", 31 July 2018, pages: 64 * |
张士娇: "小球藻中二十碳五烯酸对小鼠免疫活性的影响", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库-医药卫生科技辑》, 15 June 2015 (2015-06-15), pages 20 * |
许倩倩等: "利用异养小球藻USTB-01生产二十碳五烯酸的研究", 《化学与生物工程》, no. 08, 25 August 2008 (2008-08-25) * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106636235B (zh) | 一种利用微生物发酵生产dha的方法 | |
CN101519676B (zh) | 用裂殖壶菌发酵生产二十二碳六烯酸的方法 | |
CN102174449A (zh) | 一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用 | |
CN106755151B (zh) | 一种利用微生物发酵生产ara的方法 | |
US20130217085A1 (en) | Methods for improving fermentation yield of polyunsaturated fatty acids | |
CN104278107A (zh) | 一种基于溶氧调控高山被孢霉发酵产花生四烯酸油脂的方法 | |
CN105132485B (zh) | 一种裂殖壶菌发酵生产dha的方法 | |
CN101617828B (zh) | 虾青素食品的制备方法 | |
CN110810655A (zh) | 一种三孢布拉霉饲料添加剂及其应用 | |
CN102887821B (zh) | 一种萃取分离海洋微藻发酵液提取dha的方法 | |
CN113773963A (zh) | 一种高密度高产率的紫球藻培养方法 | |
CN109266698B (zh) | 被孢霉属微生物油脂中脂肪酸组合物成分调整的方法 | |
CN102703525B (zh) | 一种调节发酵液渗透压提高赤藓糖醇产量的方法 | |
CN109371071B (zh) | Dha微生物油脂中脂肪酸组合物成分调整的方法 | |
CN111763698A (zh) | 一种用于制备生产epa的小球藻发酵方法及epa的提取方法 | |
CN110839797A (zh) | 助消化土豆醋饮料及加工方法 | |
CN102352400A (zh) | 微生物发酵植物油脂脱臭馏出物生产植物甾醇的方法 | |
CN101857886B (zh) | 一种木糖醇联产l-阿拉伯糖的制备方法 | |
CN112143770B (zh) | 一种海洋红酵母及其在以秸秆为原料生产β-胡萝卜素中的应用 | |
CN109055456A (zh) | 一种生产、分离以及纯化藻多糖的工艺 | |
CN111057674B (zh) | 一种富硒富多不饱和脂肪酸藻类、制品和制备方法 | |
CN113817793A (zh) | 一种叶黄素提高雨生红球藻中虾青素含量的生产工艺 | |
CN108315381B (zh) | 蛋白核小球藻细胞利用木薯渣为主要原料制备油脂的方法 | |
CN108517338B (zh) | 一种基于活性氧调控高山被孢霉发酵产花生四烯酸油脂的方法 | |
CN111944700A (zh) | 一种破囊壶菌及其在以秸秆为原料生产dha中的应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20201013 |