CN104304002B - 一种华南忍冬叶片不定芽的诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种华南忍冬叶片不定芽的诱导方法，包括：步骤1)、利用壮苗培养基培养华南忍冬无菌苗，第25‑31天时，摘取叶片，其中，壮苗培养基含0.1‑0.5mg/L的α‑萘乙酸；步骤2)、将摘取的叶片制成0.2‑0.3cm2小块；步骤3)、利用诱导培养基培养0.2‑0.3cm2小块，获取华南忍冬不定芽，其中，诱导培养基含1.5‑2.0mg/L的6‑苄基氨基嘌呤和0.3‑0.5mg/L的呋喃氨基嘌呤。本发明能够在40天内从华南忍冬的叶片中诱导出华南忍冬不定芽，可以快速地培养出华南忍冬苗，满足市场需求。同时，为华南忍冬物种资源的保存和材料的来源提供新的参考途径，为今后更进一步研究和利用该物种提供技术参考。
Description
技术领域
本发明涉及一种华南忍冬叶片不定芽的诱导方法。
背景技术
华南忍冬，属多年生半常绿的木质藤本，别名山银花，为华南地区“金银花”中药材的主要品种，是我国大宗常用中药材之一。全株均可入药，供应临床药用，制剂生产，凉茶和保健品生产，同时可作为庭院绿化的观赏植物，市场需求量大。多年的开垦荒山导致华南忍冬野生资源逐渐减少，濒临灭绝，供需缺口很大，需要快速发展人工种植，而快速规模化种植与常规扦插、压条和种子繁殖周期长之间的矛盾日趋严重，因此，对华南忍冬组培快繁技术的研究日益重要。目前，对华南忍冬组织培养研究的报道不多，主要集中在以带腋芽的半木质化的茎段为外植体进行丛生芽诱导方面的研究，关于华南忍冬无菌组培苗叶片诱导芽的研究，国内外均尚未见报道。
发明内容
本发明设计开发了一种华南忍冬叶片不定芽的诱导方法。本发明能够在40天内从华南忍冬的叶片中诱导出华南忍冬不定芽，利用植物细胞的全能性和植物组织培养技术，可以快速地培养出华南忍冬无菌苗，满足市场需求。同时，本发明也为华南忍冬物种资源的保存和材料的来源提供新的参考途径，为今后更进一步研究和利用该物种提供技术参考。
本发明提供的技术方案为：
一种华南忍冬叶片不定芽的诱导方法，包括：
步骤1)、利用壮苗培养基培养华南忍冬无菌苗，第25-31天时，摘取叶片，其中，壮苗培养基含0.1-0.5mg/L的α-萘乙酸；
步骤2)、将摘取的叶片制成0.2-0.3cm2小块；
步骤3)、利用诱导培养基培养0.2-0.3cm2小块，获取华南忍冬不定芽，其中，诱导培养基含1.5-2.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.3-0.5mg/L的呋喃氨基嘌呤。
优选的是，所述的华南忍冬不定芽的诱导方法中，所述步骤1)中壮苗培养基为含0.1mg/Lα-萘乙酸的1/2MS培养基；步骤3)中诱导培养基为含2.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.5mg/L的呋喃氨基嘌呤的MS培养基。
优选的是，所述的华南忍冬不定芽的诱导方法中，所述1/2MS培养基是指将MS培养基中的大量元素含量减半，微量元素和琼脂含量不变配制的培养基。
优选的是，所述的华南忍冬不定芽的诱导方法中，所述步骤3)诱导培养基培养0.2-0.3cm2小块，培养温度28℃，相对湿度75％，光照时间12小时/天，光照强度3000勒克斯。
优选的是，所述的华南忍冬不定芽的诱导方法中，所述所制得小块在诱导培养基上培养40-45天，得到华南忍冬不定芽。
本发明所述的华南忍冬不定芽的诱导方法利用华南忍冬无菌苗的叶片作为外植体诱导愈伤组织，进而促进愈伤组织分化成不定芽，缩短了获得华南忍冬无菌试管苗周期。同时，本发明也为华南忍冬物种资源的保存和药材的来源提供新的参考途径，为更进一步研究和利用该物种提供技术参考。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
实施例一：
利用含0.1mg/Lα-萘乙酸的1/2MS培养基培养华南忍冬无菌苗，第31天时，摘取叶片作为外植体，在超净工作台上将叶片剪切成0.25cm2的小块，并在小块中再剪几刀以增加伤口面积，转接至诱导培养基中培养，其中诱导培养基为含2.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.5mg/L的呋喃氨基嘌呤的MS培养基，培养条件：培养温度28℃，相对湿度75％，光照时间12小时/天，光照强度3000勒克斯。培养40天后诱导出不定芽，诱导率达42.86％。
实施例二：
利用含0.5mg/Lα-萘乙酸的1/2MS培养基培养华南忍冬无菌苗，第25天时，摘取叶片作为外植体，在超净工作台上将叶片剪切成0.25cm2的小块，并在小块中再剪几刀以增加伤口面积，转接至诱导培养基中培养，其中诱导培养基为含1.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.3mg/L的呋喃氨基嘌呤的MS培养基，培养条件：培养温度28℃，相对湿度75％，光照时间12小时/天，光照强度3000勒克斯。培养40天后诱导出不定芽，诱导率达40.53％。
本发明能够在40天内从华南忍冬的叶片中诱导出华南忍冬不定芽，可以快速地培养出华南忍冬苗，满足市场需求。同时，本发明也为华南忍冬物种资源的保存和材料的来源提供新的参考途径，为今后更进一步研究和利用该物种提供技术参考。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (4)
1.一种华南忍冬叶片不定芽的诱导方法，其特征在于，包括：
步骤1)、利用壮苗培养基培养忍冬无菌苗，第25-31天时，摘取叶片，其中，壮苗培养基为含0.1-0.5mg/L的α-萘乙酸的1/2MS培养基；
步骤2)、将摘取的叶片制成0.2-0.3cm2小块；
步骤3)、利用诱导培养基培养0.2-0.3cm2小块，获取华南忍冬不定芽，其中，诱导培养基为含1.5-2.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.3-0.5mg/L的呋喃氨基嘌呤的MS培养基。
2.如权利要求1所述的华南忍冬叶片不定芽的诱导方法，其特征在于，所述1/2MS培养基是指将MS培养基中的大量元素含量减半，微量元素和琼脂含量不变配制的培养基。
3.如权利要求1所述的华南忍冬叶片不定芽的诱导方法，其特征在于，所述步骤3)诱导培养基培养0.2-0.3cm2小块，培养温度28℃，相对湿度75％，光照时间12小时/天，光照强度3000勒克斯。
4.如权利要求1所述的华南忍冬叶片不定芽的诱导方法，其特征在于，所述所制得小块在诱导培养基上培养40-45天，得到华南忍冬不定芽。
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