CN102640708A - 一种黄花倒水莲的组织培养繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物组织培养技术领域，提供一种黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，利用该方法能在短期内获得大量的黄花倒水莲组培苗，有效的解决黄花倒水莲产量低、采收困难、野生资源有限导致资源严重短缺等问题，同时为其优质苗木的规模化生产乃至资源培育与利用奠定基础，本发明主要包括以下步骤：（1）外植体采集及消毒；（2）不定芽的诱导；（3）不定芽增殖培养；（4）不定芽生根培养；（5）炼苗及移栽。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种黄花倒水莲的组织培养繁殖方法。
背景技术
黄花倒水莲（Polygala fallax Hemsl.）属远志科(Polygalaceae)远志属( Polygala) 植物，别名黄花参、鸡仔树、吊吊黄、黄花吊水莲、观音串、黄花大远志等，分布于湖南、福建、广西、江西、广东和云南等地，生于山坡疏林下或沟谷丛林中。黄花倒水莲属珍贵中药材，药用其全草；具有补益、强壮、祛湿、散瘀功效，主治虚弱虚肿、急慢性肝炎、腰腿酸痛、跌打损伤；其提取物具活血、抗炎、抗血脂作用，同时在小鼠上实验其具增强免疫及耐缺氧等作用。
黄花倒水莲药用价值早被民间所认知，加之近年来对其药用的日益重视，市场需求量大，而目前栽培仍以种子繁殖为主，种子产量低，采收困难，野生资源亦有限，导致资源严重短缺。
目前国内外关于黄花倒水莲研究主要集中于其药用成分及药用机理等方面，而组织培养方面，仅同属植物远志有相关报道；张杭颖等近年来有开展黄花倒水莲扦插、组织培养等试验研究，但未见具体报道，亦未见有规模化种植等相关报道。
发明内容
因此，针对上述问题，本发明提供一种黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，利用该方法能在短期内获得大量的黄花倒水莲组培苗，有效的解决黄花倒水莲产量低、采收困难、野生资源有限导致资源严重短缺等问题，同时为其优质苗木的规模化生产乃至资源培育与利用奠定基础。
一种黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，包括以下步骤：
（1）外植体采集及消毒：取黄花倒水莲当年生带腋芽幼嫩茎段作为外植体，用洗洁精浸泡处理10 min，用软毛刷轻轻刷洗茎段表面，流水冲洗30 min，置于超净工作台上，剪成带1-2个节间的茎段，用质量浓度为0.1% 的KMnO4浸泡处理5min，无菌水冲洗2遍，体积浓度为75%的乙醇浸泡处理20 s，再用质量浓度为0.1%的升汞浸泡处理10 min，无菌水冲洗6遍，获得无菌材料；
（2）不定芽的诱导：将上述无菌材料接种于不定芽诱导培养基上，在温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX的条件下诱导黄花倒水莲不定芽，诱导培养30天；
（3）不定芽增殖培养：将诱导出的黄花倒水莲不定芽转接至不定芽增殖培养基中进行不定芽的增殖培养，培养条件为：温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX，增殖培养25天；
（4）不定芽生根培养：将增殖培养的不定芽转入不定芽生根培养基中进行生根培养，培养条件为：温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX，生根培养25天即可获得组培苗；
（5）炼苗及移栽：待组培苗80%长出根原基时将其移至大棚进行炼苗，7 天后将瓶苗轻轻夹出，洗净根部培养基，用质量浓度为0.1%的代森猛锌浸泡处理2～3 min，阴干，待植株枝干上的水分阴干好后，移栽入事先已用质量浓度为0.1%的高锰酸钾消毒的移栽基质中，保持环境温度25±1 ℃，喷雾保湿，使空气湿度保持在85-95%，覆盖遮阴率70%的遮阳网，每7 天喷洒一次广谱杀菌剂，30 天后长出新根时浇一次两倍MS大量元素溶液。
进一步的改进是：所述步骤（2）中的不定芽诱导培养基为：1/2MS+BA1.0-3.0 mg/L+NAA0.1-0.3 mg/L，其中，不定芽诱导培养基中添加白砂糖30 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节不定芽诱导培养基的pH使pH=5.8-6.0。
进一步的改进是：所述步骤（3）中的不定芽增殖培养基为：WPM+BA1.0-3.0mg/L+NAA 0.1-0.3 mg/L L，不定芽增殖培养基中添加白砂糖30 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节不定芽增殖培养基的pH使pH=5.8-6.0。
进一步的改进是：所述步骤（4）中的不定芽生根培养基为：1/2WPM+IBA 0.1-0.3 mg/L+ABT 0.2-0.4 mg/L，不定芽生根培养基中添加白砂糖15 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节pH值5.8-6.0。
进一步的改进是：所述步骤（5）中的移栽基质及其重量比为：泥炭土：黄泥土：珍珠岩=2：1：1。
通过采用前述技术方案，本发明的有益效果是：本发明通过取以当年生幼嫩带腋芽（未萌发）茎段作为外植体，经消毒获得无菌材料后，通过诱导不定芽，再经不定芽的增殖、生根从而获得组培苗，组培苗经过驯化获得栽培苗，从外植体的诱导到获得存活的黄花倒水莲栽培苗只需110天，大大加快黄花倒水莲的繁殖速度。本发明中黄花倒水莲不定芽的诱导率可达95.1%，同时不定芽每月的增殖系数为6.12，生根率为95.67%，移栽成活率可达92.6%，因此可以在短期内提供大量的黄花倒水莲栽培苗，决解目前黄花倒水莲产量低、采收困难、野生资源亦有限、导致资源严重短缺等问题，同时为其优质苗木的规模化生产乃至资源培育与利用奠定基础。
具体实施方式
以下将结合具体实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
本发明的实施例为：
一种黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，包括以下步骤：
（1）外植体采集及消毒：于4月晴天取黄花倒水莲当年生带腋芽幼嫩茎段作为外植体，用洗洁精浸泡处理10 min，用软毛刷轻轻刷洗茎段表面，流水冲洗30 min，置于超净工作台上，剪成带1-2个节间的茎段，用质量浓度为0.1% 的KMnO4浸泡处理5 min，无菌水冲洗2遍，体积浓度为75%的乙醇浸泡处理20 s，再用质量浓度为0.1%的升汞浸泡处理10 min，无菌水冲洗6遍，获得无菌材料；
（2）不定芽的诱导：将上述无菌材料接种于不定芽诱导培养基上，在温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX的条件下诱导黄花倒水莲不定芽，诱导培养30天；所述不定芽诱导培养基为：1/2MS+BA2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L，不定芽诱导培养基中添加白砂糖30 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节不定芽诱导培养基的pH使pH=5.8-6.0；
（3）不定芽增殖培养：将诱导出的黄花倒水莲不定芽转接至不定芽增殖培养基中进行不定芽的增殖培养，培养条件为：温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX，增殖培养25天；不定芽增殖培养基为：WPM+BA2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L L，不定芽增殖培养基中添加白砂糖30 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节不定芽增殖培养基的pH使pH=5.8-6.0；
（4）不定芽生根培养：将增殖培养的不定芽转入不定芽生根培养基中进行生根培养，培养条件为：温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX，生根培养25天即可获得组培苗；不定芽生根培养基为：1/2WPM+IBA 0.2 mg/L+ABT 0.3mg/L，不定芽生根培养基中添加白砂糖15 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节pH值5.8-6.0；
（5）炼苗及移栽：待组培苗80%长出根原基时将其移至大棚进行炼苗，7 天后将瓶苗轻轻夹出，洗净根部培养基，用质量浓度为0.1%的代森猛锌浸泡处理2～3 min，阴干，待植株枝干上的水分阴干好后，移栽入事先已用质量浓度为0.1%的高锰酸钾消毒的移栽基质中，所述移栽基质及其重量比为：泥炭土：黄泥土：珍珠岩=2：1：1，保持环境温度25±1 ℃，喷雾保湿，使空气湿度保持在85-95%，覆盖遮阴率70%的遮阳网，每7 天喷洒一次广谱杀菌剂，30 天后长出新根时浇一次两倍MS大量元素溶液。
其中，不定芽诱导培养基、不定芽增殖培养基中的BA，即苄氨基腺嘌呤，其使用量在1.0-3.0 mg/L，都具有促进不定芽萌发的作用；NAA，即α-萘乙酸，其使用量在0.1-0.3 mg/L，都具有促进不定芽生根的作用，BA和NAA在以上的范围内皆可达到本发明的目的。不定芽生根培养基中的IBA，即吲哚丁酸，其使用量在 0.1-0.3 mg/L，都具有促进主根生长，提高发芽率、成活率的作用，ABT，即生根粉，其用量在 0.2-0.4 mg/L，都具有促进生根的作用，IBA和ABT在以上的使用范围内皆可达到本发明的目的。
另外，不定芽的诱导、不定芽增殖培养、不定芽生根培养的过程中，改变光照强度，则所需的光照时间也发生改变，例如，增加光照强度则所需的光照时间也相应的缩短。
以上所记载，仅为利用本创作技术内容的实施例，任何熟悉本项技艺者运用本创作所做的修饰、变化，皆属本创作主张的专利范围，而不限于实施例所揭示者。
Claims (5)
1.一种黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）外植体采集及消毒：取黄花倒水莲当年生带腋芽幼嫩茎段作为外植体，用洗洁精浸泡处理10 min，用软毛刷轻轻刷洗茎段表面，流水冲洗30 min，置于超净工作台上，剪成带1-2个节间的茎段，用质量浓度为0.1% 的KMnO4浸泡处理5min，无菌水冲洗2遍，体积浓度为75%的乙醇浸泡处理20 s，再用质量浓度为0.1%的升汞浸泡处理10 min，无菌水冲洗6遍，获得无菌材料；
（2）不定芽的诱导：将上述无菌材料接种于不定芽诱导培养基上，在温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX的条件下诱导黄花倒水莲不定芽，诱导培养30天；
（3）不定芽增殖培养：将诱导出的黄花倒水莲不定芽转接至不定芽增殖培养基中进行不定芽的增殖培养，培养条件为：温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX，增殖培养25天；
（4）不定芽生根培养：将增殖培养的不定芽转入不定芽生根培养基中进行生根培养，培养条件为：温度25±1 ℃，光照时间11 h/d，光照强度3000 LX，生根培养25天即可获得组培苗；
（5）炼苗及移栽：待组培苗80%长出根原基时将其移至大棚进行炼苗，7 天后将瓶苗轻轻夹出，洗净根部培养基，用质量浓度为0.1%的代森猛锌浸泡处理2～3 min，阴干，待植株枝干上的水分阴干好后，移栽入事先已用质量浓度为0.1%的高锰酸钾消毒的移栽基质中，保持环境温度25±1 ℃，喷雾保湿，使空气湿度保持在85-95%，覆盖遮阴率70%的遮阳网，每7 天喷洒一次广谱杀菌剂，30 天后长出新根时浇一次两倍MS大量元素溶液。
2.根据权利要求1所述的黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，其特征在于：所述步骤（2）中的不定芽诱导培养基为：1/2MS+BA1.0-3.0 mg/L+NAA0.1-0.3 mg/L，其中，不定芽诱导培养基中添加白砂糖30 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节不定芽诱导培养基的pH使pH=5.8-6.0。
3.根据权利要求1所述的黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，其特征在于：所述步骤（3）中的不定芽增殖培养基为：WPM+BA1.0-3.0mg/L+NAA 0.1-0.3 mg/L L，不定芽增殖培养基中添加白砂糖30 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节不定芽增殖培养基的pH使pH=5.8-6.0。
4.根据权利要求1所述的黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，其特征在于：所述步骤（4）中的不定芽生根培养基为：1/2WPM+IBA 0.1-0.3 mg/L+ABT 0.2-0.4 mg/L，不定芽生根培养基中添加白砂糖15 g/L，卡拉胶6.5 g/L，调节pH值5.8-6.0。
5.根据权利要求1所述的黄花倒水莲的组织培养繁殖方法，其特征在于：所述步骤（5）中的移栽基质及其重量比为：泥炭土：黄泥土：珍珠岩=2：1：1。
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