CN104292092B - 从山核桃外果皮中分离纯化4,8-dht的方法及4,8-dht应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了从山核桃外果皮中分离纯化4,8-DHT的方法及4,8-DHT应用,通过它激式超声发声超声提取得到山核桃外果皮提取液,减压浓缩,然后过X-5大孔树脂,用水与乙醇的混合溶液进行梯度洗脱,收集水与乙醇体积比为4:6的混合液洗脱得到的洗脱液,减压浓缩得到浓缩液,硅胶柱层析,用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂梯度洗脱,1/2柱体积收集一瓶流份,共收集36瓶流份,合并第10-18瓶流份,减压浓缩,乙酸乙酯结晶,得4,8-二羟基-1-四氢萘酮结晶化合物,该4,8-DHT为1:1外消旋体,杂质少,纯度为99.5-99.8%,提取率达到94%以上,该4,8-DHT外消旋体具有抑制植物种子萌发和幼苗生长的作用。
Description
技术领域
本发明涉及4,8-二羟基-1-四氢萘酮提取,具体涉及从山核桃外果皮中分离纯化4,8-二羟基-1-四氢萘酮的方法及4,8-DHT应用。
背景技术
4,8-二羟基-1-四氢萘酮(4,8-DHT),化学名4,8-dihydroxy-1-tetralone,无色细簇针状结晶,其中4位与羟基相连的碳为一个手性碳。4,8-DHT的左旋对映体(–)被称为regiolone,右旋对映体(+)被称为isosclerone。Regiolone最早是从青核桃中鉴定出的,可用于治疗皮肤瘙痒及痛等病症。Isosclerone最早是从Sclerotiniasclerotium中分离鉴定出,后来从一些真菌中也分离出了该化合物,它能引起葡萄灰色斑点病。山核桃外果皮中也含有4,8-DHT,是一个1:1外消旋体,熔点366-368K,溶于水、乙醇、丙酮及氯仿,[α]20 D=±0°(c1.3,CH2Cl2)。目前公开了对山核桃外果皮中含有的4,8-DHT的鉴定,如用高效液相色谱法鉴定,一般用甲醇浸泡、回流提取山核桃外果皮提取物,再用色谱柱鉴定,4,8-DHT含量约0.036%左右。但未见从山核桃外果皮中分离纯化4,8-二羟基-1-四氢萘酮报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种从山核桃外果皮中分离纯化4,8-DHT的方法,该方法杂质少,纯度高,提取效率高。本发明还公开了4,8-DHT在抑制植物种子萌发和幼苗生长的应用。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:从山核桃外果皮中分离纯化4,8-DHT的方法,步骤如下:
(1)将风干的山核桃外果皮粉碎,过45-60目筛,得到山核桃外果皮粉末;
(2)将山核桃外果皮粉末装入超声萃取釜中并加入蒸馏水,其中山核桃外果皮粉末与蒸馏水的质量体积比为1:18-20(Kg/L),在超声发生方式为:它激式超声发声,径向振动柱状换能器,超声波功率为100W,超声频率为28kHz,提取方式为间隔2min超声一次,每次4min,于25℃气升式搅拌条件下,超声提取30-45min,过滤,得到山核桃外果皮提取液;
(3)将山核桃外果皮提取液在压力为450-500Pa的条件下,减压浓缩至初始体积的1/10,然后过X-5大孔树脂,依次用体积比为10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9、0:10的水与乙醇的混合溶液进行梯度洗脱,每个梯度洗脱的水与乙醇混合溶液体积为5柱体积,洗脱过程中保持流速为2-3滴/秒,收集水与乙醇体积比为4:6的混合液洗脱得到的洗脱液,在压力为450-500Pa的条件下,减压浓缩55-70min,得到浓缩液;
(4)将上述浓缩液上200-300目的硅胶柱层析,依次用体积比为3:1,2:1,1:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱,体积比为3:1相的混合溶剂用量为10柱体积,体积比为2:1相的混合溶剂用量为5柱体积,体积比为1:1相的混合溶剂用量为3柱体积,洗脱流速5mL/min,每1/2柱体积收集一瓶流份,共收集36瓶流份,合并第10-18瓶流份,减压浓缩,用乙酸乙酯结晶,得4,8-二羟基-1-四氢萘酮结晶化合物。
4,8-DHT在抑制植物种子萌发和幼苗生长的应用。
与现有技术相比,本发明的优点在于从山核桃外果皮中分离纯化4,8-DHT的方法及4,8-DHT应用,通过它激式超声发声超声提取得到山核桃外果皮提取液,减压浓缩,然后过X-5大孔树脂,用水与乙醇的混合溶液进行梯度洗脱,收集水与乙醇体积比为4:6的混合液洗脱得到的洗脱液,减压浓缩得到浓缩液,硅胶柱层析,用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂梯度洗脱,1/2柱体积收集一瓶流份,共收集36瓶流份,合并第10-18瓶流份,减压浓缩,乙酸乙酯结晶,得4,8-二羟基-1-四氢萘酮结晶化合物,该4,8-DHT为1:1外消旋体,杂质少,纯度为99.5-99.8%,提取率达到94%以上,该4,8-DHT外消旋体具有抑制植物种子萌发和幼苗生长的作用。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
从山核桃外果皮中分离纯化4,8-DHT的方法,将风干的山核桃外果皮粉碎,过45-60目筛,得到山核桃外果皮粉末10g,将山核桃外果皮粉末装入超声萃取釜中并加入180-200ml蒸馏水,在超声发生方式为:它激式超声发声,径向振动柱状换能器,超声波功率为100W,超声频率为28kHz,提取方式为间隔2min超声一次,每次4min,于25℃气升式搅拌条件下,超声提取30-45min,过滤,得到山核桃外果皮提取液;将山核桃外果皮提取液在压力为450-500Pa的条件下,减压浓缩至初始体积的1/10,然后过X-5大孔树脂,依次用体积比为10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9、0:10的水与乙醇混合溶液进行梯度洗脱,每个梯度洗脱的混合溶液体积为5柱体积,洗脱过程中保持流速为2-3滴/秒,收集水与乙醇体积比为4:6的混合液洗脱得到的洗脱液,在压力为450-500Pa的条件下,减压浓缩55-70min,得到浓缩液;将上述浓缩液上200-300目的硅胶柱层析,依次用体积比为3:1,2:1,1:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱,体积比为3:1相的混合溶剂用量为10柱体积,体积比为2:1相的混合溶剂用量为5柱体积,体积比为1:1相的混合溶剂用量为3柱体积,洗脱流速5mL/min,1/2柱体积收集一瓶流份,共收集36瓶流份,合并第10-18瓶流份,在压力为460-480Pa的条件下,减压浓缩50-70min,加乙酸乙酯重结晶,得4,8-二羟基-1-四氢萘酮结晶化合物0.00342g,提取率达到94%以上,采用高效液相色谱法测定,该结晶化合物为纯度99.5-99.8%。
实施例2
将实施例1的4,8-二羟基-1-四氢萘酮配置成0.1mM、0.5mM的处理液作对莴苣、萝卜、黄瓜、洋葱、小麦种子萌发抑制实验,取测试物种种子各100粒,均匀摆放在铺有两层滤纸、大小15×20cm发芽盒,加10ml不同浓度处理液(对照组为去离子水),每个处理设置3个重复。培养条件为光周期25℃,12h;暗周期15℃,12h。种子萌发以胚根突破种皮为标准,第四天和第七天记录莴苣种子发芽数,第四天和第十天记录萝卜种子发芽数,第四天和第八天记录黄瓜种子和小麦种子发芽数,第六天和第十二天记录洋葱种子发芽数。最后结果:0.1mM4,8-DHT处理可以降低莴苣种子发芽数50%左右、小麦种子发芽数10%以上,对其它植物种有降低作用但效应不显著(p<0.05);0.5mM4,8-DHT处理都可以显著降低测试上述植物种子发芽数,其中莴苣发芽数降低90%以上,萝卜发芽数降低60%左右,黄瓜发芽数降低10%以上,洋葱发芽数降低80%左右,小麦发芽数降低65%左右(p<0.05)。
实施例3
将实施例1的4,8-二羟基-1-四氢萘酮配置成0.1mM、0.5mM的处理液作对莴苣、萝卜、黄瓜、洋葱、小麦幼苗生长的抑制实验,取胚根突破种皮种子各100粒,均匀摆放在铺有两层滤纸、大小15×20cm发芽盒,加入10ml不同浓度处理液(对照组为去离子水),每个处理设置3个重复。培养条件为光周期25℃,12h;暗周期15℃,12h。每隔一天从发芽盒中随机取5粒种子测其胚根、胚芽长度及鲜重,共测6次。0.1mM和0.5mM4,8-DHT处理可以显著降低测试种胚根生长(p<0.05)。0.1mM4,8-DHT处理可以抑制莴苣胚芽生长45%左右,萝卜胚芽生长15%左右,黄瓜胚芽生长16%左右,洋葱胚芽生长30%左右,小麦胚芽生长10%左右(p<0.05);0.5mM4,8-DHT处理可以抑制莴苣胚芽生长85%左右,萝卜胚芽生长80%左右,黄瓜胚芽生长90%左右,洋葱胚芽生长70%左右,小麦胚芽生长70%左右(p<0.05)。
Claims (1)
1.从山核桃外果皮中分离纯化4,8-DHT的方法,其特征在于步骤如下:
(1)将风干的山核桃外果皮粉碎,过45-60目筛,得到山核桃外果皮粉末;
(2)将山核桃外果皮粉末装入超声萃取釜中并加入蒸馏水,其中山核桃外果皮粉末与蒸馏水的质量体积比为1Kg:18-20L,在超声发生方式为:它激式超声发声,径向振动柱状换能器,超声波功率为100W,超声频率为28kHz,提取方式为间隔2min超声一次,每次4min,于25℃气升式搅拌条件下,超声提取30-45min,过滤,得到山核桃外果皮提取液;
(3)将山核桃外果皮提取液在压力为450-500Pa的条件下,减压浓缩至初始体积的1/10,然后过X-5大孔树脂,依次用体积比为10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9、0:10的水与乙醇混合溶液进行梯度洗脱,每个梯度洗脱水与乙醇混合溶液体积为5柱体积,洗脱过程中保持流速为2-3滴/秒,收集水与乙醇体积比为4:6的混合液洗脱得到的洗脱液,在压力为450-500Pa的条件下,减压浓缩55-70min,得到浓缩液;
(4)将上述浓缩液上200-300目的硅胶柱层析,依次用体积比为3:1,2:1,1:1的石油醚和乙酸乙酯混合溶剂梯度洗脱,体积比为3:1相的混合溶剂用量为10柱体积,体积比为2:1相的混合溶剂用量为5柱体积,体积比为1:1相的混合溶剂用量为3柱体积,洗脱流速5mL/min,每1/2柱体积收集一瓶流份,共收集36瓶流份,合并第10-18瓶流份,减压浓缩,用乙酸乙酯结晶,得4,8-二羟基-1-四氢萘酮结晶化合物。
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"Metabolites from Aspergillus fumigatus, an Endophytic Fungus Associated with Melia azedarach, and Their Antifungal, Antifeedant,and Toxic Activities";Xiao-Jun Li,et al.;《Journal of Agricultural and Food Chemistry》;20120313;第60卷;3424-3431 * |
"核桃青皮化感活性及作用机理研究";王婷;《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》;20081115(第11期);D049-123 * |
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