CN104367744A - 化癥散积颗粒制剂及制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种化癥散积颗粒制剂及制备工艺，由蜈蚣、守宫、半枝莲、大黄、虎杖、山萸肉、醋香附、枸杞制成，适用于癥瘕积聚，证属热毒内蕴、肝肾阴虚者。症见：胁肋疼痛或肋下痞块，或黄疸，五心烦热，腰酸膝软，心烦，易怒，口苦咽干，神疲乏力等。本发明组方以纯中药制剂为主，药物作用迅速，临床症状消失快，毒副作用小，疗程短、痛苦小、费用低，治愈率高，能很快的解除患者的痛苦，具有显著的抗肿瘤效果。

Description

化癥散积颗粒制剂及制备工艺

技术领域

本发明公开一种化癥散积颗粒制剂，本发明还提供了化癥散积颗粒制剂的制备工艺，属于中医制药技术领域。 

背景技术

中医理论认为癥瘕积聚，证属热毒内蕴肝肾阴虚者。症见：胁肋疼痛或肋下痞块，或黄疸，五心烦热，腰酸膝软，心烦易怒，口苦咽干，神疲乏力等。肝癌的发生是由正虚与邪实共存，内因与外因相互作用而产生的病理产物。传统的治疗方法多以扶正祛邪为主，以改善临床症状为主要目的，在抑制肿瘤生长、调节免疫、疗效稳定等方面具有不足和缺欠。 

发明内容

本发明公开一种化癥散积颗粒制剂，解决了目前传统药物抑制肿瘤生长并调节免疫等方面的缺欠。 

本发明还提供了化癥散积颗粒制剂的制备工艺。 

本发明所述的一种化癥散积颗粒制剂，其特征在于是由以下药物按重量份数比制成的： 

蜈蚣3-5g；守宫3-5g；半枝莲15-20g；大黄3-5g；虎杖15-20g；山萸肉10-15g；醋香附15-20g；枸杞15-20g。

本发明所述的化癥散积颗粒制剂的制备工艺，包括以下步骤： 

以上八味中药中，将蜈蚣、守宫净制，酒制焙干，粉碎过80目筛，备用；其余药物加水煎煮3次，每次1.5小时；合并水煎液，滤过，滤液浓缩至浸膏，备用；药渣加70%乙醇提取3次，每次1.0小时；合并提取液，滤过，回收乙醇，滤液减压浓缩（70℃）至浸膏；合并各浸膏，在温度70℃，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛；取浸膏粉加入适量的糊精，乳糖，动物细粉，混合均匀后加入适量90%乙醇制粒；所得颗粒筛去细粉，12目筛整粒，检查，分装即得。

【性状】本品为棕褐色颗粒，味微苦。 

【用法与用量】3次/日，10g~15g/次，冲服； 

【功能主治】化癥瘕散积聚、清热毒补肝肾。适用于癥瘕积聚，证属热毒内蕴、肝肾阴虚者。症见：胁肋疼痛或肋下痞块，或黄疸，五心烦热，腰酸膝软，心烦，易怒，口苦咽干，神疲乏力等。

本发明是基于我国中医学对肿瘤疾病的总体认识和现代医学对本症发病机理及治疗原则，化癥瘕散积聚、清热毒补肝肾，适用于癥瘕积聚，证属热毒内蕴肝肾阴虚者。症见：胁肋疼痛或肋下痞块，或黄疸，五心烦热，腰酸膝软，心烦易怒，口苦咽干，神疲乏力等。能抑制肿瘤细胞生长，增强人体免疫力，提高患者生活质量，延长患者生命的作用。 

本发明的药理药效及方解如下：

蜈蚣味辛，性温，主息风止痉、解毒散结、通络止痛；守宫味咸、性寒，主祛风、定惊、散结、止痛、解毒。二药合用，共奏化癥瘕散积聚为君。虎杖味苦、性寒，主利胆退黄、清热解毒、活血祛瘀；半枝莲味辛苦、性寒，主热毒痈肿，二药清热解毒，散结止痛；醋香附味辛、性平，主理气解郁，消积止痛；大黄味苦、性寒，主泻热通肠、凉血解毒，二药理气解郁、泻下排毒以使邪有出路、又可止痛。四药助君药之功为臣。山萸肉味酸、微温，补益肝肾；枸杞味甘、性平，滋养肝肾，润肺。二药合用可补肝肾，共为佐使。纵观全方治标而不忘本，标本兼顾，攻邪而不留邪，邪去自有出路，补中有泻，散里寓收，攻而无过，充分体现了中国传统医学见证立法定方妙谛。全方共奏化癥瘕散积聚，清热毒补肝肾之功。

观察40例消化道恶性肿瘤患者随机分为治疗组和对照组。治疗组用本发明药物联合全身化疗，并与单纯化疗组进行对照，两组化疗方法相同。按WHO实体瘤客观疗效评价标准及采用EORTC QLQ- C30（ V3.0）对40例患者治疗前后症状和生活质量的改进进行评价。 

治疗2疗程后，治疗组近期有效率为45%，对照组为35%，无显著差异（P>0.05）。患者躯体功能和整体生活质量评分均值显著增加（P<0.05）. 全身症状（乏力和食欲不振）以及疾病相关症状（气促、疼痛、便秘）评分的均值显著降低（P<0.05）。 

治疗后乏力、食欲不振、疼痛有效率均超过 50%。 

结论：本发明药物对中晚期消化道恶性肿瘤患者有改善临床症状及提高生活质量的作用。近年有学者研究表明，虎杖中白藜芦醇可抑制癌变过程中细胞和组织变异，成为预防、抑制和治疗组织癌变和肿瘤发生的研究热点。 

本发明的积极效果在于：组方以纯中药制剂为主，药物作用迅速，临床症状消失快，毒副作用小，疗程短、痛苦小、费用低，治愈率高，能很快的解除患者的痛苦，具有显著的抗肿瘤效果。 

具体实施方式

以下实施例的内容从本发明的药物组成和制备工艺上对本发明进行了详细的论述,该描述属于说明性而非限定性的,在此之外还可举出若干个实例,因此在不脱离本发明总体构思下的修改,应属本发明的保护范围之内。 

实施例1

将蜈蚣5g、守宫5g净制，酒制焙干，粉碎过80目筛，备用；半枝莲20g、大黄5g、虎杖20g、山萸肉15g、醋香附20g、枸杞20g加水煎煮3次，每次1.5小时；合并水煎液，滤过，滤液浓缩至浸膏，备用；药渣加70%乙醇提取3次，每次1.0小时；合并提取液，滤过，回收乙醇，滤液减压浓缩（70℃）至浸膏；合并各浸膏，在温度70℃，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛；取浸膏粉加入适量的糊精，乳糖，动物细粉，混合均匀后加入适量90%乙醇制粒；所得颗粒筛去细粉，12目筛整粒，检查，分装即得。

实施例2

将蜈蚣4g、守宫4g净制，酒制焙干，粉碎过80目筛，备用；半枝莲18g、大黄4g、虎杖18g、山萸肉13g、醋香附18g、枸杞18g加水煎煮3次，每次1.5小时；合并水煎液，滤过，滤液浓缩至浸膏，备用；药渣加70%乙醇提取3次，每次1.0小时；合并提取液，滤过，回收乙醇，滤液减压浓缩（70℃）至浸膏；合并各浸膏，在温度70℃，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛；取浸膏粉加入适量的糊精，乳糖，动物细粉，混合均匀后加入适量90%乙醇制粒；所得颗粒筛去细粉，12目筛整粒，检查，分装即得。

实施例3

将蜈蚣3g、守宫3g净制，酒制焙干，粉碎过80目筛，备用；半枝莲15g、大黄3g、虎杖15g、山萸肉10g、醋香附15g、枸杞15g加水煎煮3次，每次1.5小时；合并水煎液，滤过，滤液浓缩至浸膏，备用；药渣加70%乙醇提取3次，每次1.0小时；合并提取液，滤过，回收乙醇，滤液减压浓缩（70℃）至浸膏；合并各浸膏，在温度70℃，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛；取浸膏粉加入适量的糊精，乳糖，动物细粉，混合均匀后加入适量90%乙醇制粒；所得颗粒筛去细粉，12目筛整粒，检查，分装即得。

    

本发明化癥散积颗粒对H22荷瘤原位肝癌小鼠模型干预作用的实验

实验1：H22荷瘤原位肝癌小鼠模型制备

1  材料与造模方法  

瘤株：小鼠H22肝癌瘤株，中国协和药物所提供。

实验动物：清洁级小鼠100只，雌雄各半，6-8周龄，体质量18-22g,由吉林大学实验动物中心提供，动物合格证号：ICR200702。   

1.1.4  实验药品：

本发明实施例1~实施例3化癥散积颗粒；

阳性药物对照：复方斑蝥胶囊   厂家：贵州益佰制药股份有限公司。  

1.2 实验方法

1.2.2 癌株复苏及传代 

取小鼠H22肝癌细胞株，解冻，离心，弃除上清液；加入生理盐水，配成生理盐水：细胞悬液=1：2的比例，取0.5ml细胞悬液接种于小鼠腹腔内，共4只；将寄主小鼠下腹部用75﹪酒精消毒，7天后，小鼠按腹腔注射方式捉持，将准备好的无菌注射器插入腹腔，吸出细胞悬液（根据实际情况转动针头）；将细胞悬液采用腹腔注射的方式注入下一代寄主小鼠体内（0.2ml/只）。

1.2.3  制备肝癌模型 

取腹腔接种有传第三代H22细胞7天的昆明种小鼠，脱椎处死，75﹪酒精浸泡1min；无菌条件下打开腹腔，抽取H22肝癌腹水；生理盐水洗涤，离心1000 r/min，5min弃上清，台盼蓝染色计数，活细胞＞95﹪，调整细胞浓度，生理盐水调整细胞数至1×108/ml；1﹪戊巴比妥钠（0.1ml/10g体重）腹腔注射麻醉小鼠；小鼠仰卧，固定于鼠板，备皮，常规消毒，于上腹正中剑突下作一约1cm的切口，轻压双侧肋弓以挤出部分肝叶，湿纱布垫于肝叶下方以保护；然后用0.25ml医用注射器针头沿肝叶长轴方向插入缓慢注入H22肝癌细胞悬液0.03ml（细胞数为3×106）。在拔出针头的同时，迅速用棉签轻压1min止血，然后在针眼周围用酒精棉球轻搽。小心地将肝脏回纳入腹腔，缝合切口，再次用酒精擦拭防感染。术后小鼠正常饮水、进食。 

1.2.4  动物分组及给药 

将瘤源小鼠分为5组，每组20只。实验分组如下：模型组（或Mock组）；斑蝥组（或FB组）；化癥散积颗粒低剂量组（或Low组）；化癥散积颗粒中剂量组（或Medium组）；化癥散积颗粒高剂量组（或High组）；化癥散积颗粒低、中、高剂量用法为：1.95g/kg，3.9g/kg，7.8g/kg，灌胃1次/天，连续给药14天，复方斑蝥胶囊用法为：0.19g/kg，灌胃1次/天，连续给药14天。模型组生理盐水每天灌胃1次，连续14天，造模后第二天开始给药，于末次给药24小时后，先摘眼球取血，脱椎处死小鼠，取肿瘤组织。

2  模型制备成功判断指标 

2.1每日记录动物体重，进食量，观察小鼠每日活动状态，死亡数量，死亡予以尸检。一般情况每日观察小鼠的自主活动，精神状态，毛发，呼吸，饮食，粪便及对外界刺激的反应。 

2.1.2  形态学指标 

肝体重比：末次给药24小时后脱椎处死小鼠，取肝脏称重，肝脏带瘤组织放入液氮保存，以备肝癌组织脱水做病理切片，常规HE染色用。

肝指数（肝体重比）=肝脏重量（mg）/体重（ g） 

2.1.3  解剖观察 

末次给药24小时后，处死小鼠取肝脏，肉眼观察癌灶生长情况。（造模图片附后）

实验2：化癥散积颗粒对H22荷瘤原位肝癌小鼠模型肝脾指数的影响

1  实验材料实验动物同实验1；

2  实验方法

2.1  分组及给药 同实验1

免疫器官脏器指数是衡量机体免疫功能的观察指标。脾脏是机体重要的免疫器官。脾脏中B淋巴细胞比例较大，与体液免疫关系密切。因此该指标说明增强免疫功能是抗肿瘤的可能途径之一。

免疫评价指标  免疫功能低下状态，如脾脏异常变大，IL-2水平下降。末次给药后次日称体重，处死小鼠，剥离脾脏称重，按下列公式计算脾指数。 

脾指数=脾脏重量（mg）/体重（g） 

肝指数：末次给药24小时后脱椎处死小鼠，取肝脏称重，肝脏带瘤组织放入液氮保存，以备肝癌组织脱水做病理切片，常规HE染色用。肝指数=肝脏重量（mg）/体重（g）

3  实验结果

表1  肝脾指数检测

※p＜0.05,       ※※p＜0.01,      ※※※p＜0.001，与模型组相比

每组保留十个较好的数据，得出结果为（用t检验法）：（1）各组与模型组相比斑蝥组肝指数p=1.71409E-05＜0.001有极显著性差异，脾指数p=0.00457＜0.01有显著性差异，证明斑蝥组对肝癌小鼠有治疗作用，且效果显著：本发明化癥散积颗粒中剂量组脾指数p=0.03＜0.05，有明显差异，脾指数p=0.000321＜0.001有极显著性差异，本发明化癥散积颗粒高剂量组肝指数p=0.04＜0.05，有明显差异，脾指数p=0.024＜0.05，有差异，化癥散积颗粒低剂量组肝指数p=0.934＞0.05，无差异，脾指数p=0.008＜0.01有显著性差异。根据表3分析，化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组与模型组相比有明显的治疗作用；化癥散积颗粒各组及斑蝥组小鼠较模型组免疫功能显著提高，有统计学意义。

实验3：化癥散积颗粒对H22荷瘤原位肝癌小鼠模型白细胞介素2（IL-2）的影响

1  实验材料：实验动物 同实验1

2  实验方法

2.1  样品收集、处理及保存方法

    ⑴ 血清   操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

    ⑵ 血浆   EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 

    ⑶  细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 

    ⑷ 保存   如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中有大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 

2.2  检测方法 

⑴准备：试剂盒从冰箱取出，置于室温，复温平衡30分钟。     ⑵配液：20倍浓缩洗涤液用蒸馏水稀释成原倍的洗涤液。     ⑶加标准品和待测样本：将足够数量的酶标包被板固定在框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本 10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5 倍）。     ⑷温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30分钟。     ⑸洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。     ⑹加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。     ⑺温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30分钟。     ⑻洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。     ⑼显色：每孔先加入显色剂 A 液 50μL，再加入显色剂 B 液 50μL，平板混匀器混匀 30s（或用手轻轻震荡混匀30s），37℃避光显色 15分钟。     ⑽终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。     ⑾以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm 波长测量各孔的吸光值（OD值）。     ⑿计算：根据标准品的浓度及对应的OD 值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

3  实验结果 

白细胞介素2（IL-2）定量检测

表2  白细胞介素 2（IL-2）定量检测

※p＜0.05, 与模型组比较

白介素2检测结果分析，白细胞介素2在化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组与模型组相比较有明显差异。可说明化癥散积颗粒中、高剂量组及斑蝥组比模型组小白鼠的免疫功能有明显增强。

实验4 化癥散积颗粒对H22荷瘤原位肝癌小鼠模型细胞凋亡的研究

1  实验材料

1.1  实验动物 同实验一

2 实验方法

2.1  HE 染色观察小鼠肝脏的形态学变化

2.1.3  病理检查     

    光镜观察  取原发瘤和转移瘤组织后，将瘤组织切割成1 mm3大小的碎块，放于2%戊二醛中前固定，俄酸后固定，乙醇逐级脱水，环氧树脂包埋、渗透、加温聚合，超薄切片机上切片，厚度为1μm，在扫描电子显微镜下观察并成像，观察细胞坏死和细胞凋亡的形态学变化。

2.2  TUNEL观察肿瘤组织晚期凋亡 

3  实验结果

3.1  HE染色

在光镜下我们可以看到：模型组可以看到较大肿瘤癌灶，癌细胞弥漫浸润，无明显边界，排列紧密，间质少，可见少量瘤巨细胞和坏死灶。化癥散积颗粒低剂量组可以观察到肿瘤多灶，中心有坏死，与模型组相比无明显差别。化癥散积颗粒中剂量组和高剂量组及斑蝥组肿瘤癌灶与模型组相比减小，且与正常肝组织边界较清楚。

TUNEL染色检测晚期凋亡细胞 

在荧光显微镜下观察发现，200倍镜下视野数凋亡阳性细胞数。结果显示：实验组细胞凋亡率均明显增加，各组与模型组相比具有明显差异（P<0.05, n=5）。其中，化癥散积颗粒中剂量组和高剂量组及斑蝥组与模型组相比，具有显著性差异（P<0.01, n=5），肿瘤范围视野凋亡细胞明显增加；化癥散积颗粒中剂量和高剂量组及斑蝥组，组间比较，凋亡无显著性差异（P﹥0.05, n=5）。

结论：

本发明化癥散积颗粒中、高剂量组和斑蝥组可增强免疫，且有效抑制原位肝癌模型小鼠肿瘤生长。化癥散积颗粒中、高剂量组和斑蝥组可诱导肝癌细胞发生凋亡。化癥散积颗粒中、高剂量组和斑蝥组诱导肝癌细胞发生凋亡可能是通过抑制Bcl-2基因表达，同时增加Bax表达，继而激活Caspase-9，使Caspase-9活化片段增多，最终激活凋亡效应蛋白Caspase-3，从而引发一系列凋亡级联反应。

Claims (3)

1.一种化癥散积颗粒制剂，其特征在于是由以下药物按重量份数比制成的：

蜈蚣3-5、守宫3-5、半枝莲15-20、大黄3-5、虎杖15-20、山萸肉10-15、醋香附15-20、枸杞15-20g。

2. 根据权利要求1所述的化癥散积颗粒制剂，其优选配比为：

蜈蚣4、守宫4、半枝莲18、大黄4、虎杖18、山萸肉13、醋香附18、枸杞18。

3. 根据权利要求1或2所述的化癥散积颗粒制剂的制备工艺，包括以下步骤：

将蜈蚣、守宫净制，酒制焙干，粉碎过80目筛，备用；其余药物加水煎煮3次，每次1.5小时；合并水煎液，滤过，滤液浓缩至浸膏，备用；药渣加70%乙醇提取3次，每次1.0小时；合并提取液，滤过，回收乙醇，滤液减压浓缩（70℃）至浸膏；合并各浸膏，在温度70℃，真空干燥，干浸膏粉碎过80目筛；取浸膏粉加入适量的糊精，乳糖，动物细粉，混合均匀后加入适量90%乙醇制粒；所得颗粒筛去细粉，12目筛整粒，检查，分装即得。