CN104267137B

CN104267137B - 一种左乙拉西坦中甲硫醇的定量分析方法

Info

Publication number: CN104267137B
Application number: CN201410544978.4A
Authority: CN
Inventors: 钟雅妮; 王德刚; 朱美容; 王平; 刘俊华
Original assignee: ZHUHAI LIANBANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: ZHUHAI LIANBANG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2014-10-16
Filing date: 2014-10-16
Publication date: 2016-07-06
Anticipated expiration: 2034-10-16
Also published as: CN104267137A

Abstract

本发明涉及制药领域，本发明提供了一种左乙拉西坦中甲硫醇的定量分析方法，所述方法包括：1)分别取待测样品以及甲硫醇对照品，加入有机溶剂以制备待测样品溶液和对照品溶液；2)按照以下色谱条件对上述溶液进行测定：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱为色谱柱；升温程序为：达到初始温度后，以每分钟50℃～70℃速率升温至溶剂的沸点以上；3)按外标法计算被测样品中甲硫醇的含量。本方法专属性强，灵敏度高，能够迅速测定左乙拉西坦中甲硫醇的含量，保证了左乙拉西坦的用药安全性。

Description

一种左乙拉西坦中甲硫醇的定量分析方法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种左乙拉西坦中甲硫醇的定量分析方法。

背景技术

左乙拉西坦是一种新型抗癫痫药物(AED)，如式(I)所示，其作为辅助治疗或单药治疗均可降低癫痫部分发作，1999年获美国FDA批准，用于成人部分性癫痫发作的辅助治疗，2005年其口服片剂和溶液剂分别获准用于4岁及以上儿童青少年癫痫首次发作的辅助治疗。与其他具有相同治疗作用的药物相比，左乙拉西坦口服吸收迅速完全，血浆蛋白结合率低，药物之间少有相互作用，耐受性良好，无严重不良反应，长期治疗未见肝、肾以及血液等生化指标异常，未见耐药者，也未见对认知功能产生不良影响。

左乙拉西坦在合成过程中有产生极微量副产物甲硫醇的潜在可能，如式(II)所示。甲硫醇具有麻醉性，吸入后可引起头痛、恶心及不同程度的麻醉作用，高浓度吸入还可引起呼吸麻痹而死亡。

目前各国药典均未收载甲硫醇的有效测定方法，相关文献记载了甲硫醇的检测方法，如李慧琴等人、分光光度法测定空气中甲硫醇(《齐齐哈尔轻工业学院学报》Vol.6No.3，1990年第9月，第78～83页)，但是该方法采用了水银压力计，缓冲液、臭气泵、配气瓶、如胶膜平衡袋、水浴杯、U型管等装置，该方法操作繁琐、实用性不强；李慧琴等人、顶空气相色谱法测定大气中甲硫醇含量(《军事医学科学院院刊》1989年第13卷第5期，第342～346页)该分析方法采用了气-液平衡器，其进样方式依然为手动进样，且采集的气体需经化学反应生成，即该方法中用于测定的甲硫醇标准品采用的甲硫醇铅是经过复杂的化学置换反应而制备的，甲硫醇气体转化率低、可控性差、而且由于生成的甲硫醇气体不稳定、易生成二甲基甲硫醚，其定量的准确性也有待商榷。

其他文献例如、韩丛碧、气相色谱法测定氨气中的甲硫醇及甲硫醚(《化工环保》第23卷第4期，2003年8月，第231～235页)；安裕敏等人、毛细管低温吸附气相色谱法同时测定空气中痕量甲硫醇和硫化氢(《环境监测与管理技术》，第20卷第3期，2008年6月，第35～37页)，这些文献中所记载的方法中均采用了钢瓶充填的具有一定浓度的甲硫醇气体作为甲硫醇标准品，该方法具有操作复杂、危险系数高、可控制性差、定量不准确、实用性不强等。

目前依然尚没有关于用于药品、特别是用于左乙拉西坦合中微量甲硫醇的检测方法。因此，建立一套操作简单，安全性好，可控性强，定量准确并且实用的定量分析方法、以测定左乙拉西坦产品中甲硫醇的含量是非常有必要的，这有助于提高用药的安全性。

发明内容

针对以上技术情况，本发明提供一种甲硫醇的定量分析方法，特别是左乙拉西坦中甲硫醇的定量分析方法。本发明方法包括以下步骤：

1、一种甲硫醇的定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)分别取待测样品以及甲硫醇对照品，加入有机溶剂以制备待测样品溶液和对照品溶液；

2)采用顶空气相色谱法对上述溶液进行检测，其中所述顶空气相色谱条件为：

色谱柱：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的色谱柱；

色谱柱升温程序：达到初始温度后，以每分钟50℃～70℃速率升温至溶剂的沸点以上；

3)按外标法计算被测样品中甲硫醇的含量。

作为本发明实施方案之一，所述步骤1)中的有机溶剂可以是本领域的可溶解待测样品和甲硫醇的有机溶剂，所述有机溶剂包括但不限于除甲醇外的醇类、酯类、酮类、腈类、氮类或苯类，或它们的任意组合；作为进一步实施方案之一，本发明所述有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、甲苯、二甲基亚砜或它们任意混合的溶液。

作为本发明实施方案之一，所述步骤2)中的色谱柱包括以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的色谱柱；本领域技术人员可以结合本发明及本领域常识来选择可以实现本发明目的与本发明所述色谱柱的性质相同或相似的其他色谱柱、以用于本发明。作为实施方案之一，本发明所述色谱柱为以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱；作为进一步实施方案之一，所述步骤2)中色谱柱的规格为：30m～60m长度；0.1μm～5μm膜厚、0.25mm～0.53mm内径；作为更进一步实施方案之一、所述色谱柱为30m×0.53mm×3μm的色谱柱。

本发明方法中、本领域技术人员可以结合本发明所使用溶剂特性及常识来确定所述步骤2)中的色谱柱升温程序，本领域技术人员知道，色谱柱需采用升温程序洗脱不同的溶剂，因不同溶剂的沸点不同，故升温是为了实现不同溶剂的洗脱；但保持适当的升温速率以实现本发明是非常必要的、而升温速率过快会使色谱图的基线升高过大过尖，不够美观，升温速率过慢则会增加时间成本。

本发明方法中对于起始温度及维持时间也可以由本领域技术人员根据本发明内容及结合本领域常识进行确定，其中起始温度及维持时间合适，可保证甲硫醇在短时间内洗脱，改变起始温度，尤其是降低起始温度，则甲硫醇可能不会在短时间内洗脱，这时若想保证甲硫醇在等温下洗脱，则需要增加维持时间，增加了检验成本。反之，升高温度并降低维持时间，可减少检验成本。

为了更好实现本发明目的、作为实施方案之一、本发明所述升温程序优选为：起始柱温为30℃～60℃；保持时间为0分钟～20分钟；升温速率为50℃～70℃/min；升至最高温度80℃～260℃；然后保持0分钟～20分钟；作为进一步实施方案之一、所述步骤2)中的升温程序为：起始柱温为40℃；保持时间为6分钟；升温速率为60℃/min；最高温度为220℃；然后保持6分钟。

作为实施方案之一，本发明所述步骤2)中的顶空气相色谱条件进一步包括：顶空平衡温度为50℃～95℃，平衡时间为20分钟～40分钟；作为进一步实施方案之一，所述顶空平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟。

本发明所述顶空平衡是瓶中气体(例如气相为：甲硫醇和空气；液相为对照品溶液或者样品溶液)的动态平衡过程；当顶空瓶中液相比例急剧减少时，气相所占比例会急剧增加，会导致在固定的平衡时间内，气液两相无法达到动态平衡，使方法的精密度降低；相反，当顶空瓶中液相比例急剧增加用于测量甲硫醇时，气相所占比例会急剧减少，如此，气液两相达到动态平衡后，在一定时间内的总进样量会不足，使本发明的检测灵敏度降低，因此保持适当的溶液体积、有利于实现本发明检测分析方法。作为实施方案之一，本发明所述步骤2)中顶空气相色谱条件进一步包括：顶空瓶中溶液体积为2ml～5ml；优选溶液体积为2ml。

本发明方法中对于步骤2)色谱条件中的顶空瓶的规格没有特定的限定，其可以由本领域技术人员根据本发明并结合本领域常识进行确定。作为实施方案之一，本发明所述顶空瓶的规格包括但不限于10ml或20ml。

本发明方法中，所述步骤2)中顶空气相色谱条件还进一步包括柱流量。本领域技术人员可以根据本发明结合本领域常识进行确定本方法中的柱流量，作为实施方案之一，所述步骤2)中的柱流量为1ml/min～10ml/min；优选为3ml/min。

本发明中所述载气为本领域常用的高纯度氮气或氦气，进一步优选为高纯度氮气；其中所述的高纯度是指纯度范围≥99.99％。

本发明方法中对于进样、既可以分流进样、也可以不分流进样。本领域技术人员可以结合本发明针对不同检查对象的不同的限度要求进行选择，只要能满足响应灵敏度的要求即可。本发明方法中当采用分流进样式时、本领域技术人员可以根据本发明并结合本领域常识来确定分流比、作为实施方案之一、所述步骤2)中的分流进样的分流比为1∶1～15∶1，优选分流比为1∶1。本文所述的分流比为本领域的常规技术术语，即分流比的气流即为载气，作为示例性的说明、当分流比为1∶1时，系指将1份进样量分成2份，取一份进行测定，另一份随尾气排放出去；同理、当分流比为15∶1，即将1份进样量分为16份，取一份进行测定，其他15份随尾气排放出去。本发明方法中当分流比为15∶1时，只需调整样品浓度，以左乙拉西坦为例、可将供试品浓度提高至300mg/ml以上、即可满足本发明检测0.2ppm以下的甲硫醇。

本发明方法中，所述步骤2)中色谱条件进还包括进样口温度和检测器温度。所述进样口温度的设定一般根据所用溶剂的沸点而定，通常需高于所用溶剂的沸点20℃以上，并不得低于150℃，且最好不要高于色谱柱所能耐受的最高温度，以保证溶剂能在瞬间完全汽化以及延长色谱柱的使用寿命；检测器温度的一般要求是大于或等于程序升温的最高温度，且并不得低于150℃，以阻止水汽凝结，防止氢火焰熄灭。为了更好实现本发明目的，本发明方法中优选进样口温度的范围为150℃～300℃，检测器温度的范围为150℃～350；作为实施方案之一、进一步优选所述色谱仪的进样口温度为250℃；检测器温度为260℃。

本发明方法可以用于可溶于本发明所述有机溶剂的任何产品中的甲硫醇的定量分析，所述被测产品包括但不限于以左乙拉西坦、空气、氨气、血液或其他可溶解于本发明所述溶剂的药品；对于待测溶液中被测产品的浓度，可以由本领域技术人员结合本发明及本领域常识进行确定。

作为实施方案之一，本发明方法中所述步骤1)中待测样品优选为左乙拉西坦。作为更进一步实施方案之一，优选待测样品溶液中左乙拉西坦的浓度为200mg/ml～500mg/ml，优选所述左乙拉西坦的浓度为200mg/ml。作为本发明实施方案之一，所述步骤1)中所述甲硫醇对照品的来源不受任何限制，可以是来自市售、也可以本领域技术人员进行制备、为了更好地实现本发明、可以采用市售的以甲苯为溶剂的甲硫醇对照品(例如百灵威科技有限公司制备的甲硫醇的市售对照品)；作为本发明实施方案之一，所述步骤1)中甲硫醇对照品的浓度为2000μg/ml～5000μg/ml、含量为80％～99.5％；作为更进一步实施方案之一、优选所述甲硫醇对照品的浓度为2000μg/ml、含量为99.5％。

本方法专属性强，甲硫醇具有良好的相关性，灵敏度高，重复性良好，能够准确快速待测样品中甲硫醇的含量。特别是用于左乙拉西坦中的甲硫醇含量的定量分析时，本发明方法可以使左乙拉西坦的回收率达到90％，准确度较高，保证了左乙拉西坦的用药的安全。

经方法学验证，本发明方法线性相关系数可达0.9997，远高于现有技术文献“分光光度法测定空气中甲硫醇”中的0.992的线性相关系数；及“顶空气相色谱法测定大气中甲硫醇含量”中的0.9969的线性相关系数。

本发明方法中对于甲硫醇的检测灵敏度可达0.2ppm，远低于甲硫醇的环境检测限度10ppm的要求，大大提高了分析方法的灵敏度。

本发明经方法学验证，平行测定6次样品的加样回收率的RSD为1.3％，远低于行业该项验证需低于6％的规定值，因而重复性良好。

附图说明

图1：实施例1中对照品溶液GC图；

图2：实施例1中空白溶剂二甲基亚砜GC图。

具体实施方式

本发明通过以下实施例和实验例进一步阐述本发明，但本发明并不受限于此。

实施例1

供试品溶液：取左乙拉西坦(404809001批)0.4g，置20ml顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml溶解，摇匀，密封，作为供试品溶液。

对照品溶液：精密量取甲硫醇对照品(由百灵威科技有限公司提供，批号：213101113，浓度：2000μg/ml(inToluene)，含量：99.5％)0.1ml，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置20ml顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

采用岛津GC-2010plus型气相色谱仪，对上述供试品溶液和对照品溶液进行分析测定，具体色谱条件为：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷(30m×0.53mm×3μm)为固定液的毛细管柱为色谱柱；起始柱温40℃，维持6分钟，以每分钟60℃的速率升温至220℃，维持6分钟；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃；顶空平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟；柱流量：3ml/min；分流比：1∶1；载气：高纯氮气；

本方法中，甲硫醇峰与溶剂峰的分离度大于1.5，甲硫醇的检测灵敏度为0.2ppm，甲硫醇的平均回收率为91.5％(RSD＝1.8％，n＝9)，甲硫醇的线性相关系数为0.9997，平行测定6次样品的RSD为1.3％，专属性强，线性关系良好，灵敏度高，重复性好，能够准确快速待测样品中甲硫醇的含量。

经检测，左乙拉西坦中甲硫醇的检出量均低于0.2ppm。

实施例2

供试品溶液：取左乙拉西坦1g(404809001批)，置20ml顶空瓶中，加二甲基亚砜5ml溶解，摇匀，密封，作为供试品溶液。

对照品溶液：精密量取甲硫醇对照品(由百灵威科技有限公司提供，批号：213101113，浓度：2000μg/ml(inToluene)，含量：99.5％)0.1ml，置50ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置20ml量瓶中，加二甲基亚砜稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置20ml顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

经检测，左乙拉西坦中甲硫醇的检出量均低于0.2ppm。

实施例3

采用岛津GC-2010plus型气相色谱仪，对上述供试品溶液和对照品溶液进行分析测定，具体色谱条件为：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷(30m×0.53mm×3μm)为固定液的毛细管柱为色谱柱；起始柱温40℃，维持6分钟，以每分钟60℃的速率升温至220℃，维持6分钟；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃；顶空平衡温度为85℃，平衡时间为30分钟；柱流量：3ml/min；分流比：1∶1；载气：高纯氮气；

经检测，左乙拉西坦中甲硫醇的检出量均低于0.2ppm。

实施例4

供试品溶液：取左乙拉西坦(批号为404809001)0.4g，置20ml顶空瓶中，加二甲基亚砜2ml溶解，摇匀，密封，作为供试品溶液。

采用岛津GC-2010plus型气相色谱仪，对上述供试品溶液和对照品溶液进行分析测定，具体色谱条件为：以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷(30m×0.53mm×3μm)为固定液的毛细管柱为色谱柱；起始柱温40℃，维持6分钟，以每分钟60℃的速率升温至220℃，维持6分钟；进样口温度为250℃；检测器温度为260℃；顶空平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟；柱流量：3ml/min；不分流进样；载气：高纯氮气；

经检测，左乙拉西坦中甲硫醇的检出量均低于0.2ppm。

Claims

1.一种甲硫醇的定量分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)分别取待测左乙拉西坦样品以及甲硫醇对照品，加入有机溶剂以制备待测样品溶液和对照品溶液；

2)采用顶空气相色谱法对上述溶液进行检测，其中顶空气相色谱条件为：

色谱柱升温程序：起始柱温为40℃；保持时间为6分钟；升温速率为60℃/min；最高温度为220℃；然后保持6分钟；

3)按外标法计算被测样品中甲硫醇的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中的有机溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、甲苯、二甲基亚砜或它们任意混合的溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的色谱柱为以6％氰丙基苯基-94％二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱的色谱柱。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的色谱柱为：30m～60m长度；0.1μm～5μm膜厚、0.25mm～0.53mm内径。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的色谱柱为30m×0.53mm×3μm的色谱柱。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的顶空气相色谱条件还包括：顶空平衡温度为50℃～95℃，平衡时间为20分钟～40分钟。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的顶空气相色谱条件为：顶空平衡温度为90℃，平衡时间为30分钟。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的顶空气相色谱条件还包括：顶空瓶中溶液体积为2ml～5ml。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的溶液体积为2ml。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的顶空气相色谱条件还包括：柱流量为1ml/min～10ml/min。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的柱流量为3ml/min。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中所述载气为高纯度氮气或氦气。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的顶空气相色谱条件还包括：分流进样或不分流进样。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中分流进样的分流比为1∶1～15∶1。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中分流进样的分流比为1∶1。

16.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的顶空气相色谱条件还包括：色谱仪的进样口温度为150℃～300℃；检测器温度为150℃～350℃。

17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中所述色谱仪的进样口温度为250℃；检测器温度为260℃。

18.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中的待测样品溶液中左乙拉西坦的浓度为200mg/ml～500mg/ml。

19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中待测样品溶液中左乙拉西坦的浓度为200mg/ml。

20.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中甲硫醇对照品的浓度为2000μg/ml～5000μg/ml、含量为80％～99.5％。

21.根据权利要求20所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中甲硫醇对照品的浓度为2000μg/ml、含量为99.5％。