CN104042506A - 一种拟缺香茶菜提取物及其制备方法和在化妆品中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种拟缺香茶菜提取物，是从拟缺香茶菜中制备获得的，其包括的制备步骤如下：将拟缺香茶菜干燥粉碎，加入石油醚脱脂脱色；加入体积分数为60-85％的乙醇中，在70-85℃回流提取，获得提取液；依次用氯仿、乙酸乙酯萃取提取液；取乙酸乙酯部位浓缩干燥后分散于0-25％乙醇，离心分离取上清液；加入X-5大孔吸附树脂柱中吸附；依次用体积分数为15-40％和75-95％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为75-95％的乙醇洗脱部分。本发明还公开拟缺香茶菜提取物在化妆品中的应用。本发明效果是：起到协同美白抗衰老功效，且属于天然活性物质，添加于化妆品中，性质稳定，美白抗衰老功效显著，安全无刺激。

Description

一种拟缺香茶菜提取物及其制备方法和在化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及一种中草药提取物及其应用，具体的说是一种具有美白抗衰老功效的拟缺香茶菜提取物及其制备方法和在化妆品中的应用。

背景技术

美白和抗衰老是化妆品、美容业永恒的两大主题，亚洲女性尤为注重皮肤的白皙。皮肤颜色的深浅受多种因素调控，但主要取决于黑色素的含量及分布，黑色素的产生和紫外线的照射及自由基的作用有直接关系。皮肤衰老主要由自由基引起，空气污染、压力、药物等都会使身体产生自由基，而紫外线是皮肤自由基的主要来源。可见，自由基和紫外线是皮肤色素沉积和衰老的共同诱因。

皮肤抗衰老可以同时促进皮肤的美白，美白的皮肤看起来更年轻健康，二者相互协同、促进皮肤保持年轻、健康、美丽。因而，兼具抗氧化、清除自由基等抗衰老功效和美白功效的化妆品功效原料将能更好的起到美白抗衰老功效。

拟缺香茶菜Isodon excisotdes(Sun ex C.H.Hu)C.Y.Wu et H.W.Li别名野紫苏，为唇形科香茶菜属多年生草本植物，据《中华本草》记载，其味辛苦，性平；能祛风活血，解毒消肿，现代天然产物化学表明其含有丰富的二萜及三萜类化合物。在活性方面，目前研究较多的是其抗肿瘤生物活性，例如专利为201310119193.8的中国发明专利申请公布了拟缺香茶菜总二萜的制备方法，并指出其具有良好的抗肿瘤活性，但并没有公开其提取物还具有良好的美白抗衰老功效及应用。

目前，安全、有效、吸收好的美白、抗衰老化妆品添加剂较少，而是同时具有美白、抗衰老功效的化妆品添加剂更少，且多为组合物，成分复杂，存在一定风险。而拟缺香茶菜提取物成分相对明确，且具有较好的美白抗衰老功效，但在化妆品中的应用少见报道。

发明内容

本发明目的在于针对以上所述现有技术存在的不足，提供一种具有美白抗衰老功效的拟缺香茶菜提取物。

本发明的第二目的是提供上述拟缺香茶菜提取物的制备方法。

本发明的第三目的是提供上述拟缺香茶菜提取物在化妆品中的应用。

为了实现本发明上述目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种拟缺香茶菜提取物，是从拟缺香茶菜中制备获得的,其中含有30-40％的二萜类化合物和25-40％三萜类化合物。

所述二萜类化合物主要为对映贝壳杉烷型、三萜类化合物主要为乌苏烷型。

所述拟缺香茶菜提取物的制备方法包括的步骤如下：先将拟缺香茶菜干燥并粉碎，加入石油醚脱脂脱色；然后加入体积分数为60-85％的乙醇溶液中，在70-85℃回流提取，获得提取液；而后依次用氯仿和乙酸乙酯萃取提取液；取乙酸乙酯部位浓缩干燥后分散于体积分数为0-25％的乙醇溶液中，离心分离取上清液；加入X-5大孔吸附树脂柱中吸附；依次用体积分数为15-40％和75-95％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为75-95％的乙醇洗脱部分；经脱色后浓缩干燥。

一种拟缺香茶菜提取物的制备方法，其包括的步骤如下:

(1)将拟缺香茶菜干燥并粉碎，加入其体积2-5倍量的石油醚脱脂脱色10-20min；

(2)在脱色后的拟缺香茶菜中加入其体积4-10倍量的体积分数为60-85％的乙醇溶液，在70-85℃回流提取1-2h，将残渣重复提取1-2次，收集提取液，减压浓缩至无醇味得粗提物提取液；

(3)依次用氯仿和乙酸乙酯萃取粗提物提取液；

(4)取乙酸乙酯部位浓缩干燥，然后分散于体积分数为0-25％乙醇溶液中，离心分离，取上清液；

(5)所述上清液加入X-5大孔吸附树脂柱中吸附；吸附后依次用体积分数为15-40％和75-95％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为75-95％乙醇溶液洗脱部分，浓缩至无醇味得水溶液；

(6)在以上水溶液中加入溶液质量1％的活性炭脱色，过滤后浓缩干燥成粉末状即得拟缺香茶菜提取物。

本发明提取物是从唇形科香茶菜属植物拟缺香茶菜中提取、分离、纯化获得，其制备步骤如下：

将上述拟缺香茶菜提取物应用于配制美白抗衰老化妆品，其用量为0.5-25％(质量百分数)。

优选的，拟缺香茶菜提取物的用量为1-10％。

一种含拟缺香茶菜提取物的护肤霜，其包括以下质量百分比组分：

一种含拟缺香茶菜提取物的乳液，其包括以下质量百分比组分：

本发明拟缺香茶菜提取物的制备工艺简单，能最大限度的减少杂质的含量，提高活性物的含量，同时成分明确，质量稳定。通过DPPH自由基清除能力实验、ABTS总抗氧化实验能力实验、抑制酪氨酸酶活性实验及人体评价实验表明该提取物具有良好的自由基清除能力、抗氧化能力，同时能有效抑制酪氨酸酶活性，减少黑色素生产，加快皮肤表层细胞更新；其美白抗衰老功效强于拟缺香茶菜总二萜提取物，与现有技术比能起到协同美白抗衰老功效，且属于天然活性物质，添加于化妆品中，性质稳定，美白抗衰老功效显著，安全无刺激。

附图说明

图1-3为拟缺香茶菜提取物中主要化合物结构类型；

图4为拟缺香茶菜提取物DPPH清除作用；

图5为拟缺香茶菜提取物ABTS总抗氧化能力；

图6为拟缺香茶菜提取物对酪氨酸酶活性抑制作用。

具体实施方式

以下通过具体实施例来对本发明作进一步的说明，但这些实施例只是为了说明，不是对本发明的限制。

本发明一种拟缺香茶菜提取物，是从拟缺香茶菜中制备获得的,其中含有35％的二萜类化合物和353％三萜类化合物，其美白抗衰老功效显著，所述二萜类化合物主要为对映贝壳杉烷型、三萜类化合物主要为乌苏烷型。

所述拟缺香茶菜提取物的制备方法，其包括的步骤如下:

(1)将拟缺香茶菜干燥并粉碎，加入其体积3倍量的石油醚脱脂脱色15min；粉碎至50-150目；

(2)在脱色后的拟缺香茶菜中加入其体积8倍量的体积分数为75％的乙醇溶液，在780℃回流提取1.5h，将残渣重复提取2次，收集提取液，减压浓缩至无醇味得粗提物提取液；

(3)依次用氯仿和乙酸乙酯萃取粗提物提取液；

(4)取乙酸乙酯部位浓缩干燥，然后分散于体积分数为15％乙醇溶液中，离心分离，取上清液；

(5)所述上清液加入X-5大孔吸附树脂柱中吸附；吸附后依次用体积分数为30％和85％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为85％乙醇溶液洗脱部分，浓缩至无醇味得水溶液；

(6)在以上水溶液中加入溶液质量1％的活性炭脱色，过滤后浓缩干燥成粉末状即得拟缺香茶菜提取物。

实施例1 拟缺香茶菜提取物(Ⅰ)的制备

一种拟缺香茶菜提取物的制备方法，其包括以下步骤：取拟缺香茶菜干燥品200g，适当粉碎，加入400g石油醚脱脂脱色10min，弃去石油醚部分；加入体积分数为70％的酒精1L，在80℃回流提取1.5h，重复提取2次，过滤，合并滤液；以上滤液在60℃条件下减压浓缩至无醇味；依次用400ml的氯仿和400ml的乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯部位，浓缩干燥后分散于15％乙醇中，离心分离，取上清液；将上清液加入准备好的X-5大孔吸附树脂柱中，吸附20min；依次用体积分数为30％和80％的乙醇溶液洗脱，收集80％乙醇溶液的洗脱部分，浓缩得水溶液；在所述水溶液中加入1％的活性炭脱色，过滤后浓缩干燥成粉末状即得拟缺香茶菜提取物。

实施例2 拟缺香茶菜提取物(Ⅱ)的制备

一种拟缺香茶菜提取物的制备方法，其包括以下步骤：取拟缺香茶菜干燥品1000g，适当粉碎，加入到3000g石油醚脱脂脱色10min，弃去石油醚部分；在脱脂脱色的拟缺香茶菜中加入体积分数为70％酒精5L，80℃热回流提取1.5h，连续重复提取2次，过滤，合并收集的滤液；将滤液在60℃条件下减压浓缩至无醇味，再依次用2000ml的氯仿和2000m的l乙酸乙酯萃取；收集乙酸乙酯部位，浓缩干燥后分散于体积分数为15％的乙醇溶液中，离心分离，取上清液加入准备好的X-5大孔吸附树脂柱中，吸附20min；依次用体积分数为30％和80％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为80％乙醇溶液洗脱部分，浓缩得水溶液；加入1％的活性炭脱色，过滤，浓缩干燥成粉末状即得拟缺香茶菜提取物。

实施例3 拟缺香茶菜提取物(Ⅲ)的制备

取拟缺香茶菜干燥品500g，适当粉碎，加入到2000g石油醚脱脂脱色15min，弃去石油醚部分；在脱脂脱色的拟缺香茶菜中加入体积分数为80％的酒精4L，80℃回流提取2h，重复提取1次，过滤，合并收集的滤液；将滤液在60℃条件下减压浓缩至无醇味，再依次用800ml的氯仿和800ml的乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯部位，浓缩干燥后分散于体积分数为20％乙醇中，离心，取上清液加入准备好的X-5大孔吸附树脂柱中，吸附15min。依次用体积分数为35％和90％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为90％乙醇溶液洗脱部分，浓缩得水溶液；加入1％的活性炭脱色，过滤，浓缩干燥成粉末状即得拟缺香茶菜提取物。

对比例1 拟缺香茶菜总二萜提取物的制备

(1)、上样液的制备：将干燥的拟缺香茶菜1kg进行粉碎，加水煎煮两次，每次煎煮1小时，第一次加水12L，第二次在药渣中加水8L，合并两次水煎液，过滤，静置冷却至室温，得上清液10L，即为上样液；

(2)、对树脂预处理：方法是：AB-8大孔吸附树脂用体积分数为95％的乙醇浸泡24小时后，湿法装柱，并用体积分数为95％的乙醇动态清洗树脂，乙醇加入量为树脂5倍的体积量，再水洗至无醇味后，依次用质量百分比浓度为5％的盐酸溶液浸泡6小时，动态清洗树脂，盐酸溶液的加入量为树脂3倍体积量，用水洗至中性，之后用质量百分比浓度为5％的NaOH溶液浸泡6小时，动态清洗树脂，NaOH溶液加入量为树脂3倍体积量，并用水洗至中性，用体积分数为95％的乙醇动态洗脱，洗脱至加入5倍体积的水不呈白色混浊溶液为止，得预处理好的树脂；

(3)、装柱与吸附：将步骤(2)预处理好的树脂湿法装柱，使树脂床径高比达1：6，再将步骤(1)中的上样液通过树脂柱，以1.6BV/h流速进行动态吸附；

(4)除杂与洗脱：吸附完后，树脂柱先用6倍体积水洗脱，再用2倍体积的体积分数为25％的乙醇溶液洗脱，再用2倍体积的体积比浓度为90％的乙醇溶液洗脱，每次洗脱流速均为3BV/h，收集体积分数为90％乙醇溶液的洗脱液，减压回收溶剂乙醇，蒸干，即得拟缺香茶菜总二萜提取物。

实施例4 清除DPPH自由基能力测定

将上述拟缺香茶菜提取物溶于无水乙醇中，配制浓度分别为：36mg/ml、18mg/ml、9mg/ml、3mg/ml、1mg/ml，各浓度分别设5个重复，同时对比例1拟缺香茶菜提取物为对照；于96孔板分别加样量100μL；各孔再加分别加0.5mg/mlDPPH无水乙醇溶液100μL，稍加震荡，37℃进行反应30min；在492nm波长下测定各孔吸光度值；计算DPPH清除率：

DPPH清除率(％)＝[1－(Ax-Ax₀)/A₀]×100

式中：A₀:无水乙醇+DPPH吸光度，Ax:样品+DPPH吸光度，Ax₀:样品+无水乙醇吸光度。

实验结果见附图4。由附图4可知，本发明拟缺香茶菜提取物的DPPH清除率随浓度的增加而增大，在10mg/ml达到平台，并最终趋近于82％，且清除效果好于对比例1拟缺香茶菜提取物。可见本发明拟缺香茶菜提取物具有很好的DPPH自由基清除功效。

实施例5 ABTS总抗氧化能力测定

将上述拟缺香茶菜提取物溶于无水乙醇中，配置溶液分别为：18mg/ml、9mg/ml、4.5mg/ml、1.5mg/ml、0.5mg/ml，同时以对比例1拟缺香茶菜提取物为对照，于96孔酶标板每个检测孔中加入20μL终浓度为0.5mM的过氧化物酶工作液，然后在样品检测孔中分别加入10μL上述不同浓度的两种样品溶液，在阴性对照孔中加入10μL无水乙醇，在标准曲线检测孔中分别加入终浓度为0.075，0.060，0.045，0.030，0.015和0.0075mM的10μL Trolox标准溶液，轻轻混匀；每个检测孔内加入170μL终浓度为0.5mM的ABTS工作液，轻轻混匀；在空白对照孔中加入200μL无水乙醇。于室温孵育20min后测定405nm处的吸光度值，样品和Trolox的吸光度值为As，空白对照为Ac。ABTS抑制率计算公式如下：

ABTS抑制率(％)＝[(Ac－As)/Ac]×100％

实验结果如附图5所示。由附图5可知，本发明拟缺香茶菜提取物的ABTS抑制率随浓度的增加而增大，并在10mg/ml处达到60％的抑制率，且效果好于对比例1拟缺香茶菜提取物。可见本发明拟缺香茶菜提取物具有很好的总抗氧化能力。

实施例6 抑制酪氨酸酶活性测试

(一)材料

1.溶液配制

(1)PBS溶液(pH＝6.8,0.1mol/L)：①17.91g十二水磷酸氢二钠溶于去离子水中，用去离子水定容至500ml；②7.8g十二水磷酸二氢钠溶于去离子水中，用去离子水定容至500ml；③分别取92.6ml①和107.4ml②配制成200ml pH＝6.8的磷酸缓冲溶液。

(2)L-酪氨酸溶液：0.05g溶于35ml0.1mol/L的HCl中，用pH6.8的PBS(0.1mol/L)缓冲液定容至100mL。

(3)酪氨酸酶：酶活为100U/ml。

2.试样配制

将上述拟缺香茶菜提取物用去离子水溶解，配成浓度为18.0mg/ml、9.0mg/ml、4.5mg/ml、1.5mg/ml和0.5mg/ml的样品溶液，以对比例1拟缺香茶菜提取物为对照，进行下面试验。

(二)试验方法

1.按照表1加样，不加酪氨酸酶。

2.将溶液置于37℃水浴中恒温10min。

3.加入酪氨酸酶，将溶液置于37℃水浴中恒温10min后，于475nm下测量其吸光度值。酪氨酸酶活性抑制率计算公式如下：

酪氨酸酶活性抑制率(％)＝[1－(Ax-Ax₀)/A₀]×100

表1酪氨酸酶活性抑制实验配制表

实验结果见附图6。本例拟缺香茶菜提取物，在浓度在0.05％就显示有酪氨酸酶抑制活性，随着浓度增大活性抑制率增加，当浓度达到10mg/ml时，对酪氨酸酶活性抑制率达到90％，明显好于对比例1拟缺香茶菜提取物。可见本例拟缺香茶菜提取物在浓度为10mg/ml时，即能很好的抑制酪氨酸酶活性力，具有很好的美白功效。

实施例7 含拟缺香茶菜提取物的护肤霜

一种含拟缺香茶菜提取物的护肤霜，其包括以下质量百分比组分，具体参见以下质量分数表：

护肤霜的制备方法：将配方表中的A相组分混合，加热至85℃，熔化搅拌均匀，作为油相；将B相的组分混合，加热至85℃，搅拌溶解均匀，作为水相。将油相加入水相中，搅拌均匀后乳化均质7分钟后，搅拌冷却至50℃时，加入组分C，搅拌均匀，冷却至35℃，即为护肤霜。

按QB/T1857-2004《润肤膏霜》标准进行检验，达到有关产品标准要求；另外在上述特定的组分的配比关系下，稳定性高，且可以有效的保持拟缺香茶菜提取物的活性，具有优异的美白效果。

对比例2 含对比例1拟缺香茶菜提取物的护肤霜

含对比例1拟缺香茶菜提取物的护肤霜，其中各物质的用量参见质量分数表：

护肤霜的制备方法：将配方表中的A相组分混合，加热至85℃，熔化搅拌均匀，作为油相；将B相的组分混合，加热至85℃，搅拌溶解均匀，作为水相。将油相加入水相中，搅拌均匀后乳化均质7分钟后，搅拌冷却至50℃时，加入组分C，搅拌均匀，冷却至35℃，即为护肤霜。按QB/T1857-2004《润肤膏霜》进行检验，达到有关产品标准要求。

实施例8含拟缺香茶菜提取物的乳液

含拟缺香茶菜提取物的乳液，具体参见下表给出含有本发明的拟缺香茶菜提取物的乳液配方，各物质的用量用质量分数表示：

乳液的制备方法：将配方表中的A相组分混合，加热至85℃，熔化搅拌均匀，作为油相；将B相的组分混合，加热至85℃，搅拌溶解均匀，作为水相。将油相加入水相中，搅拌均匀后乳化均质7分钟后，搅拌冷却至50℃时，加入组分C，搅拌均匀，冷却至35℃，即为护肤乳液。按QB/T2286-1997《润肤乳液》进行检验，达到有关产品标准要求。另外在上述特定的组分的配比关系下，稳定性高，且可以有效的保持拟缺香茶菜提取物的活性，具有优异的美白效果。

对比例3 含对比例1拟缺香茶菜提取物的护肤乳液

含对比例1拟缺香茶菜提取物的护肤乳液，具体参见下表给出的各物质的用量用质量分数表示：

乳液的制备方法：将配方表中的A相组分混合，加热至85℃，熔化搅拌均匀，作为油相；将B相的组分混合，加热至85℃，搅拌溶解均匀，作为水相。将油相加入水相中，搅拌均匀后乳化均质7分钟后，搅拌冷却至50℃时，加入组分C，搅拌均匀，冷却至35℃，即为护肤乳液。按QB/T2286-1997《润肤乳液》进行检验，达到有关产品标准要求。

实施例9 人体试用评价实验

(一)实验方法

对实施例7、8及对比例2、3制备的膏霜乳液分别进行人体试用评价，同时以市售美白化妆品为对照；选取100名肤色较深的志愿者，男女各半，随机分成5组，每组10名男性、10名女性；分别使用市售美白抗衰老化妆品、本例护肤霜、对比例护肤霜、本例护肤乳液、对比例护肤乳液。使用方法为每日洁面后使用，每天一次，实验期为一个月，根据感官评价填写试用评价表。使用第3天、第7天、第14天、第28天各统计一次。

(二)实验结果

人体试用评价结果统计见下表。

人体试用评价结果

本表采用志愿者评价打分制，其中最高分为5，表示效果显著，最低分为1表示没有效果。

由上表结果可见，实施例7、8的化妆品美白抗衰老功效明显，且比市售相关产品功效显著。添加有拟缺香茶菜提取物的实施例7、8的化妆品使用肤感舒适，没有刺激性，有良好的美白、抗衰老协同作用，美白抗衰老功效显著。

上详细描述了本发明的较佳具体实施例，是发明人花费了大量人才财力和时间，在多次试验出来的的结果，应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明构思在现有技术基础上通过逻辑分析、推理或者根据有限的实验可以得到的技术方案，均应该在由本权利要求书所确定的保护范围之中。

Claims (8)

1.一种拟缺香茶菜提取物，其特征在于，是从拟缺香茶菜中制备获得的其中含有30-40％的二萜类化合物和25-40％三萜类化合物。

2.根据权利要求2所述的一种拟缺香茶菜提取物，其特征在于，所述二萜类化合物为对映贝壳杉烷型、三萜类化合物为乌苏烷型。

3.根据权利要求2所述的一种拟缺香茶菜提取物，其特征在于，制备方法包括的步骤如下：先将拟缺香茶菜干燥粉碎，加入石油醚脱脂脱色；然后加入体积分数为60-85％的乙醇溶液中，在70-85℃回流提取，获得提取液；而后依次用氯仿和乙酸乙酯萃取提取液；取乙酸乙酯部位浓缩干燥后分散于体积分数为0-25％乙醇溶液，离心分离取上清液；加入X-5大孔吸附树脂柱中吸附；依次用体积分数为15-40％和75-95％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为75-95％的乙醇洗脱部分。

4.根据权利要求1或者2所述的一种拟缺香茶菜提取物的制备方法，其特征在于，其包括的步骤如下:

(1)将拟缺香茶菜干燥并粉碎，加入其体积2-5倍量的石油醚脱脂脱色10-20min；

(2)在脱色后的拟缺香茶菜中加入其体积4-10倍量的体积分数为60-85％的乙醇溶液，在70-85℃回流提取1-2h，将残渣重复提取1-2次，收集提取液，减压浓缩至无醇味得粗提物提取液；

(3)依次用氯仿和乙酸乙酯萃取粗提物提取液；

(4)取乙酸乙酯部位浓缩干燥，然后分散于体积分数为0-25％乙醇溶液中，离心分离，取上清液；

(5)所述上清液加入X-5大孔吸附树脂柱中吸附；吸附后依次用体积分数为15-40％和75-95％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为75-95％乙醇溶液洗脱部分，浓缩得水溶液；

(6)在以上水溶液中加入溶液质量1％的活性炭脱色，过滤后浓缩干燥。

5.一种根据权利要求1-3所述的拟缺香茶菜提取物应用于配制美白抗衰老化妆品，其用量为0.5-25％。

6.根据权利要求5所述的拟缺香茶菜提取物应用于配制美白抗衰老化妆品，其特征在于，拟缺香茶菜提取物的用量为1-10％。

7.一种含拟缺香茶菜提取物的护肤霜，其特征在于，其包括以下质量百分比组分

8.含拟缺香茶菜提取物的乳液，其特征在于，其包括以下质量百分比组分：