CN104364220A - 矿物性索玛瑅提取方法及利用其的多功能尖端材料制造方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及利用从自然界出产的矿物提取的矿物类索玛瑅量子能量生物体(Quantum Energy Living Body:QELBY)的康复多功能天然凝胶制造方法。根据本发明,分离培养存在于矿物中的矿物性索玛瑅并将培养出的矿物性索玛瑅与陶瓷粉末融合,从而没有危害性和对生物体的副作用,具有抑制癌细胞、增强免疫力,皮肤再生在内的自我发热,冰凉感,VOC去除,屏蔽吸收有害电磁波等功能,并通过发酵及熟成来促进,从而具有增加香味及增加有益成分的效果。
Description
技术领域
本发明涉及矿物性索玛瑅(Somatid)提取方法及利用其的多功能尖端材料制造方法。更为具体地涉及一种矿物性索玛瑅提取方法及利用其的多功能尖端材料制造方法,其分离培养存在于矿物中的矿物性索玛瑅并利用培养出的矿物性索玛瑅,从而没有危害性和对生物体无副作用,具有抑制癌细胞、增强免疫力,皮肤再生在内的自我发热、冰凉感、VOC去除、有害电磁波屏蔽吸收功能。
背景技术
一般,就索玛瑅而言,与巴斯德(Pasteur)同一时代的贝尚(Bechamp)发现成为发酵的根源的小生命体并称之为小生命体(tiny body)或具有发酵体的意思的麦可柔载玛(Microzyma),并且将其描述为作为引起发酵的生命体,有了它才能产生发酵,而人类制造出的纯粹的材料中不存在,并且不会死灭,在自然界中负责生成和消灭的过程,存在于生命体的独立的解剖因素、血液的第三构成要素。
与此同时,贝尚还表示麦可柔载玛还存在于天然矿物之中,但除了发酵之外,没有表明其特性或应用。
另外,贝尚之后,恩德·莱恩(Gunther Enderlein)、克劳德·伯纳德(Claude Bernard)、威廉·赖希(Wilhelm Reich)、罗耶·莱福(RoyalReif)、弗吉尼亚·利文斯顿·惠勒(Virginia Livingston-Wheeler)等发表类似的研究结果,而加拿大的加斯顿纳森(Gaston Naessens)博士利用自己开发的30,000X以上的特殊光学显微镜观察血液时发现非常小的生命体,并将其命名为索玛瑅。
另外,加斯顿纳森以倾其一生的数十年的研究结果为基础,发表了索玛瑅的如下特性:
1、索玛瑅是DNA的前体(precursor),而这表明索玛瑅是物质分子和表现生命体特性的DNA之间的连接体。
2、被认为物质和生命的中间阶段的病毒,只在有宿主的情况下才能继续存在,但即使没有外部的营养供应,索玛瑅仍能独立存在。具有在生命体或玻璃(glass)中生存的特性。
3、索玛瑅是能量的凝结体(concretization of energy),因为有了它才能生成诱导细胞分裂的细胞营养质(trephone),所以没有它就不能进行细胞分裂。因此,索玛瑅成为生命的根源。
4、虽然没有DNA或RNA,索玛瑅也包含有遗传信息。病毒只包含DNA粒子或碎片,但索玛瑅是诱导DNA生成的前体。
5、通常具有电气特性,索玛瑅的核带正电,膜带负电。虽然具有与细胞类似的特性,但具有比细胞小的0.2m以下的大小,是生命体的最小基本单位。
6、因为是最小的活着的能量凝结体(tiny living condensers of energy),是比干细胞更根源性的生命单位,因此,具有与干细胞类似的应用前景。
7、可以亚细胞(subcellular)的状态再生,产生200℃以上的碳化从而即使在高温中也不会被杀灭,耐强酸,50,000rem的放射线中不会被杀灭,在干燥状态下成为与结晶类似的形态,具有钻石、刀等也不能切断的强度,直至遇到合适的环境为止可以类似孢子的形态存活数百万年。
获得可为人体提供上述积极作用的索玛瑅的方法曾公开在日本公开专利第2006-166738号(2006.06.29)。
上述先行专利通过古代索玛瑅的采集方法来获得索玛瑅,所述采集方法的特征在于包括如下工艺:将贝壳化石加工成0.1~5μm粒径的微粒;相对于上述1g的贝壳化石微粒,以至少5cc的比率与水进行混合;将上述微粒和水的混合液至少静置4小时;从上述静置4小时的混合液分离以碳酸钙为主要成分的沉淀物和上层清液,以此清液作为含有古代索玛瑅的水。
但是,在现有技术中,用于获取索玛瑅的材料限于古代贝壳化石,而且,获取量也非常小,因此,作为单纯的研究目的尚可应用,但很难作为获取实际生活中所需索玛瑅的方法。
另外,最近首尔大学的苏光燮教授小组经研究发表多篇论文的凤汉管(Bonghan Ducts)、酸粒(Sanal)与细胞增殖的相关性,具有与索玛瑅类似的方面。
根据上述现有技术的索玛瑅,通过利用存在于人体或动植物生物体内的索玛瑅进行研究,但因生物体环境的特点,难以大量培养提取索玛瑅,不能作为复合索玛瑅的材料使用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之不足提供复合多功能尖端材料,其分离培养存在于矿物中的矿物性索玛瑅并将培养出的矿物性索玛瑅与天然植物提取物混合,从而通过矿物性索玛瑅通过生命活动产生的能量作用,提供没有危害性和对生物体的无副作用、具有抑制癌细胞、增强免疫力、皮肤再生在内的自我发热、冰凉感、VOC去除、有害电磁波屏蔽吸收功能的复合多功能尖端材料。
本发明的另一目的在于,更便捷、更低廉、更容易地大量生产复合多功能尖端材料,其混合有生命活动旺盛、包括治疗等在内的各种功能卓越、在1,000℃的高温中加热10小时也不会被杀灭而仍能生存活动的量子能量生物体(Quantum Energy Living Body:QELBY)(矿物性索玛瑅)和由各种微生物材料构成的天然植物提取物。
本发明的目的在于,利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料而制造用于癌症、糖尿病、血压病、脑卒中、艾滋病、帕金森综合症、代谢性疾病、心脏病及器官移植的药物、生物产品及食品。
本发明的目的在于,利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料而制造用于雷达屏蔽、吸收、武器散热涂布剂、国防武器、非武器相关复合材料及宇宙飞船、飞机、船舶、汽车的复合材料。
本发明的目的在于,利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料制造水泥、瓷砖、砖、涂料、保暖材料、地板材料、窗户等其他建筑材料,土壤改良剂、环保肥料、农药、塑料保暖材料等农业材料。
本发明的另一目的在于,利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料制造用于改善水质、防止绿藻、净化废水、净化毒烟、改善白化现象、净化油脂的材料。
本发明的另一目的在于,利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料制造IT、电子、半导体、LCD、LED、3D等尖端材料用复合材料。
本发明的另一目的在于,利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料制造纤维、服装、化学及高分子材料。
为达到上述目的,本发明提供一种矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于,包括:(a)矿物采集步骤,从地下采集不包含对生物体有害的重金属或放射性物质的无污染的天然矿石;(b)矿物粉碎步骤,将上述采集的天然矿石粉碎成320目~2纳米的粒子以形成粉末状;(c)矿物粉末提纯步骤,从粉末状的矿石粉末中提纯及分离对生物体有害的重金属及放射性物质;(d)矿物粉末燃烧步骤,燃烧经提纯的矿物粉末,以改变矿石本身的质量、比重、电子数、离子数等;(e)混合及发酵工艺步骤,以一定比率混合经燃烧的矿物粉末和H2O及天然植物提取物,并将混合的矿物混合粉末发酵一定时间以提高矿物性索玛瑅和微生物的活性;(f)灭菌干燥步骤,对熟成发酵的矿物混合粉末进行灭菌干燥;(g)混合粉末培养步骤,向经干燥的矿物混合粉末添加添加溶液并向添加溶液的矿物混合粉末添加培养基进行培养;(h)矿物性索玛瑅提取步骤,从上述(g)步骤中培养出的矿物混合粉末中分离提取微生物,并对提取出的微生物中包含的矿物性索玛瑅进行分离提取。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,上述天然矿石为复合SiO2、Al2O3、Fe2O3、MgO3等无机物的矿石。
另外,在本发明的含有矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料的制造方法中,上述(d)步骤的矿物粉末燃烧步骤,包括:第一次燃烧工艺,以50℃~300℃的温度加热2~3小时来进行焙烧;第二次燃烧工艺,完成第一次燃烧工艺之后,将经第一次燃烧的天然矿石以300℃~850℃的温度加热30分钟~10小时来实现第二次燃烧。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,在上述(e)步骤的混合工艺步骤中,将70%的粉碎成320目~2纳米大小的矿物粉末、25%的H2O及5%的无毒性植物的根、茎、叶的提取物进行混合,以制成矿物混合粉末。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,在上述(e)步骤的发酵步骤中,将上述矿物混合粉末放入容器中之后,在-10℃~200℃范围的温度下熟成10~90天进行发酵,以提高矿物性索玛瑅及微生物的活性。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,上述矿物混合粉末中的矿物粉末,只选用粉碎成320目~2纳米大小之后去除重金属及有害成分的状态的粉末。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,在上述(f)步骤的灭菌及干燥步骤中,在焙烧炉内以180℃以下的高温旋转30分钟~2小时进行灭菌,并以150℃~200℃的温度进行干燥。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,在上述(g)步骤中,将经干燥的矿物混合粉末放入容器之后,添加混合有一定量的水、蒸馏水、磁化水、葡萄糖或糖类的溶液并在添加溶液的矿物混合粉末中添加糖类或用于培养微生物的培养基,并进行1小时以上的培养。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,培养上述微生物的培养条件为:具备酵母提取物基本培养基(YEM(Yeast Extract Minimal)medium)、胰酶大豆肉汤培养基(TSB(Tryptic Soy Broth)medium)、M9培养基(M9medium)、路尼亚肉汤培养基(LB(Luria broth)medium)等培养基,以温度范围为30℃~37℃的范围实现培养,而在培养基中,构成YEM的组合物含有Na2HPO4·12H2O 3.5g、K2HPO41.0g、MgSO4·7H2O 0.03g、NH4Cl 0.5g、酵母提取物(Yeast extract)4.0g、石花菜(Agar)15.0g、蒸馏水(Distilled water)1.0L。
另外,在本发明的矿物性索玛瑅提取方法中,在上述矿物性索玛瑅提取步骤中,只提取在1,000℃以上的高温中进行10小时以上的高压蒸汽灭菌之后也仍存活并进行生命活动从而散发能量的矿物性索玛瑅。
如上所述,根据本发明,分离培养存在于矿物中的矿物性索玛瑅并将培养出的矿物性索玛瑅与粉末混合,从而没有危害性和对生物体的副作用,可抑制癌细胞、增强免疫力,皮肤再生在内的自我发热,冰凉感,VOC除臭,屏蔽吸收有害电磁波等,通过发酵及熟成来促进,从而具有增加香味及增加有益成分的效果。
另外,根据本发明,更便捷,更低廉,更容易地大量生产复合多功能尖端材料的效果,上述尖端材料将生命活动旺盛,且具有治疗等各种功能的量子能量生物体(矿物性索玛瑅)和由在1,000℃的高温中加热10小时也不会被杀灭的各种微生物材料所构成的陶瓷粉末进行混合。
另外,根据本发明,本发明的包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料容易与纤维、化学物质等高分子材料混合,并可与铁、非铁金属、陶瓷等用于工业的物质混合制成复合材料。
另外,根据本发明,不攻击或杀灭有利于生物体或不对活体产生有害作用的细胞或微生物,在高温或极限环境中保护生存,而且,抑制(抗菌)对生物体有害的病原性细菌或对抗生素产生耐药性的超级细菌(super bacteria)。
另外,根据本发明,与高分子材料、金属材料、无机材料、有机材料等各种材料结合以增强材料本身的特性,起到催化剂的作用,而且,抑制氧化作用,使其还原。
另外,根据本发明,可利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料来制造用于癌症、糖尿病、血压病、脑卒中、艾滋病、帕金森综合症、代谢性疾病、心脏病的治疗及器官移植的药物、生物产品及食品,从而健康地治疗人类、动物及植物。
另外,根据本发明,本发明利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料来制造用于雷达屏蔽、吸收、武器散热涂布剂、国防武器、非武器相关复合材料及宇宙飞船、飞机、船舶、汽车用复合材料,从而为世界的经济发展及创造就业做出重大贡献。
另外,根据本发明,可利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料来制造制造IT、电子、半导体、LCD、LED、3D等尖端材料用复合材料,从而为世界的经济发展及创造就业做出重大贡献。
另外,根据本发明,可利用包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料来制造纤维、服装、化学、高分子材料,从而提供便于生活的服装。
附图说明
图1为表示根据本发明优选实施例的利用矿物性索玛瑅量子能量生物体(QELBY)的复合多功能尖端材料制造方法的顺序图;
图2至图4为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对肿瘤细胞活性的影响、及对活性化免疫细胞增殖的影响的图;
图5为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的创伤治疗效果试验中治疗经过状态的图;
图6为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对真皮损伤的伤口治疗经过的图表;
图7为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的皮肤损伤实验中治疗经过的图;
图8为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的皮肤损伤时创伤治疗能力的图表;
图9为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的体重比较分析的图表;
图10为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅为治疗关节炎的试料处理状态的图;
图11为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对关节炎严重程度的影响的经过图;
图12为表示通过根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的关节炎缓和程度的表格;
图13及图14为根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅与炎症性细胞活素(Cytokine)相关的测量图表及表格;
图15为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对促进成长的影响的表格及各喂养组个体的消化器官比较图;
图16及图17为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅在血清中抗原特异性抗体测量结果图表;
图18为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对多种药物抗药性病原菌(超级细菌)的抗菌效果的测量结果图表;
图19为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的抗氧化效果实验过程中实验刚结束后的情况的图;
图20及图21为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的抗氧化效果实验过程中实验结果的图;
图22至图24为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的除VOC、除氨(ammonia)实验结果的图;
图25及图26为表示用于进行根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的电磁波吸收能力及电磁波屏蔽率实验的包含矿物性索玛瑅的面板的图;
图27至图29为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的电磁波吸收能力实验结果的图;
图30为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的电磁波屏蔽率实验结果的图;
图31为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的发热能力实验结果的图;
图32至图34为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的自我电流充电与否的实验结果的图。
图35至图37为表示通过根据本发明实施例的图3所示的方法进行二次培养的矿物类索玛瑅量子能量生物体和微生物种的探索及功能性分析结果的图。
具体实施方式
下面,结合附图对本发明的优选实施例进行详细说明。需要注意的是在给各附图中的结构赋予标号时,即使在不同的图中,也尽量给相同的结构赋予相同的标号。另外,在详细说明本发明的过程中,若认为对相关已公开功能或结构的具体说明有碍于对本发明的理解,则将省略其详细说明。
图1为表示包括有根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料制造方法的顺序图。
本发明的复合多功能尖端材料复合有由生命活动旺盛并治疗等各种功能卓越的量子能量生物体(矿物性索玛瑅)和在1,000℃的高温中加热10小时也不会被杀灭的各种微生物材料构成的陶瓷粉末材料,为了更便捷、更低廉、更容易地大量生产所述复合多功能尖端材料,本发明的所述复合多功能尖端材料实施如图1所示的工艺。
执行从地底下采集不含有对生物体有害的重金属或放射性物质且未被污染的天然矿石的矿物采集步骤,而所述天然矿石中复合有SiO2、Al2O3、Fe2O3、MgO3等无机物。(S110)
另外,执行将含有SiO2、Al2O3、Fe2O3、MgO3等诸无机物的天然矿石粉碎成320目(mesh)~2纳米粒子而构成为粉末形态的矿物粉碎步骤。(S120)
与此同时,完成矿物粉碎之后,执行从粉末形态的矿石粉末中提纯及分离对人体有害的重金属和放射性物质的矿物粉末提纯步骤。(S130)
另外,执行为了改变矿石本身的质量、比重、电子数、离子数而对完成提纯的矿物粉末进行燃烧的矿物粉末燃烧步骤。(S140)
矿物粉末燃烧步骤包括:第一次燃烧工艺,其通过50℃~300℃的温度加热2~3小时来进行焙烧;和,第二次燃烧工艺,其中,完成所述第一次燃烧工艺之后,将经第一次燃烧的天然矿石以300℃~850℃的温度加热30分钟~10小时以便实现第二次燃烧。
之后,执行如下的混合及发酵工艺步骤:在经燃烧的矿物粉末中以一定比率混合H2O、及天然植物提取物中的石花菜提取物而得到矿物混合粉末,并将所述矿物混合粉末发酵一定时间以提高矿物性索玛瑅和微生物的活性。(S150)
在混合及发酵工艺步骤中,混合粉碎成320目的矿物粉末70%、H2O25%及由石花菜构成的天然植物的根、茎、叶提取物5%并放在容器中之后,在熟成库中以-10℃~200℃的温度熟成10~90天进行发酵,以提高矿物性索玛瑅和微生物的活性。
此时,就矿物混合粉末而言,只提取粉碎至320目的大小并去除重金属及有害成分的状态的粉末而加以使用。
另外,执行如下灭菌干燥步骤:将熟成发酵的矿物混合粉末在焙烧炉中在180℃以下的高温旋转30分钟~2小时,并利用干燥器以150℃~200℃的温度进行干燥以进行灭菌干燥。
之后,执行如下的陶瓷混合粉末培养步骤:将经干燥的矿物混合粉末放在容器之后,添加一定量的添加有水、蒸馏水、磁化水、葡萄糖或糖类的溶液,并向添加有溶液的矿物混合粉末添加用于培养包含于矿物混合粉末的糖类或微生物的培养基,并进行1小时以上的培养。(S170)
另外,本发明中的用于培养微生物的培养条件为:具备YEM(Yeast Extract Minimal)培养基(medium)、TSB(Tryptic Soy Broth)培养基(medium)、M9培养基(medium)、LB(Luria broth)培养基(medium)等培养基,温度范围为30℃~37℃。
另外,在培养基中,构成YEM的组合物以如下成分构成:Na2HPO4·12H2O3.5g,K2HPO41.0g,MgSO4·7H2O 0.03g,NH4Cl 0.5g,酵母提取物(Yeastextract)4.0g,石花菜(Agar)15.0g,蒸馏水(Distilled water)1.0L。
与此同时,执行如下的微生物提取步骤:从经培养的含有SiO2、Al2O3、Fe2O3、MgO3的陶瓷混合粉末中,分离提取将在1,000℃以上的高温中进行10小时以上的高压蒸汽(autoclave)灭菌之后也仍存活并进行生命活动从而散发能量的矿物性索玛瑅(量子能量生物体)包括在内的多种微生物。(S180)
另外,执行分离提取包含于所提取的微生物中的矿物性索玛瑅的步骤。(S190)
另外,为了掌握根据上述步骤所提取的矿物性索玛瑅的功能及效果,进行如下实验。
[实验1]
-矿物性索玛瑅分别对大肠癌细胞及胃癌细胞等肿瘤细胞活性的影响,及对活化免疫细胞增殖的影响
为对本发明的矿物性索玛瑅对肿瘤细胞活性的影响利用人的肿瘤细胞株进行研究,与此同时,为确认对免疫细胞的活化状态的影响而进行如下实验。
1、癌细胞及实验组的构成
利用如下癌细胞株来分析用于与添加矿物性索玛瑅的组对照的添加有锗(germanium)的组中的细胞活性状态。
(1)癌细胞株
-SNU1:人类胃癌细胞株(human gastric cancer)
-SNUC2A:人类大肠癌细胞株(human colon cancer)
实验物质选用矿物性索玛瑅和作为石粉对照组的锗凝胶制剂及以1:1的比例向与量子能量相关的矿物性索玛瑅混合阳地植物的试料。
【表1】
未处理组 |
矿物性索玛瑅处理组 |
锗处理组 |
矿物性索玛瑅+阳地植物处理组 |
<矿物性索玛瑅的抗癌效果实验组>
2、培养癌细胞
用于实验的肿瘤细胞株,放入适当的培养液(RPMI 1640,10%FBS;GIBCO Inc.,USA)中并在37℃温度下,在5%的CO2的培养条件中维持。将矿物性索玛瑅凝胶(gel)及作为析组对照组的锗凝胶(gel)根据浓度按实验计划向所培养的细胞板(plate)分注。此时,细胞根据细胞株确定浓度,并在96孔板(96-well plate)中进行培养。培养3天,以24小时为间隔,通过细胞数分析及生存率分析来确认癌细胞数的增加或减少。对生存率,利用CCK-8检测试剂盒(CCK-8assay kit,Dojindo Molecular Technologies,Inc.,USA)来测量OD450值,并将未处理对照组定为100%之后,通过与未处理组的相对比较来进行量化。
SNUC2A细胞以3.3X 104细胞(cells)/ml的浓度向96孔板以100μl/孔(well)的比例分注之后,将矿物性索玛瑅及锗以每孔(well)0.25mg/ml的浓度进行处理。
SNU1细胞以1X 105细胞(cells)/ml的浓度向96孔板以100μl/孔(well)的比例分注之后,将矿物性索玛瑅及锗以每孔1.0mg/ml的浓度进行处理。
在本实验中,除矿物性索玛瑅和锗试料之外,还选用以1:1的比例向矿物性索玛瑅混合阳地植物的试料。
3、正常免疫细胞的培养及活化
作为正常免疫细胞,从约20周龄的BALB/c小鼠(中央实验动物,韩国)提取脾脏细胞,在RPMI 1640中,以37℃的温度下,在5%的CO2的培养条件下最大限度地进行培养。
在2X106细胞/ml的浓度下,脾脏细胞,用伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A;ConA;Sigma Chemical Co.,USA)以2.5μg/ml的浓度进行处理并培养3天,所述伴刀豆球蛋白A为作为细胞活性诱导物质的有丝分裂原(mitogen)。以24小时为间隔测量细胞数,而与癌细胞的情况一样,生存率利用CCK-8检测试剂盒(CCK-8assay kit)测量吸光度,并将未处理对照组定为100%之后,通过与未处理组的相对比较显示出来。
在各实验中,所有实验都进行三份(triplicate),并求得平均值及标准偏差。而且,根据需要进行数次的重复实验。
根据上述实验条件研究的结果如下:
1、对肿瘤细胞及活化免疫细胞的影响
(1)肿瘤细胞生长分析
-大肠癌细胞SNUC2A的情况,在培养肿瘤细胞之后3天,以24小时为间隔测量生存率的结果表明,在第48小时、第72小时,与锗处理组相比在矿物性索玛瑅处理组,生存率有显著的降低(图2)。
-胃癌细胞SNU1的情况,在各实验组,3天间以24小时为间隔测量生存率的结果表明,在第24小时、第48小时,与锗处理组相比在矿物性索玛瑅处理组,生存率有显著的降低(图3所示)。
2、对活化免疫细胞增殖的影响
-对切除分离的脾脏细胞以0.25mg/ml的浓度用矿物性索玛瑅进行处理,并在培养72小时之后,测量生存细胞数的结果表明,与锗处理组相比在矿物性索玛瑅处理组,细胞数有显著的降低(图4)。
3、结论
对于癌细胞而言,与未处理组及锗处理组时相比较,在矿物性索玛瑅处理组显著地阻止肿瘤细胞的成长。这可以判断矿物性索玛瑅具有抑制癌细胞的活性、增殖的效果。在本实验条件下,锗未表现出这样的效果。
这种对肿瘤细胞增殖的矿物性索玛瑅的效果,在大肠癌及胃癌两方面都观察到,但发现其效果的作用时间表现出差异,对于大肠癌,在进行处理后的第2-3天,而对于胃癌细胞,在进行处理后的第1-2天表现出显著的效果。
[实验2]
图5为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的创伤治疗效果试验中治疗经过状态的图,图6为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对真皮损伤的治疗经过的图表。
另外,图7为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的皮肤损伤实验中治疗经过状态的图,图8为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的皮肤损伤时创伤治疗能力的图表。图9为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅的体重比较分析的图表。
如图所示,为了解本发明的矿物性索玛瑅在创伤导致的皮肤损伤中对皮肤再生的影响,在利用小鼠的动物模型中比较、分析创伤的治疗效果。
1、实验动物
购买6周龄的BALB/c小鼠并驯化1周之后,用于本实验。在实验中比较研究的组如下(表2)。在此使用的创伤治疗的良性试料为,以与本实验相同的目的当前在市面上广为流通的普通商用软膏剂(积雪苷(madecassol);东国制药,韩国),而石粉对照组使用锗凝胶(gel)组。
在实验中作为良性试料使用的市售产品积雪苷是获政府批准已商用化的物质,已知其包含抗生剂从而减少炎症。广为人知的主要功能为:作为主要成分的积雪草(Centella asiatica)定量提取物在新的结缔组织生成的过程中起到作用,帮助生成优质的肉芽组织(新肉),诱导正常的胶原纤维形成过程,从而最大限度地减少疤痕。
【表2】
<矿物性索玛瑅的创伤治疗效果实验组>
2、创伤的形成及试料涂抹方法
为防止小鼠互相舔为了进行实验所形成的伤口而影响实验结果,每个笼子(cage)中只隔离收容一只小鼠。为形成创伤,作为前期处理,在所要形成创伤的部位用电动剃须刀进行除毛之后,涂抹除毛剂完全除毛。
在真皮损伤实验中,用乙醚(ether)麻醉小鼠之后,利用打孔器(punch)去除上皮及真皮层,形成及至根表皮膜的创伤。另外,在皮肤损伤实验中,在用乙醚(ether)麻醉小鼠之后,利用砂纸去除表皮层而形成皮肤擦伤。用矿物性索玛瑅及锗凝胶(gel)制剂充分覆盖伤口,而商用产品根据制造商推荐的方法进行处理。
创伤治疗效果的比较方法如下:形成创伤后第7天、第14天用磷酸盐缓冲盐水(PBS;phosphate buffered saline)处理伤口部位,并用无尘纸(Kim wipes)去除凝胶(gel)制剂之后,利用游标卡尺(vernier calipers)测量伤口宽度。为了消除个体组之间的变数,在未处理组和商用产品处理组也实施相同的过程。
在皮肤损伤过程中,利用照片按不同个体比较第6天的创伤程度和第1天的创伤程度,从而将创伤治疗经过评分,通过此进行量化。创伤治疗评分项目如下:
1、皮肤红肿消失程度
2、结痂(crust)的硬度
3、确定结痂大小的减小程度
根据治疗程度各项目的分数根据其程度定为1-5分,在将未处理组的特定个体的分数定为3分并以此为基准,通过与各组的个体进行比较来进行评分(scoring)之后,综合各项目的分数得出各组的不同个体的分数。为确认因试料处理而实验动物所受到的压力所引起的影响,对实验动物个体的体重变化也进行了测量。
根据上述实验条件研究的结果如下:
1、真皮损伤实验
进行利用打孔器(Punch)的真皮损伤实验,刚形成真皮损伤之后(Day0)和实验结束日(Day 14)的创伤部位的样子如图3所示。
图5的(a)表示刚形成真皮损伤之后(Day 0)的情况,图5的(b)表示真皮损伤实验结束之后的未处理组(Day 14)的情况,图5的(c)为表示本发明的矿物性索玛瑅处理组的真皮损伤实验结束之后(Day 14)的情况的图,图5的(d)为真皮损伤实验结束之后的锗处理组(Day 14)的情况,图5的(e)为真皮损伤实验结束之后的积雪苷(积雪苷)处理组(Day 14)的情况。
真皮损伤实验的情况,因个体之间的差异较大,虽未出现组之间显著的差异,但未处理组的创伤治疗速度最快,其次,显示伤口治愈倾向的顺序为锗、矿物性索玛瑅、积雪苷处理组。创伤残存率(Xd)将相对于最初伤口大小(S0)的后来的伤口大小(Sd)以百分比表达出来(如图6所示),其公式如下:
Xd的值越大,表示伤口治疗越迟延。
【数学式1】
2-1、皮肤损伤实验
皮肤损伤实验是利用砂纸在表皮引起损伤之后,利用试料进行处理的,如图7所示。在此,图7的(a)为未处理组的刚处理之后的情况,图7的(b)为本发明的矿物性索玛瑅处理组的刚处理之后的情况,图7的(c)为积雪苷处理组的刚处理之后的情况。
尤其,如图8所示,在皮肤损伤的情况下,就伤口治疗速度而言,未进行任何处理的未处理组最快,其次顺序为积雪苷、矿物性索玛瑅、锗。从各处理组之间的平均值看,只在未处理组和锗处理组的比较上表现出显著的差异。
2-2、体重比较分析
如图9所示,就体重比较分析而言,测量刚形成创伤之后(Day 0)的体重和实验最后一天(Day 7)的体重,按各实验组比较体重变化。矿物性索玛瑅处理组的体重增加与积雪苷或锗处理组的差异存在显著性。另外,积雪苷处理组和未处理组的差异存在显著性。
3、结论
在正常的创伤治疗过程中包括如下复杂的过程:首先发生血小板凝固,接着放出创伤治疗所需的细胞活素的炎症期(inflammation);纤维芽细胞移动至创伤部位并合成新的细胞外基质(extracellular matrix)的肉芽期(granulation);表皮变厚,基底细胞变大的上皮形成期(epithelialization);出现胶原纤维,生成创伤内部结构的纤维素增殖期(fibroplasia);最后使创伤收缩的收缩期(contraction)等。
对于真皮层的损伤,未处理组(自然治疗组)的效果最好,而且,表现出的效果顺序依次为锗、本发明的矿物性索玛瑅、积雪苷。
从主要成分的功能考虑,难以期待积雪苷对真皮层的创伤治疗效果。因此,本实验结果的意义在于:与锗不同,矿物性索玛瑅在对真皮层的损伤恢复方面,起到与积雪苷类似水平的影响。这样的情况,在对表皮细胞的实验中也同样出现。
在作为另一个实验的因擦伤导致的表皮层的创伤实验中,只有作为对照组的锗处理组表现为明显低于其他组,而本发明的矿物性索玛瑅处理组较之未处理组(自然治疗组)、积雪苷处理组未表现出显著的差异,因此,可以知道本发明的矿物性索玛瑅具有与自然治疗和积雪苷类似水平的效果。
另外,矿物性索玛瑅是凝胶(gel)制剂,考虑到为拍摄照片去除凝胶(gel)的过程中因PBS使覆盖在所形成的伤口的结痂变软、硬度降低,具有与积雪苷类似水平的对皮肤损伤的治疗效果。但是,未处理组比商用产品处理组表现出较快恢复力是预料之外的实验结果,目前不清楚是否因为是动物细胞或动物种群之间的差异导致的。
另外,为了解对炎症反应的受压力程度而测量体重变化的结果表明,矿物性索玛瑅处理组的体重增加较之其他积雪苷或锗处理组中出现的体重减少表现出显著的差异,而比未处理组表现出很大的体重增加,但其差异并不显著。表现出与未处理组类似的体重增加倾向,说明在抗生物质处理等情况下常见的动物或人的体重减少等负面效果,没有在矿物性索玛瑅中发现,只有普通的体重增加效果的可能性。
综合上述所有结果来看,矿物性索玛瑅在创伤治疗速度方面比商用产品表现相同或更有效果。矿物性索玛瑅对真皮损伤具有比积雪苷更好的效果,而对表皮层损伤具有与积雪苷类似的效果,另外,在个体的体重变化方面,考虑到与锗或积雪苷处理组不同,表现出与未处理组类似的体重增加,就可以判定为没有副作用,并具有与商用产品类似的水平的创伤治疗效果。
[实验3]
图10为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅为治疗关节炎的试料处理状态的图;图11为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对关节炎严重程度的影响的经过图;图12为表示通过根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅关节炎缓和程度的表格。
图13及图14为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅与炎症性细胞活素(Cytokine)相关的测量图表及表格。
如图所示,为了解矿物性索玛瑅对关节炎治疗的影响,在利用小鼠的动物模型中比较、分析关节炎的治疗效果,而且,为了对此进行更确切的分析而测量作为炎症性细胞活素的TNF-α的血液中浓度及氮氧化合物(Nitric Oxide)浓度。
1、实验动物
购买6周龄的BALB/1J小鼠(中央实验动物,韩国)并驯化1周之后,用于本实验。在实验中比较研究的组以如表3所示的情况设定并进行实验。作为关节炎治疗的良性试料,使用以相同目的当前在市面上广为流通的商用膏药(patch)剂(Trast;SK化学,韩国),石粉对照组用锗凝胶(gel)进行处理。
实验中作为良性试料使用的市售产品特拉斯特膏药(Trast patch),其主要成分为吡罗昔康(Piroxicam),具有广为人知的消炎、镇痛、解热功能。
吡罗昔康(Piroxicam)的具体机理为抑制导致炎症和疼痛的前列腺素(prostaglandin)合成,作用于丘脑下部的体温调节中枢而表现解热作用,减低疼痛受体的感受性而具有镇痛功能,另外,通过嗜中性白细胞的活性抑制机理而具有抗炎活性。
【表3】
矿物性索玛瑅的关节炎治疗效果实验组
2、关节炎的形成及试料涂抹方法
为形成实验动物的关节炎,将第2型胶原蛋白(Type collagen,ChondrexInc.,USA)在0.05M乙酸(acetic acid)中溶解至2mg/ml,准备弗氏完全佐剂(CFA,complete Freund's adjuvant;Sigma Chemical Co.,USA),保持低温下将第2型胶原蛋白溶液和CFA以1:1的比例(v/v)相互混合并乳化,之后将100μg的混合液注射至尾巴。另外,在第一次接种2周之后,为了加速(boosting),作为第二次接种,以1:1的比例(v/v)混合第2型胶原蛋白和弗氏不完全佐剂(IFA,incomplete Freund's adjuvant;SigmaChemical Co.,USA)并给每个个体的尾巴注射100μg。
关节炎在第一次注射第2型胶原蛋白和CFA混合液之后的4周到6周之间出现,到了第7周用可以充分覆盖关节的量一天一次用矿物性索玛瑅及锗凝胶(gel)制剂进行处理,而商用产品根据制造商推荐的方法进行使用。
3、关节炎严重程度(severity)评价
关节炎的表达过程,以到第3周为止一周一次、之后一周两次的频率进行观察,而且用肉眼评价。浮肿的程度在涂抹试料第10天、第20天及第30天对小鼠进行补正之后,拍摄照片进行评价。
为了客观的测量,四条腿的关节炎严重程度用0-3分进行评价,从而每个个体的最高分为12分,而且,按不同的个体将第0天的关节炎症状和第30天的症状程度用单盲打分(blind scoring)进行量化之后,表达为各组的总个体数量中症状缓和的个体数而进行比较。
[图1]关节炎严重程度的评分(scoring)标准
a、0分:正常。前后腿没有发红或浮肿。
b、1分:有部分发红和浮肿。
c、2分:有明显的发红和浮肿,但没有出现关节僵直(ankylosis)。
d、3分:有严重的发红和浮肿,并出现关节僵直(ankylosis)。
4、测量TNF-α(tumor necrosis factor-a,肿瘤坏死因子-a)浓度
在处理之后的最后一天(Day 30),从小鼠的心脏采集血液分离血清,利用使用单克隆抗体的TNF-αELISA kit(eBioscience Inc.,USA),根据厂商的资料从分离的血清中测量作为炎症相关细胞活素的TNF-α的浓度。
5、测量氮氧化合物(Nitric Oxide;NO)
提取脾脏细胞向96孔板(well plate)按每个孔(well)分注5X103细胞(cells),在RPMI 1640(10%FBS,1%抗生素(antibiotics);GIBCO Inc.,USA)中,37℃的温度,5%的CO2的培养条件下进行24小时的稳定化之后,用第2型胶原蛋白以0μl/ml,200μl/ml的浓度进行处理。过48小时之后,收取上层液并利用Total NO assay kit(R&D systems,USA)根据厂商的指示进行测量。
根据上述实验条件表现出研究结果如下:
1、关节炎严重程度进程
用第2型胶原蛋白形成关节炎之后,按如图10所示的方法进行处理的结果,得到如图11所示的研究结果。
图11表示对各实验组进行处理后经过10天、20天、30天之后的后腿浮肿程度,将严重程度在实验开始日(Day 0)和实验结束日(Day 30)通过评分(scoring)进行量化,这样得出的关节炎缓和程度结果为如图12所示。
2、TNF-α的表达
按各实验组比较处置最后一天(Day 30)的实验动物个体内的TNF-α表达量(如图13所示)。诱发后,与未处理组相比,矿物性索玛瑅、锗、特拉斯特处理组的血液内TNF-α量减少,但未表现出矿物性索玛瑅、锗、特拉斯特各组间的显著的差异,三个组都表现出与未诱发炎症的对照组相类似的程度。
3、氮氧化合物(Nitric Oxide;NO)浓度
在处置最后一天(Day 30),测量并比较从各实验组的脾脏细胞分泌的NO的浓度(图14所示)。较之形成关节炎之后未进行任何处理的组,矿物性索玛瑅、锗、特拉斯特处理组中的NO浓度低,而且,矿物性索玛瑅组的NO浓度与作为商用产品的特拉斯特处理组类似。但是,在矿物性索玛瑅处理组和作为石粉对照组的锗处理组的比较当中,也未出现显著的差异。
4、结果
类风湿性关节炎的病原还不十分明确,但是与类风湿性关节炎相关的淋巴球、巨噬细胞等分泌的各种炎症性细胞活素(TNF-α、IL-1β)和抗炎症性细胞活素(TGF-β)的不均衡是类风湿性关节炎中重要的免疫反应的特征。广为人知地,类风湿性关节炎的另一病因物质氮氧化合物(nitricoxide;NO)引起作为自我免疫疾病的系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎的T细胞的功能障碍。
广为人知地,第2型胶原蛋白可在动物身上引起与类风湿性关节炎非常相似的关节炎,而利用其的胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型是其一例。在本研究中,也利用CIA模型了解矿物性索玛瑅处理引起的关节炎的临床经过和TNF-α、NO等的炎症性媒介物质的变化。
将关节炎的临床经过用肉眼以总体变化和关节浮肿程度观测之后,按各组进行比较。作为对照组的诱发关节炎之后的未处理组,即使经过时间的推移,关节炎症状不见缓和,反而变得轻微恶化。与此相比,正如预想地,用于缓和关节炎或肌肉痛的市面上广为使用的作为商用产品的特拉斯特,对包括浮肿在内的关节炎的症状缓和,表现出最好的效果。与此同时,较之症状未见好转的未处理组,在矿物性索玛瑅处理组中,5只小鼠中的2只的症状得到缓和,表现出约40%的症状缓和比率。
接着,了解作为类风湿性关节炎的炎症媒介物质的TNF-α和NO的变化。各组中的TNF-α和NO的情况表现出相互关联,而考虑到作为炎症性细胞活素的TNF-α和IL-1β为生成NO的强力的刺激因子,这是理所当然的结果。在炎症媒介物质的实验中,因小鼠的脾脏细胞数的不足,炎症媒介物质的数值整体上较低。因此,虽然没有显著的差异,但组间的微弱的差异还是存在。
较之未进行任何处理的组,矿物性索玛瑅处理组的炎症性指标物质或细胞活素较低,因此,表现出与商用产品类似水平的炎症缓和效果,而在与作为石粉对照组的锗比较,未表现出显著的差异。
综合上述所有结果可知,用肉眼观察的矿物性索玛瑅对关节炎的影响,虽然不像商用产品那样明显,但较之未进行任何处理的,具有缓和症状的效果,而且,虽然从炎症媒介物质等具体机理考虑时,其效果微弱,但表现出与商用产品类似水平的炎症缓和效果。
考虑到特拉斯特的主要功能不是根治类风湿性关节炎而是缓和症状或疼痛,换句话说,考虑到添加有缓和炎症反应和伴随而来的浮肿的对症疗法效果,矿物性索玛瑅虽然不具有消除浮肿的效果,但具有在一定程度上抑制炎症反应的效果。
[实验4]
图15为表示根据本发明优选实施例的矿物性索玛瑅对促进成长的影响的表格及各喂养组个体的消化器官比较图。
如图所示,为了解矿物性索玛瑅的生理效果,比较分析在利用小鼠的动物模型中矿物性索玛瑅引起的体重增加效果,而且,为了判断更准确的影响,在结束实验的同时,观察消化道的变化。
1、实验动物及饲料喂养方法
为防止体重增加中非特异性效果的干扰,取9周以后的高周龄的Ovalbumin TCR-Transgenic小鼠(中央实验动物,韩国)并在动物实验室环境中驯化一周之后,用于本实验。在实验中比较研究的组以如表4所示的情况设定。对照组饲料为用于小鼠喂养的普通饲料,而实验组饲料为喂养将矿物性索玛瑅丸以1:3的比例(W/W)与一般饲料混合而成的饲料的组和只喂养索玛瑅丸的组。饮用水方面,对照组饮用自来水,而喂养含矿物性索玛瑅的饲料的两个实验组,饮用将索玛瑅3g(1茶勺)投入到100ml水而煮开后,再以1:1的比例(v/v)将上层液和水混合而成的水(好水)。另外,在喂养含矿物性索玛瑅的饲料的两个组,还额外提供矿物性索玛瑅垫子。
【表4】
矿物性索玛瑅的生长促进效果实验组
喂养结果测量在第0天、第1周、第2周、第3周之后的体重来表现,并在实验最后一天的第3周解剖小鼠比较消化器官。
根据上述实验条件研究的结果如下:
如图15所示,测量喂养实验开始之前(Day 0)的体重和实验最后一天(Day 21)的各实验动物个体的体重,然后用总数量中体重增加的个体数量来表达。普通饲料喂养组中,共7只中只有3只体重增加,但矿物性索玛瑅添加饲料喂养组中,有5只体重增加。在只喂养矿物性索玛瑅丸的实验组中,从实验开始后的第3天开始出现同类相食(cannibalism)现象,从而在12天之内组内的所有小鼠全部死亡。
另外,在实验最后一天(Day 21)解剖小鼠,比较普通饲料喂养组和矿物性索玛瑅添加饲料喂养组的消化器官的结果表明,除粪便的颜色之外,没有观察到特别的消化道变性等情况。
根据上述研究结果,只喂养本发明的矿物性索玛瑅丸的组中,从第3天开始出现同类相食(cannibalism)现象,这表明只喂养矿物性索玛瑅丸不能提供充分的营养。但是,在普通饲料中添加矿物性索玛瑅丸的饲料喂养组,较之摄取普通饲料的组,体重明显增加。
目前,如上所述的作用机理不十分明确,但可以考虑起到如下作用:矿物性索玛瑅与普通饲料一起进入生物体内之后,可以帮助包含于饲料中的营养素的吸收。尤其,在一同喂养矿物性索玛瑅和普通饲料的组中,对消化道的肉眼观察没有发现任何异常,这表明摄取矿物性索玛瑅不会有毒性。
换句话说,综上所述,用本发明的矿物性索玛瑅进行处理,可抑制在与周围失去平衡的状态下增殖的肿瘤细胞的增殖,抑制通过人为的活化而诱发过度细胞分裂的状态的免疫细胞的增殖。因此,对免疫反应有调节作用,而且,具有促进体重增加的效果,表明矿物性索玛瑅具有维持生物体的均衡状态,即健康状态的作用。
因此,虽然矿物性索玛瑅的处理在创伤治疗及关节炎治疗中未能获得与药物相同水平的效果,但具有一定的抑制炎症反应的效果,因此,若长期使用矿物性索玛瑅,将会充分预想取得积极的效果。尤其,可以推断,各种实验结果表明,矿物性索玛瑅的效果与生物体的恒定性(homeostasis)的维持相关具有一定的治疗效果。所述的特点表明,矿物性索玛瑅与药物不同,需要在日常生活中作为一种辅助剂长期服用或使用,而且并未观察到伴随矿物性索玛瑅的生物体内摄取的特殊消化障碍或细胞毒性。
因此,从本实验结果可知,用矿物性索玛瑅处理可使生物体维持恒定性,在如下方面起作用:从受损或失去平衡状态的生物体恢复正常的状态,以维持生物体的健康。
[实验5]
实验5为生物体恒定性维持活性的机理研究,使用了对过敏性(allergy)反应的小鼠实验模型。为此,利用诱发过敏性(allergy)反应的小鼠分析矿物性索玛瑅对抑制过敏性(allergy)反应的效果,与此同时,研究从细胞分泌的细胞活素(cytokine)和具有免疫抑制效果的调节性T细胞(Treg细胞)的变化。
1、研究方法
1.1、动物(Animals)
从美国杰克逊实验室(Jackson Laboratory,Main,USA)进口在BALB/c的遗传背景具有OVA323-339-特异性的和I-Ad受限的TCR-αβ(OVA323-339-specific and I-Ad restricted TCR-αβ)(Vα3/Vβ15)的8-10周龄的公(male)或母(female)小鼠进行实验。含有矿物性索玛瑅的布和普通布由(株)量子能量(Quantum energy)提供。在本实验中,原打算用含有矿物性索玛瑅的布和普通布做成衣服给小鼠穿上而进行试验,但实现起来比较困难,所以替代为在饲育笼里面铺上布的方法。
2、研究结果
2.1、血清中抗原特异性抗体测量结果
如图16所示,测量口服OVA后用i,p复敏的小鼠血清中的总IgE(totalIgE)和OVA-特异性IgG(OVA-specific IgG)表达。对比a)总IgE,b)OVA-特异性IgG,正常组(未诱发过敏性反应(allergy)的组)、对照组(诱发过敏性反应(allergy)的组)的结果表明,在用卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)处理的所有组中,血清内的OVA特异性IgG水平较之正常组(control)有显著的差异并大幅提高。
但是,含有矿物性索玛瑅的布、普通布处理组和未处理组之间没有出现显著的差异。较之正常组和对照组,含有矿物性索玛瑅的布处理组的总IgE很高,尤其与普通布处理组相比差异显著。
在用OVA处理的所有组中,血清内的OVA特异性IgG水平较之正常组有很显著的增加。但是,实验组和对照组之间没有出现显著的差异。
另外,如图17所示,总IgE的情况,用OVA处理的所有组比正常组表现得高,尤其,在含有矿物性索玛瑅的布处理组和未处理组表现出显著的差异。另外,较之普通布处理组,含有矿物性索玛瑅的布处理组表现出很高的IgE水平。
[实验6]
矿物性索玛瑅的对多药剂耐药病原菌(超级细菌)的抗菌效果实验
2、实验方法
1)目标细菌
第一、细菌种
○Staphylococcus aureus N315(对四种抗生剂具有耐药性):克林霉素(Clindamycin)、红霉素(Erythromycin)、苯唑西林(Oxacillin)、青霉素(Penicillin)
第二、接种量
○初始接种浓度:4.53Ⅹ105CFU/ml
2)用于本研究的矿物性索玛瑅
第一、种类
【表5】
第二、试验培养基及处理容量
○Muller-Hinton broth(MHB)4ml
○MHB液体培养基每4ml对1s小茶勺(~0.1grams)
3)菌数测量方法
○将用于接种的菌株,从-80℃贮存原种(stock),划线接种(streaking)至5%的羊血琼脂(Sheep Blood agar)之后,在37℃温度下,进行20小时的静置培养。
○选用一个集落,重新划线接种(streaking)至5%的羊血琼脂(SheepBlood agar)中之后,在37℃温度下,进行20小时的静置培养。
○从上面选择一个集落之后,接种至MHB 3ml后,在37℃温度下,进行20小时的振荡培养。
○第二天,以1:100的比例将培养液稀释至MHB之后,取40μl并将其接种至4ml的MHB。
○向实验组添加一小勺(small spoon)的石粉A或B之后,在37℃温度下,开始进行振荡培养。
○将培养0、6、24小时的样品各取100μl进行十进制稀释。
○将稀释液100μl滴至M-H琼脂(Muller-Hinton Agar)上吸收之后,在37℃温度下,进行20小时的静置培养后,计算出现的菌集数并测量菌量。
4)实验组设置
【表6】
3、实验结果
【表7】
4、结论
如图18所示,矿物性索玛瑅A、B都对多药剂抗药病原菌Staphylococcus aureus N315的增殖有抑制效果。
[实验7]
矿物性索玛瑅的抗氧化效果实验
1、实验条件
A(图19的左侧):普通自来水;B(图19的中间):陶瓷球5个(9gm);C(图19的右侧):陶瓷粉末1gm
瓶子的容量为100ml,装入80ml的水。瓶子+水的重量
2、实验结果
矿物性索玛瑅的抗氧化效果实验如图20及图21所示。
A:就像普通生锈那样,在钉子表面生成红色的锈,锈的大小相对大且粗糙。锈粒子变大掉落在地上。在钉子周围,锈和锈之间表现为像用蜘蛛网连接的一样,轻轻一碰,就像用线连接一样动。
B:相对来说,生锈速度慢,锈的大小小,几乎没有表现出连接。地面上堆积有红锈。钉子表面为黑色。
C:生锈最慢,锈的量不多,锈粒子也最小。未发现表面上起皮一样的锈。
[实验8]
以重症患者为对象,进行用于确认寝具及服装所引起的免疫活性增加的临床实验,上述寝具及服装是用包含本发明矿物性索玛瑅的纤维制成的。
1、选定标准
(1)自愿参加本临床实验且在被实验者信息利用同意书中签字的被实验者(包括住院)
(2)年满20岁以上的男、女被实验者
(3)剩余寿命为6个月以上的被实验者
(4)因重症疾病住院中的被实验者
2、统计分析方法
(1)第一次有效性评价
接受用于临床实验的物质处理之后,为验证统计学上较之基础时刻(Visit 1)的16周(Week 16)(Visit 4)的CD4、CD25及Fox P3(性因子)的变化是否显著,在两侧5%的显著性水平上进行配对t检验(Paired T-Test)或Wilcoxon符号秩检验(Wilcoxon Signed Rank Test)。
(2)安全性
被实验者报告的异常反应用被实验者数量及百分比来描述,而对异常反应的严重性(Seriousness)、与用于临床实验的物质的关联性、矫正治疗及其结果,整理了被实验者数量及百分比。
实验室检验和生物体征的结果,在连续数据情况下按平均、标准偏差和最小值、最大值来整理,而用于临床实验的物质处理前后的差异,通过配对t检验(Paired T-Test)或Wilcoxon符号秩检验(Wilcoxon Signed RankTest)进行验证。
3、结论
以利用矿物性索玛瑅寝具及服装的重症患者为对象,对免疫细胞(CD4、CD25、Fox P3)的改善,在此次临床实验中进行确认。
4个月时间的观察表明,作为代表性的免疫细胞种类的CD4、CD25、FoxP3都比实验之前统计上有了显著的增加。
[实验9]
实施本发明的矿物性索玛瑅的除VOC、除氨气实验。
1、除VOC实验
(1)实验方法
1、将委托人提供的试料20g放入5L大小的反应器中并密封。
2、将实验气体的初始浓度以50μmol/mol进行注入,并在开始(0分)、30分、60分、90分、120分测量实验气体的浓度,并将其称之为样品(sample)浓度。
3、实验气体的浓度通过KS I 2218:2009进行测量。
4、实验中温度保持23℃±5℃,相对湿度保持50%±10%。
5、另行,在没有试料的状态下根据上述2~4进行实验,并将其称之为空白(blank)浓度。
6、各时间段的实验气体的去除率通过如下式计算:
实验气体的去除率(%)=[{(空白浓度)-(样品浓度)}/(空白浓度)]×100
2、实验结果
如图22及图23所示,利用本发明的矿物性索玛瑅的除VOC实验,在最少经过30分钟之后,表现出87.8%的去除率,而经过120分钟之后,表现出89.6%的去除率。
另外,如图22所示,除氨气实验中,在初始浓度100ppm的情况下,经过0.5小时之后,可确认发生降低至1ppm以下的大变化。
可见,本发明的矿物性索玛瑅在除VOC、除氨气方面具有很好的效果。
[实验10]
实验10利用时域反射率测试(Time Domain Reflectivity Test)法,利用简易设施验证混合碳(carbon)、松脂、黄土制造而成的平板状电磁波吸收体的电磁波吸收能力,而且,利用对电磁波屏蔽率的IEEE Std 299&MIL-STD-188-125法,利用屏蔽测量设施验证电磁波屏蔽能力。
如图25及图26所示,在上述实验10中,利用了由60%的本发明的矿物性索玛瑅、30%的木炭及10%的松脂构成的板,电磁波吸收能力实验结果表现出如图27至图29所示图表的电磁波吸收率。
另外,如图30所示,利用了由60%的矿物性索玛瑅、35%的碳及5%的松脂构成的板,电磁波屏蔽率实验结果表现出如图25及图26所示图表的电磁波屏蔽率。
[实验11]
实验11按照“EL610除雪剂”的实验方法测试本发明的矿物性索玛瑅能否在-12℃和-5℃下融化冰,以此实验矿物性索玛瑅的发热性能。
实验步骤
1)为除去油(oil)或油脂(grease),利用乙醇(ethanol)等有机溶剂冲洗实验盘后并使其完全干燥。
2)将蒸馏水或去离子水130ml放在盘中并通过旋转或摇晃,使水分散在盘子表面全体。
3)将盘子放在温度调节型恒温器的水平面上。
4)水完全冻结之后,用厚度为12.7mm的铝圆形(直径约21.6mm)平板熔融表面的冰,以使其变得平整。
5)将盘子重新放入低温恒温器再次冻结表面的水,并使其相对于规定的作业温度维持平衡。
实验试料分离、测量及添加
1)利用用于分析的秤(请参考6.1.2)测量实验试料(矿物性索玛瑅)(10±0.1)g。
2)将经称重的试料均匀铺设在所准备的冰上。
确认融化的冰
1)在冰试片上铺设实验试料时启动定时器。
※2)以24小时、48小时、72小时为间隔通过拍照确认冰融化的情况。
重复实验
对于各实验试料,每规定的温度重复三次。
实验结果
如图31所示,在-12℃的条件下,实验试料未能使冰完全融化,但结束实验之后,试料的确认结果为试料粒子以球状团在一起。
[实验12]
实验12是矿物性索玛瑅的电流发散效果实验,如图32至图34所示,以0.1mV以下放电的电气电容器(condenser)通过矿物性索玛瑅实现自我充电。
换句话说,从本发明的矿物性索玛瑅相隔15cm(紫色)、1m(紫红色)、1.8m(米黄色)及3.0m(淡蓝色)的距离,并在一定时间内确认电容器的充电与否的结果为26.5小时~168小时内至少有12.9mV~164.1mV的电流自我充电。
[实验13]
实验13调查矿物类索玛瑅中完成超高温预处理工艺的矿物粉末的微生物融合可能性,探索、鉴定潜在的微生物种,且定性、定量实验对各种病原性细菌的抗菌能力。
在此,为探索包含于矿物粉末的微生物种并分析功能性,如图35所示,对两种试料(试料A、试料B)执行预处理工艺之后进行实验。
之后,执行对包含于完成预处理工艺的试料A及试料B中的微生物的培养,并根据如图36所示的用于微生物种探索及分离、鉴定的战略模式图进行实验。
另外,作为用于调查包含矿物类索玛瑅量子能量生物体及多个微生物种的矿物粉末的微生物融合可能性的微生物培养基,使用一般广泛使用的最少营养培养基和复合营养培养基。
作为最少营养培养基,将酵母提取物基本培养基(Yeast ExtractMinimal Medium(YEM))以3.5g的Na2HPO4·12H2O、1.0g的K2HPO4、0.03g的MgSO4·7H2O、0.5g的NH4Cl、4.0g的酵母抽提物(Yeast extract)、1L的D.W.upto的构成制造之后,经灭菌使用。
作为复合营养培养基使用胰蛋白胨大豆肉汤(Tryptic Soy Broth(TSB,BD&Company)),固体培养基是在YEM和TSB的构成中添加1.5%(w/v)的细菌琼脂(Bacto-agar)制作而成。
微生物的培养是在32℃的温度条件下维持24~72小时,尝试需氧培养及厌氧培养,在液体需氧培养的情况下,利用振荡培养器以250rpm的条件尝试微生物培养,而为了厌氧培养,利用自动厌氧微需氧细菌培养系统(Anoxomat Mark II System)实施厌氧培养。
如图37所示,为了鉴定微生物种,所有经分离的微生物种通过显微镜观察细胞形状之后,利用CTAB法分离提纯基因组DNA(genomic DNA)并利用BLAST程序(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)进行分析。
实验结果表明,从试料A及试料B纯分离出共53种对生物体无害的需氧微生物,而对其中24种进行的分子遗传学微生物鉴定的结果表明,24种微生物种中探索到来自矿物性粉末试料中A的微生物13种、来自B的微生物11种,从培养前进行高温、高压湿热灭菌的A和B分离的微生物种有3种,而从不进行灭菌的A和B分离出21种。
另外,从未进行灭菌的A和B分离的微生物中存在大小为1μm的微小微生物。值得关注的是,在此也在用于培养的皮氏培养皿(Petri dish)的底面上形成薄膜,这与上述通过S340步骤的实验结果类似。
尤其,为确认实验上的错误与否,另行分离培养出的微生物并在121℃的温度下利用高压灭菌器进行15分钟的杀菌处理之后,重新培养的结果为未能实现培养,但是,将一般环境微生物和矿物类索玛瑅量子能量生物体天然粉末一同放入培养基后,再在121℃的温度下进行15分钟的杀菌处理之后培养的结果为培养得到实现。
通过上述结果可知,矿物类索玛瑅量子能量生物体具有在极限环境下保护和救活一般微生物的作用,与此同时,只分离微生物并在没有矿物类索玛瑅量子能量生物体天然粉末的状态下进行加压杀菌处理之后观察增殖与否的结果表明,全部杀灭,未发生任何微生物增殖。
这表明矿物类索玛瑅量子能量生物体天然粉末在高温中为一般环境微生物提供可克服环境的避难所,或矿物类索玛瑅量子能量生物体天然粉末通过能量作用使一般微生物克服高温。
上述实施例仅用以说明本发明的技术思想而非限制本发明。本发明所属技术领域的普通技术人员应当理解,可以在不脱离本发明的本质特性范围内对本发明进行各种修改及变形。因此本发明所提出的实施例并非用于限定本发明,而是用于举例说明,并非通过所述实施例来限定本发明的技术思想的范围。本发明的保护范围应根据以下权利要求范围进行解释,而在与其同等的范围内的所有的技术思想应包含于本发明的权利要求范围内。
工业实用性
如上所述的本发明,分离培养存在于矿物中的矿物性索玛瑅并将培养出的矿物性索玛瑅与陶瓷粉末融合,从而没有危害性和对生物体的副作用,具有抑制癌细胞、增强免疫力,皮肤再生在内的自我发热,冰凉感,去除VOC,屏蔽吸收有害电磁波等功能。
另外,本发明的矿物性索玛瑅可更便捷,更低廉,更容易地大量生产复合多功能尖端材料,其混合生命活动旺盛,具有治疗等各种卓越功能的量子能量生物体(矿物性索玛瑅)和由在1,000℃的高温中加热10小时也不会被杀灭的各种微生物陶瓷材料构成的陶瓷粉末,而且本发明的包含分散性好的矿物性索玛瑅的复合多功能尖端材料容易混合于纤维、化学物质等高分子材料,并可与铁、非铁金属、陶瓷等用于工业的物质混合制成复合材料。
另外,本发明的包含分散性好的矿物性索玛瑅不攻击或杀灭有利于生物体或不对生物体产生有害作用的细胞或微生物,在高温或极限环境中起到保护生存的作用,不仅抑制(抗菌)对生物体有害的病原性细菌或对抗生素产生耐药性的超级细菌,而且,具有如下功能:使创伤或褥疮等患者外皮及真皮再生痊愈、抑制癌细胞、改善免疫功能、维持可使生物体健康的动态平衡,增强对病害的抵抗性。
另外,本发明的矿物性索玛瑅可起到催化剂的作用,与高分子材料、金属材料、无机材料、有机材料等各种材料结合以增强材料本身的特性,而且,抑制氧化作用,使其还原。
Claims (8)
1.一种矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于,包括:
(a)矿物采集步骤,从地下采集不包含对生物体有害的重金属或放射性物质、而全包含未被污染的SiO2、Al2O3、Fe2O3、MgO3的无机物的天然矿石;
(b)矿物粉碎步骤,将上述采集的天然矿石粉碎成320目~2纳米的粒子以形成粉末状;
(c)矿物粉末提纯步骤,从粉末状的矿石粉末中提纯及分离对生物体有害的重金属及放射性物质;
(d)矿物粉末燃烧步骤,燃烧经提纯的矿物粉末,以改变矿石本身的质量、比重、电子数、离子数;
(e)混合及发酵工艺步骤,以一定比率混合经燃烧的矿物粉末和H2O及由石花菜构成的天然植物提取物,并将混合的矿物混合粉末发酵一定时间以提高矿物性索玛瑅和微生物的活性;
(f)灭菌干燥步骤,对熟成发酵的矿物混合粉末进行灭菌及干燥;
(g)陶瓷混合粉末培养步骤,将经干燥的矿物混合粉末放在容器之后,添加混合有一定量的水、蒸馏水、磁化水、葡萄糖或糖类的溶液,并向添加溶液的矿物混合粉末添加糖类或用于培养微生物的培养基并进行1小时以上的培养;
(h)矿物性索玛瑅提取步骤,从上述(g)步骤中培养出的矿物混合粉末中分离提取微生物,并分离提取在提取出的微生物中包含的矿物性索玛瑅。
2.根据权利要求1所述的矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于:
上述(d)步骤的矿物粉末燃烧步骤,包括:第一次燃烧工艺,通过50℃~300℃的温度加热2~3小时来进行焙烧;第二次燃烧工艺,完成第一次燃烧工艺之后,将经第一次燃烧的天然矿石以300℃~850℃的温度加热30分钟~10小时来实现第二次燃烧。
3.根据权利要求1所述的矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于:
在上述(e)步骤的混合工艺步骤中,将70%重量的粉碎成320目~2纳米大小的矿物粉末、25%重量的H2O及5%重量的由石花菜构成的天然植物的根、茎、叶的提取物进行混合,以制成矿物混合粉末。
4.根据权利要求1所述的矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于:
上述(e)步骤的发酵工艺步骤,将上述矿物混合粉末放入容器中之后,在熟成库中在-10℃~200℃以内的温度下熟成10~90天进行发酵,以提高矿物性索玛瑅及微生物的活性。
5.根据权利要求1所述的矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于:
上述矿物混合粉末中的矿物粉末,只选用粉碎成320目~2纳米大小之后去除重金属及有害成分的状态的粉末。
6.根据权利要求1所述的矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于:
上述(f)步骤的灭菌及干燥步骤,在焙烧炉内在180℃以下的高温旋转30分钟~2小时进行灭菌,并以150℃~200℃的温度进行干燥。
7.根据权利要求1所述的矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于:
培养上述微生物的培养条件为:具备YEM培养基、TSB培养基、M9培养基、LB培养基的培养基,以温度范围为30℃~37℃的范围实现培养,而在培养基中构成YEM的组合物含有Na2HPO4·12H2O 3.5g、K2HPO41.0g、MgSO4·7H2O 0.03g、NH4Cl 0.5g、酵母提取物4.0g、石花菜15.0g、蒸馏水1.0L。
8.根据权利要求1所述的矿物性索玛瑅提取方法,其特征在于:上述矿物性索玛瑅提取步骤,只提取在1,000℃以上的高温中进行10小时以上的高压蒸汽灭菌之后也仍存活并进行生命活动从而散发能量的矿物性索玛瑅。
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TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170215 Address after: Gyeonggi Do, South Korea Patentee after: Quantum energy (strain) Address before: South Korea Gyeonggi Do Dongan District of Anyang City Hongan road 434 East apartment 303 Patentee before: Li Zhongdou |
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CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160504 Termination date: 20190602 |
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