CN104195220A

CN104195220A - 一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液

Info

Publication number: CN104195220A
Application number: CN201410398221.9A
Authority: CN
Inventors: 杨灵勇; 周丽霞
Original assignee: Medical Science And Technology Ltd Of Sincere Industry Of Suzhou Kang Ming
Current assignee: Medical Science And Technology Ltd Of Sincere Industry Of Suzhou Kang Ming
Priority date: 2014-08-14
Filing date: 2014-08-14
Publication date: 2014-12-10
Anticipated expiration: 2034-08-14
Also published as: CN104195220B

Abstract

本发明公开了一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液，所述缓冲液是以Tris-柠檬酸作为缓冲体系用于试剂盒中的，试剂盒包括第一试剂和第二试剂，第一试剂的成分组成为Tris、丙氨酸、NADH、乳酸脱氢酶、叠氮钠、柠檬酸，第二试剂的成分组成为Tris、α-酮戊二酸、叠氮钠、柠檬酸。通过上述方式，本发明的用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液采用Tris-柠檬酸作为缓冲体系，该缓冲液可提供人血清中丙氨酸氨基转移酶发生酶促反应的良性条件，与之配伍的试剂盒在测定数据的准确度和稳定性方面均优于现有报道的缓冲液，值得推广使用。

Description

一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，特别是涉及一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液。

背景技术

丙氨酸氨基转移酶（ALT）通常称为谷丙转氨酶，是一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶（相当于工业生产中的催化剂），在生物体内起加快蛋白质氨基酸转化的作用，它在肝脏细胞的细胞浆中浓度最高，而在肾、心、骨骼肌等组织器官中含量较少。人体内谷丙转氨酶升高通常是由某些与肝脏相关的疾病如肝硬化、肝癌、病毒性肝炎等引起的，也常见于广泛损伤的肌肉疾病或伴有休克的循环衰竭、缺氧、心肌梗塞和溶血性疾病。故在临床医学上，丙氨酸氨基转移酶是最重要的肝功能指标之一，对其测定的稳定性和准确性也就尤为重要。

目前在体外测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）主要采用连续监测法，该方法是国际临床化学和实验室医学联盟（IFCC）推荐方法。具体测定过程如下：

。

上述反应造成NADH减少，引起吸光度在波长340nm处下降，下降速率与丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力成正比。然而要保证上述反应的正常进行，必须有一个稳定的缓冲溶液环境，缓冲液是决定丙氨酸氨基转移酶发生酶促反应的制约因素，是该酶测定试剂盒的重要组成部分。国外专利EP20030708559用来检测血清丙氨酸氨基转移酶涉及的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）；专利US4241179、US7192727中测定丙氨酸氨基转移酶采用磷酸盐（钠盐或铵盐）缓冲液、GOOD’S缓冲液、Tris-HCl缓冲液，使用浓度为20 mM-100 mM不等；国内专利CN98101247中亦提到丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液为磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲液；专利CN200610167703.9对丙氨酸氨基转移酶测定提及pH为5.0~8.0的系列缓冲液，包含磷酸盐缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、Tris-HCl缓冲液等。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液，使与之配伍的试剂盒在测定数据的准确度和稳定性方面均优于现有报道的缓冲液。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液，所述缓冲液是以三羟基甲基氨基甲烷（Tris）-柠檬酸作为缓冲体系用于试剂盒中的，所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的成分组成为：Tris 5~15 g/L、丙氨酸44 g/L、烟酰胺嘌呤二核苷酸（NADH） 0.25 g/L、乳酸脱氢酶 4000 U/L、叠氮钠 0.5 g/L、柠檬酸 2~5 g/L，所述第二试剂的成分组成为：Tris 5~15 g/L、α-酮戊二酸 2.2g/L、叠氮钠 0.5g/L、柠檬酸 2~5 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述第一试剂的pH值为7.5，所述第二试剂的pH值为7.5。

在本发明一个较佳实施例中，所述第一试剂的成分组成为：Tris 9.6912 g/L、丙氨酸44 g/L、烟酰胺嘌呤二核苷酸（NADH） 0.25 g/L、乳酸脱氢酶 4000 U/L、叠氮钠 0.5 g/L、柠檬酸 3.99 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述第二试剂的成分组成为：Tris 12.11g/L、α-酮戊二酸 2.2g/L、叠氮钠 0.5g/L、柠檬酸 2 g/L。

本发明的有益效果是：本发明的用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液是以Tris-柠檬酸作为缓冲体系的，与现有报道的缓冲液相比，对维持与之配伍的酶类稳定性具有更优的效果，与之配伍的试剂盒在测定数据的准确度和稳定性方面表现更优，值得推广使用。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

以下实施例中采用的仪器：UV Blue Star紫外分光光度计1台（北京莱伯泰科仪器有限公司，亦或者其它品牌）；恒温数显水浴锅1台（上海梅香仪器有限公司，亦或者其它品牌）。

实施例1：

提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒，由第一试剂和第二试剂组成，以Tris-柠檬酸作为缓冲体系：

所述第一试剂的主要成分为：

所述第二试剂的主要成分为：

。

实施例2：

提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒，由第一试剂和第二试剂组成，以Tris-HCl作为缓冲体系：

所述第一试剂的主要成分为：

所述第二试剂的主要成分为：

。

实施例3：

提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒，由第一试剂和第二试剂组成，以HEPES-氢氧化钠作为缓冲体系：

所述第一试剂的主要成分为：

所述第二试剂的主要成分为：

。

实施例4：

提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒，由第一试剂和第二试剂组成，以硼酸-硼砂作为缓冲体系：

所述第一试剂的主要成分为：

所述第二试剂的主要成分为：

。

实施例5：

提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒，由第一试剂和第二试剂组成，以磷酸盐作为缓冲体系：

所述第一试剂的主要成分为：

所述第二试剂的主要成分为：

。

将以上实施例1~5配制试剂作为供试试剂盒，以英国朗道实验室有限公司生产的质控血清2（质控2）、质控血清3（质控3）作为待测样本，采用紫外可见分光光度计进行检测。设一个空白测试、两个样本测试，其中空白测试以蒸馏水代替样本，详细测定过程如下表所示。样本、第一试剂、第二试剂的比例为60μL︰1000μL︰500μL，设定的主波长为340nm、副波长为405nm，样品与试剂混匀后延迟1min读数，读数时间为1.5min，得出△A/min（每分钟吸光度变化），根据公式ALT（U/L）=△A/min × F计算出样本中丙氨酸氨基转移酶（ALT）含量，计算因子F=4180。质控血清2 ALT的靶值为20U/L，质控血清3 ALT的靶值为84U/L，允许偏差范围±10%。

根据以上测定方法，每5天测试一次，每次做3个平行并取其平均值，连续监测一个月，共测试6次，得到每个实施例及空白测试数据，详见下面两个表。计算得到6次测定结果的平均值、相对偏差、标准偏差（SD）。相对偏差这项可反映测定结果的准确性，标准偏差这项可反映测定结果的稳定性。

Claims

1.一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液，其特征在于，所述缓冲液是以三羟基甲基氨基甲烷（Tris）-柠檬酸作为缓冲体系用于试剂盒中的，所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的成分组成为：Tris 5~15 g/L、丙氨酸44 g/L、烟酰胺嘌呤二核苷酸（NADH） 0.25 g/L、乳酸脱氢酶 4000 U/L、叠氮钠 0.5 g/L、柠檬酸 2~5 g/L，所述第二试剂的成分组成为：Tris 5~15 g/L、α-酮戊二酸 2.2g/L、叠氮钠 0.5g/L、柠檬酸 2~5 g/L。

2.根据权利要求1所述的用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液，其特征在于，所述第一试剂的pH值为7.5，所述第二试剂的pH值为7.5。

3.根据权利要求1所述的用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液，其特征在于，所述第一试剂的成分组成为：Tris 9.6912 g/L、丙氨酸44 g/L、烟酰胺嘌呤二核苷酸（NADH） 0.25 g/L、乳酸脱氢酶 4000 U/L、叠氮钠 0.5 g/L、柠檬酸 3.99 g/L。

4.根据权利要求1所述的用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液，其特征在于，所述第二试剂的成分组成为：Tris 12.11g/L、α-酮戊二酸 2.2g/L、叠氮钠 0.5g/L、柠檬酸 2 g/L。