CN105012409A - 用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法，属于生物活性物质制备技术领域。该方法将白何首乌切片放入抽取罐后加入水，在80℃～100℃搅拌6～10小时获取第一次抽取物，然后加入淀粉酶，在温度70℃中发酵6小时制得第二次抽取物，利用离心式脱水机以及高速离心式脱水机制得第三次抽取物，然后通过活性炭过滤器制得第四次抽取物，将第四次抽取物过滤3～5次制得第五次抽取物，将第五次抽取物浓缩到10白利度以上得最终抽取物，将最终抽取物在36小时内从-60℃升温到40℃，制得白何首乌水溶性精炼物。本发明制备的白何首乌水溶性精炼物，具有促进分泌类胰岛素一号生长因子及促进骨骼成长的效能。

Description

用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法

技术领域

本发明属于生物活性物质制备技术领域，具体涉及一种用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法。

背景技术

成长荷尔蒙是从人的脑下垂体前瓣分泌出来的，蛋白质性质的，主要促进生长和修复功能的荷尔蒙。人的成长荷尔蒙由191个氨基酸构成，自然分泌成长荷尔蒙要针对脑下垂体有所刺激。成长荷尔蒙在体内的主要机能是，促使肝等末梢组织生成类胰岛素生长因子，类胰岛素生长因子刺激软骨组织生长，通过代谢作用增加蛋白质合成，进而增加肌肉的同时增加脂肪组织的脂肪酸化、减少体脂肪。正因为成长荷尔蒙具有这些机能，早已用于治疗矮小患者，近来广泛用于青少年助长，以及治疗肥胖症。

1985年开始，通过微生物再组合方式，大量生产供给成长荷尔蒙，广泛适用于缺乏成长荷尔蒙患者。而微生物再组合方式生产的成长荷尔蒙是蛋白质构造，不能用口服方式送入体内，目前普遍使用注射方式投入体内肌肉里。使用这样的成长荷尔蒙，治疗费用较高，且有注射到肌肉的诸多不便。

本发明着眼于中草药，研究了可能具有促进成长效果的30种素材，即山楂、鱼腥草、桂皮、乾姜、五味子、桑白皮、苏叶、赤芍、桔梗、甘菊、桂枝、白何首乌、远志、蛇床子、竹叶、石菖蒲、乌梅、覆盆子、续断、百合、柴胡、砂仁、肉豆蔻、侧柏叶、没药、五加皮、桑叶、栗叶、冬虫夏草等天然药材，从中选择了助长性能最佳的白何首乌，利用其中的分泌促生长因子(IGF-1)及促进骨骼成长效能的有效成分。

发明内容

本发明的目的是提供一种用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法，该发明方法是白何首乌糖苷为主成分的，水溶性抽取精炼物质的产品制造技术，以及检验该精炼物质产品促进分泌类胰岛素一号生长因子(IGF-1)及促进骨骼成长的效能。

本发明所提供的用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法具体步骤如下：

(1)将干的白何首乌切成2～5mm长的切片，放入抽取罐，在抽取罐中加入白何首乌切片10倍重的水，水温保持在80℃～100℃，搅拌6～10小时获取白何首乌第一次抽取物，然后将所述第一次抽取物温度降到70℃。

(2)在步骤(1)得到的所述第一次抽取物中加入白何首乌切片重量比3％的淀粉酶，在温度70℃中发酵6小时，发酵结束后，抽取物温度提升到95℃，温度达到95℃时，迅速冷却抽取物，抑制抽取物继续发酵，制得白何首乌第二次抽取物。

(3)利用离心式脱水机或压力过滤器分离所述第二次抽取物中的固态粉，利用高速离心式脱水机祛除所述第二次抽取物中不溶性微粒子以及蛋白质，制得白何首乌第三次抽取物，所述高速离心式脱水机的转速为15000转/分～20000转/分。

(4)通过活性炭过滤器祛除所述第三次抽取物中的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁酸成分以及重金属，制得白何首乌第四次抽取物。

(5)通过正切流动过滤方式的超微型过滤器，将所述第四次抽取物反复过滤3～5次，制得白何首乌第五次抽取物。

(6)利用减压浓缩器，把所述第五次抽取物浓缩到10白利度以上，获得白何首乌最终抽取物。

(7)将所述最终抽取物在36小时内，从-60℃升温到40℃，制得目标产物：白何首乌促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物。

白何首乌含有氧基金属蒽醌衍生物1.8％,碳水化合物45％,白薇素精油成分3％，卵磷脂3.7％，同时含亲水、亲油基的蛋白质成分。本发明把白何首乌成分中的糖苷三萜系皂苷，选定为分泌促生长因子及促进骨骼成长效能的主要成分。

本发明以白何首乌糖苷为主成分制备水溶性精炼物，该水溶性精炼物能够促进分泌类胰岛素一号生长因子(IGF-1)及促进骨骼成长的效能。本发明有效利用具有补肾益肝、乌发生发、养血益精、抗衰老之功效的白何首乌，抽取白何首乌中的促进分泌类胰岛素一号生长因子(IGF-1)及促进骨骼成长效能的糖苷，制造口服方式的，糖苷成分为主成分的，水溶性精炼物质。本发明方法所制备的水溶性精炼物是比遗传因子再组合方式生产的成长荷尔蒙更廉价、使用更方便、对人体无毒物副作用的物质，能够用于医学治疗以及保健食品，提高人类健康水平并且具有显著地经济社会效益。

具体实施方式

本发明所提供的用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法具体步骤如下：

(1)把干的白何首乌切成2～5mm长的切片，放入抽取罐，在抽取罐中加入白何首乌切片10倍重的水，水温保持在90℃，搅拌8小时获取白何首乌第一次抽取物，然后将所述第一次抽取物温度降到70℃。

(2)在步骤(1)得到的所述第一次抽取物中加入白何首乌切片重量比3％的淀粉酶，在温度70℃中发酵6小时，发酵结束后，抽取物温度提升到95℃，温度达到95℃时，迅速冷却抽取物，抑制抽取物继续发酵，制得白何首乌第二次抽取物。

(3)利用离心式脱水机或压力过滤器分离所述第二次抽取物中的固态粉，利用高速离心式脱水机祛除所述第二次抽取物中不溶性微粒子以及蛋白质，制得白何首乌第三次抽取物，所述高速离心式脱水机的转速为18000转/分。

(4)通过活性炭过滤器，祛除所述第三次抽取物中的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁酸成分以及重金属，制得白何首乌第四次抽取物。

(5)通过正切流动过滤方式的超微型过滤器，将所述第四次抽取物反复过滤4次，祛除非活性高分子、碳水化合物以及微生物，制得白何首乌第五次抽取物。

(6)利用减压浓缩器，把所述第五次抽取物浓缩到10白利度以上，获得白何首乌最终抽取物。

(7)将所述最终抽取物在36小时内，从-60℃升温到40℃，获得本发明目标产物：白何首乌促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物。

本发明制备的白何首乌促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的糖苷含量比较：

(1)糖苷含量比较实验方法：

①提取1～2g样品，用60ml蒸馏水溶解，移到分液漏斗，用60ml乙醚抽取脂肪。

②60ml随同化丁醇加入分液漏斗，晃动的方式进行分离，回收上层部分。晃动、回收反复3次。

③把回收的丁醇层全部合在分液漏斗，用50ml蒸馏水溶解，回收上层部分。

④倒入长颈瓶，80℃中蒸发减压浓缩，105℃烘箱中烘干15分钟。

⑤倒入保干器中完全冷却后称重。

⑥糖苷含量的计算式如下：

(2)糖苷含量比较实验结果：

①白何首乌的糖苷含量比较实验结果表(实验3次的平均)

分类	糖苷含量比(％)	糖苷含量(㎎/g)
			未利用酶	8.95	89.5
利用酶	14.87	148.7

实验结果：抽取白何首乌有用成分中，利用淀粉酶发酵的实验组，比未使用发酵的实验组，糖苷含量高66％。

4、分泌生长因子(IGF-1)及促进骨骼成长效能实验方法：

(1)实验物质、器具：

①实验物质：白何首乌水溶性糖苷抽取物(实验物)。

②实验材料：实验室诊断系统。

③数据分析统计系统：绘制医学图表软件。

④实验分析器具：酶标仪。

(2)实验动物：

①动物的种类：白鼠。

②动物的周龄：3周龄(用于长期服用实验)。

              9周龄(用于生长因子评价实验)。

③动物的性别：雄性。

④动物的数量：20只(实验组10只，对照组10只)。

⑤动物的饲养：温度19～25℃，湿度30～70％，

             光周期12小时，明周期08:00～20:00。

(3)实验物投入方法：

①生长因子评价实验：

为了调节血液中的成长荷尔蒙基本量，所有动物断食24小时后进行试验。人的体重60㎏，1日口服量1,500㎎为基数，按人与白鼠的比重换算，实验物的投入量。

对照组：喂的饮食与实验组相同。

实验组：喂1日口服量实验物质。

②长期服用实验：

对照组：喂的饮食与实验组相同。

实验组：每天按1日口服量，实验物加入饲料，连续喂8周。

(4)实验方法：

①生长因子评价实验：

口服2小时后开始，对每只白鼠采尾部血各0.1ml，分离血浆，准备测试标本，用酶联免疫吸附测定法，测试生长因子。

采血时间：对照组：0,2,4,6,8,10时。

         实验组：0,2,4,6,8,10时。

实验时间：8小时。

观察事项：血液中的生长因子浓度。

②长期服用实验：

实验动物：雄性白鼠20只(实验组10只，对照组10只)。

实验时间：8周。

观察事项：大腿骨长度。

(5)生长因子评价实验结果：

测定血中的生长因子量，利用于测定成长荷尔蒙的分泌量。生长因子在血液中维持稳定，显示成长荷尔蒙的效果。

①生长因子评价实验：

天然植物中抽取的助长糖苷的药理学评价：

实验物的实验结果，生长因子的分泌量比2个对照组增多28％，显示实验物促进生长因子分泌。

②长期服用实验：

实验物的实验结果，大腿骨的长度比2个对照组长了6％，显示实验物促进骨骼成长。

Claims (1)

1.一种用白何首乌制备促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物的方法，其特征在于该方法具体步骤如下：

(1)将干的白何首乌切成2～5mm长的切片，放入抽取罐，然后在所述抽取罐中加入白何首乌切片10倍重的水，水温保持在80℃～100℃，搅拌6～10小时获取白何首乌第一次抽取物，然后将所述第一次抽取物温度降到70℃；

(2)在步骤(1)得到的所述第一次抽取物中加入白何首乌切片重量比3％的淀粉酶，在温度70℃中发酵6小时，发酵结束后，抽取物温度提升到95℃，温度达到95℃时，迅速冷却抽取物，抑制抽取物继续发酵，制得白何首乌第二次抽取物；

(3)利用离心式脱水机或压力过滤器分离所述第二次抽取物中的固态粉，利用高速离心式脱水机祛除所述第二次抽取物中不溶性微粒子以及蛋白质，制得白何首乌第三次抽取物，所述高速离心式脱水机的转速为15000转/分～20000转/分；

(4)通过活性炭过滤器祛除所述第三次抽取物中的脂肪成分、非活性有机化合物、丹宁酸成分以及重金属，制得白何首乌第四次抽取物；

(5)通过正切流动过滤方式的超微型过滤器，将所述第四次抽取物反复过滤3～5次，制得白何首乌第五次抽取物；

(6)利用减压浓缩器，将所述第五次抽取物浓缩到10白利度以上，获得白何首乌最终抽取物；

(7)将所述最终抽取物在36小时内，从-60℃升温到40℃，制得目标产物：白何首乌促进分泌类胰岛素生长因子的水溶性精炼物。