CN104303820B - 一种活体桑蚕蛹虫草的规模化生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种活体桑蚕蛹虫草的规模化生产方法，包括以下步骤：灭菌、接种、发菌期培养、转色期培养、出草期培养、采收、烘干。其中，发菌期包括温度、湿度、光照、通风的控制；转色期包括温度、湿度、光照、转色时间的控制；出草期控制原基期、子实体生长前期、子实体生长后期的培养。通过本发明制备的蛹虫草活性成分含量丰富，接种成功率高，可达96%以上，具备了原生态蛹虫草产业化发展的基础，提高了蛹虫草成本产出率，具有较大的经济效益。

Description

一种活体桑蚕蛹虫草的规模化生产方法

技术领域

本发明涉及一种活体桑蚕蛹虫草的规模化生产方法，属于蛹虫草培养技术领域。

背景技术

冬虫夏草是高级滋补名贵中药材，冬虫夏草首次记载使用时清代吴仪洛《本草丛新》，书中认为冬虫夏草性味甘、温。功能补肾、化痰止咳，可用于久咳虚喘，产后虚弱、阳痿阴冷等“虚”的病症。

随着人们对健康越来越重视，与此同时在野生冬虫夏草巨大利润的驱使下，越来越多的人从事虫草的采集和挖掘，加剧了野生冬虫夏草的减少，并对自然生态环境造成了不同程度的破坏。人工培养蛹虫草是解决野生虫草来源不足的良好途径，并且相关的研究很多。目前，采用最为广泛、技术最为成熟的栽培方式为代料栽培，主要流程包括接种、发菌、催蕾、培养和采收；其中，接种室指将蛹虫草菌种置于培养基中；发菌是指使蛹虫草菌种在培养基中生长产生培养料中的菌丝和气生菌丝；催蕾是指诱导子实体原基的形成；培养是指使子实体原基生长至符合采收标准；采收是指将符合采收标准的蛹虫草子实体收获。这种栽培方式原料来源广泛，操作简便，适合规模化和标准化生产。

蛹虫草的各种营养成分因素与野生冬虫夏草基本相同，且在有些成分上还远高于野生虫草。虫草多糖和SOD等多种生物活性物质的药用价值最为显著。虫草酸（甘露醇）可以显著地降低颅压，促进机体新陈代谢，因而使脑溢血和脑血栓病症得到缓解。虫草素是一种具有抗菌活性的核苷类物质，对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖，它能促进淋巴细胞转化，提高血清IgG的抗体含量和机体的免疫功能，增强机体自身抗癌抑癌的作用。此外，蛹虫草还含有丰富的硒（Se），这种微量元素已被大家公认是人体必需的微量元素，是谷胱甘肽过氧化酶的活性中心，以硒半胱氨酸的形式连接在酶蛋白的肽链上，保护细胞膜的稳定性以及正常的通透性，并刺激免疫球蛋白和抗体的产生，增强机体免疫和抗氧化能力。虫草素（3’-脱氧腺苷）可以抗病毒、抗菌，可明显地抑制肿瘤生产、干扰人体RNA及DNA合成。虫草酸（D-甘露醇）可以预防治疗脑血栓、脑溢血、肾功能衰竭，利尿。

然而，现有人工培养蛹虫草的方法中，培养的蛹虫草产量和品质较低。

发明内容

针对上述问题，本发明经过对不同状态下、不同环境中虫草菌种的繁殖状况以及后期生长状况乃至虫草成熟整个生长周期的研究，研制出了一种活体桑蚕蛹虫草的规模化生产方法。

本发明的技术方案如下：

一种活体桑蚕蛹虫草（即北冬虫夏草、蛹虫草）的规模化生产方法，包括以下步骤：

（1）灭菌

将接种用的接种枪、罐头瓶培养基进行灭菌消毒；其中，接种枪用报纸包好，于高压锅内121℃灭菌20min，放凉备用；将灭菌的罐头瓶培养基冷却到30℃放入接种室内，用气雾剂或甲醛熏蒸消毒，待罐头瓶培养基冷却到30℃以下进行接种。

罐头瓶培养基即蚕蛹培养基：将新鲜的蚕蛹（5龄蚕蛹）放入洁净的罐头瓶中，蚕蛹盖瓶底为宜，用裁好的聚丙烯薄膜封口，并用橡皮筋扎紧。将薄膜封于瓶口正中，上面展平，四周薄膜扎紧后密封无缝隙。

（2）接种

在超净工作台内，向罐头瓶培养基内注入5-8ml质量检验合格的液体菌种，迅速用薄膜封好瓶口后移入培养室。

（3）发菌期培养

发菌期培养室内温度、湿度、光照、通风条件的设定：

①温度控制

发菌初期温度为15-18℃，待培养基料面长满菌丝后缓慢升高温度，升高后的温度为20-22℃。优选的，发菌初期温度为16℃，升高后的温度为21℃。

②湿度控制

菌丝培养期间空气相对湿度为63-67%。若空气相对温度较低，可适当向室内喷水；若空气相对湿度过大应加强通风换气，降低空气湿度。优选的，菌丝培养期间空气相对湿度为65%。

③光照控制

菌丝培养期间培养室保持黑暗，光线较强易导致菌丝老化，过早进入生殖生长，降低产量，影响质量。

④通风控制

发菌期间不通风，蛹虫草是介于好气性与兼气性之间，对氧气需求量小，因此发菌期不能通风，但要防止煤气或其他有害气体进入。

（4）转色期培养

当菌丝全部长满培养基，料面产生数量不等、大小不一的多个圆丘状隆起时，即进入转色期培养。

①温度控制

前期白天温度为19-21℃，逐渐升温，后期白天温度为22-24℃，转色期间，夜晚温度为8-10℃，保证昼夜温差。优选的，前期白天温度为20℃，逐渐升温，后期白天温度为23℃，转色期间，夜晚温度为9℃。

②湿度控制

由前期空气相对湿度65%，逐渐升高到85%-90%。优选的，空气相对湿度逐渐升高到87%。

③光照控制

增加散射光照时间，光照强度为200-250勒克斯，光照时间由12h逐渐延长到18小时。优选的，光照强度为230勒克斯。

④转色时间控制

转色期为3-10天，菌丝逐渐由白色变成橘黄色，转色后再培养1-3天。优选的，转色后再培养2天。

（5）出草期培养

①原基期培养

原基形成后，温度保持在22-23℃，空气相对温度逐渐加大到85-90%，光照延长至15h，经1-3d培养，原基顶端开始出现锥子状的子实体。

②子实体生长前期培养

生长前期子实体呈橘黄色、1-2cm，在罐头瓶上方薄膜刺几个小孔，温度控制在21-23℃，空气相对湿度在80-90%，光照18h/d不可连续光照。蛹虫草具有趋光性，应及其调整光源光照方向，使子实体直立生长。优选的，温度控制在22℃，空气相对湿度在85%。

③子实体生长后期培养

待子实体不再增粗、增长，头部开始膨大时，每天光照20h，温度为23℃，空气相对湿度控制在85-90%。优选的，空气相对湿度控制在88%。

（6）采收

待蛹虫草子实体膨大后，再培养2-5d，待蛹虫草子实体头部顶端出现龟背状花纹，并出现粉状的子囊孢子时蛹虫草成熟，进行采收。

进一步地，采收后的烘干过程：

将采收后的新鲜蛹虫草放入烘干炉内50℃烘干至含水分质量分数为5-10%，即得。优选的，烘干至含水分质量分数为7%。

培养期间应注意的问题：

1、空气湿度

培养室内保持潮湿而且感觉不到燥热，若罐头瓶内壁有水珠，说明水分偏大，可加强通风。

2、出草期通风增氧

出草时，二氧化碳含量不超过10%，每天通风15-30min。

3、出草后定期消毒

罐头瓶中出草后，栽培室每3天用克霉灵消毒一次，防治病虫害的发生。

本发明所取得有益效果如下：

通过本发明制备的蛹虫草活性成分含量丰富，接种成功率高，可达96%以上，具备了原生态蛹虫草产业化发展的基础，提高了蛹虫草成本产出率，具有较大的经济效益。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1 一种活体桑蚕蛹虫草（即北冬虫夏草、蛹虫草）的规模化生产方法，包括以下步骤：

（1）灭菌

将接种用的接种枪、罐头培养基进行灭菌消毒；其中，接种枪用报纸包好，于高压锅内121℃灭菌20min，放凉备用；将灭菌的罐头瓶培养基冷却到30℃放入接种室内，用气雾剂或甲醛熏蒸消毒，待罐头瓶培养基冷却到30℃以下进行接种。

（2）接种

在超净工作台内，向罐头瓶培养基内注入5-8ml质量检验合格的液体菌种，迅速用薄膜封好瓶口后移入培养室。

（3）发菌期培养

发菌期培养室内温度、湿度、光照、通风条件的设定：

①温度控制

发菌初期温度为15-18℃，待培养基料面长满菌丝后缓慢升高温度，升高后的温度为20-22℃。

②湿度控制

菌丝培养期间空气相对湿度为63-67%。若空气相对温度较低，可适当向室内喷水；若空气相对湿度过大应加强通风换气，降低空气湿度。

③光照控制

菌丝培养期间培养室保持黑暗，光线较强易导致菌丝老化，过早进入生殖生长，降低产量，影响质量。

④通风控制

发菌期间不通风，蛹虫草是介于好气性与兼气性之间，对氧气需求量小，因此发菌期不能通风，但要防止煤气或其他有害气体进入。

（4）转色期培养

当菌丝全部长满培养基，料面产生数量不等、大小不一的多个圆丘状隆起时，即进入转色期培养。

①温度控制

前期白天温度为19-21℃，逐渐升温，后期白天温度为22-24℃，转色期间，夜晚温度为8-10℃，保证昼夜温差。

②湿度控制

由前期空气相对湿度65%，逐渐升高到85%-90%。

③光照控制

增加散射光照时间，光照强度为200-250勒克斯，光照时间由12h逐渐延长到18小时。

④转色时间控制

转色期为3-10天，料面菌丝逐渐由白色变成橘黄色，转色后再培养1-3天。

（5）出草期培养

①原基期培养

原基形成后，温度保持在22-23℃，空气相对温度逐渐加大到85-90%，光照延长至15h，经1-3d培养，原基顶端开始出现锥子状的子实体。

②子实体生长前期培养

生长前期子实体呈橘黄色、1-2cm，在罐头瓶上方薄膜刺几个小孔，温度控制在21-23℃，空气相对湿度在80-90%，光照18h/d不可连续光照。蛹虫草具有趋光性，应及其调整光源光照方向，使子实体直立生长。

③子实体生长后期培养

待子实体不再增粗、增长，头部开始膨大时，每天光照20h，温度为23℃，空气相对湿度控制在85-90%。

（6）采收

待蛹虫草子实体膨大后，再培养2-5d，待蛹虫草子实体头部顶端出现龟背状花纹，并出现粉状的子囊孢子时蛹虫草成熟，进行采收。

（7）烘干

将采收后的新鲜蛹虫草放入烘干炉内50℃烘干至含水分质量分数为5-10%，即得。

试验例1 对实施例1获得的蛹虫草进行活性成分检测

山东大学生命科学院对本发明获得的蛹虫草的活性成分检测结果如表1所示，其中，本发明获得的蛹虫草粉碎后过60目筛。

表1 蛹虫草中活性成分在蛹虫草中的占有量

。

Claims (1)

1.一种活体桑蚕蛹虫草的规模化生产方法，包括以下步骤：

灭菌

将接种用的接种枪、罐头瓶培养基进行灭菌消毒；其中，接种枪用报纸包好，于高压锅内121℃灭菌20min，放凉备用；将灭菌的罐头瓶培养基冷却到30℃放入接种室内，用气雾剂或甲醛熏蒸消毒，待罐头瓶培养基冷却到30℃以下进行接种；

接种

在超净工作台内，向罐头瓶培养基内注入5-8ml的液体菌种，迅速用薄膜封好瓶口后移入培养室；

发菌期培养

①温度控制

发菌初期温度为16℃，待培养基料面长满菌丝后缓慢升高温度，升高后的温度为21℃；

②湿度控制

菌丝培养期间空气相对湿度为65%；

若空气相对温度较低，可适当向室内喷水；若空气相对湿度过大应加强通风换气，降低空气湿度；

③光照控制

菌丝培养期间培养室保持黑暗；

④通风控制

发菌期间不通风；

转色期培养

①温度控制

前期白天温度为20℃，逐渐升温，后期白天温度为23℃，转色期间，夜晚温度为9℃，保证昼夜温差；

②湿度控制

由前期空气相对湿度65%，逐渐升高到87%；

③光照控制

增加散射光照时间，光照强度为230勒克斯，光照时间由12h逐渐延长到18小时；

④转色时间控制

转色期为3-10天，菌丝逐渐由白色变成橘黄色，转色后再培养2天；

出草期培养

①原基期培养

原基形成后，温度保持在22-23℃，空气相对温度逐渐加大到85-90%，光照延长至15h，培养1-3d；

②子实体生长前期培养

子实体生长前期在罐头瓶上方薄膜刺几个小孔，温度控制在22℃，空气相对湿度在85%，光照18h/d不可连续光照；

③子实体生长后期培养

待子实体不再增粗、增长，头部开始膨大时，每天光照20h，温度为23℃，空气相对湿度控制在88%；

采收

待蛹虫草子实体膨大后，再培养2-5d，待蛹虫草子实体头部顶端出现龟背状花纹，并出现粉状的子囊孢子时蛹虫草成熟，进行采收；

采收后的烘干，具体步骤如下：

将采收后的新鲜蛹虫草放入烘干炉内50℃烘干至含水分质量分数为7%，即得。