CN104284601A - 用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的白何首乌提取物和续断提取物及其制造方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种以具有增强类胰岛素生长因子分泌能力及促进骨骼生长功效的白何首乌和续断配糖体作为主要成分的水溶性提取精制物及其制造方法。

Description

用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的白何首乌提取物和续断提取物及其制造方法
技术领域
本发明涉及一种以具有增强类胰岛素生长因子分泌能力及促进骨骼生长功效的白何首乌和续断配糖体作为主要成分的水溶性提取精制物及其制造方法。
背景技术
生长激素是人和动物的脑垂体前叶分泌的蛋白质类激素，就人而言，生长激素由191个氨基酸构成，为了进行分泌需要用生长激素分泌促进激素对脑垂体进行刺激。
生长激素在生物体内的主要功能是使肝脏等未梢组织产生类胰岛素生长因子（Insulin-like Growth Factor-1,IGF-1），类胰岛素生长因子作用于软骨组织而刺激生长，并通过代谢作用增强蛋白质的合成，从而在增加肌肉的同时加快脂肪酸的氧化，进而减少体内脂肪。
具有上述功能的生长激素很早就开始用于治疗矮小症患者病症，近年来对其研究范围已扩展到肥胖治疗剂。过去有些患者注射从尸体脑垂体获取的生长激素，但这种生长素易使患者患上克雅氏症。1985年后半期，基因再组合方式的生长激素实现商品化，开始批量生产和供应，但由于这种生长激素没有感染其他疾病的危险性，因此现在只把基因再组合方式生长激素作为治疗生长激素缺乏疾病的药剂使用。
向人体注入基因再组合方式生长激素时，由于生长激素本身具有巨大的蛋白质结构，因此只能通过注射器向肌肉内注射，而无法口服，因此，虽然可批量生产，但是不仅治疗费用高，而且使用也非常不方便。
韩国公开专利第2002-46923号公开了一种利用分子量临界值为30,000～100,000的限外过滤膜过滤续断热水提取物而提取的续断提取液的药学治疗剂量及用于诱导含有药学许可药物载体的IGF-1分泌的药学组合物。
韩国公开专利第2003-22655号公开了一种（a）药剂学治疗剂量白何首乌提取物、乾姜提取物、桔梗提取物及其混合物；及（b)用于治疗或预防随着含有药剂学许可药物载体的IGF-1的减少而引发的疾病的药学组合物。
上述现有技术中组合物的IGF-1分泌功能还不具备用于商业化条件，其功能待需改善。
发明内容
本发明的目的是弥补现有技术的不足，提供一种可改善类胰岛素生长因子分泌能力及骨骼生长促进功效的白何首乌提取物及续断提取物的制造方法。
本发明的另一目的是提供一种根据上述制造方法制造的以配糖体为主要成分的白何首乌提取物及续断提取物。
本发明的又一目的是提供一种包含上述白何首乌提取物及续断提取物的食品及药品。
为了达到上述目的本发明采用的技术方案如下：
本发明白何首乌提取物的制造方法包括：白何首乌提取阶段；发酵在所述提取阶段提取的白何首乌提取物的发酵阶段；精制在所述发酵阶段发酵的白何首物提取物的精制阶段；及浓缩在所述精制阶段精制的白何首乌提取物的浓缩阶段。
本发明用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的白何首乌提取物通过下述制造方法制造以来自白何首乌的配糖体为主要成分，并具有促进类胰岛素生长因子分泌的功效和骨骼生长促进功效的白何首乌提取物，其制造方法包括：
将白何首乌混合于干燥白何首乌重量6～10倍的80℃～100℃水中并搅拌6～10小时而进行提取后，将提取物温度冷却至70℃的阶段；
将干燥白何首乌的4～5重量百分比α-淀粉酶放入白何首乌提取物中，并在70℃～80℃温度下发酵2～3小时，从而提高来自白何首乌的配糖体含量的发酵阶段；
所述发酵阶段结束后将白何首乌提取物的温度升至95～99℃后进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶活性的阶段；
利用离心脱水机或压滤机去除白何首乌提取物中的固体，利用超高速离心分离机以15,000～20,000rpm的速度进行离心分离而去除不溶性微粒子和蛋白质的第一次精制阶段；
利用活性碳过滤器去除通过第一次精制阶段的白何首乌提取物里含有的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁成分、重金属的第二次精制阶段；
利用设有0.2～0.45薄膜的正切流动过滤（Tangential Flow Filtration）方式微/超滤系统分离渗余物和渗透物后获取渗透物，当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行2～9次过滤,从而去除通过第二次精制阶段的白何首乌提取物中含有的高分子碳水化合物和微生物的第三次精制阶段；
将精制的白何首乌提取物注入减压浓缩机内进行减压后，在40～60℃温度下进行浓缩使浓缩度达到10brix以上的浓缩阶段；
将通过浓缩阶段的浓缩白何首乌提取物注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃，并在此条件下冻结干燥30～40小时，从而获得粉末状白何首乌提取物的阶段。
含有权利要求1所述的用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的白何首乌提取物的食品及药品。
本发明用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的续断提取物通过下述制造方法制造以来自续断的配糖体为主要成分，并具有促进类胰岛素生长因子分泌的功效和骨骼生长促进功效的续断提取物，其制造方法包括：
将续断混合于干燥续断重量6～10倍的80℃～100℃水中并搅拌6～10小时而进行提取后，将提取物温度冷却至70℃的阶段；
将干燥续断的4～5重量百分比α-淀粉酶加入续断提取物中，并在70℃～80℃温度下发酵2～3小时，从而提高来自续断的配糖体含量的发酵阶段；
所述发酵阶段结束后将续断提取物的温度升至95～99℃后进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶活性的阶段；
利用离心脱水机或压滤机去除续断提取物中的固体，利用超高速离心分离机以15,000～20,000rpm的速度进行离心分离而去除不溶性微粒子和蛋白质的第一次精制阶段；
利用活性碳过滤器去除通过第一次精制阶段的续断提取物里含有的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁成分、重金属的第二次精制阶段；
利用设有0.2～0.45薄膜的正切流动过滤（TFF：Tangential Flow Filtration）方式微/超滤（Ultra）系统分离渗余物（retentate）和渗透物(permeate)后取渗透物，当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行2～9次过滤，从而去除通过第二次精制阶段的续断提取物中含有的高分子碳水化合物和微生物的第三次精制阶段；
将精制的续断提取物注入减压浓缩机内进行减压后，在40～60℃温度下进行浓缩使浓缩度达到10brix以上的浓缩阶段；
将通过浓缩阶段的浓缩续断提取物注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃，并在此条件下冻结干燥30～40小时，从而获得粉末状续断提取物的阶段。
含有权利要求3所述的用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的续断提取物的食品及药品。
本发明提供一种可批量生产以来自白何首乌和续断的配糖体作为主要成分的水溶性提取物的技术，根据本发明开发的技术制造的白何首乌和续断的水溶性配糖体提取物与现有技术相比具有更加显著的增强类胰岛素生长因子（IGF-1）分泌能力及骨骼生长促进功效。
本发明的分离、精制于白何首乌和续断，并以具有增强类胰岛素生长因子分泌能力及骨骼生长促进功效的配糖体作为主要成分的水溶性提取物适合口服、服用方便，而且与基因再组合生长激素治疗剂相比其价格更加低廉、使用更加方便，特别是作为无害于人体的生长激素分泌促进物质，它既可适用于药品也可适用于食品。
过去10余年里，生长激素由于具有生物学活性和有利于人体的效果，在产业方面备受关注。据网上发表的生药理学新闻报道，2000年人体生长激素注射剂（用微生物生产的再组合蛋白质）的世界市场规模达到1,500,000万美元，而且，年均增长率达到20%以上。近年来，美国很多保健食品公司开始开发并销售称之为生长激素分泌促进剂的功能性食品，该产品的主要成分大部分为可提高人体健康的功能性氨基酸和维生素。其中一些产品因直接添加猪脑垂体提取物而含有动物生长激素分泌激素（GHRH），但实际上人们不愿意直接食用从动物组织提取的物质，而且，由于处理动物提取物时易产生病毒感染，因此难以保障其生物学安全性。
本发明为了克服上述不足，开发安全而具有生物学活性的天然生长激素分泌促进剂，对东医学中记载的天然植物进行了探研，结果发现以来自白何首乌和续断的水溶性配糖体作为主要成分的提取物具有卓越的增强生长激素分泌活性，并通过大鼠后腿大腿骨骼生长促进功效实验得到了验证。本发明的白何首乌水溶性配糖体提取物和续断水溶性配糖体提取物是可打入全世界生长激素促进剂市场的核心物质，有望开发成对人体安全无害的功能性饮食产品和医药产品。
附图说明
图1是植物配糖体成分在生物体内促进类胰岛素生长因子IGF-1分泌的原理图。
图2是进行酶处理和未进行酶处理时白何首乌配糖体含量的比较图。
图3是进行酶处理和未进行酶处理时续断配糖体含量的比较图。
图4是服用实施例1及比较例1的白何首乌提取物后IGF-1浓度根据时间的变化图。
图5是服用实施例2及比较例2的续断提取物后IGF-1浓度根据时间的变化图。
图6是服用实施例1及比较例1的白何首乌提取物8周后大鼠大腿骨生长的比较图。
图7是服用实施例2及比较例2的续断提取物8周后大鼠大腿骨生长比较图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明进行详细说明。
本发明涉及一种以具有增强类胰岛素生长因子分泌能力及骨骼生长促进功效的白何首乌和续断的配糖体作为主要成分的水溶性提取精制物及其制造方法。
本发明中的提取物包括在各制造阶段形成的液态提取原液、发酵液、精制液、浓缩液及固态粉末。即，提取阶段后形成的所有物质统称为提取物。
本发明探究记载在东医学里的生长促进效果良好的各种生药材中可作为食品原料的30余种原材料，即，山楂、蕺菜、桂皮、乾姜、五味子、桑白皮、苏叶、赤芍药、桔梗、甘菊、桂枝、白何首乌、远志、蛇床子、竹叶、石菖蒲、乌梅、覆盆子、续断、百合、柴胡、砂仁、肉豆蔻、侧柏叶、没药、五加皮、桑叶茶、栗子叶茶及冬虫夏草等天然生药材的结果，发现白何首乌和续断提取物的增强类胰岛素生长因子（IGF-1）分泌能力及促进骨骼生长功效很佳，并对白何首乌和续断提取物进行了集中研究，进而研究了可增加有效成份含量的方案。
白何首乌是萝藦科多年生藤草本植物，它以使白发变黑的健康长寿灵药而有名。白何首乌中含有蒽醌衍生物1.8%、碳水化合物45%、白薇素（cynanchol）精油成分3%、卵磷脂3.7%、同时具有大黄甙（rhapontin）、磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine）亲水基和亲油基的蛋白质成分等。本发明将含于白何首乌的成分中所谓强心苷（cardiac glycoside）的萜类（triterpene）皂甙（saponin）选定为具有增强类胰岛素（IGF-1）分泌能力及促进骨骼生长功效的主要成分。
续断为唇形科多年生草本植物，它用于接骨，而且可保护肝和肾，并可调节筋骨和血脉。续断含有生物碱、精油（essential oil）、维生素等成分。本发明将含于续断的成分中所谓shanzhigenin甲酯的环烯醚萜（iridoid）配糖体选定为具有增强类胰岛素生长因子（IGF-1）分泌能力及促进骨骼生长功效的主要成分。
配糖体是植物的不同成分相结合而成的，是活性有机化合物与糖结合的形态。例如：皂甙+糖、黄酮+糖、类胡萝卜素+糖等结合形态均为配糖体。配糖体是糖的还原基和其它糖或其他化合物的羟基脱水缩合而成的物质，含于所有植物中，它起存糖、调节渗透压、解毒、排除植物代谢废物等作用。
本发明开发了可批量生产以自于白何首乌和续断的配糖体为主要成分的水溶性提取物的技术，并验证了通过开发技术制造的白何首乌和续断的水溶性配糖体提取物的增强类胰岛素生长因子分泌能力及促进骨骼生长功效。
图1是植物配糖体成分在生物体内促进类胰岛素生长因子IGF-1分泌的原理图，本发明提供的植物配糖体可刺激脑垂体促进IGF-1的分泌。
本发明的以分离、精制于白何首乌和续断、并具有增强类胰岛素生长因子（IGF-1）分泌能力及促进骨骼生长功效的配糖体成分作为主要成分的水溶性提取物具有易于口服、服用方便的优点，而且，是对人体无害的生长激素分泌促进物质，因此，不仅适用于医药方面，而且还可作为食品食用。
下面详细说明本发明一实施例将自于白何首乌的配糖体作为主要成分的水溶性提取物的生产方法。
本发明白何首乌提取物的制造方法主要包括加工阶段、提取阶段、发酵阶段、第一次精制阶段、第二次精制阶段、第三次精制阶段、浓缩阶段、冻结干燥阶段。
首先，将干燥的白何首乌加工成大小为2～5mm的粉末或片。
然后，在适合自于白何首乌的配糖体成分物性的提取条件下进行提取。
提取溶剂最好是使用热水，可在设有夹套的提取箱内进行提取。具体将干燥白何首乌重量（ℓ/kg）6～10倍的80℃～100℃水混合于加工的白何首乌，搅拌6～10小时而提取水溶性提取液后，将提取液温度冷却至70℃。本发明中有发酵阶段，可相对减少提取时间。
然后利用酶发酵白何首乌提取物，酶最好是使用可有效生成配糖体的糖分解酶α-淀粉酶。可以在提取阶段使用的提取箱内直接进行发酵，也可以在另一发酵装置中进行发酵。通过上述发酵过程可增加自于白何首乌的配糖体含量。
具体地，先把干燥白何首乌的1～5重量百分比α-淀粉酶放入装有白何首乌提取物的提取箱内，然后将发酵温度设定为30℃～80℃、发酵时间设定为2～24小时后进行白何首乌提取液的发酵。当发酵酶过少时配糖体等发酵生成物减少而导致发酵效果微弱，而发酵酶过多其成本相对发酵效果要高；当发酵温度过低时发酵速度变慢而导致发酵时间长，而发酵温度过高时有可能破坏有效成分；当发酵时间过短时导致发酵效果微弱，而发酵时间过长其成本相对发酵效果要高。
放入适当的酶、并在适当的发酵温度及发酵时间内进行发酵，而大幅提高自于天然物质的配糖体含量，进而大幅提高增强类胰岛素生长因子分泌能力及促进骨骼生长功效。
白何首乌提取液的发酵过程结束后，将提取液的温度升至95℃以上，然后立即向提取箱夹套内注入冷却水对提取发酵液进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶的活性。
利用离心脱水机或压滤机从白何首乌水溶性提取发酵液中去除固体，通过利用超高速离心分离机以15,000～20,000rpm的速度进行离心分离的第一次精制阶段去除提取发酵液中不溶性微粒子和蛋白质等而获得有色透明的白何首乌水溶性一次精制液。
利用活性碳过滤器去除离心分离后获得的自于白何首乌的水溶性一次精制液里含有的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁成分、重金属等而进行第二次精制。
为了去除通过活性碳过滤器精制的白何首乌二次精制液内含有的非活性高分子碳水化合物和微生物，利用设有0.2～0.45μm薄膜的过滤过程中无堵塞现象而可连续进行过滤的正切流动过滤（Tangential Flow Filtration）方式微/超滤系统分离渗余物和渗透物后只获取渗透物白何首乌三次精制液。当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行多次（最佳次数为2～9次）过滤，使残留的二次精制液中的白何首乌配糖体成分达到最高值。
将经过多次（最佳次数为2～9次）过滤参透的白何首乌三次精制液注入减压浓缩机内进行减压后，在40～80℃浓缩温度下进行浓缩使精制液的浓缩度达到10brix以上，从而获得白何首乌水溶性配糖体提取精制液。
然后将浓缩液注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃，并在此条件下冻结干燥30～40小时，从而获得白何首乌水溶性配糖体提取精制粉末。所述冻结干燥阶段可根据需要有选择地实施。
本发明提供根据上述方法制造的具有促进类胰岛素生长因子分泌和骨骼生长功效的以自于白何首乌的配糖体作为主要成分的白何首乌提取物。
本发明白何首乌提取物可有效适用于食品及药品。例如：适用于药品时，根据药品的需要可另添加药物载体、成型添加剂、润滑剂、湿润剂、甘味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、保鲜剂、分散剂及/或稳定剂等。药品的剂型可为油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳化液或者浸膏、粉末、颗粒、片剂或胶囊。药品中的添加量根据制剂方法、添加方式、患者年龄、体重、性别、病态、饮食、添加时间、添加路径、排泄速度及反应感应性等因素而不同。熟练的医生可易于决定及开出治疗或预防所需的有效添加量处方。例如，口服白何首乌提取物时，成人可按一日一次，每次0.3～3g的量口服。投用可以通过口服方式或非口服方式进行，但最好还是选择口服方式为好。
包括饮料、保健食品、酒类等的所有食品类中均可适用白何首乌提取物。例如，制造口服液时，还可添加本发明有效成分之外的柠檬酸、液态果糖、砂糖、葡萄糖、硝酸、苹果酸、果汁等。
下面详细说明本发明另一实施例以续断配糖体为主要成分的水溶性提取物的生产方法。
本发明续断提取物的制造方法主要包括加工阶段、提取阶段、发酵阶段、一次精制阶段、二次精制阶段、三次精制阶段、浓缩阶段、冻结干燥阶段。
首先，将干燥的续断加工生长度为2～5mm的粉末或片。然后在适合自于续断配糖体成分物性的提取条件下进行提取。
具体将干燥继断重量（ℓ/kg）6～10倍的80℃～100℃水混合于加工的继断中，并搅拌6～10小时而提取继断水溶性提取液后，将提取液温度冷却至70℃。
然后利用酶发酵续断提取物，具体先把干燥续断的1～5重量百分比α-淀粉酶混入装有续断提取物的提取箱内，将发酵温度设定为30℃～80℃、发酵时间设定为2～24小时后进行续断提取液的发酵。
续断提取液的发酵过程结束后，将提取液的温度升至95℃以上，然后立即向提取箱夹套内注入冷却水对提取发酵液进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶的活性。
然后利用离心脱水机或压滤机从续断水溶性提取发酵液中去除固体，通过利用超高速离心分离机以15,000～20,000rpm的速度进行离心分离的第一次精制阶段去除提取发酵液中不溶性微粒子和蛋白质等而获得有色透明的续断水溶性一次精制液。
利用活性碳过滤器去除离心分离后获得的自于续断的水溶性一次精制液里含有的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁成分、重金属等而进行第二次精制。
利用设有0.2～0.45μm薄膜的正切流动过滤方式微/超滤系统分离渗余物和渗透物后只获取渗透物续断三次精制液。当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行多次（最佳次数为2～9次）过滤，使残留的二次精制液中的续断配糖体成分达到最高值。
将经过多次（最佳次数为2～9次）过滤参透的续断三次精制液注入减压浓缩机内进行减压后，在40～80℃浓缩温度下进行浓缩使精制液的浓缩度达到10brix以上，从而获得续断水溶性配糖体提取精制液。
最后将浓缩液注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃、并在此条件下冻结干燥30～40小时，从而获得续断水溶性配糖体提取精制粉末。
本发明提供根据上述方法制造的具有促进类胰岛素生长因子分泌和骨骼生长功效的以续断配糖体作为主要成分的续断提取物。
本发明的续断提取物可适用于食品及药品。
下面根据实施例及实验例详细说明本发明。但是，下述实施例或实验例均是为了说明本发明的构成及效果而例示的，并不限制本发明权利要求范围。
[实施例1]
首先，将干燥的白何首乌加工成大小为4mm的粉末或片。
然后，在设有夹套的提取箱内相混合干燥白何首乌重量8倍的90℃水和已加工的白何首乌，并搅拌8小时而提取白何首乌水溶性提取液后，将提取液温度冷却至70℃。
再把干燥白何首乌的3重量百分比α-淀粉酶添加至装有白何首乌提取物的提取箱内，并将发酵温度设定为70℃、发酵时间设定为6小时后进行白何首乌提取液的发酵。
白何首乌提取液的发酵结束后，将提取液的温度升至95℃以上，然后立即向提取箱夹套内注入冷却水对提取发酵液进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶的活性。
利用离心脱水机或压滤机从白何首乌水溶性提取发酵液中去除固体，利用超高速离心分离机以18,000rpm的速度进行离心分离而获得白何首乌水溶性一次精制液。
使一次精制液通过活性碳过滤器而获得二次精制液。
然后利用设有0.45μm薄膜的正切流动过滤方式微/超滤系统分离渗余物和渗透物，其中只获取渗透物白何首乌三次精制液。当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行多次（最佳次数为2～9次）过滤。
然后将三次精制液注入减压浓缩机内进行减压后，在60℃浓缩温度下进行浓缩使精制液的浓缩度达到10brix以上而获得浓缩液。
最后将浓缩液注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃，并在此条件下冻结干燥36小时，从而获得白何首乌水溶性配糖体提取精制粉末。
[实施例2]
首先，将干燥的续断加工成大小为4mm的粉末或片。
然后，在设有夹套的提取箱内相混合干燥续断重量8倍的90℃水和加工的续断，并搅拌8小时而提取续断水溶性提取液后，将提取液温度冷却至70℃。
然后把干燥续断的3重量百分比α-淀粉酶放入装有续断提取物的提取箱内，并将发酵温度设定为70℃、发酵时间设定为6小时后进行续断提取液的发酵。
续断提取液的发酵结束后，将提取液的温度升至95℃以上，然后立即向提取箱夹套内注入冷却水对提取发酵液进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶的活性。
然后利用离心脱水机或压滤机从续断水溶性提取发酵液中去除固体，利用超高速离心分离机以18,000rpm的速度进行离心分离而获得续断水溶性一次精制液。
使一次精制液通过活性碳过滤器而获得二次精制液。
然后利用设有0.45μm薄膜的将正切流动过滤方式微/超滤系统分离渗余物和渗透物，其中只获取渗透物续断三次精制液。当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行多次（最佳次数为2～9次）过滤。
然后将三次精制液注入减压浓缩机内进行减压后，在60℃浓缩温度下进行浓缩使精制液的浓缩度达到10brix以上而获得浓缩液。
最后将浓缩液注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃，并在此条件下冻结干燥36小时，从而获得续断水溶性配糖体提取精制粉末。
[比较例1]
相同于实施例1，但未进行发酵。
[比较例2]
相同于实施例2，但未进行发酵。
[实验列1]
本实验例中对进行和未进行α-淀粉酶处理时白何首乌和续断提取物的配糖体含量进行了比较。
实验方法如下：取1g实施例和比较例中制造的样品用60㎖蒸馏水进行溶解后倒入分液漏斗后用60㎖乙醚提取脂肪。
将60㎖水饱和正丁醇倒入分液漏斗后摇晃而进行分离，并提取上层。重复三次此步骤。
将提取的丁醇一同倒入分液漏斗用50㎖蒸馏水进行一次清洗，并提取上层。
然后将提取的液体倒入量好重量的烧瓶内，并在80℃蒸发器中进行减压浓缩，在105℃干燥烤箱内干燥15分钟。
然后在干燥器（desiccators）内进行完全冷却后测重量。
最后利用下述算式算出配糖体含量。
配糖体含量=（浓缩后烧瓶重量-浓缩前烧瓶重量）/样品重量（g）×100
表1是比较实施例1及比较例1中制造的白何首乌配糖体含量的实验结果，图2是进行酶处理和未进行酶处理时白何首乌配糖体含量比较示意图。
表1
分类（3次实验的平均值） 配糖体含量比（%） 配糖体含量（mg/g）
比较例1（未进行酶处理） 8.95 89.5
实施例1（进行酶处理） 14.87 148.7
从表1及图2中可知，白何首乌有效成分提取过程中，利用α-淀粉酶进行发酵的实施例1的配糖体成分含量比未进行发酵的比较例1的配糖体成分含量高66%左右。
表2是比较实施例2及比较例2制造的续断配糖体含量的实验结果，图3是进行酶处理和未进行酶处理时续断配糖体含量比较示意图。
表2
分类（3次实验的平均值） 配糖体含量比（%） 配糖体含量（mg/g）
比较例1（未进行酶处理） 5.32 53.2
实施例1（进行酶处理） 7.98 79.8
从表2及图3中可知，续断有效成分提取过程中，利用α-淀粉酶进行发酵的实施例2的配糖体成分含量比未进行发酵的比较例2的配糖体成分含量高50%左右。
[实验例2]
本实验例中进行了实施例及比较例中制造的白何首乌及续断水溶性配糖体提取物对类胰岛素生长因子（IGF-1）分泌能力和骨骼生长促进功效的实验。
分析仪使用了酶标仪（LAB SYSTEM,USA）、酶免仪（rat IGF-1,catalongue # DSL 10-2900,Diagnostic Systems Laboratories,USA），数据分析及统计系统使用了棱镜（Prism）系统（ver,Graphpad Software Inc,USA）。
实验动物使用了SD大鼠（Sprague Dawley rats）。长期服用实验时使用了3周龄的动物，IGF-1评价实验时使用了9周龄的动物。动物均使用雄性，每实验均使用了30只（对照群10只、实施例10只、比较例10只）。实验动物的饲养条件为温度22±3（19～25）℃、湿度30～70%、光周期（12小时，光照期：08：00～20：00）。
IGF-1的评价实验中，为了调节血液中生长激素基本量或同步性，使所有动物绝食24小时后进行了实验。
作为实验群的实施例和比较例中，均以人和大鼠的重量比服用1日口服量（60kg的人一日1，500mg基准）。对照群是服用了同样体积的饮用水。0点采尾巴血，服用后10小时内每隔2小时分别采血0.1ml，并分离血清备为测定样品。利用剂量仪并通过酶联免疫吸附测定 （ELISA）方法测定IGF-1。
长期服药时，以人和大鼠的重量比将实施例及比较例的提取物一日量（60kg的人一日1，500mg基准）混合于饲料，对照群使用普通饲料，吸收的饲料及饮用的水量相同，每天换新鲜饲料和饮用水，并连续服用8周。实验期间观察大腿部骨骼的变化。
大部分生长激素分泌以脉冲方式瞬间放出，因此，以生理刺激的反应难以测定生长激素分泌量的变化。虽然激素随血流只流动几分钟，但是激素流入肝脏后可充分刺激生长因子的转换。IGF-1的分泌可利用于测定生长激素分泌量，并且，IGF-1的作用比生长激素本身更多，即，可直接起大部分生物学作用。本实验中测定了生长激素二次信号IGF-1的血中分泌量，刺激后在血液中IGF-1维持稳定量，实际上起生长激素效果。
图4及图5是IGF-1的评价实验中白何首乌及续断水溶性配糖体提取物对促进生长激素分泌效果的评价结果图。
图4是服用实施例1及比较例1的白何首乌提取物后IGF-1浓度根据时间的变化图,图5是服用实施例2及比较例2的续断提取物后IGF-1浓度根据时间的变化图。
如图4所示，对照群的IGF-1分泌量持续减少，比较例1的IGF-1分泌量基本保持不变，实施例1的IGF-1分泌量而增加。将服用后8小时时的最大值作为基准时，实施例1的IGF-1分泌量比对照群多64%左右，比比较例1多24%左右。由此可知通过本发明发酵过程制造的白何首乌提取物对类胰岛素生长因子IGF-1分泌具有良好的促进效果。
如图5所示，对照群的IGF-1分泌量基本保持不变，比较例2的IGF-1分泌量有意增加，实施例2的IGF-1分泌量而大幅增加。将服用后8小时时的最大值作为基准时，实施例2的IGF-1分泌量比对照群多53%左右，比比较例2多21%左右。由此可知通过本发明发酵过程制造的续断提取物对类胰岛素生长因子IGF-1分泌具有良好的促进效果。
如图4及图5所示，实施例的IGF-1分泌8小时止逐渐增加后减少，这说明此分泌方式并不是实验物质直接刺激肝脏而诱导IGF-1分泌至血液中的。并且，实施例的IGF-1分泌形式与服用生长激素6～12小时内诱导的类胰岛素生长因子IGF-1的通常分泌特征一致。
图6及图7是长期服用实验时骨骼生长促进效果评价结果图。
图6是服用实施例1及比较例1的白何首乌提取物8周后的大鼠大腿骨生长比较图，图7是服用实施例2及比较例2的续断提取物8周后的大鼠大腿骨生长比较图。
如图6所示，实施例1的大鼠大腿骨平均长度比对照群长22%左右，比比较例1长12%左右。由此可知，通过本发明发酵过程而制造的白何首乌提取物对骨骼生长具有良好的促进效果。
如图7所示，实施例2的大鼠大腿骨平均长度比对照群长17%左右，比比较例2长8%左右。由此可知，通过本发明发酵过程而制造的续断提取物对骨骼生长具有良好的促进效果。
如图4至图7所示，对白何首乌水溶性配糖体提取物和续断水溶性配糖体提取物来说，类胰岛素生长因子IGF-1分泌量的增加对促进骨骼生长起重要变量作用。
为了了解白何首乌水溶性配糖体提取物和续断水溶性配糖体提取物对促进生长激素分泌的生物学效果进行了两种实验。其一是测定服用一次后IGF-1的分泌量变化的短期服用效果实验，其二是比较了骨骼生长的长期服用效果实验。
如图4及图5所示，测定服用一次白何首乌水溶性配糖体提取物和续断水溶性配糖体提取物后根据时间而变化的大鼠IGF-1分泌量的结果，实施例的IGF-1分泌量远远多于比对照群及比较例。
如图6及图７所示，实施例的骨骼长度大于对照群及比较例的骨骼长度，通过上述结果可知服用实施例的提取物时也仍然具有生理学活性，而且，口服白何首乌水溶性配糖体提取物和续断水溶性配糖体提取物后的类胰岛素生长因子IGF-1分泌量的增加效果均与骨骼生长促进因素有直接的关系。

Claims (4)

1.一种用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的白何首乌提取物，其特征在于：它通过下述制造方法制造以来自白何首乌的配糖体为主要成分，并具有促进类胰岛素生长因子分泌的功效和骨骼生长促进功效的白何首乌提取物，其制造方法包括：
将白何首乌混合于干燥白何首乌重量6～10倍的80℃～100℃水中并搅拌6～10小时而进行提取后，将提取物温度冷却至70℃的阶段；
将干燥白何首乌的4～5重量百分比α-淀粉酶放入白何首乌提取物中，并在70℃～80℃温度下发酵2～3小时，从而提高来自白何首乌的配糖体含量的发酵阶段；
所述发酵阶段结束后将白何首乌提取物的温度升至95～99℃后进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶活性的阶段；
利用离心脱水机或压滤机去除白何首乌提取物中的固体，利用超高速离心分离机以15,000～20,000rpm的速度进行离心分离而去除不溶性微粒子和蛋白质的第一次精制阶段；
利用活性碳过滤器去除通过第一次精制阶段的白何首乌提取物里含有的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁成分、重金属的第二次精制阶段；
利用设有0.2～0.45薄膜的正切流动过滤（Tangential Flow Filtration）方式微/超滤系统分离渗余物和渗透物后获取渗透物，当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行2～9次过滤,从而去除通过第二次精制阶段的白何首乌提取物中含有的高分子碳水化合物和微生物的第三次精制阶段；
将精制的白何首乌提取物注入减压浓缩机内进行减压后，在40～60℃温度下进行浓缩使浓缩度达到10brix以上的浓缩阶段；
将通过浓缩阶段的浓缩白何首乌提取物注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃，并在此条件下冻结干燥30～40小时，从而获得粉末状白何首乌提取物的阶段。
2.含有权利要求1所述的用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的白何首乌提取物的食品。
3.一种用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的续断提取物，其特征在于：它通过下述制造方法制造以来自续断的配糖体为主要成分，并具有促进类胰岛素生长因子分泌的功效和骨骼生长促进功效的续断提取物，其制造方法包括：
将续断混合于干燥续断重量6～10倍的80℃～100℃水中并搅拌6～10小时而进行提取后，将提取物温度冷却至70℃的阶段；
将干燥续断的4～5重量百分比α-淀粉酶加入续断提取物中，并在70℃～80℃温度下发酵2～3小时，从而提高来自续断的配糖体含量的发酵阶段；
所述发酵阶段结束后将续断提取物的温度升至95～99℃后进行急速冷却，从而停止α-淀粉酶活性的阶段；
利用离心脱水机或压滤机去除续断提取物中的固体，利用超高速离心分离机以15,000～20,000rpm的速度进行离心分离而去除不溶性微粒子和蛋白质的第一次精制阶段；
利用活性碳过滤器去除通过第一次精制阶段的续断提取物里含有的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁成分、重金属的第二次精制阶段；
利用设有0.2～0.45薄膜的正切流动过滤（TFF：Tangential Flow Filtration）方式微/超滤（Ultra）系统分离渗余物（retentate）和渗透物(permeate)后取渗透物，当渗余液的浓度变大而过滤压力显著上升、流速急速下降时，注入精制水稀释后进行2～9次过滤，从而去除通过第二次精制阶段的续断提取物中含有的高分子碳水化合物和微生物的第三次精制阶段；
将精制的续断提取物注入减压浓缩机内进行减压后，在40～60℃温度下进行浓缩使浓缩度达到10brix以上的浓缩阶段；
将通过浓缩阶段的浓缩续断提取物注入冻结干燥机后将温度从-60℃升至40℃，并在此条件下冻结干燥30～40小时，从而获得粉末状续断提取物的阶段。
4.含有权利要求3所述的用于促进类胰岛素生长因子分泌及骨骼生长的续断提取物的食品。
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