CN105168432A - 一种促进骨折修复的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种促进骨折修复的药物组合物，本发明药物组合物是以毛莲菜、荨麻、巴旦仁、齿缘草、葫芦素E、爵床脂素A为原料药，配比而成，可按常规制剂工艺制成各种剂型，促进骨折修复疗效显著。

Description

一种促进骨折修复的药物组合物

技术领域

本发明属于中药技术领域，尤其涉及一种促进骨折修复的药物组合物。

背景技术

根据中医气血学说，创伤骨折后，肢体伤于外，则气血伤于内，营卫有所不贯，脏腑由之不和。创伤后气血两伤，形成气滞血瘀的病理机制。载气者血也，运血者气也。气行则血行，气滞则血凝，气虚则运血无力，使血瘀更瘀，血瘀则脉道不通，使气滞更滞。故要达到去瘀接骨的目的，必须气血并治，活血必先治气，治气必以补气为主。因此以明朝薛己为代表的正体派，对创伤强调内治，主张补气，活血，养血，补血。现代医学也认为，创伤骨折，病变虽在局部，但也伴随有全身性病理变化，这主要是由于交感神经内分泌系统介导的应激反应，另外创伤部位的炎症介质也可使整体有所增加，这就说明在骨折愈合过程中骨折部位的细胞分化和合成功能有所增强，以适应骨折愈合的需要，如果某种因素能够促进这些功能的增强，也就促进了骨折愈合。

骨折愈合是一个极其复杂的过程，涉及多种细胞和细胞因子的共同参与，目前，大多数研究只基于试验阶段，其作用机制以及各细胞因子间的相互作用关系尚未完全阐明。中药促进骨折修复历史悠久，经验丰富，疗效显著，但中药促进骨折修复的疗效机制却极为复杂。近年来，中医药促进骨折修复的机制研究已取得了一定成果，尤其是分子生物学的发展给中药促进骨折修复机制的研究带来了新的生机，但同时也存在着较多问题，如药理、药效学方面的研究多局限于单味中药，对于中药复方的研究方面，由于其成分复杂、有效成分难以分离提取、较难明确哪种有效成分起作用等，还需更进一步的研究，这也可能是以后的发展方向。因此，进一步明确中药如何对各种已知的骨生长因子作用的机制、明确中药对各骨生长因子之间相互作用的调控机制是今后要解决的重要问题；如何更好地利用中药同时促进多种骨生长因子的表达，从而促进骨愈合、提高骨折愈合的质量，并保障其临床应用的安全性也是十分值得深入研究的课题。

目前中药促进骨折修复的实验研究内容基本包括了中医科研的各个方面。从被试因素看，包括传统古方、自制药、经验方、单味药等；从实验动物看，鼠、鸡、兔等被广泛采用。大多数研究均取得了较好的成果，但仍存在许多不足，有些实验指标的检测尚存在着某些片面性，且与中医的某些具体治法之间没有总结出一定规律，尚未显现出对中医临床治疗的实际指导意义；另外现代药理研究还不够深入，大多数仍停留在疗效观察阶段。今后还需要总结临床特点和大量的古今文献，归纳整理出临床常用、疗效较好的单味或复方中药的有效成份，并进行有关的药效学和毒理学研究，这样才能与中医药作用的多系统、多层次、多功效、多靶点的特点相呼应。

毛莲菜：本品为菊科植物毛莲菜（PicrisjaponicaThunb.）的干燥地上部分。夏、秋二季花开时采收，除去杂质，晒干。性凉、糙，味苦。杀“粘”，止痛，清热，消肿，解毒。用于瘟疫，结喉，乳腺炎，胸刺痛，腮腺炎，阵刺痛。

荨麻：本品为荨麻科植物宽叶荨麻UrticalaetevirensMaxim.或裂叶荨麻U.fissaPritz.的干燥地上部分。秋季采收，去根，洗净，晾干水气，切段，用木棒敲打,微出香气,阴干。甘、苦、辛，温；有小毒。祛风定惊，温胃消食。用于“龙”病引起的久热，消化不良。

巴旦仁：本品为蔷薇科植物甜巴旦AmygdaluscommunisL.的干燥成熟种子。夏秋果实成熟时，采收取核，晒干。用时除去外壳。一级湿热。具有助护营养力，强身健脑，明目养颜，润肠止咳之功效，用于身体虚弱，咳嗽多痰，胸闷便秘，视弱面案。

齿缘草：齿缘草为紫草科植物石生齿缘草Eritrichiumrupestre（Pall.）Bunge的干燥地上部分。夏季花开时采收，除去根及杂质，阴干。其性凉，味苦甘。具有杀“粘”，清热，解毒之功效。用于瘟热流感，“协日”人脉症，“协日”热。

葫芦素E（cucurbitacineE）：CAS号18444-66-1，分子式C₃₂H₄₄O₈，分子量556.69。

爵床脂素A（JusticidinA）：CAS号25001-57-4，分子式C₂₂H₁₈O₇，分子量394.38；

葫芦素E（cucurbitacineE）爵床脂素A（JusticidinA）。

发明内容

本发明的目的是克服背景技术的不足，提供一种有效促进骨折修复的药物组合物。

本发明是采用如下技术方案实现的：

制成该促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜65-75重量份荨麻40-50重量份巴旦仁30-40重量份齿缘草10-20重量份葫芦素E5-6重量份爵床脂素A3-5重量份。

优选的用于促进骨折修复的药物组合物，是由如下重量份的原料药组成：

毛莲菜70重量份荨麻45重量份巴旦仁35重量份齿缘草15重量份葫芦素E5.5重量份爵床脂素A4重量份。

一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。

一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成的促进骨折修复药物。

一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于按如下方法制备：

原料药的组成和重量份为：毛莲菜65-75重量份荨麻40-50重量份巴旦仁30-40重量份齿缘草10-20重量份葫芦素E5-6重量份爵床脂素A3-5重量份；

制备方法：

（1）按原料药配比取荨麻、巴旦仁，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为荨麻、巴旦仁药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A；

（2）按原料药配比取毛莲菜、齿缘草，并与步骤（1）得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇为溶剂，在70℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过NKA-9大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；

（3）按原料药配比取葫芦素E、爵床脂素A，混匀，依次加入提取物A、提取物B，混匀，即得药物组合物。

优选的一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于按如下方法制备：

原料药的组成和重量份为：毛莲菜70重量份荨麻45重量份巴旦仁35重量份齿缘草15重量份葫芦素E5.5重量份爵床脂素A4重量份；

制备方法：

（1）按原料药配比取荨麻、巴旦仁，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为荨麻、巴旦仁药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A；

（2）按原料药配比取毛莲菜、齿缘草，并与步骤（1）得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇为溶剂，在70℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过NKA-9大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；

（3）按原料药配比取葫芦素E、爵床脂素A，混匀，依次加入提取物A、提取物B，混匀，即得药物组合物。

一种促进骨折修复的药物组合物，按本发明的技术方案制备后，采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。

一种促进骨折修复的药物组合物，按本发明的技术方案制备后与化学药或中药组成的促进骨折修复药物。

本发明的药物组合物能明显促进骨折和骨缺损的修复：药物组合物明显促进了骨折断端细胞的增殖和合成活性，DNA和RNA合成活性明显提高,RNA含量有所增加,以骨折侧尤甚。

具体实施方式

实施例1：促进骨折修复的药物组合物及其制备方法

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜70重量份荨麻45重量份巴旦仁35重量份齿缘草15重量份葫芦素E5.5重量份爵床脂素A4重量份；

制备方法：

（1）按原料药配比取荨麻、巴旦仁，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为荨麻、巴旦仁药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A；

（2）按原料药配比取毛莲菜、齿缘草，并与步骤（1）得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇为溶剂，在70℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过NKA-9大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；

（3）按原料药配比取葫芦素E、爵床脂素A，混匀，依次加入提取物A、提取物B，混匀，即得药物组合物。

实施例2：促进骨折修复的药物组合物及其制备方法

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜65重量份荨麻50重量份巴旦仁30重量份齿缘草20重量份葫芦素E5重量份爵床脂素A5重量份；

制备方法：

（1）按原料药配比取荨麻、巴旦仁，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为荨麻、巴旦仁药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A；

（2）按原料药配比取毛莲菜、齿缘草，并与步骤（1）得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇为溶剂，在70℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过NKA-9大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；

（3）按原料药配比取葫芦素E、爵床脂素A，混匀，依次加入提取物A、提取物B，混匀，即得药物组合物。

实施例3：促进骨折修复的药物组合物及其制备方法

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜75重量份荨麻40重量份巴旦仁40重量份齿缘草10重量份葫芦素E6重量份爵床脂素A3重量份；

制备方法：

（1）按原料药配比取荨麻、巴旦仁，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为荨麻、巴旦仁药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A；

（2）按原料药配比取毛莲菜、齿缘草，并与步骤（1）得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇为溶剂，在70℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过NKA-9大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；

（3）按原料药配比取葫芦素E、爵床脂素A，混匀，依次加入提取物A、提取物B，混匀，即得药物组合物。

实施例4：片剂的制备

取实施例1组合物145g，加入淀粉31g，混匀，制粒，干燥，加微晶纤维素15g，硬脂酸镁1.4g，混匀，压制成1000片，即得本发明组合物片剂。

实施例5：胶囊的制备

取实施例2组合物126g，加入淀粉28g，混匀，制粒，干燥，整粒，加入适量硬脂酸镁，混匀，装胶囊1000粒，即得本发明组合物胶囊。

实施例6：滴丸的制备

称取聚乙二醇6000160g水浴(80℃)加热煮熔，加入实施例3组合物15g，充分搅拌均匀，以液体石蜡为冷却剂，置玻璃管（4*80cm）中，冷却温度为6℃，滴口内外径为7.0/2.0(mm/mm)，滴口距液面为2cm，滴速以每分35滴为最佳条件，用棉布吸干滴丸表面的冷凝剂，即得本发明组合物滴丸。

实施例7：促进骨折修复的药物组合物

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜60重量份齿缘草25重量份葫芦素E5.5重量份爵床脂素A5.5重量份。

实施例8：促进骨折修复的药物组合物

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜65重量份齿缘草30重量份葫芦素E5重量份爵床脂素A6重量份

实施例9：促进骨折修复的药物组合物

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜75重量份齿缘草20重量份葫芦素E6重量份爵床脂素A5重量份

实施例10：促进骨折修复的药物组合物

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜60重量份巴旦仁50重量份爵床脂素A5.5重量份。

实施例11：促进骨折修复的药物组合物

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜65重量份巴旦仁55重量份爵床脂素A5重量份。

实施例12：促进骨折修复的药物组合物

促进骨折修复的药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜75重量份巴旦仁45重量份爵床脂素A6重量份。

实验例1：对骨折断端细胞活性的影响试验研究

1.材料

1.1.1主要试剂与药物 ³H-TdR、³H-UR,1mCi/ml(中国原子能科学研究院)；5-甲基间苯二酚(美国sigma公司)；药物组合物(按实施例1方法制备，批号20030612)。

1.1.2动物昆明种小白鼠,雄性,体重20g-22g(编号:2003LA-011,郑州大学实验动物中心提供)。

1.1.3仪器液体闪烁计数器(西安二六二厂)；LT-160万分之一天平(日本岛津公司)；HP8452A分光光度计(美国惠普公司)。

2.方法

2.1.1同位素示踪实验50只成年雄性小白鼠分为空白组(10只),对照组(20只)和实验组(20只)。对照组和实验组造成左侧尺桡骨闭合骨折,实验组于骨折前三天灌胃药物组合物,每只动物每天1ml(相当于10g生药)分2次灌胃。空白组和对照同时灌胃等量的蒸馏水。

动物标记与取样:于造成骨折后36h和5天后对照组和实验组各取10只动物,空白组5只动物,用³H-TdR皮下注射标记1h(1μCi/g体重),杀死。每只动物取骨折断端两侧的骨段,和对侧相应的骨段,空白组取尺桡骨相应骨段,分离去软组织作为待测样品。

另取50只动物,除了用³H-UR代替³H-TdR进行标记外,其他方法同上。

全部待测样品用流水充分洗去附着的³H标记物后,60℃烘干,称重,加0.2ml高氯酸和0.2ml双氧水,80℃消化1h,加入4ml闪烁液和6ml乙二醇甲醚,混匀后,在液体闪烁计数器上测定5min计数。

2.1.2RNA测定小白鼠50只,分组、造模和用药方法同上。造模后36h和5天每组各取半数动物处死,取样部位和方法同上,取样后称湿重,用3ml15%三氯醋酸(TCA)脱钙2次,每次24h,弃去脱钙液,残留物用3ml15%TCA匀浆,转入离心管,离心,弃去上清。沉淀用95%乙醇洗涤,离心,弃去上清。沉淀再用5ml3:1的醇:醚混合液煮沸3min,离心,弃去上清,向离心管中加入7ml5%TCA,90℃水浴加热15min,冷却后用5%TCA补充到10ml刻度,过滤,滤液则为测试液,用5-甲基间苯二酚法测定RNA含量。

2.1.3统计方法各组数据表达为x±s,采用SPSS1110统计软件进行t检验。

3.结果

3.1.1³H-TdR掺入实验对照组创伤骨折后36h,对照组³H-TdR掺入率受到抑制,健侧更为明显。到第5天这种抑制作用得到缓解,折侧的掺入率明显高于空白组；实验组的掺入率有明显的促进,骨折后36h折侧的掺入率便明显高于空白组,到第5天,进一步得到促进,实验组健侧的掺入率也都略高于正常。对照组和实验组在折后第5天折侧的掺入率均明显高于健侧的掺入率。骨折后36h和骨折后第5天,不论是骨折侧还是健侧实验组的³H-TdR掺入率都明显高于对照组,说明药物组合物不只是促进骨折部位DNA的合成,对健侧DNA合成也有促进作用,这说明药物组合物的作用是全身性的(见表1)。

表1创伤骨折后不同时期折侧和健侧³H-TdR[掺入率(CPM/10mg)]

注:与空白组比较^,*P<0.05；折侧与健侧比较,^vP<0.05；骨折后5天与骨折后36h同侧比较,^xP<0.05；实验组与对照组伤后相同时段同侧比较,^sP<0.05(下同)。

3.1.2³H-UR掺入实验对照组创伤骨折后健侧³H-UR掺入率受到抑制,到第5天明显低于空白组。而折侧的掺入率到第5天明显高于空白组,说明骨折部位RNA的合成受到刺激。实验组不论折侧和健侧都明显高于空白组,也明显高于对照组。折侧掺入率明显高于健侧。说明药物组合物刺激全身RNA的合成,骨折部位尤其明显。骨折第5天对照组和实验组折侧的掺入率均明显高于健侧,说明骨折部位由于骨折愈合需要具有较活跃的蛋白质合成功能(见表2)。

表2骨折后36h和第5天折侧和健侧³H-UR[掺入率(CPM/10mg)]

3.1.3RNA含量测定对照组骨折后36h骨中RNA含量有减少的趋势,健侧比较明显,到骨折后第5天,开始有所增加；实验组RNA含量在骨折后36h就有明显增加,到第5天折侧RNA含量进一步增加,明显高于骨折后36h折侧的含量。说明药物组合物明显促进骨折端RNA的合成,对于健侧的RNA含量也有促进作用(见表3)。

表3骨折后36h和第5天折侧和健侧RNA含量(μg/mg)

结果表明：药物组合物能够改善创伤骨折后整体机能,促进骨折局部细胞分化增殖能力,并提高其合成功能,能够明显促进骨折修复。

实验例2：典型病例

病例1：周某，男，50岁。受伤住院，临床诊断为左下肢骨折，采用的治疗方案如下：服用本发明上述实施例1制备药物组合物，每次3g，每天3次，连服7周后痊愈出院。

病例2：吴某，女，43岁。受伤住院，临床诊断为左尺桡骨骨折，采用的治疗方案如下：服用本发明上述实施例1制备药物组合物，每次3g，每天3次，连服75天后痊愈出院。

Claims (8)

1.一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜65-75重量份荨麻40-50重量份巴旦仁30-40重量份齿缘草10-20重量份葫芦素E5-6重量份爵床脂素A3-5重量份。

2.根据权利要求1所述一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重量份为：

毛莲菜70重量份荨麻45重量份巴旦仁35重量份齿缘草15重量份葫芦素E5.5重量份爵床脂素A4重量份。

3.根据权利要求1所述一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。

4.根据权利要求1所述一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成的促进骨折修复药物。

5.一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于按如下方法制备：

原料药的组成和重量份为：毛莲菜65-75重量份荨麻40-50重量份巴旦仁30-40重量份齿缘草10-20重量份葫芦素E5-6重量份爵床脂素A3-5重量份；

制备方法：

（1）按原料药配比取荨麻、巴旦仁，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为荨麻、巴旦仁药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A；

（2）按原料药配比取毛莲菜、齿缘草，并与步骤（1）得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇为溶剂，在70℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过NKA-9大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；

（3）按原料药配比取葫芦素E、爵床脂素A，混匀，依次加入提取物A、提取物B，混匀，即得药物组合物。

6.根据权利要求5所述一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于按如下方法制备：

原料药的组成和重量份为：毛莲菜70重量份荨麻45重量份巴旦仁35重量份齿缘草15重量份葫芦素E5.5重量份爵床脂素A4重量份；

制备方法：

（1）按原料药配比取荨麻、巴旦仁，混匀，先用重量百分比浓度60%乙醇作为溶剂，在50℃温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为荨麻、巴旦仁药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物A；

（2）按原料药配比取毛莲菜、齿缘草，并与步骤（1）得到药渣A混匀，用重量百分比浓度35%乙醇为溶剂，在70℃温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.12，滤过，药液通过NKA-9大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱NKA-9大孔吸附树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B；

（3）按原料药配比取葫芦素E、爵床脂素A，混匀，依次加入提取物A、提取物B，混匀，即得药物组合物。

7.根据权利要求5所述一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。

8.根据权利要求5所述一种促进骨折修复的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学药或中药组成的促进骨折修复药物。