CN104306435A - 一种拟缺香茶菜提取物的提取方法 - Google Patents

一种拟缺香茶菜提取物的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，依次经过乙醚提取、乙酸乙酯提取、乙醇提取和水提取；分别得到乙醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水提取物；这四种提取物对正常细胞无细胞毒作用，这将对于癌症的药物治疗将起到重大的推动作用，产生良好的社会效益。

Description

一种拟缺香茶菜提取物的提取方法
技术领域
本发明属于食品医药技术领域，具体涉及一种拟缺香茶菜提取物的提取方法。
背景技术
拟缺香茶菜为双子叶植物纲，唇形目，唇形科多年生草本，别名野紫苏；根茎横走，木质，略增粗或呈疙瘩状，粗可达2厘米，其上密生纤维状须根。茎直立，多数，高(0.3-)0.5-1(-1.5)米，四棱形，具四槽，下部变无毛，上部被短柔毛，有时上部有分枝。茎叶对生，宽椭圆形或卵形或圆卵形，先端锐尖状尾形，基部宽楔形或平截，骤然渐狭下延，边缘具不整齐的锯齿状牙齿，坚纸质，上面暗绿色，沿脉上被微柔毛，余部疏被糙伏毛小硬毛，下面淡绿色，仅沿脉上疏被短柔毛，余部无毛，侧脉约3对，在上面凹陷，下面明显凸起，平行细脉两面多少明显；叶柄长1—5厘米，上部具宽翅。总状圆锥花序顶生或于上部茎叶腋生，长6—15厘米，由3(-5)花的聚伞花序组成，聚伞花序具长2—5毫米的梗，花柄长2—6毫米，与花梗、序轴均密被微柔毛；苞叶叶状，向上渐变小，近无柄，苞片及小苞片线形，长1-3毫米；花萼钟形，长达3.5毫米，外被短柔毛，内面无毛，齿5，明显3/2式二唇形，裂至中部或以下，上唇三齿，齿三角形，具刺尖，下唇二齿，靠近，长三角形，具刺尖，果时花萼明显增大，长达7毫米，肋及边缘脉明显凸起，上唇三齿外反，下唇二齿平伸；花冠白、淡红、淡紫至紫蓝色，长约10毫米，外疏被短柔毛及腺点，内面无毛，冠筒长约6毫米，基部上方浅囊状，至喉部宽达3毫米，冠檐二唇形，上唇外反，长约3毫米，宽达5毫米，先端具相等4圆裂，下唇近圆形，长宽约4毫米，内凹；雄蕊4，下倾，内藏，花丝扁平，中部以下具髯毛；花柱丝状，内藏或微伸出，先端相等二浅裂；花盘环状。成熟小坚果近球形，径约1.5毫米，褐色，无毛。花期7-9月，果期8-10月。拟缺香茶菜生长分布于产滇东北，海拔1200—3000米的草坡、路边、沟边、荒地、疏林下。我国四川、湖北西部、河南亦有分布。拟缺香茶菜的功效分类：拟缺香茶菜具有清热解毒、活血化瘀、抗菌消炎及抗肿瘤等功效，性味：味辛；苦；性平；药材基源：为唇形科植物拟缺香茶菜的全草。主治：感冒头痛；风湿痹痛；跌打瘀肿；骨折；外伤出血；毒蛇咬伤；资源分布：分布于湖北、四川、云南、河南等地。
恶性肿瘤是威胁人类生命的恶性疾病之一，极大危害着人类的健康，并将成为新世纪人类的第一杀手。从世界范围来看，发展中国家面临更大的疾病负担，我国作为一个发展中国家，恶性肿瘤面临的形势更加严峻。随着人们对癌的认识不断深化，目前已从多个层面进行救治，并取得了一系列有价值的治疗方法，延长了患者的生命，其中利用一些化学物质杀死或抑制肿瘤细胞恶性增殖的方法也取得一些重要进展。但是人们逐渐认识到合成抗癌药多半对人体正常细胞产生很大的毒副作用，因此，研制新的具有高度选择性的抗肿瘤药是有效控制恶性肿瘤的迫切需要。在这种情况下出现了回归自然、使用天然药物的潮流，所以从天然动植物中寻找毒性低、疗效高的抗肿瘤活性成分已成为国内外科学工作者研究的热点之一。研究并提取具有抗肿瘤作用的有效成分用于治疗肿瘤是目前国家重点支持的项目之一。
近年来，随着中药研究技术的发展，人们对香茶菜属植物的活性成分做了大量研究，从该属植物中分离出500多种二萜类化合物单体。香茶菜属植物中主要富含对映贝壳杉烷类二萜化合物，而现代研究表明，从香茶菜属植物中分离得到的对映贝壳杉烷型结构的二萜类化合物，已被证实具有较好的抗肿瘤功效，其活性中心也已确定为环外亚甲基环戊酮结构，这无疑为该属植物的化学成分研究工作提供了理论支持。拟缺香茶菜是唇形科香茶菜属植物，其药理活性作用广泛，主要有细胞毒活性、抗氧化作用、免疫调节作用、对心血管系统的作用及抗菌抗病毒功效等。
拟缺香茶菜是我国民间广泛使用的草药，该植物中二萜化合物结构类型丰富，由于其多样的生理活性，长期以来，一直吸引着广大天然药物化学家的兴趣。丁兰教授对甘肃产的拟缺香茶菜化学成分进行了系统的研究，共分离鉴定了14个化合物，其中包括甾醇、对映贝壳杉烷二萜、三萜和黄酮化合等化合物。利用SRB法研究了对映贝壳杉烷二萜化合物对三种肿瘤细胞(人胃腺癌细胞株SGC-7901、人肝癌细胞株BEL-7402及人卵巢癌细胞株HO-8910)的构效关系，研究表明：对映贝壳杉烷二萜化合物在高浓度条件下，不同浓度药物的持续作用对细胞产生明显的致死效应，且浓度越高对细胞的杀伤力作用越明显，具有较好的量效和时效关系。郑州大学李继成教授对河南龙浴湾产的拟缺香茶菜进行了系统的研究，分离出二十多个单体化合物，体外生物活性筛选表明具有很强的细胞毒活性及抗氧化活性。
目前对拟缺香茶菜这种植物的研究主要停滞在化学成分的提取分离及相应的药理实验上，还没有从拟缺香茶菜中找到能用到临床上的有抗癌活性的化合物。
发明内容
本发明的目的是提供一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，此提取方法提取出来的拟缺香茶菜提取物对癌细胞有高度选择性，可以预防癌症。
以体外培养条件下和荷瘤小鼠对肿瘤细胞的抗增殖作用为导向，拟分步分离拟缺香茶菜乙酸乙酯提取物中的出新的抗肿瘤目标化合物。测定其分子结构，为下一步将其开发为新型的具有高度选择性的国家一类抗肿瘤药物提供物质基础。
本发明所采用的技术方案是，一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、乙醚提取：采取拟缺香茶菜原药材的地上部分，自然阴干，用粉碎机粉粹，用无水乙醚浸泡21天，用滤纸常温常压下过滤，减压浓缩得墨绿色提取物浸膏，即为乙醚提取物；
步骤2、乙酸乙酯提取：乙醚提取后的残渣在常温下把乙醚挥发完全；在残渣中加入乙酸乙酯浸泡并进行加热回流，乙酸乙酯的用量为乙酸乙酯淹没药材为准，然后常温常压下过滤，得到浸取液；将浸取液减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙酸乙酯提取物；
步骤3、乙醇提取：乙酸乙酯提取过的残渣晾干无乙酸乙酯味，在乙酸乙酯提取过的残渣中加乙醇溶液浸泡并加热回流，然后常温常压下过滤，得到浸取液，将浸取液进行减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙醇提取物；
步骤4、水提取：乙醇提取过的残渣晾干无乙醇味，取一半残渣加入蒸馏水溶液，进行浸泡并加热回流，然后常温常压下过滤，得到浸取液，将得到的浸取液进行，浓缩得黄褐色浸膏，即为水提取物。
本发明的特点还在于，
乙醚、乙酸乙酯、乙醇和水的用量为淹没药材为准，过滤的滤纸为中速102或者快速101的定性滤纸。
浸泡时间为20h-28h，加热回流时间为2h-3h。
步骤1中的减压浓缩的条件为水温温度30℃-40℃，压强在0.07-0.1MPa。
步骤1中的减压浓缩的压强为0.09MPa。
步骤2减压浓缩的压强为0.07-0.1MPa；水温温度为60℃-70℃。
步骤2的减压浓缩的压强为0.09MPa。
步骤3中的减压浓缩的压强为0.07-0.1MPa；所述水温温度为80℃-90℃。
步骤3中乙醇溶液的浓度为95％。
步骤4中浓缩条件为100℃下常压浓缩。
本发明的有益效果是：得到对癌细胞有高度选择性的拟缺香茶菜提取物，对正常细胞无细胞毒作用，这将对于癌症的药物治疗将起到重大的推动作用，产生良好的社会效益。我国拟缺香茶菜资源丰富，目前尚未得到充分开发利用，一旦从中开发出预期的有高度选择性的抗癌新药，其市场是非常广阔的，可产生出巨大的经济效益。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明提供一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，具体按照以下步骤实施：
步骤1、乙醚提取：采取拟缺香茶菜原药材(地上部分)，自然阴干，取原药材1kg，用粉碎机粉粹，用无水乙醚浸泡21天(乙醚的用量为：乙醚要淹没药材为准)，用中速102或者快速101(中速和快速为本领域的常用术语)的定性滤纸常温常压下过滤，在水温温度30℃-40℃，压强在0.07-0.1MPa(尤其是0.09MPa)的条件下，减压浓缩得墨绿色提取物浸膏，即为乙醚提取物。
其中，提取物中有大量的糖类化合物，浓缩以后比较黏稠，因此，选用快速101比较好；压强为0.07-0.1MPa这个范围内旋转蒸发仪最好控制，乙醚可以快速回收。
步骤2、乙酸乙酯提取：乙醚提取后的残渣倒入干净的搪瓷盘中在常温下把乙醚挥发完全，直到无乙醚味为好，然后把残渣装入一个5L球形烧瓶里，加入乙酸乙酯，浸泡20h-28h(尤其是24h)，加热回流2h-3h，然后常温常压下过滤，其中，滤纸采用定性滤纸(中速102，快速101)；然后得到浸取液，减压浓缩得墨绿色浸膏乙酸乙酯提取物，其中，减压浓缩的条件为水温温度在60℃-70℃，压强0.07-0.1MPa，最佳压强0.09MPa。
其中，浸泡时间范围为20-28个小时，着这个能充分把药材浸润，时间太长，溶剂容易挥发且浪费时间；加热回流时间为2-3小时，最佳2小时，在这个时间范围内能完全提出乙酸乙酯提取物的有效部位且节约能源，节省时间，且乙酸乙酯提取物的活性比较高；滤纸采用定性滤纸(中速102，快速101)，提取物中有大量的糖类化合物和叶绿素，浓缩以后比较黏稠，因此，选用快速101比较好；减压浓缩的条件采用压强0.07-0.1MPa，在这个范围内旋转蒸发仪最好控制，乙酸乙酯可以快速回收。
步骤3、乙醇提取：乙酸乙酯提取过的残渣晾干无乙酸乙酯味，装入5L球形烧瓶里，加入95％的乙醇溶液，浸泡20h-28h，加热回流2h-3h，然后常温常压下过滤，得到浸取液，对浸取液进行减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙醇提取物，其中，过滤和减压浓缩同乙酸乙酯提取条件，减压浓缩的温度为80℃-90℃。
步骤4、水提取：乙醇提取过的残渣晾干无乙醇味，取一半残渣装入5L球形烧瓶里，加入蒸馏水，浸泡20-28h，加热回流2h-3h，然后常温常压下过滤，得到浸取液，将浸取液进行浓缩得黄褐色浸膏，即为水提取物，其中，过滤同乙酸乙酯提取条件，浓缩条件为100℃下常压。
下面结合三种拟缺香茶菜提取物体外抗肿瘤活性筛选实验来说明本发明的有益效果：
1供试细胞
人肝癌细胞系HepG2、人食管癌细胞系EC9706、人乳头状甲状腺癌细胞系TPC-1均为普通市售商品。
2主要仪器与耗材
生物安全柜，力康发展有限公司，HFsafe-1200TE；
CO2培养箱，力康发展有限公司，HF160W；
倒置生物显微镜，奥林巴斯，BDS200；
空气浴恒温摇床，国华企业，ZD-85型；
EXL800uv全自动酶标仪，Bio-Rad(美国)公司，168-1000XC；
精密可调微量移液器，Eppendorf(德国)公司；
96孔细胞培养板，Corning(美国)公司；
细胞培养瓶，Corning(美国)公司。
3主要试剂
优级胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；
胰蛋白酶，Gibco公司；
RPMI1640培养基、DMSO和四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium,MTT)，美国Solarbio公司。
4主要试剂配制
RPMI1640培养液：市售；
PBS缓冲液配制(PH7.4)：NaCl8.0g，KCl0.20g，NaHPO43.49g，KH2PO40.20g，溶于1000ml三蒸水中，0.22μm微孔滤器过滤后高压灭菌，4℃保存备用；
MTT配制：称取10mgMTT，加2mlPBS(PH7.4)搅拌30min，用0.22μm微孔滤器过滤除菌，分装4℃避光保存，两周内有效；
胰蛋白酶消化液：用PBS溶液溶解胰酶，配置成浓度为0.25％的胰酶溶液，调PH值为7.2左右，过滤除菌，分装-20℃保存。
5方法
5.1细胞培养
三种细胞株均为贴壁细胞，使用含10％胎牛血清的RPMI1640培养基，在37℃饱和湿度、5％CO2培养箱中常规培养；每2-3d换液1次，当细胞汇合度达90％时，进行传代培养。实验过程中用台盼蓝染色法检测细胞活性。消化传代方法：倒掉原培养基，加入PBS缓冲液润洗两次，向培养瓶加1ml胰蛋白酶，在倒置显微镜下观察，至细胞变圆、有间隙时将胰蛋白酶倒出，加入含10％胎牛血清RPMI1640培养基1ml，反复吹打细胞使其脱壁直至散开成单个，分装到新培养瓶中，加入含10％胎牛血清的培养基中培养。
5.2MTT法体外筛选抗肿瘤药物
5.2.1原理
MTT全称为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，简称噻唑蓝。活细胞线粒体中的琥拍酸脱氧酶能够使MTT还原为不溶于水的蓝紫色针状结晶甲瓚，并沉积在细胞中，而死细胞则没有该功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓚颗粒，使细胞着色，用酶标仪在490mn波长处测定其吸光度(A)，根据A值大小分析活细胞多少，A值可间接反映活细胞数量。
5.2.2实验方法
收集对数生长期细胞，用细胞计数板计数，调整细胞悬液浓度为7-8×104/ml，96孔细胞培养板中每孔加入100μl，每个浓度设三个复孔，细胞培养箱(5％CO2，37℃)中孵育24h，待细胞贴壁后，小心吸去上清，加入含有不同药物浓度的培养基100μl，并设正常对照孔、溶剂对照孔及阳性对照孔。连续培养48h后，每孔加入20μlMTT溶液(5mg/ml)，继续培养4h后，小心吸去孔内培养基，每孔加入DMSO150μl，置摇床上低速避光振荡6min，使结晶物充分溶解，酶标仪(检测波长490nm参考波长630nm)测定，并读取各孔吸光度(A)值，按下面的公式计算各药物对肿瘤细胞生长抑制率：
抑制率(％)＝(1-给药孔A值/正常对照孔A值)×100％
6结果
本研究以HepG2、TPC-1和EC9706细胞株为模型，对三种拟缺香茶菜提取物的体外抗肿瘤活性进行筛选。从下述表格中可看出，以HepG2细胞为模型，乙醚提取物、乙酸乙酯提取物、95％乙醇提取物的IC50分别为29.81μg/ml、56.74μg/ml、272.00μg/ml，乙醚提取物对该肿瘤细胞生长抑制作用最强，即抗肿瘤活性较强。以TPC-1细胞为模型，乙醚提取物和乙酸乙酯提取物的IC50分别为37.72μg/ml、76.60μg/ml，乙醚提取物的体外抗肿瘤活性较强。以EC9706细胞株为模型，三种提取物的IC50分别为16.06μg/ml、18.77μg/ml、113.59μg/ml，乙醚提取物和乙酸乙酯提取物的抗肿瘤活性均较好。根据该结果可知，拟缺香茶菜乙醚、乙酸乙酯、95％乙醇提取物均具有不同程度的体外抗肿瘤活性，以乙醚提取物和乙酸乙酯提取物抗肿瘤活性较为突出，提示可用于制备抗肿瘤药物。
表1拟缺香茶菜乙醚提取物对各细胞系48h体外抑制活性结果
表2拟缺香茶菜乙酸乙酯提取物对各细胞系48h体外抑制活性结果
表3拟缺香茶菜95％乙醇提取物对各细胞系48h体外抑制活性结果
体外实验表明：拟缺香茶菜乙醚提取物和乙酸乙酯提取物均具有较好的抗肿瘤效果。
实施例1
一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，具体按照以下步骤实施：采取拟缺香茶菜原药材(地上部分)，自然阴干，取阴干后的原药材1kg，用粉碎机粉粹，用无水乙醚5000ml浸泡21天(乙醚的用量为：乙醚要淹没药材为准)，用快速101的定性滤纸常温常压下过滤，在水温温度36℃，压强在0.09MPa的条件下，减压浓缩得墨绿色提取物浸膏，即为乙醚提取物29g。
乙酸乙酯提取：乙醚提取后的残渣倒入干净的搪瓷盘中在常温下把乙醚挥发完全，直到无乙醚味为好，然后把残渣装入一个5L球形烧瓶里，加入3500ml乙酸乙酯，浸泡24h，加热回流2h，然后常温常压下过滤，其中，滤纸采用快速101定性滤纸；然后得到2800ml的浸取液，减压浓缩得墨绿色浸膏，即乙酸乙酯提取物22g，其中，减压浓缩的条件为水温温度在65℃，压强0.09MPa。
乙醇提取：乙酸乙酯提取过的残渣晾干无乙酸乙酯味，装入5L球形烧瓶里，加入3500ml95％的乙醇溶液，浸泡24h，加热回流2h，然后常温常压下过滤，得到2500ml的浸取液，对浸取液进行减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙醇提取物26g，其中，过滤和减压浓缩压强同乙酸乙酯提取条件，温度为85℃。
水提取：乙醇提取过的残渣晾干无乙醇味，取一半残渣装入5L球形烧瓶里，加入4000ml蒸馏水，浸泡24h，加热回流2h，然后常温常压下过滤，得到3000ml的浸取液，将浸取液进行浓缩得黄褐色浸膏，即为水提取物23g，其中，过滤同乙酸乙酯提取条件，浓缩条件为100℃下常压。
实施例2
一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，具体按照以下步骤实施：
乙醚提取：采取拟缺香茶菜原药材(地上部分)，自然阴干，取原药材1kg，用粉碎机粉粹，用5000ml无水乙醚浸泡21天，用中速102的定性滤纸常温常压下过滤，在水温温度30℃，压强在0.1MPa的条件下，减压浓缩得墨绿色提取物浸膏，即为乙醚提取物30g。
乙酸乙酯提取：乙醚提取后的残渣倒入干净的搪瓷盘中在常温下把乙醚挥发完全，直到无乙醚味为好，然后把残渣装入一个5L球形烧瓶里，加入3500ml乙酸乙酯，浸泡20h，加热回流2.5h，然后常温常压下过滤，其中，滤纸采用定性滤纸(快速101)；然后得到约2800ml浸取液，减压浓缩得墨绿色浸膏乙酸乙酯提取物21.5g，其中，减压浓缩的条件为水温温度在60℃，压强0.07MPa。
乙醇提取：乙酸乙酯提取过的残渣晾干无乙酸乙酯味，装入5L球形烧瓶里，加入3500ml95％的乙醇溶液，浸泡28h，加热回流3h，然后常温常压下过滤，得到约2500ml浸取液，对浸取液进行减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙醇提取物25g，其中，过滤和减压浓缩同乙酸乙酯提取条件，温度为80℃。
水提取：乙醇提取过的残渣晾干无乙醇味，取一半残渣装入5L球形烧瓶里，加入4000ml蒸馏水，浸泡20h，加热回流3h，然后常温常压下过滤，得到约3000ml浸取液，将浸取液进行减压浓缩得黄褐色浸膏，即为水提取物23.5g，其中，过滤同乙酸乙酯提取条件，100℃下常压下蒸发得到提取物。
实施例3
一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，具体按照以下步骤实施：
乙醚提取：采取拟缺香茶菜原药材(地上部分)，自然阴干，取原药材1kg，用粉碎机粉粹，用5000ml无水乙醚浸泡21天，用快速101定性滤纸常温常压下过滤，在水温温度40℃，压强在0.07MPa的条件下，减压浓缩得墨绿色提取物浸膏，即为乙醚提取物29.5g。
乙酸乙酯提取：乙醚提取后的残渣倒入干净的搪瓷盘中在常温下把乙醚挥发完全，直到无乙醚味为好，然后把残渣装入一个5L球形烧瓶里，加入3500ml乙酸乙酯，浸泡28h，加热回流3h，然后常温常压下过滤，其中，滤纸采用定性滤纸(中速102)；然后得到约2800ml浸取液，减压浓缩得墨绿色浸膏乙酸乙酯提取物21.8g，其中，减压浓缩的条件为水温温度在70℃，压强0.1MPa。
乙醇提取：乙酸乙酯提取过的残渣晾干无乙酸乙酯味，装入5L球形烧瓶里，加入3500ml95％的乙醇溶液，浸泡20h，加热回流2.5h，然后常温常压下过滤，得到约2500ml浸取液，对浸取液进行减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙醇提取物26.2g，其中，过滤和减压浓缩压强同乙酸乙酯提取条件,但温度为90℃。
水提取：乙醇提取过的残渣晾干无乙醇味，取一半残渣装入5L球形烧瓶里，加入4000ml蒸馏水，浸泡28h，加热回流2.5h，然后常温常压下过滤，得到浸取液，将浸取液进行浓缩得黄褐色浸膏，即为水提取物23.8g，其中，过滤同乙酸乙酯提取条件，浓缩条件为100℃下常压浓缩。

Claims (10)

1.一种拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：
步骤1、乙醚提取：采取拟缺香茶菜原药材的地上部分，自然阴干，用粉碎机粉粹，用无水乙醚浸泡21天，用滤纸常温常压下过滤，减压浓缩得墨绿色提取物浸膏，即为乙醚提取物；
步骤2、乙酸乙酯提取：乙醚提取后的残渣在常温下把乙醚挥发完全；在残渣中加入乙酸乙酯浸泡并进行加热回流，乙酸乙酯的用量为乙酸乙酯淹没药材为准，然后常温常压下过滤；将浸取液减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙酸乙酯提取物；
步骤3、乙醇提取：乙酸乙酯提取过的残渣晾干无乙酸乙酯味，在乙酸乙酯提取过的残渣中加乙醇溶液浸泡并加热回流，然后常温常压下过滤，将浸取液进行减压浓缩得墨绿色浸膏，即为乙醇提取物；
步骤4、水提取：乙醇提取过的残渣晾干无乙醇味，取一半残渣加入蒸馏水溶液，进行浸泡并加热回流，然后常温常压下过滤，将得到的浸取液进行，常压浓缩浓缩得黄褐色浸膏，即为水提取物。
2.根据权利要求1所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述乙醚、乙酸乙酯、乙醇和水的用量为淹没药材为准，过滤的滤纸为中速102或者快速101的定性滤纸。
3.根据权利要求1所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述浸泡时间为20h-28h，加热回流时间为2h-3h。
4.根据权利要求1所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步骤1中的减压浓缩的条件为水温温度30℃-40℃，压强在0.07-0.1MPa。
5.根据权利要求3所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步骤1中的减压浓缩的压强为0.09MPa。
6.根据权利要求1所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步骤2减压浓缩的压强为0.07-0.1MPa；所述水温温度为60℃-70℃。
7.根据权利要求6所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步骤2的减压浓缩的压强为0.09MPa。
8.根据权利要求1所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步骤3中的减压浓缩的压强为0.07-0.1MPa；所述水温温度为80℃-90℃。
9.根据权利要求1所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步骤3中乙醇溶液的浓度为95％。
10.根据权利要求1所述的拟缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步骤4中浓缩条件为100℃下常压浓缩。
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