CN104247662A - 一种桃金娘组培快繁技术 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种桃金娘组培快繁技术，涉及桃金娘（Rhodomyrtustomentosa（Ait.）Hassk）通过无性快繁技术获得株性稳定种苗的育苗方法。本发明包括外植体的采集及预处理、初代培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程，实现了桃金娘种苗的快速繁殖，解决了这一野生乡土植物大规模种植对种苗需求的问题，对充分开发这一具有极高观赏价值和食用价值的野生植物具有现实意义。
Description
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种桃金娘组培快繁技术。
背景技术
桃金娘（Rhodomyrtus tomentosa（Ait.） Hassk）又名稔子、山稔，为桃金娘科桃金娘属常绿多花小灌木，是一种目前尚未进行规模开发利用的食品新资源，具有较高的研究价值和应用前景。我国野生桃金娘植物资源丰富，是华南地区绿化荒山，保持水土的优良品种，耐旱瘠，适应性强。
桃金娘的利用价值高，其果实很早就引起人们的关注，但其开发利用进展较慢。目前华南地区的一些地方正在发展规模化桃金娘种植，优质桃金娘种苗是制约其规模化种植的难题之一。然而，目前桃金娘种苗主要依靠种子繁殖，但其发芽率低，而且实生苗分化明显，个体之间各种性状差异大。因此，非常有必要建立一套完整的桃金娘组培快繁技术。目前，完整的桃金娘组培快繁技术尚未见有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供出一种桃金娘组培快繁技术，通过外植体的采集及预处理、初代培养、增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程，从而实现了本发明的目的。
本发明的一种桃金娘组培快繁技术，包括以下的步骤：
（1）外植体的采集与处理：选择桃金娘优良单株的当年生腑芽饱满枝条，去叶后于洗衣粉水浸泡10～30min，刷净后自来水冲洗1～2h，剪成长1～3cm带腋芽的茎段，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后备用。
（2）初代培养：将步骤（1）的茎段接种到初代培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养30～45天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成不定芽。
（3）增殖培养：将步骤（2）的不定芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为3000～5000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，45～60天转接一次。
（4）生根培养：将步骤（1）或（2）高度约为3～5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为5000～6000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根。
（5）炼苗移栽：将高约8～10cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。
上述步骤（2）所述的初代培养基为：MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+CPPU0.01～0.5 mg/L+ Ad1.0～3.0mg/L+蔗糖15～30g/L+琼脂3.5～6.0g/L，pH为5.4～5.8。
上述步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+IBA0.2～0.5mg/L+ Ad1.0～3.0mg/L+蔗糖15～30g/L+琼脂3.5～6.0g/L，pH为5.4～5.8。
上述步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+IBA0.4～1.2mg/L+GGR1.0～2.0mg/L+PG10～40mg/L+蔗糖15～30g/L+琼脂3.5～6.0g/L，pH为5.4～5.8。
目前国内关于桃金娘组培快繁技术尚未有报道，而本发明具有简单、易行、经济的特点。通过本发明育成的桃金娘试管苗移栽成活率达到95%以上，可以有效解决桃金娘规模化种植中的优质桃金娘种苗供应问题。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
实施例1
（1）、外植体的采集与处理：选择桃金娘优良单株的当年生腑芽饱满枝条，去叶后于洗衣粉水浸泡15min，刷净后自来水冲洗1h，剪成长1～3cm带腋芽的茎段，先用75%乙醇消毒8s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒20min，用无菌水冲洗5次后备用。
（2）、初代培养：将上述的茎段接种到初代培养基上,先在28℃条件下全暗培养40天，然后置于每天光照10小时，光照强度为2000lx，直至诱导形成不定芽。所述的初代培养基为：MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.4mg/L+CPPU0.05 mg/L+ Ad1.0mg/L+蔗糖25g/L+琼脂4g/L，pH为5.7。
（3）、增殖培养：将上述的不定芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照14小时，光照强度为4000lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，50天转接一次。所述的增殖培养基为：MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.3mg/L+IBA0.2mg/L+ Ad1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂4g/L，pH为5.7。
（4）、生根培养：将上述高度约为3～5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养9天，然后置于每天光照15小时，光照强度为5000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根。所述的生根培养基为：1/2MS+IBA0.6mg/L+GGR1.0mg/L+PG10mg/L+蔗糖15g/L+琼脂4g/L，pH为5.7。
（5）、炼苗移栽：将高约8～10cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽栽入由泥炭土和河沙（3：1）混合成的基质中并定植于大田中，成活率达到92%。。
实施例2
（ 1）、外植体的采集与处理：选择桃金娘优良单株的当年生腑芽饱满枝条，去叶后于洗衣粉水浸泡30min，刷净后自来水冲洗2h，剪成长1～3cm带腋芽的茎段，先用75%乙醇消毒20s后用无菌水洗5次，再用0.1%升汞溶液消毒15min，用无菌水冲洗6次后备用。
（2）、初代培养：将上述的茎段接种到初代培养基上,先在25℃条件下全暗培养30天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2000lx，直至诱导形成不定芽。所述的初代培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+CPPU0.1 mg/L+ Ad2.0mg/L+蔗糖25g/L+琼脂4g/L，pH为5.8。
（3）、增殖培养：将上述的不定芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25℃条件下全暗培养13天，然后置于每天光照12小时，光照强度为3000lx，置于培养温度为28℃的条件下培养，45天转接一次。所述的增殖培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L+ Ad3.0mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，pH为5.8。
（4）、生根培养：将上述高度约为3～5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照16小时，光照强度为6000lx，培养温度为28℃的条件下培养至生根。所述的生根培养基为：1/2MS+IBA0.8mg/L+GGR2.0mg/L+PG15mg/L+蔗糖20g/L+琼脂4g/L，pH为5.8。
（5）、炼苗移栽：将高约8～10cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽栽入由泥炭土和河沙（4：1）混合成的基质中并定植于大田中，成活率达到94%。
Claims (4)
1.一种桃金娘组培快繁技术，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体的采集与处理：选择桃金娘优良单株的当年生腑芽饱满枝条，去叶后于洗衣粉水浸泡10～30min，刷净后自来水冲洗1～2h，剪成长1～3cm带腋芽的茎段，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后备用；
（2）初代培养：将步骤（1）的茎段接种到初代培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养30～45天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成不定芽；
（3）增殖培养：将步骤（2）的不定芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为3000～5000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养，45～60天转接一次；
（4）生根培养：将步骤（1）或（2）高度约为3～5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为5000～6000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；
（5）炼苗移栽：将高约8～10cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。
2.根据权利要求1所述的一种桃金娘组培快繁技术，其特征在于步骤（2）所述的初代培养基为：MS+6-BA1.0～1.5mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+CPPU0.01～0.5 mg/L+ Ad1.0～3.0mg/L+蔗糖15～30g/L+琼脂3.5～6.0g/L，pH为5.4～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种桃金娘组培快繁技术，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+6-BA0.5～1.0mg/L+NAA0.2～0.5mg/L+IBA0.2～0.5mg/L+ Ad1.0～3.0mg/L+蔗糖15～30g/L+琼脂3.5～6.0g/L，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种桃金娘组培快繁技术，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+IBA0.4～1.2mg/L+GGR1.0～2.0mg/L+PG10～40mg/L+蔗糖15～30g/L+琼脂3.5～6.0g/L，pH为5.4～5.8。
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