CN104208202B - 一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用 - Google Patents
一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用。所述的南酸枣原花青素是以南酸枣树皮作为有效部位进行提取、纯化而得到的。本发明揭示了南酸枣树皮中含有极高含量的原花青素类物质。利用南酸枣树皮，经提取物纯化，制备的植物提取物，在低浓度下的抗氧化活性强于同质量浓度的碧萝芷化学成分分析表明该提取物中黄酮类成分、酚类成分以及标志性的黄烷‑3‑醇类抗氧化成分含量均高于碧萝芷该提取物的原料易于获得、提取工艺简单、成本低廉，具有十分广阔的市场前景与经济价值。
Description
技术领域
本发明属于植物提取技术领域，涉及一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用。
背景技术
原花青素，即儿茶素(catechin)或者表儿茶素(epicatechin)等黄烷-3-醇类物质的聚合物，聚合度通常在2～10之间，二～五聚体通常被称为低聚原花青素(OPC)、五聚体以上则称作高聚原花青素(PPC)。原花青素具有广泛的生物学活性，在医学界和营养学界，原花青素被普遍认为是清除自由基最强的天然抗氧化物质，其清除自由基活性约为同质量的维生素E的50倍。目前已知的富含原花青素的植物提取物主要有松树皮提取物—碧萝芷、葡萄籽提取物、黑果枸杞提取物、欧洲越橘提取物以及莲房提取物等。
南酸枣树皮(Cortex Choerospondias)，又名五眼果树皮，为漆树科南酸枣属植物南酸枣(Choerospondias axilaris(Roxb.)Burtt et Hill.)或毛脉南酸枣(Choerospondias axilaris(Roxb.)Burtt et Hill var.pubinervis(Rehd.et Wils.)Burtt et Hill.)的干燥树皮。《中华本草》及《南宁市药物志》中载其“味酸、涩，性凉”，具有清热解毒，祛湿，杀虫之功效，主治疮疡，烫火伤，阴囊湿疹、痢疾、白带、疥癣。民间用于治疗烧烫伤，有特效。有关南酸枣树皮的现代研究报道得不多，现有的文献主要集中在化学成分研究和抗菌、抗心肌缺血、抗缺氧等方面的报道。对南酸枣树皮化学成分的研究表明其含有谷甾醇、谷甾醇-3-O-葡萄糖苷，脂肪酸、槲皮素、芸香苷、木犀草素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(+)-儿茶素、(+)-儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(+)-儿茶素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷等。但是，关于南酸枣树皮中上述化合物的含量以及南酸枣树皮的其他生物学活性却未见文献报道。
发明内容
本发明解决的问题在于提供一种南酸枣原花青素及其制备方法和应用，开发利用南酸枣树皮中丰富的原花青素资源，该提取物的原料易于获得、提取工艺简单、成本低廉，具有十分广阔的市场前景与经济价值。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种南酸枣原花青素，是以南酸枣树皮作为有效部位进行提取、纯化而得到的；所述的提取是以酸化的醇或酮为溶剂、超声条件下进行提取，得到提取液；所述的纯化是将提取液吸附于大孔树脂柱中，经过水洗脱、静置、水洗脱、体积浓度70％以上的醇或酮洗脱的洗脱程序，收集包含南酸枣原花青素的洗脱液；洗脱液减压回收溶剂，并经浓缩、冻干后得到南酸枣原花青素。
所述的南酸枣原花青素，其含有的黄酮类成分以芦丁的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于1000mg；其含有的酚类成分和以没食子酸的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于500mg；其含有的黄烷-3-醇类成分以儿茶素水合物的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于100mg。
所述的南酸枣原花青素，其具有抗氧化活性，其对DPPH·的半数清除浓度不超过4μg/ml，对ABTS·的清除活性的TEAC值不低于6000μmolTrolox/1g，对铜离子还原能力的TEAC值不低于7000μmolTrolox/1g。
一种南酸枣原花青素的制备方法，包括以下操作：
1)以南酸枣树皮作为有效部位，将其粉碎后用酸化的醇或酮的溶液，在超声条件下提取，得到提取液；
2)将提取液上样于活化后的大孔树脂柱中，用水洗脱至流出液刚好变浑浊时，停止洗脱并静置5～10h；静置后再用水洗脱至流出液澄清为止，然后以体积浓度70％以上的醇或酮进行洗脱，并收集包含南酸枣原花青素的洗脱液；
3)将洗脱液减压回收溶剂，并经浓缩、冻干后得到南酸枣原花青素。
所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的南酸枣树皮为南酸枣(Choerospondias axillaris(Roxb.)Burtt et Hill.)或毛脉南酸枣(Choerospondias axillaris(Roxb.)Burtt et Hill var.pubinervis(Rehd.et Wils.)Burtt et Hill.)的树皮。
所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的提取液的提取为：
将南酸枣属植物的果序轴粉碎后，用0.01～10％乙酸或盐酸酸化的体积浓度50～90％的乙醇溶液浸泡，静置过夜后，在30～50KHz超声条件下提取20～60min，过滤，滤渣再次提取，合并滤液得到提取液。
所述的提取液浓缩后上样于活化后的大孔树脂柱中；
所述的大孔树脂的活化为：将大孔树脂装柱后以体积浓度95％的乙醇浸泡24h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止；然后以体积浓度5％的盐酸溶液浸泡12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性；再以4％的NaOH溶液浸泡12h,以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性；
提取液上样后的洗脱为：
将浓缩液上柱，用去离子水以0.5BV/h速度洗脱，待流出液刚好变浑浊时停止洗脱，静置6h后，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直至流出液澄清为止，然后以4BV的体积浓度80％的乙醇，以1BV/h速度洗脱、收集洗脱液；
洗脱液中原花青素的存在与否和含量可以用对-二甲氨基肉桂醛(p-Dimethylaminocinnamaldehyde)显色法进行分析。
所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的大孔树脂为D101、X-5、AB-8、XDA-7中的任何一种。
所述的南酸枣原花青素作为抗氧化剂在制备药物、保健品、化妆品、护肤品、饮料、食品、宠物粮或者饲料中的应用。
所述的南酸枣原花青素在制备自由基清除剂中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供的南酸枣原花青素及其制备方法，提供了原花青素新的提取来源，而且是活性更好、成本更为低廉的提取来源。本发明揭示了南酸枣树皮中含有丰富的原花青素类成分，从南酸枣树皮中制备的原花青素无论是清除自由基活性、抗氧化活性，还是抗氧化活性物质含量均高于当今最成功的天然抗氧化植物提取物—碧萝芷，显示出了广阔的应用价值和极大地开发前景。但是，从南酸枣树皮中制备原花青素的方法尚未见报道，亦未见基于南酸枣原花青素的应用案例。
本发明采用南酸枣树皮为原料经提取、纯化制备南酸枣原花青素，具有原料易于获得、制备方法简单、成本低廉等优点。所制备的原花青素在低浓度下抗氧化活性强于同质量浓度的碧萝芷，各类抗氧化活性成分含量均高于碧萝芷，具有极大地现实意义和推广价值。
附图说明
图1为清除DPPH·抗氧化活性测试中南酸枣原花青素和碧萝芷的浓度-清除率曲线对比图；
图2为清除ABTS·抗氧化活性测试中南酸枣原花青素和碧萝芷的浓度-清除率曲线对比图；
图3为CUPRAC抗氧化活性测试中南酸枣原花青素和碧萝芷的浓度-吸光度值曲线对比图；
具体实施方式
下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域的技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例1 一种南酸枣原花青素的制备方法
称取25g干燥的南酸枣树皮粗粉，置于1000mL锥形瓶中，加入800mL经0.5％(V/V)乙酸酸化的50％乙醇，静置过夜，次日于超声波发生器中，40KHz下超声提取30min,布氏漏斗滤过，滤渣加入600mL经0.5％乙酸酸化的50％乙醇，40KHz下超声提取30min，布氏漏斗滤过，滤渣加入600mL经0.5％乙酸酸化的50％乙醇，40KHz下超声提取30min，布氏漏斗滤过，合并三次滤液，滤液于旋转蒸发器中45℃下减压浓缩，得到提取物浓缩液，用于大孔树脂纯化。
取新的D101大孔树脂200g，装入层析柱中，以95％乙醇浸泡24h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止，然后以5％HCl浸泡12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性，然后以4％NaOH浸泡12h,以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性。将浓缩液上柱，用去离子水以0.5BV/h速度缓慢洗脱，待流出液刚好变浑浊时关闭层析柱活塞，静置6h后，打开层析柱活塞，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直至流出液澄清为止，然后以4BV的以0.5％乙酸酸化的无水乙醇，以1BV/h速度洗脱、收集洗脱液，与旋转蒸发器中减压回收乙醇，浓缩，冻干即得。
为评价通过此法制备的南酸枣原花青素的优劣，以碧萝芷为对照，分别以NaNO2-AlCl3-NaOH比色法、福林酚法和对-二甲氨基肉桂醛显色法对南酸枣干燥树皮和南酸枣原花青素中的黄酮类成分、酚类成分和黄烷-3-醇类成分进行定量分析，结果以每克受试样品中芦丁、没食子酸和儿茶素水合物的当量值表示，测定结果见表1。
表1 植物粗粉及提取物和碧萝芷中三大类抗氧化活性成分对比
结果显示，经过本工艺所制备的南酸枣树皮中酚类成分、黄酮类成分以及黄烷-3-醇类成分含量均高于对照碧萝芷。
同时，以碧萝芷为对照，采用清除DPPH·法、清除ABTS·法、以及基于铜离子还原能力(CUPRAC)的抗氧化活性测定方法，评价南酸枣原花青素的抗氧化活性。各受试样品清除DPPH·的活性以受试样品对DPPH·的半数清除浓度(IC50值)表示，IC50值越小，表示抗氧化活性越强；对ABTS·的清除活性以及对铜离子还原能力以水溶性维生素E(Trolox)抗氧化活性当量值(TEAC值)表示，TEAC值越大，表示抗氧化活性越强。测定结果分别见表2、表3及表4，以及图1、图2和图3。
表2 南酸枣原花青素和碧萝芷清除DPPH·活性对比
表3 南酸枣原花青素和碧萝芷清除ABTS·活性对比
表4 南酸枣原花青素和碧萝芷CUPRAC活性对比
结果显示，南酸枣原花青素的三个抗氧化活性指标均优于对照碧萝芷
实施例2 南酸枣原花青素的制备方法
称取50g干燥的南酸枣树皮粗粉，置于2000mL烧杯中，加入1500mL经1.0％HCl(V/V)乙酸酸化的70％乙醇，静置过夜，次日于超声波发生器中，40KHz下超声提取30min,布氏漏斗滤过，滤渣加入1200mL经1.0％HCl酸化的70％乙醇，40KHz下超声提取30min，布氏漏斗滤过，滤渣再加入1000mL经1.0％HCl酸化的70％乙醇，40KHz下超声提取30min，布氏漏斗滤过，合并三次滤液，滤液于旋转蒸发器中45℃下减压浓缩，得到提取物浓缩液，浓缩液用于大孔树脂纯化。
取新的X-5大孔树脂400g，装入层析柱中，以95％乙醇浸泡24h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止，然后以5％HCl浸泡12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性，然后以4％NaOH浸泡12h,以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性。将浓缩液上柱，用去离子水以0.5BV/h速度缓慢洗脱，待流出液刚好变浑浊时关闭层析柱活塞，静置6h后，打开层析柱活塞，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直至流出液澄清为止，然后以4BV的80％乙醇，以1BV/h速度洗脱、收集洗脱液，与旋转蒸发器中减压回收乙醇，浓缩，冻干即得。
实施例3 南酸枣原花青素的制备方法
称取50g干燥的毛脉南酸枣树皮粗粉，置于2000mL烧杯中，加入1500mL经1.0％HCl(V/V)乙酸酸化的70％甲醇，静置过夜，次日于超声波发生器中，50KHz下超声提取30min,布氏漏斗滤过，滤渣加入1200mL经1.0％HCl酸化的70％甲醇，50KHz下超声提取40min，布氏漏斗滤过，滤渣再加入1000mL经1.0％HCl酸化的70％甲醇，50KHz下超声提取60min，布氏漏斗滤过，合并三次滤液，滤液于旋转蒸发器中45℃下减压浓缩，得到提取物浓缩液，浓缩液用于大孔树脂纯化。
取新的AB-8大孔树脂400g，装入层析柱中，以95％乙醇浸泡24h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止，然后以5％HCl浸泡12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性，然后以4％NaOH浸泡12h,以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性。将浓缩液上柱，用去离子水以0.5BV/h速度缓慢洗脱，待流出液刚好变浑浊时关闭层析柱活塞，静置6h后，打开层析柱活塞，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直至流出液澄清为止，然后以4BV的无水乙醇，以1BV/h速度洗脱、收集洗脱液(洗脱液中原花青素的存在与否和含量用对-二甲氨基肉桂醛(p-Dimethylaminocinnamaldehyde)显色法进行分析)，与旋转蒸发器中减压回收乙醇，浓缩，冻干即得。
鉴于南酸枣花青素的抗氧化活性，可用于制备自由基清除剂，下面给出具体的制备实施例
实施例4 含有南酸枣原花青素的泡腾片
取南酸枣原花青素25g，抗坏血酸175g，无水柠檬酸600g，碳酸氢钠185g，甘草甜素15g，置于容器中，混合30min，转移至装有5/4寸平冲压片机上，压制成3/8寸的大片，研碎后过20目筛，制粒，充分混合，压片，共制成1000片，即得每片含南酸枣原花青素25mg的泡腾片。
实施例5 含有南酸枣原花青素的硬胶囊
取南酸枣原花青素50g，微晶纤维素100g，粉末状乳糖100g,置于容器中，混合30min，转移至装有5/4寸平冲压片机上，压制成3/8寸的大片，研碎后过20目筛，填入空壳胶囊中，共制成1000粒，即得每粒含南酸枣原花青素50mg的硬胶囊。
实施例6 含有南酸枣原花青素的美白保湿化妆水
按照如下配方制成：
变性乙醇5份，丙三醇10份，1,2-丁二醇2份，1,2-戊二醇1份，甜菜碱1份，柠檬酸0.50份，尿囊素0.10份，透明质酸钠0.10份，氨甲环酸0.10份，烟酰胺0.10份，抗坏血酸葡糖苷0.10份；生育酚乙酸酯0.10份，乙二胺四乙酸二钠0.05份，尼泊金甲酯0.05份，南酸枣原花青素0.10份，玫瑰纯露79.8份。
首先，按照配方剂量，先以变性乙醇溶解南酸枣原花青素和尼泊金甲酯，然后按照配方比例依次将其余各组分加入玫瑰纯露中，使充分溶解，超声振荡处理15min，混匀，过滤以除去杂质及不溶物，灌装，密闭保存。
实施例7 含有南酸枣原花青素的祛痘抗炎化妆水
按照如下配方制成：
变性乙醇10份，丙三醇5份，甜菜碱1份，柠檬酸0.50份，尿囊素0.20份，透明质酸钠0.10份，2-羟基丙酸-5-甲基-2-(1-甲基乙基)环己酯0.10份，烟酰胺0.10份，抗坏血酸葡糖苷0.10份；生育酚乙酸酯0.10份，甘草酸二钾0.10份，乙二胺四乙酸二钠0.05份，尼泊金甲酯0.05份，南酸枣原花青素0.2份，洋甘菊纯露82.4份。
首先，按照配方剂量，先以变性乙醇溶解南酸枣原花青素、2-羟基丙酸-5-甲基-2-(1-甲基乙基)环己酯及尼泊金甲酯，然后按照配方比例依次将其余各组分加入洋甘菊纯露中，使充分溶解，超声振荡处理15min，混匀，过滤以除去杂质及不溶物，灌装，密闭保存。
以上实施例，仅为本发明的部分具体实施方式，本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的技术人员在本发明所揭露的技术范围内，可不经过创造性劳动所想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种南酸枣原花青素，其特征在于，是以南酸枣树皮作为有效部位进行提取、纯化而得到的；所述的提取是以酸化的体积浓度50～90％的甲醇或乙醇为溶剂、超声条件下进行提取，得到提取液；所述的纯化是将提取液吸附于大孔树脂柱中，经过水洗脱、静置、水洗脱、体积浓度70％以上的甲醇或乙醇洗脱的洗脱程序，收集包含南酸枣原花青素的洗脱液；洗脱液减压回收溶剂，并经浓缩、冻干后得到南酸枣原花青素。
2.如权利要求1所述的南酸枣原花青素，其特征在于，其含有的黄酮类成分以芦丁的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于1000mg；其含有的酚类成分和以没食子酸的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于500mg；其含有的黄烷-3-醇类成分以儿茶素水合物的当量值表示，每g南酸枣原花青素中的含量不少于100mg。
3.如权利要求1所述的南酸枣原花青素，其特征在于，其具有抗氧化活性，其对DPPH·的半数清除浓度不超过4μg/ml，对ABTS·的清除活性的TEAC值不低于6000μmolTrolox/1g，对铜离子还原能力的TEAC值不低于7000μmolTrolox/1g。
4.一种南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，包括以下操作：
1)以南酸枣树皮作为有效部位，将其粉碎后用酸化的体积浓度50～90％的甲醇或乙醇的溶液，在超声条件下提取，得到提取液；
2)将提取液上样于活化后的大孔树脂柱中，用水洗脱至流出液刚好变浑浊时，停止洗脱并静置5～10h；静置后再用水洗脱至流出液澄清为止，然后以体积浓度70％以上的甲醇或乙醇进行洗脱，并收集包含南酸枣原花青素的洗脱液；
3)将洗脱液减压回收溶剂，并经浓缩、冻干后得到南酸枣原花青素。
5.如权利要求4所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的南酸枣树皮为南酸枣(Choerospondias axillaris(Roxb.)Burtt et Hill.)或毛脉南酸枣(Choerospondias axillaris(Roxb.)Burtt et Hill var.pubinervis(Rehd.etWils.)Burtt et Hill.)的树皮。
6.如权利要求4所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的提取液的提取为：
将南酸枣属植物的树皮粉碎后，用0.01～10％乙酸或盐酸酸化的体积浓度50～90％的乙醇溶液浸泡，静置过夜后，在30～50KHz超声条件下提取20～60min，过滤，滤渣再次提取，合并滤液得到提取液。
7.如权利要求4所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的提取液浓缩后上样于活化后的大孔树脂柱中；
所述的大孔树脂的活化为：将大孔树脂装柱后以体积浓度95％的乙醇浸泡24h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液澄清为止；然后以体积浓度5％的盐酸溶液浸泡12h，以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性；再以4％的NaOH溶液浸泡12h,以去离子水以2BV/h的流速洗涤，洗至流出液为中性；
提取液上样后的洗脱为：
将浓缩液上柱，用去离子水以0.5BV/h速度洗脱，待流出液刚好变浑浊时停止洗脱，静置6h后，先用去离子水以2BV/h速度洗脱，直至流出液澄清为止，然后以4BV的体积浓度80％的乙醇，以1BV/h速度洗脱、收集洗脱液；
洗脱液中原花青素的存在与否和含量可以用对-二甲氨基肉桂醛(p-Dimethylaminocinnamaldehyde)显色法进行分析。
8.如权利要求5或7所述的南酸枣原花青素的制备方法，其特征在于，所述的大孔树脂为D101、X-5、AB-8、XDA-7中的任何一种。
9.权利要求1所述的南酸枣原花青素作为抗氧化剂在制备药物、保健品、化妆品、食品、宠物粮或者饲料中的应用。
10.权利要求1所述的南酸枣原花青素在制备自由基清除剂中的应用。
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